Uloga y-glutamyltranspeptidase u patogenezi Helicobacter suis i Helicobacter pylori infections

Uloga y-glutamyltranspeptidase u patogenezi Helicobacter suis Netlogu i Helicobacter pylori pregled infekcija pregled Sažetak pregled Helicobacter
(H. pregled) suis pregled može kolonizirati želudac svinja, kao i ljudi, što uzrokuje kronični gastritis i druge želučane patološke promjene uključujući želučanog ulkusa i sluznica povezane limfnog tkiva (MALT) limfom. Nedavno, virulentnost faktor H. suis
, γ-glutamil transpeptidase (GGT), pokazalo se da ima važnu ulogu u indukciji humanog epitela smrti i modulaciju limfocitne proliferacije ovisno o glutamina i glutation katabolizam želuca stanica. U ovom istraživanju, relevantnost GGT u patogenezi H. suis
infekcije je proučavana u miša i mongolski skočimiš modela. Osim toga, relativna važnost H. suis
GGT je u usporedbi s onom od H. pylori pregled, GGT. Značajan i drugačiji doprinos GGT H. suis Netlogu i H. pylori pregled je viđen u smislu bakterijske kolonizacije, upala i evocirane imunološkog odgovora. Za razliku od H. pylori
Δggt
sojeva, H. suis
Δggt
sojevi bili sposobni za kolonizaciju želudac na nivoima usporedivim s sojeva WT, iako su prouzročili su znatno manje ukupnu želučane upale kod miševa. Ovo stanje karakterizirala je niži broj T i B-stanice, te nisku razinu proliferacije epitelnih stanica. U principu, u odnosu na WT soj infekcije, GGT pregled mutiranih sojeva H. suis pregled aktivirao niže razine Th1 i Th17 izražavanja potpis citokina. Kao izraziti Doreguliranje B-limfocita kemoatraktant CXCL13 uočeno kako u životinja inficiranih WT i GGT
mutiranih sojeva H. suis
. Zanimljivo, H. suis pregled GGT se pokazalo da utječu na glutamin metabolizam želučanog epitela kroz silazni glutamin transportera ASCT2. Pregled Uvod pregled Helicobacter pregled (H. pregled) pylori pregled je gram-negativna bakterija koja naseljava želudac više od polovice svjetske populacije. Infekcija ove bakterije može izazvati gastritis, peptičkog ulkusa želuca, adenokarcinom i sluznicu limfnog tkiva (MALT) limfom [1-3]. Osim H. pylori Netlogu, non-H. pylori pregled helicobacters (NHPH) također su otkrivene u želucu čovjeka i ove bakterije uzrokuju slične želučanih bolesti. Rizik od razvoja želučanog MALT limfom je veći tijekom NHPH infekcije u odnosu na infekcije s H. pylori pregled [4-9]. H. suis pregled je najčešći želuca NHPH kod ljudi. Svinje su prirodni domaćin ove bakterije, a prevalenciji dosežu 90% ili više [10] i najvjerojatnije, svinje, a možda i svinjetina su glavni izvori ljudskih H. suis
infekcije [4,11-13].
H. suis pregled infekcija se čini da ostaju za život, barem u svinja i glodavaca koji se koriste kao modeli za liječenje infekcija [14]. U svinja, infekcije uzrokuje razvoj gastritisa i smanjenje tjelesne težine. Osim toga, bakterije se čini da igra ulogu u razvoju ulceracijama ne-žljezdane pars oesophagea [15]. Kod miševa i mongolskih gerbila modelima humanog želučanog bolesti eksperimentalni H. suis pregled infekcija uzrokuje ozbiljne želučane patologiju [4,16,17], uključujući gastritis, nekroze parijetalni stanica i razvoj želučanom MALT-limfoma lezija, nalik lezije opažene kod H. suis
-infected ljude.
Prethodne studije su pokazale da je ova bakterija nema homologije nekoliko čimbenika virulencije H. pylori pregled, kao što su citotiksin povezana gena pregled patogenosti Island ( CAG
pai) i vakuolirajući citotoksin (vaca) [18]. Bili smo, međutim, sposoban za identifikaciju γ-glutamil transpeptidase (GGT) kao važnog čimbenika virulencije H. suis Netlogu. Ovaj enzim je opisan da uzrokuje oštećenje želuca epitelnih stanica [19] i modulaciju proliferacije limfocita [20] kroz interakcije enzima sa dva njegova supstrata, L-glutamina i glutationa, što je prvi identificirani i istražuju H. suis pregled virulencije odrednica.
ulogu GGT tijekom H. pylori pregled infekcije in vivo pregled je ispitivan u miševa. Proturječnih zaključaka su izvučeni o važnosti GGT za kolonizaciju. Neke skupine su zaključili da H. pylori pregled, GGT je potreban za perzistentne infekcije u miševa [21], dok su drugi napravili suprotno zaključcima [22]. Osim toga, tu je dokaza da Helicobacter pregled, GGT je ključni faktor virulencije koji su uključeni u imunološki utaje i imunološki tolerancije [23-25].
Trenutno nije poznato da li i kako H. suis
GGT utjecaji tijek H. suis
infekcije in vivo pregled. Cilj ovog rada bio je proširiti naše prijašnje
rezultate in vitro s H. suis
GGT, i da proučavaju ulogu ovog virulencije čimbenika u patogenezi H. suis
infekcije in vivo
. Istovremeno, cilj smo u uspoređujući relativne važnosti s onom GGT H. pylori
. Sadašnji Eksperimenti su provedeni u BALB /c miševa i uzgojene mongolskih gerbila, jer su ti životinjski modeli doista su pokazali da se kompletan alat se istražilo ulogu Helicobacter pregled vrsta u želučanom patologije. Tipično, u mongolskim gerbilima, brži i žestoko razvijanje želučanih lezija može opaziti u odnosu na miševe [4,26,27]. Pregled Materijal i metode pregled životinja i bakterijske vrste pregled Šezdeset 4-kratka afera stare ženke specifičnih patogena (SPF) BALB /c miševi su dobiveni od Harlan NL (Horst, Nizozemska). Dvadeset i pet 4 tjedna stare ženke SPF genetski mongolskih gerbila (Crl: MON) dobivene su od Charles River Laboratories (Lille, Francuska)
Za H. suis pregled infekcije u miševa i mongolskih gerbila, soj HS5cLP. je korišten. Ovaj soj je izoliran 2008. iz želuca u klaonici svinja [28]. Za eksperimentalni H. pylori pregled infekcije kod mongolskih gerbila, soj PMSS1 [29] se koristi, jer je taj soj nema povijest in vivo
adaptacije u miševa, za razliku od miša prilagođen soj SS1. U BALB /c miševa, H. pylori pregled soj SS1 [29] se koristi, jer soj PMSS1 ranije je pokazao da ne bi mogli kolonizirati želudac od BALB /c miševa [29]. Pregled Izgradnja izogeni ggt pregled mutiranih sojeva H. suis
i H. pylori pregled
An izogenskih H. suis GGT pregled mutirani soj (HS5cLPΔggt
) je pripravljen kao što je opisano [20]. Izogena ggt pregled mutirani soj iz Helicobacter pylori pregled je dobiven koristeći istu strategiju kao za izradu od H. suis pregled Izogena ggt pregled mutanata, osim što je kazeta kanamicin rezistentan je korištena od a otpornost na kloramfenikol kazeta [20]. Vrlo kratko, brisanje GGT Netlogu H. pylori
SS1 i PMSS1 uveden izmjenom aleličke pomoću pBluescript II SK (+) fagemidje vektor (Agilent Technologies, Kalifornija, SAD) u kojem ~ 440 bp od 5 ' co kraju i ~ 430 bp 3 'co kraju ciljnog gena i otpornost na kanamicin kaseta od plazmida pKD4 [30] su legirani pomoću PCR posredovanog strategije s 2 ciklusa inverznog PCR i PCR fuzijskog [20]. Sve početnice korištene za PCR posredovanog konstrukciju rekombinantnih plazmida su prikazani u tablici 1.
Dobivenog plazmida je amplificiran XL1-Blue MRF 'E. coli pregled (Agilent Technologies), a koristi se kao plazmida samoubojstva u H . pylori pregled SS1 i PMSS1 (poklon od Sara Linden i Anne Muller, respektivno). H. pylori pregled SS1 GGT pregled mutant (SS1Δggt pregled) i H. pylori pregled PMSS1 GGT pregled mutant (PMSS1Δggt pregled) dobiveni su elektrotransformacijom [31] ili prirodne transformacije [32 ] kao što je prethodno opisano. Konačno, bakterije su odabrani na Columbia agar ploče (oksoid, Basingstoke, Velika Britanija) s Vitox dodatak (Oxoid), 5% (v /v) defibriniziranom ovce krvi (E & O Laboratories Ltd, Bonnybridge, UK) i kanamicin (25 ug /mL). Ploče se inkubiraju na 5-9 dana. U izogeni GGT
mutanti su verificirani testu GGT aktivnosti [19], PCR i nukleotida sequencing.Table 1 Primeri koji se koriste za izgradnju H. pylori GGT izogeni mutiranih sojeva
Primer naziv pregled
Slijed (5'-3 ')
Primer koristiti
pBlue linearno FWD 1 pregled GGGGATCCACTAGTTCTAGAGCG pregled linearizacije plazmida pregled pBlue linearni REV1 pregled CGGGCTGCAGGAATTCGATATCAAG pregled Linearizacija plasmid
HpGGT-flank_fusion1F
CTTGATATCGAATTCCTGCAGCCCGTAACCGGTAAAATCAACACGGACGC
Amplification H. pylori GGT pregled i parcijalne uzlazni i silazni bočne geni pregled HpGGT-flank_fusion1R pregled CGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCGCGCTCTTATAAAAAGAAGCCGC pregled Pojačanje H. pylori GGT pregled i parcijalne prethodnim i nizvodno omeđuju gene pregled pBluelinear_Hpggtflank1F
CCAAGGAAAGAATTTTAATCCTATTTAG pregled linearizacije rekombinantnog plazmida pregled pBluelinear_Hpggtflank1R pregled CTGTTTTCCTTTCAATCAACAATAATC pregled linearizacije rekombinantnog plazmida gen za rezistenciju na pregled Hpkana_fusion_1F pregled ATTATTGTTGATTGAAAGGAAAACAGATGATTGAACAAGATGGATTGC pregled Pojačanje kanamicin pregled Hpkana_fusion_1R pregled CTAAATAGGATTAAAATTCTTTCCTTGGTCAGAAGAACTCGTCAAGAAG
gen za rezistenciju na Pojačanje kanamicin pregled T7 prom3 pregled TAATACGACTCACTATAGGG pregled sekvenciranje pregled M13R pregled CAGGAAACAGCTATGAC pregled sekvenciranje pregled Kultura uvjetima bakterijskih sojeva pregled divljeg tipa (WT) H. suis pregled soj HS5cLP je narasla za 48 sati kako je ranije [29] što je opisano. HS5cLPΔggt pregled bakterije su uzgajane pod istim uvjetima kao i soja HS5cLP, osim što je uzgoj ploče imale su dodatak kloramfenikol (30 ug /ml), kako je prethodno opisano [20].
WT H. pylori pregled sojeva SS1 i PMSS1 su uzgajani na Columbia agar ploče koje sadrže 5% (v /v) defibriniziranom ovčje krvi 48-72 sati na 37 ° C pod microaerobic uvjetima kao što je prethodno opisano [29]. Nakon toga, kolonije se sakupe i kultivirane u Brucella smjese uz dodatak Vitox (Oxoid) i 5% fetalnog telećeg seruma (Hyclone) na rotacijskoj tresilici, pod uvjetima microaerobic (16 sati, 125 rpm). SS1Δggt pregled i PMSS1Δggt pregled sojevi su uzgojene pod istim uvjetima kao i odgovarajućih sojeva WT na pločama s dodatkom kanamicin (25 ug /ml). Pregled, eksperimentalni dizajn Netlogu Po dolasku, šezdeset BALB /c miševa i dvadeset i pet mongolskih gerbila su podijeljeni u 5 skupina, i životinje su ostavljene da se prilagode na novoj sredini 1 tjedan. Životinje su inokulirane intragastrično 3 puta u razmacima od 48 h. Životinje iz skupine 1 i 2 (miševa i mongolskih gerbila) su inokulirane Brucella otopine koja sadržava 8 x 10 7 izvediv bakterija sojeva HS5cLP i HS5cLPΔggt
, respektivno. Životinje u grupi 3 i 4 bili su inokulirani Brucella buljonu koji je sadržavao 3 x 10 8 izvediv bakterija sojeva SS1 and SS1Δggt pregled (miševa) ili 1 × 10 9 izvediv bakterija sojeva PMSS1 i PMSS1Δggt
(gerbila). Životinje u petoj skupini bile su cijepljene s Brucella juhe i služio je kao nezaražene kontrole. Kod miševa, 4 tjedna, 9 tjedna i 6 mjeseci nakon infekcije (PI), 4 životinja iz svake skupine je eutaniziran cerviklanom dislokacijom, pod anestezijom izofluranom. Za mongolskih gerbila, sve su životinje žrtvovane nakon 9 tjedana pi. Želucima životinja su resected za daljnju obradu kao što je prethodno opisano [27,29].
Pokusa na životinjama su odobreni od strane etičkog povjerenstva Veterinarskog fakulteta, Ghent University, Belgija (EC2013 /29). Pregled Histopatološko ispitivanje i imunohistokemijski (IHH)
tri uzdužne trake želučanog tkiva miševa i mongolskih gerbila se odrežu od jednjaka do duodenuma uzduž veće zakrivljenosti. Tkivo je fiksirano u 4% fosfatno puferiranoj formaldehida obrađuje standardnim postupcima i uklopljene u parafin za svjetlosnim mikroskopom. Pet serijski dijelovi 5 um su rez. Prvi dio je obojena hematoksilin /eozinom (H &E) postići stupanj gastritisa prema ažuriranoj Sydney sustav s nekim izmjenama [33]. Nakon deparaffinization i rehidracije za preostalih dijelova, popravljanje antigenom izazvanog toplinom je provedena u citratnom puferu (pH = 6,0). Kako bi se blokirala reakcije Aktivnost endogene peroksidaze i nespecifični, svi su stakalca su inkubirana 3% H 2O 2 u metanolu (5 min) i 30% kozjim serumom (30 min), respektivno. Za razlikovanje između T i B limfociti, CD3 i CD20 antigena su obojene u sekcijama dvije i tri upotrebom poliklonalni zečji anti-CD3 antitijela (1/100, DakoCytomation, Glostrup, Denmark) i poliklonsko zečje anti-CD20 protutijela (1 /25; Thermo Scientific, Fremont, SAD), respektivno. Ti dijelovi su dodatno obraditi s isplanirati + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) za korištenje s zec primarnih protutijela. Na četvrtom i petom poglavlju, proliferaciju epitelnih stanica, a broj parijetalni stanice određena su IHC bojenje, koristeći mišjim monoklonskim anti-Ki67 protutijela (1/25, Menarini Diagnostics, Zaventem, Belgija) i mišjim monoklonskim anti-vodika kalij ATPaze β-podjedinica (H + /K + ATPaze) protutijela (1/25 000; Abcam Ltd, Cambridge, UK), respektivno. Naknadno vizualizacija je učinjeno s isplanirati + System-HPR (DAB) (DakoCytomation) za korištenje s mišem primarnih protutijela. Kvantifikacija T stanica, B-stanica i epitelnih stanica je provedena kao što je prethodno opisano [4]. Ukratko, broj stanica koje pripadaju određenim populacija stanica (T-stanice, B-stanice i epitelne stanice) su određene brojanjem pozitivnih stanica u pet nasumce odabranih Snažni polja (povećanjem: × 400), oba u antralnom i corpus regije . pregled da bi se procijenili mogući razvoj pseudopyloric metaplazije izazvana Helicobacter pregled, infekcije, Alcian blue-periodic acid-Schiff mrlja mrlja (AB /PAS) je izvedena. pregled, kvantifikacija kolonizatora bakterija u želucu miševi i mongolskih gerbila pregled trake želučanog tkiva koja sadrži sve regije za miševe i zasebnih komada (antruma i korpusa) za mongolskih gerbila su pohranjeni u 0,5 ml RNAlater pregled otopine (Ambion, Austin, tE, USA) na -70 ° C C do RNA i DNA ekstrakcije. Kvantitativno Real-Time PCR (QRT-PCR) se koristi za određivanje broja bakterija koloniziranjem u želučanom tkivu, kao što je ranije opisano [29,34]. Pregled ekstrakcija RNA i reverzne transkripcije
QRT-PCR je korištena za određivanje gena u želučanom tkivu miševa i mongolskih gerbila. Ukupna RNA je ekstrahirana pomoću RNeasy Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Njemačka) prema naputku proizvođača. Koncentracija RNK mjerena je pomoću NanoDrop spektrofotometar (ISOGEN Life Science, PW De meern, Utrecht, Nizozemska). Čistoća RNA je procijenjena s Experion automatizirani sustav za elektroforezu pomoću StdSens RNA pločice (Bio-Rad, Hercules CA, USA). Koncentracija RNA iz svih uzoraka je podešen na 1 ug /ul cDNA sintetiziran je odmah nakon pročišćavanja RNA pomoću iScript ™ cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad).
Dizajn i validaciju primera i određivanje ekspresije gena
domaćinstva geni H2afz, PPIA
i HPRT pregled su uključeni kao referentne gena kod miševa [29]. Za mongolskih gerbila, skup referentnih gena ispitana je na temelju činjenice da se u velikoj mjeri koriste u drugim životinjskim vrstama. Klice su konstruirane na temelju očuvanih regija ACTB, P-aktin, RPS18 Netlogu, GAPDH Netlogu, HPRT1 Netlogu, SDHA Netlogu i UBC
potpunog ili djelomičnog kodne sekvence na raspolaganju za ljude, svinje, miševa i štakora.
razine ekspresije mRNA raznih citokina (IFN-y, IL-4, IL-5, IL-17, IL-1β, IL-6, IL-10), koji je prethodno pokazao različitiom ekspresijom u H. suis
infekcije, kao i druge gene (Foxp3, CXCL13, ASCT2, ATP4a i ATP4b) su utvrđene pomoću SYBR Green RT-PCR na temelju s iQ ™ SYBR Green Supermix. Reakcije su provedene uz CFX96 RT PCR Sustav u C1000 Thermal Cycleru (Bio-Rad) kako je prethodno opisano [29]. Sve su reakcije izvedene u 12 uL volumena koji sadrži 0,05 ul svakog primera (1.25 pmol /ul), 6 ul iQ ™ SYBR Green Mix, 3.9 ul HPLC vode i 2 ul cDNA. Eksperimentalna Program se sastojao od 95 ° C tijekom 15 minuta, nakon čega slijedi 40 ciklusa denaturacije na 95 ° C 20 sekundi, zagrijavanje na 60 ° C tijekom 30 sekundi i ekstenzijom na 72 ° C tijekom 30 s. Prag ciklusa vrijednosti (CT) su normalizirani na geometrijske sredine referentnih gena i normalizacije razine mRNA svih ciljnih gena su izračunati koristeći metodu 2 -ΔΔCt [35]. Pregled Zbog nedostupnosti informacije gen za Forkhead /zaliscima faktora helix transkripcije (Foxp3) i kemokinske CXC ligand 13 (CXCL13) iz mongolskih gerbila, prajmeri su konstruirani na temelju sačuvanih regija Foxp3 i CXCL13 potpunim ili djelomičnim kodne sekvence raspolaganju za ljude, svinje, miševe i štakori s istu strategiju kao što je gore opisano. Razina ekspresije mRNA Foxp3 i CXCL13 su određena pomoću iste metode kao što je gore opisano. Slijed informacije o svim početnice za miševe i za mongolskih gerbila je prikazano u tablicama 2 i 3.Table 2. Popis gena i klica korištenih za QRT-PCR u mongolskih gerbila pregled Gene
Primer pregled
Sequence (5'-3 ')
Reference
Foxp3
osjećaj pregled GCCCCTMGTCATGGTGGCA pregled ove studije pregled negativna pregled CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA
CXCL13
osjećaj pregled GAATGGCTGCCCCAAAACTGAA pregled Ova studija pregled negativna pregled TCACTGGAGCTTGGGGAGTTGAA pregled GAPDH
osjećaj pregled AACGGGAAGCTCACTGGCATG pregled Ova studija pregled negativna pregled CTGCTTCACCACCTTCTTGATGTCA pregled HPRT1
osjećaj pregled GCCCCAAAATGGTTAAGGTTGCA pregled Ova studija pregled negativna pregled TCAAGGGCATATCCAACAACAAAC pregled RPS18
osjećaj pregled CGAGTACTCAACACCAACATCGATGG pregled Ova studija pregled negativna pregled ATGTCTGCTTTCCTCAACACCACATG pregled IL-1β
osjećaj pregled GGCAGGTGGTATCGCTCATC pregled [64] pregled negativna pregled CACCTTGGATTTGACTTCTA pregled IFN-γ pregled pregled osjećaj pregled CCATGAACGCTACACACTGCATC pregled [65] pregled negativna pregled GAAGTAGAAAGAGACAATCTGG pregled IL-5
osjećaj pregled AGAGAAGTGTGGCGAGGAGAGACG pregled [27] pregled negativna
ACAGGGCAATCCCTTCATCGG pregled IL-6
osjećaj pregled GAGGTGAAGGATCCAGGTCA pregled [66] pregled negativna pregled GAGGAATGTCCTCAGCTTGG pregled IL-10
osjećaj pregled GGTTGCCAAGCCTTATCAGA pregled, [27] pregled negativna pregled GCTGCATTCTGAGGGTCTTC pregled IL-17
osjećaj pregled AGCTCCAGAGGCCCTCGGAC pregled [64] pregled negativna pregled AGGACCAGGATCTCTTGCTG pregled ATP4b
osjećaj pregled GGGGGTAACCTTGAGACCTGATG pregled [27] pregled negativna pregled AAGAAGTACCTTTCCGACGTGCAG pregled β-aktin
osjećaj pregled TCCTCCCTGGAGAAGAGCTA pregled [66]
negativna pregled CCAGACAGCACTGTGTTGGC pregled Tablica 3. Popis gena i klica korištenih za QRT-PCR u miševa
gene
Primer
Sequence (5'-3 ')

Reference
IL-1β
osjećaj pregled GGGCCTCAA AGGAAAGAATC pregled [29] pregled negativna pregled TACCAGTTGGGGAACTCTGC pregled IFN-γ pregled
osjećaj pregled GCGTCATTGAATCACACCTG pregled [29] pregled negativna pregled TGAGCTCATTGAATGCTTGG pregled IL-4
osjećaj pregled ACTCTTTCGGGCTTTTCGAT pregled [29] pregled negativna
AAAAATTCATAAGTTAAAGCATGGTG pregled, IL-10
osjećaj pregled ATCGATTTCTCCCCTGTGAA pregled [29] pregled negativna pregled CACACTGCAGGTGTTTTAGCTT pregled IL-17
osjećaj pregled TTTAACTCCCTTGGCGCAAAA pregled, [29] pregled negativna pregled CTTTCCCTCCGCATTGACAC pregled Foxp3
osjećaj pregled GCCCCTMGTCATGGTGGCA pregled ove studije pregled negativna pregled CCGGGCCTTGAGGGAGAAGA pregled CXCL13 pregled
osjećaj pregled CTCTCCAGGCCACGGTATT pregled [67] pregled negativna pregled TAACCATTTGGCACGAGGAT pregled ATP4a
osjećaj pregled TGCTGCTATCTGCCTCATTG pregled [68] pregled negativna pregled GTGCTCTTGAACTCCTGGTAG pregled ATP4b
osjećaj pregled AACAGAATTGTCAAGTTCCTC pregled [68] pregled negativna pregled AGACTGAAGGTGCCATTG pregled HPRT
osjećaj pregled CAGGCCAGACTTTGTTGGAT pregled [29] pregled negativna pregled TTGCGCTCATCTTAGGCTTT pregled PPIA
osjećaj pregled AGCATACAGGTCCTGGCATC pregled [29] pregled negativna pregled TTCACCTTCCCAAAGACCAC pregled H2afz
smisla
CGTATCACCCCTCGTCACTT pregled [29]
antisense
TCAGCGATTTGTGGATGTGT
statistička analiza pregled razlike u kolonizacije kapaciteta su analizirani korištenjem ne-parametarskog Mann-Whitney u pregled, test. Razlike u infiltracije limfocita, ekspresiji citokina i IHC analizom određene su jednosmjernom ANOVA slijedi post hoc Bonferroni test. Statistička analiza je provedena pomoću SPSS za statistiku 20 programa (IBM). Pair-mudar usporedbe su učinili za svakog pojedinog trenutku i na pomiješanih podataka pomoću vrijeme kao faktor stratifikacije. P pregled vrijednosti manje od 0,05 smatrane su statistički značajne. Sve podatke izrazi se kao srednja vrijednost ± SD. Sve figure su stvorene pomoću GraphPad Prism5 softvera (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Pregled Rezultati
gustoće kolonizacija pregled svih kontrolne životinje bile negativne za Helicobacter Netlogu. Rezultati zaraženih životinja pokazala su da WT H. suis pregled uporno može kolonizirati miša trbuh razina kolonizacije kao visok kao 5,42 × 10 4 (± 1,46 × 10 4) bakterija /mg želučanog tkiva, čak i na 6 mjeseci pi (slika 1C). H. pylori pregled soj SS1 Pokazalo kolonizirati miša trbuh na mnogo nižoj bakterijske gustoće, što je 1,68 × 10 3 (± 1,73 × 10 3) bakterije /mg tkiva na 6 mjeseci pi (Slika 1C, p pregled i 0.05). Slika 1 POVEZANOST bakterijske kolonizacije kapaciteta i upale rezultat u želucu miševa i mongolskih gerbila. Kapacitet kolonizacija je prikazan kao log10 vrijednosti H. suis Netlogu ili H. pylori
po mg tkiva, koja se određuje s QRT-PCR u korpusu miševa (A-C) i antruma od mongolskih gerbila (D). 0, nema infiltracija s mononuklearnim i /ili polimorfonuklearnih stanica; 1 vrlo blagi difuzni infiltracija s mononuklearnim i /ili polimorfonuklearnih stanica i prisutnosti jednog malog (20-50 stanice) agregat upalnih stanica; 2 blagi difuzni infiltracija s mononuklearnim i /ili polimorfonuklearnih stanica i prisutnosti jednog malog (50-200 stanice) agregat upalnih stanica; 3 umjereni difuzni infiltracija s mononuklearnim i /ili polimorfonuklearnih stanica i /ili prisutnosti 2-4 upalnih agregata; 4, označen difuzna infiltracija s mononuklearnim i /ili polimorfonuklearnih stanica i /ili prisutnost najmanje pet upalnih agregata. HS vs HSM: Kolonizacija: p izvoznici > 0,05; Upala: p izvoznici < 0.05. SS1 vs SS1m: Kolonizacija: p izvoznici < 0,05; Upala: p izvoznici < 0.05. PMSS1 vs PMSS1m: Kolonizacija: p izvoznici > 0,05; Upala: p izvoznici < 0.05. HS: životinje zaražene WT H. suis Netlogu srain HS5cLP; HSM: životinje zaražene H. suis pregled soj HS5cLPΔggt pregled; SS1: životinje zaražene WT H. pylori
SS1; SS1m: životinje zaražene s H. pylori pregled SS1Δggt
; PMSS1: životinje zaražene WT H. pylori
PMSS1; PMSS1m: životinje zaražene sa H. pylori pregled PMSS1Δggt
Zanimljivo, H. suis pregled soj HS5cLPΔggt pregled bio u stanju kolonizirati korpus želuca miševa u sličnoj mjeri kao što je. WT soj, a to je primijećen kod svih vremenskih točaka (Slike 1A-1C). Nasuprot tome, H. pylori pregled soj SS1Δggt pregled je pokazano da ima oslabljenu kolonizacije kapacitet kod miševa na sve tri vremenskih točaka (Slike 1A-1C, p pregled i 0.05). Slične podatke naseljavanja su pokazali u antruma Helicobacter pregled inficiranih-miševa na sve tri vremenskim razmacima (podaci nisu prikazani).
I HS5cLP i HS5cLPΔggt pregled soj uspješno kolonizirali antruma i korpusa želuca od mongolskih gerbila , iako naseljavanja stope su znatno niže u korpusu u odnosu na antruma. Statistički su promatrane značajne razlike između oba soja (Slika 1D, p pregled i 0.05). H. pylori pregled soj PMSS1Δggt pregled bio u stanju kolonizirati antruma i korpusa želuca na sličnoj razini u usporedbi s PMSS1 (Slika 1D, p izvoznici &0.05), iako je 2 iz 5 mongolskih gerbila su negativni za prisutnost PMSS1Δggt
u korpus želuca (podaci nisu prikazani).
zaraze izazvane upale pregled svih kontrolnih miševa i gerbila pokazao normalno želučane histomorphology u svim vremenskim točkama. Korelacija između upale rezultate i bakterijske kolonizacije je prikazan na slici 1. pregled u usporedbi s miševima s WT soj infekcije, infekcije s H. suis pregled soj HS5cLPΔggt
obično inducirane znatno manje ukupnu upala iu antruma (p izvoznici < 0,01) i korpus (p izvoznici < 0,01), dok je samo u regiji corpus (p izvoznici < 0,01), infekcija s H. pylori pregled soja SS1Δggt
izazvana manje upale, u usporedbi s onim koji je opažen kod WT deformacije zaražene miševa. U 6 mjeseci pi, corpus regija u 2 od 4 miševa s HS5cLP infekcije sadržavala velike limfoidnim agregatima ili folikula limfoidne pratnji uništenje normalne sluznice arhitekture (slika 2A), koja nije zabilježena u životinja iz drugih skupina. Slika 2 H &E bojenje odjeljaka želuca s Helicobacter -infected miševima i mongolskih gerbila. Reprezentativni Mikrografi H &E obojenih presjeka prikazan ovdje su uzeti iz miševa oralno zaražen s H. suis pregled HS5cLP (A), H. suis pregled HS5cLPΔggt pregled (B), H. pylori
SS1 ( C) i H. pylori pregled SS1Δggt pregled (D) na 6 mjeseci nakon inokulacije i mongolskih gerbila oralno izazvan s H. suis pregled HS5cLP (E), H. suis pregled HS5cLPΔggt
(F ), H. pylori pregled PMSS1 (G) i H. pylori pregled PMSS1Δggt pregled (H) na 9 tjedana nakon inokulacije. Strelice pokazuju prisutnost upalnih stanica, upalni agregata, infiltracije limfocita ili limfocitne folikula. HS: životinje zaražene WT H. suis pregled soja HS5cLP; HSM: životinje zaražene H. suis pregled soj HS5cLPΔggt pregled; SS1: životinje zaražene WT H. pylori
SS1; SS1m: životinje zaražene s H. pylori pregled SS1Δggt
; PMSS1: životinje zaražene WT H. pylori
PMSS1; PMSS1m: životinje zaražene s H. pylori pregled PMSS1Δggt
; WT: divlji tip. Izvorni povećanje. 100 ×
Za mongolskih gerbila, infekcija s HS5cLP ili PMSS1 izazvana teškim antruma-dominantna gastritis s formiranjem limfocitne agregata u lamina propria i /ili pod-sluznici želuca (slike 1D, 2E, i 2G ). Nema značajne razlike između skupina WT i mutantnu H. suis
odnosu na upalni odgovor induciran kod gerbila (Slikama 1D, 2E i 2 F), iako sve životinje inficirane HS5cLP pokazao upale u corpus regiji , dok je to bio slučaj samo kod nekih životinja zaraženih HS5cLPΔggt Netlogu (podaci nisu prikazani). U jednom gerbila zaražena H. suis pregled soja HS5cLP, izrazita upalnog odgovora zabilježeno je u više od 65% područja u lamina propria i submukozi od antruma gusto je infiltrirana s upalnim stanicama, sjedinjen limfoidnim agregatima i . limfoidne folikule (dodatne datotečne 1) pregled, upala uzrokuje H. pylori
soja PMSS1Δggt Netlogu u antruma od gerbila bio blaži u odnosu na koje se vidi u WT zaraženih životinja (p Netlogu < 0,05) . (Slike 1D, 2G i 2H)
upalnih stanica infiltracije
općenito, što je povećanje od broja T-stanica uočeno je u korpusu (slika 3A, p izvoznici < 0,05) miševa zaražena H. suis pregled soj HS5cLP i H. pylori pregled soj SS1 na sva tri trenucima. U odnosu na miševe zaražene s wt H. suis
, HS5cLPΔggt
inducirana niži odgovor T-stanica na korpusu 6 mjeseci pi (p pregled < 0,01). H. pylori pregled soj SS1Δggt
izaziva smanjenu odgovor T-stanica u corpus regiji (p pregled < 0,01) u usporedbi s WT inficiranih životinja, na obje 9 tjedana i 6 mjeseci pi (slika 3A). Slični rezultati su opaženi u antrumu miševa (podaci nisu prikazani).

• Primjena trimetoprim-sulphadimidine ne poboljšava zacjeljivanje žljezdanog želuca ulkusa kod konja koji su primali omeprazol: randomizirano, zaslijepljeni, kliničke studije
• Skeniranje elektronskim mikroskopom zapažanja hh želuca crva, Physaloptera clausa (Spirurida: Physalopteridae)