PLoS ONE: padidėjusi Interleukinas-32 išraiška yra susijęs su Helicobacter pylori susijusios Gastritis

Anotacija

Fonas

Interleukinas-32 (IL-32) yra neseniai atrasta prouždegiminių citokinų dalyvauja uždegimo ligos. Mes tyrė IL-32 ir jos reguliavimo mechanizmo išraiška uždegiminio atsako sergančių pacientų, Helicobacter pylori
( h. Pylori
) infekcija.

Dizainas ir metodai

IL-32 iRNR ir baltymų ekspresija skrandžio audinių buvo aptikta kiekybinė realaus laiko PGR ir imunohistocheminiu. IL-32 reglamentavimas žmogaus skrandžio epitelyje ląstelių linijos AGS buvo tiriama skirtinga citokinų stimuliacijos ir kitokią H. pylori
padermės infekcija.

Rezultatai

Skrandžio IL-32 iRNR ir baltymų raiška buvo padidėjusi pacientams, sergantiems H. Helicobacter pylori infekcija
ir teigiamai koreliuoja su gastritu. Be H. pylori
-infected pacientai, lygis mRNR IL-32 taip pat buvo susietas su, kad iš priešuždegiminiais citokinų IL-1β ir TNF-. in vitro
IL-1β ir TNF-α gali upregulate IL-32 mRNR ir baltymų kiekį AGS ląstelių, kurios priklausė nuo NF-κB signalo kelyje. IL-32 išraiškos reguliavimas reaguojant į H. pylori
-infection gali susilpnėti naudojant neutralizuojančius antikūnus blokuoti IL-1β ir TNF-alfa. Be to, h. pylori
-infected AGS ląstelės taip pat sukeltas IL-32 mRNR ir baltymų ekspresiją, kuri buvo priklausoma nuo CagA.

Išvados

IL-32 lygis yra padidėjusi pacientams, sergantiems H , Helicobacter pylori infekcija
ir jos išraiška reglamentuoja prouždegiminių dirgiklius, o tai rodo, kad IL-32 gali atlikti svarbų vaidmenį į H patogenezėje. pylori
AMŽIAUS gastritas

nurodomoji dalis:. Peng L ai Zhuang Y Li W val Zhou Y Y Wang, T-T Chen N. et al. (2014) Padidėjęs Interleukinas-32 raiška yra susijusi su Helicobacter pylori pervežimas AMŽIAUS gastritas. PLoS ONE 9 (3): e88270. Doi: 10,1371 /journal.pone.0088270

redaktorius Ivo G. Boneca Institut Pasteur Paryžius, Prancūzija

Įstojo rugpjūčio 24, 2013 m Priėmė: Sausis 8, 2014 m Paskelbta kovo 14 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Peng et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas parėmė dotacijas iš medicinos mokslo jaunimo mokymo projektas Kinijos Liaudies išlaisvinimo armija (13QNP108) ir Nacionalinės pagrindinių mokslinių tyrimų programą Kinijos (973 programa, Nr 2009CB522606). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Helicobacter pylori
( h. pylori
) yra gram-neigiamas, microaerophilic bakterija, kuri kolonizuoja apie 50% gyventojų skrandį visame pasaulyje. Nuolatinis infekcija H. pylori
sukelia lėtinį ir nuolatinis gastritas ir padidina skrandžio opa ir skrandžio vėžio riziką.

h. pylori
-infected skrandžio gleivinės buvo būdinga tai, kad imuninių ląstelių infiltracija ir uždegiminių faktorių gamybą. TH1 ir Th2 atsakymą pranešama tarpininkauti imuninį atsaką į H. pylori
ir Th1 atsakas Manoma, kad dominuojantis [1]. Tada indukcija Th17 atsako H. pylori
-infected skrandis patvirtino [2]. Be Th1, Th2 ir Th17 ląsteles, reguliavimo T ląstelių (Tregs) taip pat vaidina svarbų vaidmenį H. pylori
AMŽIAUS gastritas [3]. Tuo tarpu, taip pat buvo įrodyta proinflammtory citokinai, tokių kaip IL-1β, TNF-alfa ir IL-6 iki būti padidėjusi H. pylori
-infected skrandžio [4], ir šie citokinai gali turėti įtakos T ląstelių imuninį atsaką uždegiminėmis ligomis, rodo, kad uždegimo veiksniai gali būti labai svarbus, H. pylori
AMŽIAUS skrandžio uždegimas. Tačiau tikslus mechanizmas proceso nebuvo visiškai aiški.

IL-32 yra naujai nustatė uždegimą skatinančių citokinų gaminamas imuninių ląstelių (NK ląstelių, T ląstelių, monocitų) ir ne imuninių ląstelių (endotelio ląstelių , epitelinės ląstelės) [5] - [7]. Ji iš pradžių buvo klonuotas kaip geno, kurią sukelia IL-2 ir vadinamas NK-4, bet jo funkcija buvo nežinomas iki 2005 m [5], [8]. Yra šešios sandūrų variantai, įskaitant IL-32α, β, γ, δ, ε ir ζ, ir įvairių vaidmenų potencialiai grojo įvairiose savo izoformų. Tačiau, specifinis receptorius IL-32 nebuvo aptikta, nors neutrofilų proteinazės 3 jungiasi prie IL-32 su dideliu afinitetu [9]. IL-32 vaidina svarbų vaidmenį įvairiose uždegiminių sutrikimų ir jo išraiška buvo parodyta, kad jie koreliuoja su ligų sunkumo reumatoidinio artrito, Krono liga ir atopinio dermatito [10] - [12]. Be to, IL-32 buvo numanoma kai infekcinių ligų, įskaitant H. pylori
infekcija [13] - [16]. Tačiau tarp IL-32 raiškos ir H asociacija. pylori
indukuotų gastritas ir jos tiksli reguliavimo mechanizmas įskaitant tai, ar auto-/paracrine poveikis IL-32, gali būti įtraukti į procesą išraiška buvo likti nežinoma.

Šiame tyrime nustatėme, IL -32 išraiška biopsijos iš pacientų su H. Helicobacter pylori infekcija
ir analizavo tarp skrandžio IL-32 lygio ir gleivinės uždegimas sunkumo santykius. Vėliau, mes ištirti prouždegiminių dirgiklių poveikį ir H. pylori
infekcijos IL-32 išraiška žmogaus skrandžio epitelyje ląstelių linijų. Mūsų rezultatai parodė, kad IL-32, gali būti įtraukti į H patogenezėje. pylori
AMŽIAUS gastritas.

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

tuo Xinqiao ligoninės trečiojo Karo medicinos universiteto Žmogaus skrandžio gleivinės biopsijos buvo surinkti vykdant įprastinę endoskopija , Kraujo buvo gauta iš to paties dalyko, kuris buvo atliktas endoskopija už H. pylori
serologinių tyrimų. Tyrimas patvirtino Etikos komiteto Xinqiao ligoninė, Trečiojo Karo medicinos universitete. Parašė informuotas sutikimas buvo gautas iš kiekvieno dalyko

Dalykai

Skrandžio audiniai ir kraujas buvo surinkti iš 54 pacientų. (Vyras /moteris = 27/27; vidutinis amžius 47 ± 1,2 metų) su O. Helicobacter pylori infekcija
, kuriems buvo atlikta endoskopija tuo Xinqiao ligoninės trečiojo Karo medicinos universitete. h. pylori
infekcija buvo patvirtinta greito ureazės testas, serologinių tyrimų, ^{13C šlapalo kvėpavimo bandymo ir histologijos. Pacientai buvo klasifikuojama kaip H. pylori
teigiamas, jei du iš keturių bandymų buvo teigiamas. Normalus skrandžio audiniai iš 47 asmenų (vyrų /moterų = 23/24; vidutinis amžius 47 ± 1,3 metų). Kurie turėjo neigiamos rezultatai keturių testų buvo įtraukti kaip kontrolės}

biopsijos ir histologija vertinimas

Biopsijos egzemplioriai buvo paimti iš kiekvienoje endoskopija dalykų. Vienas iš karto buvo užšaldomos skystame azoto ir saugomi -80 ° C RNR ekstrakcijos. Iš biopsijos poilsio buvo fiksuojami formalinu ir įdėta į parafiną. Hematoksilinu-eozinas (H & R) tamsintas skyriai išnagrinėjo du patyrę histopathologist. Histologinis sunkumas gastritas buvo rūšiuojami nuo normalios iki sunkaus remiantis infiltrating mononukleininėje ir polymorphnuclear ląsteles pagal nustatytus kriterijus [17], [18].

Mobilusis kultūros

skrandžio tankio epitelio linija AGS (ATCC, Amerikietiško tipo Kultūrų rinkinys) buvo kultivuojamos 37 ° C temperatūroje ir 5% CO _{2 į Ham F12 (Hyclone, Logan, UT, JAV), kuriame yra 10% serumas iš veršiuko embriono (FCS). AGS Ląstelės buvo pasėjamos į šešių duobučių lėkštelėse esant tankiui 1 × 10 ^{6 ląstelių /taip ir skatino su 10 ng /ml TNF-alfa arba /ir 10 ng /ml IL-1β (PeproTech Rocky Hill, NJ , JAV); ląstelės buvo surenkamos nurodyto laiko analizei IL-32 mRNR ir baltymų išraiška. Dėl signalo rūšyse inhibicijos tyrimas, NF-κB inhibitorius (BAY 11-7082), MEK1 /2 inhibitorius (U0126), p38 /MAPK inhibitorių (SB203580), JNK inhibitoriaus (SP600125), "JAK inhibitoriais I (visi bent 10 m ir visų nuo CalBiochem, San Diego, CA, JAV) arba transporto priemonės DMSO (Sigma, Saint Louis, MO, JAV) buvo pridėta prie ląstelių kultūros 1 valandą prieš citokinų stimuliacijos.}}

infekcija AGS ląstelės su H. pylori

h. pylori
11637 įtampą ir jos izogeninių CagA neigiamas mutavęs štamas (CagA ^{- padermės) buvo auginami smegenų širdies infuziją lėkštelėse, turinčiose 10% triušio kraujas 37 ° C temperatūroje microaerophilic sąlygų (5% O _{2 , 10% CO 2, 85% N 2). h. pylori
buvo nuplauti, kultūros programų plokštės su PBS ir centrifuguojamas 2500 × g 5 min, prieš sumaišymo PBS optinio tankio kiekybinio esant 600 nm bangos ilgiui (1 OD 600 = 1 × 10 9 H. pylori
/ml). Sukeltos infekcijos įvairovė (MOI) iš 1, 10, ir 100 buvo naudojamas užkrėsti AgS ląsteles. Neutralizavimo tyrimai, neutralizuojančių antikūnų prieš TNF-alfa (nTNF-alfa, 1 mikrogramai /ml, Biolegend) arba IL-1β (Nil-1β, 1 mikrogramo /ml, eBioscience) buvo įtraukta į coculture sistema.}}

RNR išskyrimas ir kiekybinė Realaus laiko PGR

RNR buvo išskirta iš biopsijos ar ląstelėse TRIzol reagent® (Invitrogen, Carlsbad, CA, JAV) ir atvirkštinio aranžuotų į kDNR naudojant ReverTra ACE (TOYOBO, Osaka, Japonija). Kiekybinis realaus laiko PGR buvo atliekama pagal iQ5 aptikimo sistemos (Bio-Rad, JAV). PCR praimeriai skirtos kirsti galinio egzono-intronas sieną ir naudojamas aptikti iRNR išraiška, sudaryto iš IL-32, TNF-α, IL-1β ir β-aktino ir jų sekos yra taip: IL-32, į priekį, 5 ' -ACGACTTCAAAGAGGGCTACC-3 "; pakeisti, 5'-GCCTCGGCACCGTAATCCAT-3 "; TNF-α, į priekį, 5'-TCTCTAATCAGCCCTCTGGC-3 '; pakeisti, 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3 "; IL-1β, pirmyn, 5'-GTTCTTTGAAGCTGATGGCC-3 "; pakeisti, 5'-GTGGTCGGAGATTCGTAGCT-3 "; β-aktino, pirmyn, 5'-TTCCTTCCTGGGCATGGAGTCC-3 "; pakeisti, 5'-TGGCGTACAGGTCTTTGCGG-3 ". β-aktino buvo naudojamas kaip vidaus kontrolės. Santykinis genų ekspresijos buvo apskaičiuota kaip kartų kaita kurį ΔΔCt metodu.

imunohistocheminis

Keturiasdešimt parafino įterptųjų mėginiai buvo supjaustyti 5 mikrometrai skyriuose. Po to, kai deparaffinized ir hidratuotas, komandos citrato buferio (pH = 6,0) dalys buvo termiškai sukeltas antigeną priìmimas mikrobangų krosnelėje ir apdorojimo su 3% vandenilio peroksido. Po inkubacijos su triušio prieš žmogaus IL-32 (Abcam, MA, JAV) per naktį 4 ° C, skaidrės buvo gydomi krienų peroksidazės konjuguoto antrinio kovos su triušio antikūnai (Zhongshan Golden Bridge Biotech., Pekinas, Kinija), po to substrato 3,3'-diaminobenzidinas tetrahidrochlorido (DAB). Izotipo atitiko antikūnas buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Vaizdai buvo įsigyta mikroskopu įrengta skaitmeninio fotoaparato "Nikon" Eclipse 80i (Tokijas, Japonija). Pusiau kiekybinę analizę imunohistocheminiu, kiekviename skyriuje buvo pasirinkta įvertinti IL-32 imunodažymu skrandžio audinių ir buvo rūšiuojami taip: rezultatas 0, jokio išraišką; Rezultatas tapo 1, mažą raišką; Rezultatas tapo 2, tarpinis išraišką; rezultatas 3, aukštą raišką.

Vakarų dėmė

Ląstelės buvo plaunami ledinio PBS ir tada sutrinka lizės buferiniame tirpale (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mm NaCl 1 mM EDTA 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 2,5 mM natrio pirofosfato, 1 mM glicerofosfatas, 1 mM Na3VO4, 1 mikrogramai /ml leupeptiną ir proteazės inhibitorius). Baltymų koncentracija buvo matuojama su PAST baltymų bandymo komplektas (boster, Uhanas, Kinija). Ląstelių fragmentai buvo atskirtos 12% SDS-PAGE ir perkelti į polivinilideno difluoridą membranos. Membranos buvo užblokuotas 1 h su 3% galvijų serumo albumino Tris-buferio druskų tirpalu-Tween kambario temperatūroje, ir inkubuojami per naktį 4 ° C su triušio anti-žmogaus IL-32 (Abcam, MA, JAV) arba pelės kovos su sukčiavimu žmogaus β-aktino ((Tianjin Sungene Biotech Co, Ltd ", Kinija). krienų peroksidazės konjuguoto vidurinė antikūnų buvo naudojama pagal gamintojo instructures. interesų baltymai buvo ryškinamos naudojant Supersignal® Vakarų Dura Trukmė substrato reagentas (Thermo, IL , JAV).

Statistinė analizė

Visi rezultatai buvo apibendrinti vidurkis ± standartinė paklaida vidurkio (SEM) ir statistinę analizę buvo atlikta naudojant GraphPad Prism 5.0 programinė įranga. tarp dviejų skirtumų . grupės buvo analizuojami buvo analizuojami vieną pusę dispersinė analizė (ANOVA) Mann-Whitney U testą ir kelių grupių Kai buvo aptikta dispersijos, Spearman koreliacijos buvo naudojamas įvertinti ryšį tarp kintamųjų laipsnį P <. 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas.

rezultatai

Padidėjęs IL-32 iRNR lygis Aptikta Sergančiųjų H. pylori
Infekcija

Jei ištirti, ar IL-32 yra dalyvauja H patogenezėje. pylori
sukeltas gastritas, pirmiausia nustatomas IL-32 iRNR raiška skrandžio biopsijos iš dalykų su ir be H. pylori
infekcija. Kaip parodyta Fig. 1A, IL-32 išraiška buvo reikšmingai didesnis, H. pylori
-positive mėginius nei kad H. pylori
negative mėginiai (P < 0,001). Įvertinti, ar IL-32 išraiška buvo susijęs su uždegimo laipsnį H. pylori
-infected skrandžio mėginius, mes suskirstė mėginius į normaliomis ir silpno, vidutinio ir sunkių gastritas grupes pagal histologijos vertinimo, kaip aprašyta Medžiagos ir metodai. Rezultatai parodė, kad IL-32 iRNR lygiui H. pylori
-positive mėginiai buvo teigiamai koreliuoja su skrandžio uždegimas (1B pav.) laipsnį. Be to, IL-32 mRNR lygis taip pat parodė teigiamą koreliaciją su TNF-alfa ir IL-1β mRNR lygių (1C pav.).

Padidėjęs IL-32 baltymo ekspresija pacientams, sergantiems H. pylori
Infekcija

Jei vizualizuoti IL-32 raišką skrandžio biopsijos, imunohistocheminį dažymo IL-32 buvo atliktas parafino įterptųjų audiniuose. Kaip parodyta Fig. 2B, keletas IL-32-gaminančių ląstelių buvo aptikta H. pylori
negative skrandžio audiniai, o H. pylori
-positive skrandžio audiniai, mes nustatėme, kad IL-32 baltymo ekspresija buvo žymiai padidėjęs (2c pav.). Be to, pusiau kiekybinis įvertinimas IL-32 reaktyvumas patvirtino, kad IL-32 išraiška į skrandžio audiniuose H. pylori
-infected pacientai, kuriems baltymų lygyje buvo taip pat žymiai padidėjo, palyginti su tais H. pylori
negative skrandžio audiniai ir švelniame gastritas.

IL-32 iRNR ir baltymų lygis buvo aktyvinama TNF-alfa ir IL-1β

Kadangi mes nustatėme teigiamą ryšį tarp IL -32 iRNR lygiai ir skrandžio uždegimas laipsnis skrandžio audinių ir koreliacija tarp IL-32 ir IL-mRNR 1β ir TNF-α mRNR, prouždegiminių citokinų reglamentas dėl IL-32 iRNR išraiškos buvo tiriamas AGS ląsteles. Kaip parodyta Fig. 3A, po to, kai gydomas su citokinų už 24 valandų, IL-32 lygis mRNR buvo žymiai aktyvinama: 5,0 ± 0,5-kartus pagal TNF-alfa, 6,9 ± 0,5-kartus IL-1β, ir 11,2 ± 1,4 karto IL-1β ir TNF-α. Šis poveikis buvo visiškai priklausoma nuo NF-κB signalinio kelio kaip pirminio gydymo NF-κB inhibitoriaus BAY 11-7082, bet ne JNK, p38 /MAPK, MEK1 /2 arba JAK /STAT signalizavimo inhibitoriai slopina IL-32 mRNR indukcijos po stimuliacijos TNF-alfa arba IL-1β (pav. 3C). Be to, Western blot patvirtino, kad IL-32 baltymas lygis taip pat buvo sukeliama TNF-alfa ir /arba IL-1β stimuliacijos, kurios priklausė nuo NF-κB signalinio kelio (pav. 3B ir D). Mes šalia studijavo ar TNF-α arba IL-1β dalyvavo H. pylori
indukuotų ląstelę IL-32 išraiška. AGS ląstelės buvo užsikrėtę H. pylori parsisiųsti ir tuo pat metu buvo gydomi neutralizuojančių antikūnų blokuoti TNF-alfa arba IL-1β. Kaip parodyta Fig. 3E, O
.

H.pylori
indukuotų IL-32 baltymo ekspresija buvo gerokai sumažėjo, naudojant nurodytus citokinų blokuojančios antikūnus.. pylori
indukuotų IL-32 išraiška

Jei toliau studijuoti tiesioginį poveikį H. pylori
dėl IL-32 išraiškos skrandžio epitelinių ląstelių, AGS ląstelės buvo infekuoti H. pylori
esant 1, 10, ir 100. MOI Kaip parodyta Fig. 4A ir B, IL-32 iRNR ir baltymų koncentracija padidėjo po H. pylori
infekcijai gydyti, gamyboje nuo dozės priklausomu būdu. Mes šalia analizuojama, ar H. pylori
atmainų skirtumai prisidėtų prie skirtingų išraiškos IL-32. Ląstelės buvo užsikrėtę H. pylori 11637
įtampa ir CagA ^{- padermė. Nors CagA - padermė infekcija šiek tiek padidino IL-32 raišką AGS ląsteles, IL-32 mRNR indukcija ir baltymų lygis iki CagA - padermė infekcija buvo gerokai mažesnis nei H. pylori 11637
padermės infekcija (pav. 4C ir D).}

Diskusijos

Šiame tyrime mes nustatėme, kad skrandžio IL-32 buvo gerokai padidėjusi pacientams su H , Helicobacter pylori infekcija
tiek mRNR ir baltymų koncentracijos. Padidėjęs IL-32 lygis mRNR koreliuoja su skrandžio uždegimas sunkumo. Be to, IL-32 iRNR lygiui taip pat buvo susijęs su TNF-alfa ir IL-1β iRNR lygiui H. pylori-
teigiamų skrandžio biopsijos, ir vieną iš dviejų citokinų gali upregulate IL-32 mRNR ir baltymų lygį. Be to, mes nustatėme, kad H. pylori
infekcija skrandžio epitelinių ląstelių linijų, taip pat sukeltas IL-32 mRNR ir baltymų ekspresiją. Šie rezultatai rodo, kad IL-32 yra tikėtina, dalyvauja skrandžio uždegimas pacientų, sergančių H. pylori
infekcija.

IL-32 buvo neseniai apibūdino kaip proinflammtory faktorius daugelyje uždegiminių ligų, tokių kaip lėtinė rinosinusito, būklė dažniausiai sukelia gramteigiamas bakterijas infekcijos [19], [20]. tada Padidėjęs IL-32 buvo pranešta HCV ir HBV infekuotus kepenų ir koreliuoja su kepenų uždegimas ir kepenų fibrozės [15] sunkumo, [21]. Šiame tyrime mes parodėme, kad IL-32 iRNR lygis buvo gerokai padidėjusi pacientams, sergantiems H. Helicobacter pylori infekcija
, ir taip pat buvo pastebėta didelė koreliacija tarp IL-32 mRNR ir skrandžio uždegimas, o tai rodo, kad IL-32, gali vaidinti svarbų vaidmenį H. pylori-
užsikrėtę skrandį. Be to, imunohistocheminis buvo naudojamas aptikti, sudaryto iš IL-32 ir rezultatų šaltinį parodė, kad IL-32 buvo išreikšta skrandžio epitelinių ląstelių ir jos labai išraiška buvo pastebėtas į H. pylori-
teigiami skrandžio audinius. Nes IL-32 buvo nustatyta, kad sukelti IL-8 gamybą skrandžio epitelinių ląstelių ir slopina proangiogenic veiksnys VEGF išsiskyrimą, bronchų epitelio ląstelių [16], [22], ir mes taip pat pastebėjo, IL-32 lygis mRNR buvo teigiamai koreliuoja su IL-8 išraiška (duomenys neparodyta). Logiška, kad IL-32 įtakoti skrandžio epitelinių ląstelių funkciją H. pylori-
užsikrėtę skrandį.

klasikinis skrandžio uždegimas su H. pylori
infekcija gali turėti įtakos infiltrating imunines ląsteles ir uždegiminius citokinus, vėliau gali būti neseniai atrado IL-32 [19] - [22]. Mūsų tyrimo duomenimis, mes nustatėme, kad in vitro, TNF-α ir /arba IL-1β skatino AGS ląsteles upregulate IL-32 mRNR ir baltymų ekspresiją, kuri palaiko teigiamą ryšį tarp IL-32 ir TNF-alfa ir IL-1β in vivo , Tačiau, Th17 citokinų (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 citokinų IL-4, Tregs citokinų TGF-β1 ir Th1 citokinų IFN-gama visi nepavyko sukelti IL-32 mRNR ir baltymo ekspresiją mūsų sistemoje, nors buvo pranešta visi atitinkami imuninių ląstelių tipai ir citokinai įsiskverbti H. pylori-
užsikrėtę skrandžio (žr S1 paveikslą). Šie rezultatai rodo, kad IL-32 yra tikėtina, gaminamas iki šių ląstelių infiltracija, kuri palaiko ataskaitos, kad IL-32 indukują dendritinių ląstelių brendimą ir skatina Th1 ir Th17 poliarizaciją [23]. Be to, IL-32 mRNR indukcija ir baltymų TNF-alfa arba IL-1β buvo užblokuotas NF-κB inhibitorių PAGAL 11-7082, nurodant, kad molekulinis mechanizmas grindžiamas šis procesas gali NF-κB priklausomi. Įdomu tai, kad naudojant neutralizuojančius antikūnus blokuoti TNF-alfa arba IL-1β lygiagrečiai su H. pylori
infekcija, mes nustatėme, kad IL-32 baltymo lygis buvo žymiai sumažėjo. Todėl, mūsų rezultatai rodo, kad epitelio citokinai (TNF-α ir IL-1β) atsakas į H. pylori
infekcija buvo svarbus IL-32 raiškos reguliavimas.

Mūsų rezultatai taip pat parodė, kad IL-32 iRNR ir baltymų lygis padidėjo nuo dozės priklausomu būdu po H. Helicobacter pylori infekcija
, tai rodo, kad H poveikį. pylori
infekcijos IL32 išraiška yra tiesiogiai fiziologinis. Be to, CagA mutacijos H. pylori
galėtų gerokai susilpninti IL-32 AGS ląstelių išraiška, nurodant, kad H. pylori
indukuotų IL-32 ląstelę buvo priklausoma nuo CagA. h. pylori
išreikšti daug baltymų, siekiant palengvinti jos patogenezę [24]. UreB taip pat yra svarbus virulentiškumo baltymo panaudojimas H kolonizavimo. pylori parsisiųsti ir tarpininkaujant, h. pylori
indukuotų disfunkcija skrandžio barjerą [25], [26]. Mes nustatėme, kad UreB mutacijos taip pat silpnos, H. pylori
indukuotų IL-32 iRNR išraiška (žr S2 paveikslą). Todėl, IL-32 išraiška buvo daugiausia reglamentuoja perkėlimas CagA į epitelio ląstelių ir kitų virulentiškumo baltymų, taip pat gali turėti įtakos patogeninę reakciją H. pylori
skrandžio epitelinių ląstelių.

Taigi, mūsų duomenys rodo, kad IL-32 išraiška buvo padidėjusi pacientams, sergantiems H. pylori
infekcija ir koreliuoja su skrandžio uždegimas sunkumo. IL-32 išraiškos reguliavimas reaguojant į H. pylori
infekcija priklauso nuo įvairių sąveikaujančių veiksnių. Šie duomenys kartu rodo, kad IL-32, gali vaidinti svarbų vaidmenį gastrito sukelia H patogenezėje. pylori
infekcija.

Pagalbinė informacija
S1 paveiksle.
AGS ląstelės buvo pasėjamos šešių duobučių plokšteles tankio 1 × 10 ^{6 ląstelių /gerai ir stimuliuotos 10 ng /ml Th17 citokinų (IL-17A, IL-17F, IL-6), Th2 citokinų IL-4, Tregs citokinų TGF-β1 ir Th1 citokinų IFN-γ už 24 valandų, ir ląstelės buvo surinkti analizei IL-32 mRNR ir baltymų išraiška. Duomenys vidurkis ± SEM trys atskiri eksperimentai ir po vieną atstovą dėmė buvo parodyta
Doi:. 10.1371 /journal.pone.0088270.s001
(TIF)
S2 pav.
h. pylori
padermė 26695, auginamos ant smegenų-širdies infuzija plokščių, kurių sudėtyje yra 10% triušių kraujo 37 ° C temperatūroje, esant microaerophilic sąlygų (5% O _{2, 10% CO 2, 85% N 2 ), o jo izogeninių ureaz B subvieneto neigiamas mutavęs štamas (UreB - padermės) buvo gauta, kaip ir anksčiau aprašyta [27]. A infekcijos įvairovė (VRM) 100 buvo naudojamas užkrėsti AGS ir GES-1 ląstelių. Ląstelės buvo surinkti analizei IL-32 mRNR išraiška. Duomenys vidurkis ± SEM trys atskiri eksperimentams. * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
< 0,001
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0088270.s002
(TIF)}}

• PLoS ONE: Atrophic Gastritas: susijusios faktorius osteoporozės vyresnio amžiaus moterims
• PLoS ligų sukėlėjai: Caveolin-1 Apsaugo B6129 Pelės prieš Helicobacter pylori gastritas