Prognostinė poveikis nustatant perspektyvias cirkuliuojančių vėžinių ląstelių skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, naudojant telomerazės konkretaus virusinio agentas: būsimasis study

prognostinė poveikis nustatant perspektyvias cirkuliuojančių vėžinių ląstelių skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, naudojant telomerazės konkretaus virusinio agentas: atlikta perspektyvų studija
Anotacija
faktai
cirkuliuojančių vėžinių ląstelių (CTCs) periferiniame kraujyje nustatymo metodas yra naudingas siekiant įvertinti prognozę, stebėti ligos progresavimą, ir įvertinti gydymo poveikį įvairių piktybinių navikų. Tačiau klinikinė reikšmė CTCs yra prieštaringas. Mes bandėme nustatyti perspektyvias CTCs periferiniame kraujyje skrandžio vėžio pacientams, vartojantiems telomerazės konkretaus virusinio agentas.
Metodai
Mes paėmė 7,5 ml kraujo mėginį iš 65 gydymo neigiamas skrandžio vėžiu sergantiems pacientams prieš operaciją ir 10 sveikos savanorių. Mes nustatėme, perspektyvius CTCs kraujyje mėginių po inkubacijai juos su telomerazės specifiką, replikacijos selektyvus, oncolytic adenoviruso agentas balansinės žalią fluorescencinė baltymų (GFP) geną (OBP-401). GFP-teigiamų CTCs buvo apibrėžta kaip turintys bent 7.735 mikronų skersmens; ši riba buvo nustatoma pagal ROC kreivė kreivė analizė. GFP-teigiamas ląstelės buvo skaičiuojami pagal fluorescencijos mikroskopu.
Rezultatai
Gerokai bendrajam išgyvenamumui skirtumo tarp pacientų su 0-4 ir tiems, su ≥ 5 GFP-teigiamas CTCs į I etapo-IV ligos grupės ir etapo II-IV Išplėstinė liga grupė. Iš GFP-teigiamas CTCs skaičius nebuvo susiję su vėžio stadijoje. Tarp patologinių išvadomis, GFP-teigiamas CTCs skaičius buvo tik smarkiai susijęs su venų invazija, nors buvo tendencijų kurti daugiau GFP-teigiamas CTCs su ligos progresavimo (naviko gylio, limfmazgių metastazių, tolimos metastazės, limfinės invazijos ir histologinis tipas ).
Išvados
Nebuvo reikšmingas ryšys tarp GFP-teigiamas CTCs skaičiaus ir bendro išgyvenamumo pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu. Iš CTCs naudojant OBP-401 aptikimas gali būti naudinga prognostinį vertinimą.
Bandomoji registracija
universiteto ligoninės medicinos informacinis tinklas Japonijoje, UMIN000002018.
Raktiniai žodžiai
Cirkuliacinis navikines ląsteles Skrandžio vėžys telomerase faktai
tolima metastazių kieto naviko yra stiprus prognostinis faktorius [1-3]. Cirkuliuojančių vėžinių ląstelių (CTCs) periferiniame kraujyje buvimas rodo, kad pacientas yra sisteminė liga etapo [4]. Iš CTCs identifikavimo periferiniame kraujyje yra naudingas metodas įvertinti prognozę, stebėti ligos progresavimą, ir įvertinti gydymo poveikį krūties, prostatos, odos, storosios žarnos ir skrandžio ir žarnyno piktybinių navikų. Todėl, buvo sukurtos įvairūs metodai aptikti CTCs, ir yra kartais naudojami kartu. Dažnas būdai sodrinimo ir aptikimo CTCs yra tankis gradientas atskyrimas [5], tiesioginis sodrinimo filtruojant [6, 7], imunomagnetiniam atskyrimas [8], tėkmės citometrijos [9], realaus laiko atvirkštinės transkriptazės polimerazės grandininę reakciją (RT- PGR) [10, 11], ir Microchip Technology [12].
Mobilusis sodrinimą tankis gradiento atskyrimo atliekamas naudojant komercinius rinkinius, pavyzdžiui, OncoQuick® (Greiner, Frickenhausen, Vokietija) [13] ir Lymphoprep® (Nycomed, Oslo , Norvegija) [14]. Tankis gradientas atskyrimas yra paremta teorija, kad skirtingų tipų ląstelių gali būti atskiriamas pagal jų tankį. Todėl, ji yra sunku išgauti visus CTCs dėl pakeitimų ląstelių migracijos. AT-PGR yra vienas iš labiausiai paplitusių metodų naviko ląstelių aptikimą, nes savo didelio jautrumo ir specifiškumo, darant prielaidą, tinkamą gruntą ir zondo konstrukciją. Tačiau klaidingai teigiami rezultatai gali būti dėl savo techninio delikatesas ir didelio jautrumo [15, 16].
Imunomagnetinės mobilųjį pagerinimas, pavyzdžiui, kad iki CellSearch System® (Veridex, LLC, Raritan, NJ, JAV) atliko [ ,,,0],17], šiuo metu yra dažniausiai naudojamas metodas siekiant praturtinti ir aptikti CTCs [18-21]. Iš imunomagnetiniam ląstelių atskyrimas privalumas yra tai, kad CTCs gali būti matomos fluorescenciniu mikroskopu. aptikta antikūnų prieš epitelio žymekliai (epitelinių ląstelių adhezijos molekulių EpCAMs) ląstelės yra pasiryžusi būti CTCs. Todėl, šis metodas gali suteikti klaidingų teigiamų rezultatų atsižvelgiant į normalų epitelio žymeklio išraiškos pagal ne-vėžinių ląstelių, ir klaidingų neigiamų rezultatų gali kilti remiantis selektyvus žymuo raiškos vėžinių ląstelių trūkumo. Kaip apribojimų, susijusių su minėtų požiūrių rezultatas, naujas metodas, reikia tiksliai nustatyti perspektyvias CTCs.
Telomerase vaidina svarbius vaidmenis Kancerogeninis ir vėžio invazijos ir metastazių [22-24]. Mes sukūrėme techniką išnaudoti aukštą telomerazės aktyvumą ląstelėse. Šis metodas naudoja telomerazės specifinis, replikacijos selektyvus modifikuota virusinė agentas (OBP-401; TelomeScan®, Oncolys Biopharma, Tokijas, Japonija), kurioje žmogaus telomerazės atvirkštinės transkriptazės (tret
) geno promotoriaus yra įterpiamas į E1 regione , ir žalią fluorescuojančio baltymo (GFP) genas, yra patalpintas pagal citomegaloviruso promotoriaus E3 kontroliuoti regiono kaip viruso replikaciją [25] žymeklį. Buvo pranešta, kad OBP-401 gali būti naudojamas siekiant aptikti perspektyvius CTCs tarp normalių kraujo ląstelių [26, 27].
Čia mes taikė tyrimą, siekiant nustatyti perspektyvias CTCs su už metastazių skrandžio vėžiu sergantiems pacientams potencialą. Mes nustatėme, GFP-teigiamas CTCs. Priešingai, ji yra įmanoma, kad ne tik vėžio ląsteles išmeta GFP fluorescenciją po OBP-401 infekcijos [28]. Todėl, mes pasirinktas ląsteles didesnis nei riba nustatoma lyginant tarp sveikų savanorių ir pacientų, nes CTCs yra didesni nei normalų kraujo ląstelių [7, 29, 30]. . Mes studijavo GFP-teigiamas CTC skaičius išlikimą ir patologinių indeksų ligos progresavimo asociaciją
metodai
pacientų ir sveikų savanorių
pacientai įtraukti į šį preliminarų tyrimą buvo tie vyksta planuojamą chirurginis gydymas; pacientai, kurie buvo tinkami endoskopinių gleivinės rezekcija arba endoskopinės gleivine skrodimo buvo atmesti. Kad įtraukimo kriterijai buvo: (i) histologiškai patvirtintas adenokarcinomos pagal endoskopinio biopsijos skrandžio; (II) klinikinių vienišas navikas; (Iii) kai prieš endoskopinis rezekcija, chemoterapija, radioterapija arba; (IV) Amžius 20-80 metai; (V) Rytų kooperatinės onkologijos grupės veiklos statusas [31] 0 arba 1; (VI) pakankamai organų funkciją; ir (vii) parašyta informuotą sutikimą. Atmetimo kriterijai buvo: (i) sinchroninės ar metachronous piktybinis navikas; (II) nėščios ar krūtimi maitinančios moterys; (III) aktyvų ar lėtinis virusinis hepatitas; (IV) aktyvus bakterinė ar grybelinė infekcija; (V) cukrinis diabetas; (VI) sisteminis kortikosteroidų; ir (vii) nestabili hipertenzija. Liga etapas pacientų buvo patologiškai tiriamas naudojant septintąjį redakciją TNM klasifikaciją Tarptautinės Sąjungos kovos su vėžiu [32]. Iš trims pacientams naviko be pašalintas skrandis ir regioninės limfmazgių būklės penkių pacientų be pakankamo limfadenektomija gylis buvo diagnozuota chirurginiu būdu.
Visi pacientai dalyvavo mūsų ligoninėje reguliariai po operacijos, ir buvo patikrinti kas 3 mėnesius. Pacientai taip pat atlikta endoskopija ir kompiuterinės tomografijos bent kartą per metus, atsižvelgiant į jų ligos stadijos ir žinoma.
Mes taip pat įdarbino sveikus savanorius veikti kaip kontrolės. Visi sveiki savanoriai buvo darbuotojai SYSMEX Corporation ir įtraukti septynis vyrus (vidutinis amžius 31,4 metai, amžiaus ribos 24-39 metų) ir trys moterys (amžiaus vidurkis 33,7 metai, amžiaus ribos 26-48 metų). Visi savanoriai buvo atlikta medicinos apžiūras upon užimtumo ir kasmet; apžiūras įtraukti medicinos interviu, auscultation, krūtinės rentgenogramos ir kraujo ir šlapimo tyrimus. Be to, mes atliekame individualius interviu prieš mėginio paėmimo; bet savanoris, kuris šiuo metu medicininio gydymo, nėščia arba maitina krūtimi, arba kurie buvo paaukoti kraujo per pastarąjį mėnesį buvo pašalintas.
virusas
OBP-401 A telomerase specifiką, replikacijos selektyvus adenoviruso agentas, kurioje tret
promotorius elementas diskai PAV
ir EIB
genų ekspresiją, ir į kurią GFP genas yra integruotas, buvo naudojami šiame tyrime. Jautrumas ir specifiškumas tyrimą naudojant OBP-401 buvo tirtas anksčiau Kim et al. [27]. Bandymas buvo pakartotas penkis kartus išbandyti atrankoje įskaitant 1 MDA-MB-468 (krūties karcinoma) ląstelių ir 7,5 ml kraujo, o GFP-teigiamas ląstelių skaičius buvo 1, 1, 1, 2 ir 3; mėginyje, įskaitant 20 MDA-MB-468 (krūties karcinoma) ląsteles, iš GFP-teigiamas ląstelių skaičius buvo 15, 17, 19, 22 ir 24. Virusinės mėginiai buvo laikomi -80 ° C temperatūroje.
ląstelių linijų ir kultūra
A549 (plaučių karcinoma), HepG2 (kepenų ląstelių karcinoma), HEC-1 (endometriumo adenokarcinoma), Kato-III (skrandžio karcinoma), ir SBC-3 (nesmulkialąstelinis plaučių vėžys) ląstelių linijas buvo gauti iš sveikatos Mokslas tyrimų ištekliai bankas (Osaka, Japonija). LNCaP (prostatos adenokarcinoma) ir ovčar-3 (kiaušidžių karcinoma) ląstelių linijas buvo gauti iš Riken Mobilusis bankas (Tokijas, Japonija). Ląstelės buvo kultivuojamos pagal į pardavėjo specifikacijas. MDA-MB-468 ląstelės buvo auginamos kaip aprašyta anksčiau [27].
Mėginio paruošimas ir ląstelių skaičiavimo
7,5 ml periferinių venų kraujo mėginyje buvo gauta iš kiekvieno paciento prieš operaciją ir iš kiekvieno savanorio. Mėginiai buvo įtraukiamas į vamzdžių, kurių sudėtyje yra citrinų rūgštis, fosforo rūgštis, ir dekstrozės, ir saugomi 4 ° C temperatūroje. Tyrimas buvo pradėtas per 48 val.
Mėginiai buvo centrifuguojamas 5 min 540 g ir plazmos fazė buvo pašalintas. Po to ląstelės buvo keturis kartus praplaunama fosfato-buferio druskų tirpalo (PBS) ir du kartus su Roswell Park memorialinis instituto terpėje. Mėginiai buvo užkrėsti su 4 × 10 8 apnašų sudarančių vienetų skaičius (pfu), iš Obp-401 virusų inkubuojant vidutiniu 24 valandas, esant 37 ° C temperatūroje.
Po negyvų ląstelių dažymo raudonieji-fluorescencinė reaktyvus dažų L23102 (gyvenimas Technologies Corporation, Karlovi Varai, CA, JAV), OBP-401 virusų buvo inaktyvuota ir ląstelės buvo fiksuotas 2% paraformaldehido (PFA) 20 min kambario temperatūroje.
mėginiai buvo gydomi paviršinio aktyvumo agentas (Emalgen 2025 G; Kao cheminių medžiagų, Tokijas, Japonija) 10 min, esant 40 ° C iki degraduoja raudonųjų kraujo kūnelių. Galiausiai, 7,5 ml kraujo buvo naudojamas sukurti du stiklelio mėginius ištirti mikroskopu. Visi GFP-teigiamas ląstelės dėl dviejų skaidrių buvo skaičiuojami, naudojant kompiuterinę kontroliuojamų fluorescencinis mikroskopas (IX71; Olympus, Tokijas, Japonija) ir egzaminuotojas apakinti atrankinių detales. Bendras tyrimo laikas buvo 27,5 val (1 paveikslas). 1 pav protokolas ir tvarka iš "GFP-CTC Analizės". Kiekvienas 7,5 ml periferinę veną kraujo mėginys buvo gautas iš pacientų prieš operaciją ir iš savanorių. Mėginiai buvo įtraukiamas į vamzdžių, kurių sudėtyje yra citrinų rūgštis, fosforo rūgštis ir dekstrozės. Mėginiai buvo centrifuguojamas ir plazmos fazė buvo pašalintas. Po ląstelių plovimo naudojant PBS ir Roswell Park memorialinis institutas terpėje, mėginiai buvo užkrėsti 4 × 108 pfu iš OBP-401 virusu. OBP-401 virusas buvo inaktyvuota ir ląstelės buvo fiksuotas 2% paraformaldehido (PFA). Mėginiai buvo gydomi paviršinio aktyvumo agentu, siekiant gauti degraduoja raudonųjų ir baltųjų kraujo ląstelių. Du stiklelio mėginiai iš 7,5 ml kraujo buvo pasirengę ištirti mikroskopu. Visi GFP-teigiamomis ląstelėmis, dėl dviejų skaidres buvo skaičiuojami naudojant kompiuteriu valdomas fluorescentinės mikroskopu.
Nustatymas GFP fluorescencijos intensyvumas ribą
už GFP fluorescencijos intensyvumas riba buvo nustatoma taip. Maždaug 30.000 išauginti ląsteles Spygliuota į 7,5 ml kraujo mėginių iš sveikų savanorių, kurie buvo Spygliuota su įvairiomis vėžio ląstelių linijų: A549, HepG2, HEC-1, Kato-III, SBC-3, LNCaP, MDA-MB-MB468 ir ovčar -3. Kraujo mėginiai buvo atliktas CTC nustatymo tyrime, ir tada aptinkamas ląstelės buvo skaičiuojamas fluorescencijos mikroskopijos. Daugiau nei 100 ląstelės buvo analizuojami kiekviename mėginyje. Mes nustatytas 2,85 × 10 7 reiškia lygiavertį fluorochromo būti už GFP signalo intensyvumą nuo minimalaus GFP intensyvumo lygį stebimas kraujo mėginiai prisodrintą su ląstelių linijas (2 paveikslas) riba. Duomenys pateikiami kaip GFP-teigiamas CTCs per 7,5 ml periferinio kraujo mėginio numerius. 2 pav GFP signalo intensyvumas iš įvairių vėžio ląstelių linijų. Viršuje ir apačioje dėžutės yra viršutinės ir apatinės, prekes ir dėžutės juosta yra mediana. Linijos dėl sagas pabaigoje yra minimali ir maksimali. Y ašyje yra GFP signalo intensyvumą ant žurnalo skalėje
imunodažymu
Fikoeritrino žymėto anti-žmogaus CD45 antikūnas (BioLegend, San Diegas, CA, JAV) buvo skiedžiamas 1: 5. Ir Ramiojo vandenyno mėlyna žymėto anti-human CD326 (EpCAM) antikūnas (BioLegend) buvo skiedžiamas santykiu 1:10 PBS, kuriame yra 2% vaisiaus galvijų serumo. Ląstelės buvo inkubuotos su sumažinto antikūnų 30 min, esant 25 ° C temperatūroje. Po plovimo su PBS su 2% vaisiaus jaučio serumo, ląstelės buvo montuojamas ant stikliukų ir analizuojami naudojant fluorescencijos mikroskopu. (IX71; Olympus)
Statistinė analizė
Statistinė analizė atlikta naudojant JMP Statistiniai Discovery 9.0.2 (SAS institutas, Cary, NC, JAV). Norėdami nustatyti ląstelių skersmuo slenkstį, aptikti GFP-teigiamas CTCs buvo analizuojami naudojant ROC kreivė (ROC) kreivę tarp mėginių iš skrandžio vėžiu sergančių pacientų ir iš savanorių. Dėl daugelio grupinių palyginimų, homogeniškumas dispersinė buvo įvertintas pagal Levene testo. Dėl parametrinių palyginimų mes naudojome dispersinės analizės, o ne parametrinių palyginimų mes panaudojome Vilkoksono ir Kruskal-Wallis testai. Mes naudojome Fišerio tikslusis ir χ
2 testai su 2 × 2 ir 4 × 2 lentelėje, atitinkamai, palyginti klinikos simbolių pacientų grupėje. Kaplan-Meier kreivės apskaičiuotos ligos reiškinių išgyventas ir bendro išgyvenamumo buvo sukurtas ir palyginimai tarp grupių buvo atliekama naudojant dvipusį log-rank testą. P
vertės ≤0.05 buvo laikomi statistiškai reikšmingas.
Tyrimą buvo patvirtinta institucinių peržiūros valdybos Showa universiteto, Šiaurės Yokohama ligoninėje. Mes paaiškino tyrimo protokolą pacientams ir savanoriams, kol jie davė raštišką sutikimą. Šis tyrimas buvo įregistruota universiteto ligoninės medicinos informacinio tinklo Japonijoje numeris 000002018.
rezultatai
Dalyvio charakteristikos
šešiasdešimt penki pacientai, sergantys skrandžio adenokarcinoma (46 vyrai ir 19 moterų, vidutinis amžius 58,8 metai, amžiaus ribos 33 -76 metų), kuriems buvo atlikta operacija tuo virškinimo ligų centras nuo Showa universiteto Šiaurės Yokohama ligoninėje nuo 2009 rugsėjo iki 2011 gegužės, buvo įtraukti į šį tyrimą. Dvidešimt devyni turėjo distalinio pašalintas skrandis, 32 turėjo bendrą pašalintas skrandis, o keturi buvo tiriamąją laparotomija. Pacientų charakteristikos yra apibendrinti 1 lentelėje dvidešimt aštuoni iš 65 pacientų chemoterapija po operacijos. Kontrolinė grupė sudarė 10 sveikų volunteers.Table 1 pacientui savybes ir patologiniai pokyčiai
parametrai
pacientų skaičių

seksas
Vyras
46
Moteris
19
Amžius (vidurkis, diapazonas)
58,8, 33-76
pašalintas skrandis
distalinio
29
viso
32
Nėra
4
Chirurginės požiūris
laparoskopija
54
Atviras laparotomija
11
Uleczalność
R0
57
R1 pervežimas 0
R2
8
TNM etapas
Aš
40
II
6
III
10
IV
9
Naviko gylis invazija
T1
36
T2
8
T3
9
T4
12
limfmazgių metastazių
N0
39
N1
5
N2
6
N3
15
Tolima metastazės
M0
56
M1
9
Pagrindinė histologinis tipas †
Diferencijuotas
25
Nediferencijuota
40
limfinės invazija
LX
4
L0
35
L1
26
Venų invazija
VX
4
V0
35
V1-2
26
† Na arba vidutiniškai diferencijuoti adenokarcinoma ir spenelių adenokarcinoma buvo klasifikuojama kaip diferencijuotą tipo. Signet žiedas ląstelių karcinoma, menkai diferencijuotas adenokarcinoma ir mucinous adenokarcinoma buvo klasifikuojama kaip nediferencijuotos tipo.
GFP-teigiamų CTCs periferiniame kraujyje
Naudojant fluorescencijos mikroskopą, ląstelės su liuminescencinėmis emisijos ≥2.85 × 10 7 vidutinė lygiavertė fluorochromo buvo skaičiuojami kaip GFP-teigiamas ląsteles
įvairių dydžių GFP-teigiamas ląstelių buvo pastebėtas kiekvieno mėginio.; todėl buvo sunku nustatyti vieną reprezentatyvią ląstelę tarp GFP-teigiamas ląsteles palyginimui tarp pacientų ir sveikų savanorių. Todėl, siekiant išvengti naudojant savavališkai vertę, mes nusprendėme naudoti optimalų ribą, gautų iš ROC analizę remiantis ląstelių dydžio, tai yra, 7.735 mikronų, nes riba apibrėžti GFP-teigiamas CTCs (3 paveikslas). 3 paveikslas Palyginimas ląstelių skersmuo yra nuo pacientų ir savanorių. Norėdami nustatyti ribą, mes palyginti ląstelių iš skrandžio vėžiu sergantiems pacientams ir kontrolę ROC analizės skersmens. Ten buvo didelis skirtumas tarp skrandžio vėžio pacientų ir kontrolės (p
< 0,001; plotas po kreive = 0,57; 95% pasikliautinasis intervalas 0,54-0,60 =)
pagal imunohistocheminį dažymo, naudojant anti-EpCAM ir. anti-CD45 antikūnai, mes patvirtino, kad GFP-teigiamas CTCs buvo EpCAM teigiamas ir CD45 neigiamas (4 paveikslas). 4 pav Pavyzdžiai mikroskopinių vaizdų. Reprezentacinės vaizdus iš dviejų skrandžio vėžio pavyzdžių GFP-teigiamas CTCs ir imunocitocheminiam analizės anti-EpCAM- ir anti-CD45 teigiamų ląstelių. Ląstelės buvo skaičiuojami naudojant kompiuterinę kontroliuojamų fluorescencijos mikroskopu pagal Egzaminuotojas aklu į mėginio statusą. Mastelio juosta, 10 mkm.
GFP-teigiamas CTCs numerius periferinių kraujo mėginiai rodomi 5 paveiksle Nebuvo jokio reikšmingo skirtumo tarp aptikimo normos GFP-teigiamas CTCs atrinktų atstovaujančių kiekvieną vėžio stadijos. 5 paveikslas Taškų GFP-teigiamas ląsteles. Taškai yra GFP-teigiamas CTCs paciento mėginių skaičius. Viršuje ir apačioje dėžutės atstovauti apatinius ir viršutinius, prekes ir grupė visoje laukelyje rodo mediana. Apatinės ir viršutinės juostos, esančios ūsai galuose rodo mažiausią duomenų tašką per 1,5 interkvartiliniais intervalais apatinio kvartiliui, ir aukščiausią duomenų tašką per 1,5 interkvartiliniais intervalais viršutinio kvartiliui, atitinkamai. Žalios juostos rodo vidutinę vertę.
Asociacija GFP-teigiamas CTCs su išlikimo pervežimas skaičiaus vidurkis GFP-teigiamas CTCs į mėginių iš 10 sveikų savanorių buvo 4,8. Mes suskirstyti pacientus į dvi grupes pagal iš GFP-teigiamas CTCs numeriai: 0-4 ir ≥ 5. Į klinikos charakteristikos dviejų grupių apibendrintos 2 lentelėje Nebuvo jokio reikšmingo skirtumo tarp abiejų grupių išskyrus tai, kad buvo tik vienos kategorijos limfinės metastasis.Table 2 klinikos simbolių dviejų pacientų grupių skaičiaus CTCs
Taškų CTCs
0 - 4.
5 ≤
P
vertė
mokomųjų dalykų skaičių
41

24
TNM: Scenos
0,1586 Aš
etapas
29
11
II pakopos
4
2
III etapas
4
6
IV etapas
4
5
TNM: T kategorijos
0.2753
T1
26
10
T2
5 3
T3
5
4
T4
5
7
TNM: Rīga, 0,0257 N kategorija *
N0
27
12
N1
5
0
N2
4
2
N3
5
10
TNM: M kategorijos
0.2121
M0
37
19
M1
4
5
Pagrindinis histologinis tipas
0,6844
Diferencijuotas tipo
15
10
nediferencijuota tipas
26
14
limfinės invazija
0,3177
Lx
2
2
L0
25
10
L1
14 12
Venų invazija
0,1293
Vx
2
2
V0
26
9
V1-2
13
13
chirurgijos
0.2124 gydomasis rezekcija
38
19
Ne gydomasis rezekcija pervežimas 1
3 pervežimas Nėra rezekcija pervežimas 2
2
Pooperacinis chemoterapija
0.1672
buvimas
15
13
nebuvimas pervežimas 26
11
* Reikšmingas skirtumas.
6a pav Kaplan -Meier bendrojo išgyvenimo kreivės į dvi grupes: pacientai 0-4 CTCs ir tiems, su ≥ 5. Ten buvo didelis skirtumas tarp šių dviejų grupių (p
= 0,0021). Be to, išplitusiu skrandžio vėžiu sergančių pacientų etapas II-IV ligos, ten buvo didelis skirtumas tarp šių dviejų grupių (p
= 0,0126) (6b pav.) 6 pav Bendras išgyvenamumas. (A) bendrasis išgyvenamumas visiems pacientams. (B) Bendras išgyvenamumas pacientų etapo II-IV ligos. Išgyvenimo buvo lyginamas pagal CTCs naudojant Kaplan-Meier analizė ir log-rank statistiką numerį. ** P
< 0,01, * p
< 0,05.
Asociacija GFP-teigiamas CTCs esant patologiniams indeksų
Nebuvo reikšmingas ryšys tarp GFP-teigiamas CTCs ir vėžio stadijos (p pervežimas = 0,2313) (5 pav) skaičius. Nors buvo pastebėtas ne statistinis reikšmingumas, iš GFP-teigiamas CTCs skaičius turėjo tendenciją didinti su pirminio naviko progresavimo (p pervežimas = 0,1521) (7a pav). Iš CTCs atrinktų iš limfmazgius pacientų skaičius buvo didesnis nei, kad mazgas neigiamas pacientų (p
= 0,1752) (pav 7b). Palyginti su be tolimų metastazių pacientams, turintiems tolimų metastazių turėjo panašių skaičių GFP-teigiamas CTCs (p
= 0,5655) (7c pav.) Nebuvo didelis skirtumas tarp diferencijuotų ir nediferencijuotos tipo (p pervežimas = 0,8387) (7d pav.) Į CTCs numeriai buvo panašus mėginių iš pacientų su ir be limfinės invazijos (psl pervežimas = 0,2054) (7e pav). Dėl venų invazija, iš CTCs atrinktų iš pacientų, sergančių invazijos skaičius buvo gerokai didesnis nei pacientų, be invazijos (psl
= 0,0351) (7f pav.) 7 pav Sąryšis tarp skaičių GFP-teigiamas CTCs į 7,5 ml kraujo mėginio iš skrandžio vėžiu sergantiems pacientams ir patologinių radinių pacientų. Taškai yra GFP-teigiamas CTCs paciento mėginių skaičius. Viršuje ir apačioje dėžutės atstovauti apatinius ir viršutinius, prekes ir grupė visoje laukelyje rodo mediana. Apatinės ir viršutinės juostos, esančios ūsai galuose rodo mažiausią duomenų tašką per 1,5 interkvartiliniais intervalais apatinio kvartiliui, ir aukščiausią duomenų tašką per 1,5 interkvartiliniais intervalais viršutinio kvartiliui, atitinkamai. A, Naviko invazija gylis (T1-T4 rodo didėjantis gylis). B, limfinės metastazės (N0 = neigiamas, N1-3 = teigiamas). C Tolima metastazės (M0 = neigiamas M1 = teigiamas). d histologinis tipas (diferencijuotas tipas ir nediferencijuotą tipo). E, limfinės invazija (L1 L0 = neigiamas, teigiamas =). F, Venų invazija (V0 = neigiamas, V1 = teigiamas), * p
< 0,05. Nors tik venų invazija rodomas statistiškai reikšmingo skirtumo, būta link CTC daugėja didėjant ligos progresavimo tendencijos.
Diskusijos
Straipsnyje pateikiamas tarp CTCs ir skrandžio vėžio ryšį, kuris yra antra pagrindinė priežastis Vėžys susijusių mirčių visame pasaulyje. Iš į CTCs aptikti diagnozės, įvertinus prognozę, ir vertinant gydymo poveikių naudingumas jau pranešė krūties [27, 33], prostatos [34], plaučių [35] ir virškinamojo trakto [11, 36, 37 ] vėžiu. Šis tyrimas rodo, kad ji taip pat yra naudinga skrandžio vėžio.
Vienas iš pagrindinių rezultatas mūsų tyrime buvo reikšmingas ryšys tarp CTCs ir prognozės numerį. Nors mes naudojome trumpą tolesnių laikotarpį, pacientų, kurie turėjo ≥ 5 CTCs jų 7,5 ml periferinio kraujo mėginiuose prognozė buvo bloga. Pacientams su ankstyvos stadijos ligą paprastai turi mažesnę atkryčio [38], ir tie, su I etapas liga iš tikrųjų neturėjo pasikartoti mūsų tyrime. Mes taip pat apskaičiuojama tikimybė per išplitusiu skrandžio vėžiu sergantiems pacientams etapo II-IV ligos, ir parodė, kad šie pacientai turėjo panašią išgyvenimo modelis tiems, su I etapas-IV ligos. Šie rezultatai rodo, kad Ikioperacinė chemoterapija ar išsami gydymas yra tinkama pažengusiems liga sergantiems pacientams, kurie turi daug CTCs į pirminio apdorojimo mėginių dėl jų blogos prognozės.
Tarp mūsų patologiniais duomenimis, tik venų invazija turėjo didelę santykius su CTCs numerį. Tai rodo susitarimą tarp tradicinės patologijos ir šiuolaikinės molekulinės technologijos. Mes tikime, kad didelis skirtumas tarp aptiktų mūsų tyrimo ir kitų patologinių indeksų CTCs skaičius trūkumas gali būti paaiškinta metodinių klausimų, kaip antai mažos imties. Mūsų technika veikė gerai kaip prognostinis įvertinimo įrankis - teikti informaciją apie pooperacinio palaikomąja terapija reikia - ir ji gali suteikti naudingą pagalbinę priemonę prie patologijos pagrindu klasifikavimo
Neaišku, ar visi aptikti CTCs sergate metastazavusiu potencialą.. Gyvybingi CTCs buvo aptikta mėginiuose iš jaunesniųjų vėžiu sergantiems pacientams šio tyrimo, tačiau beveik visos I etapo grupės pacientai išgyveno be pasikartojimo [38]. Mes ketiname patvirtinti, ar atsparios vėžinės ląstelės, pavyzdžiui, vėžio kamieninių ląstelių, buvo pateikti nustatytų GFP-teigiamas ląsteles. Be to, mes analizuojame gyvybingų CTCs funkcijas atskirai po ląstelių rūšiavimo ir nustatyti CTCs su metastazavusiu potencialo naudojant papildomus įrankius, tokius kaip DNR ploidiškumą analizė [39, 40]. Be to, genų ekspresijos tarp gyvybingų CTCs, negyvų ląstelių, pirminių navikų ir metastazių navikų atskleis svarbią informaciją, susijusią su vėžio metastazių mechanizmus.
Mūsų rezultatai turi būti interpretuojami atsargiai, atsižvelgiant į šio tyrimo trūkumų. Pirma, CTCs skaičius labai skyrėsi tarp individų, įskaitant pacientų ir sveikų savanorių. Be to, jis buvo neturi įtakos naviko etape arba kliniškai nustatomų metastazių buvimo. Be to, nebuvo ryšio tarp metastazių buvimas (limfmazgių ar tolimoje) arba invazijos ir CTCs numerį, kuris iškelia klausimą apie CTCs naudoti prognozuoti metastazavusiu potencialą. Tačiau, tai yra įmanoma, kad santykinai mažas imties dydis apribojo galimybes aptikti realius skirtumus tarp šių grupių pacientų. Galiausiai reikia pripažinti, kad mūsų rezultatai gali būti taikomi tik iki operacijos, anksčiau negydytiems skrandžio vėžio ir neturėtų būti apibendrinti kitų vėžio rūšių.
Aišku, daugiau tyrimų, tuo labiau gyventojams pacientų, o su skirtingais vėžio tipų , reikia išsiaiškinti klinikinę pritaikomumą CTC aptikimo. Mes dabar rengia tyrimą ištirti skrandžio vėžio gydymo poveikį CTCs, kurie turėtų padėti nustatyti jų ryšį su būsimo ligos progresavimo ir ar BTK skaičius gali padėti guidetherapy paiešką.
Išvadas
Už Nebuvo reikšmingo skirtumo išlikimo tarp pacientų su 0-4 CTCs ir tiems, su ≥ 5. Tačiau neaišku, ar visi CTCs turėti tikrą metastazavusiu potencialą, ir yra reikalingi tolesni tyrimai.
Deklaracijų
Padėka
Šis tyrimas buvo iš dalies remiamą dotacijos-in-pagalbos sudėtinga žvalgomuosius tyrimus (23659308) iš Japonijos draugijos mokslo skatinimo (JSP). Finansavimo kūno nesuvaidino jokio vaidmens studijų dizainas; į rinkimo, analizės ar aiškinimo duomenis; į rankraščio raštu; arba sprendime pateikti rankraštį paskelbimo. Esame dėkingi visiems pacientams ir savanoriams, kurie paaukoti kraujo šiame tyrime. Norėtume padėkoti profesoriui Toshiyoshi Fujiwara (Okayama University Graduate School of Medicine, Okayama, Japonija) teikti naudingų pastabų ir pasiūlymų; J. Yasuo Urata (Oncolys Biopharma, Tokijas, Japonija), skirtų aprūpinti OBP-401; Dr Yukio Tsujino, dr Toshiyuki Ozawa ir dr Akinori Masago (SYSMEX Corporation ", Kobė, Japonija) už jų naudingos paramą; ir dr Rebecca Devonas (genetikos skyrius ir Edinburgo universitetas, Edinburgas, Jungtinė Karalystė) kritiškai peržiūrėti ir redaguoti rankraščio. Mes taip pat labai dėkingi, kad medicinos personalo.
Autorių originalios pateikti failai vaizdų
Žemiau išvardintos nuorodos į autorių originalus pateiktų failų vaizdų. 12885_2012_3365_MOESM1_ESM.tiff Autorių originalus failas 1 pav 12885_2012_3365_MOESM2_ESM.tiff Autorių originalus failas 2 pav 12885_2012_3365_MOESM3_ESM.pdf Autorių originalios 3 pav 12885_2012_3365_MOESM4_ESM.pdf Autorių originalaus failo 4 pav 12885_2012_3365_MOESM5_ESM.tiff Autorių originalaus failo 5 paveiksle Visi autoriai perskaičiau ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Gydomasis potencialas PRL-3 nukreipimą ir klinikinė reikšmė PRL-3 genomo amplifikacijos skrandžio vėžio
• Šeimos istorija vėžio ir skrandžio sutrikimų ir rizikos stemplės ir skrandžio adenokarcinomos: atvejo ir kontrolės tyrimas