Andere betekenis tussen intratumorale en peritumorale lymfatische vaartuig dichtheid bij maagkanker: een retrospectief onderzoek van 123 cases

andere betekenis tussen intratumorale en peritumorale lymfatische dichtheid vaartuig bij maagkanker: een retrospectief onderzoek van 123 gevallen
Abstracte achtergrond
Patiënten met maagkanker in China hebben een slechter resultaat en slechtere prognose. Tumorgeïnduceerde lymfevatontwikkeling speelt een cruciale rol in metastase en tumorprogressie. De intratumorale en peritumorale lymfevaten moesten verschillende biologische effecten hebben. Drie belangrijke groeifactoren, vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) -A, VEGF-C en VEGF-D zijn betrokken bij via hun receptoren (VEGFRs) het activeringsproces. Het doel van de huidige studie is van het grote verschil tussen intratumorale en peritumorale lymfatische bloedvatdichtheid (LVD) bij maagkanker en hun correlatie met lymphangiogenetic groeifactoren te onderzoeken.
Methods
intratumorale LVD (I-LVD) en peritumorale LVD ( P-LVD) van 123 patiënten met primaire maagkanker werden beoordeeld na kleuren met D2-40, en bevestigd door dubbele kleuring met D2-40 /CD34. Proliferatieve activiteit van lymfevaten endotheel werd geëvalueerd door dubbele kleuring met D2-40 /Ki-67. De associaties tussen geanalyseerd I-LVD /P-LVD en het expressieniveau van VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D en de receptor VEGFR-3, dat werd gemeten door immunohistochemie (IHC). De correlaties van de I-LVD en P-LVD met een prognose voor de patiënt werden ook gewaardeerd.
Resultaten
(1) De peritumorale lymfevaten (PTLs) waren relatief uitgebreid met verwijde lumen in vergelijking met het intratumorale lymfevaten (ITLs). Verhoogde P-LVD was significant hoger dan I-LVD (P
< 0,05). (2) P-LVD werd gevonden significant geassocieerd met lymfeklier metastase (LNM) (P Restaurant < 0,001), lymfatische vaartuig invasie (LVI) (P Restaurant < 0,001), VEGF-C (P
= 0,003), VEGF-D-expressie niveau (P
= 0,005) en VEGFR-3 expressie (P Restaurant < 0,001) in peritumorale weefsels, ondanks dat er geen significant verband gevonden tussen bovenstaande varianten met I-LVD . Verhoogde I-LVD werd aangetoond geassocieerd te worden met verminderd tumorvolume (P
< 0,001). Noch ik, noch P-LVD-LVD werd gecorreleerd met VEGF-A expressie (P Restaurant > 0,05). (3) proliferatieve activiteit van lymfevaten endotheel waargenomen in PTLs, ondanks ITLs. (4) Het P-LVD, maar niet I-LVD is aangegeven een onafhankelijke risicofactor voor lymfeknoop metastase door multivariate logistische regressie analyse, en is gerelateerd aan slechtere ziektevrije overleving en totale overleving.
Conclusies
PTLs een rol spelen bij maagkanker progressie. Verhoogde P-LVD, maar niet I-LVD, was significant geassocieerd met VEGF-C /D /VEGFR-3-systeem, en een onafhankelijke risicofactor voor lymfeklier en een prognostische factor bij maagkanker kan zijn.
Achtergrond
Maagkanker is de belangrijkste belangrijke oorzaak van aan kanker gerelateerde dood in China. Ongeveer 80% ~ 90% van de patiënten worden gediagnosticeerd in een vergevorderd stadium met een slechte uitkomst, vaak met lymfatische verspreiding en metastasen op afstand. Gedurende de afgelopen jaren heeft tumor geïnduceerde lymfevatontwikkeling gedreven door lymfangiogene groeifactoren is stevig gevestigd als een nieuw mechanisme voor de progressie van kanker. Tegenwoordig steeds meer deskundigen geloven dat intratumorale lymfevaten (ITLs de lymphtics binnen tumoren) en peritumorale lymfevaten (PTLs, lymphtics aan de omtrek) play precies onderscheiden biologische rollen in gedrag van de tumor en de prognose van verschillende typen tumoren. Bij maagkanker, hebben verscheidene studies aangetoond dat patiënten met hogere I-LVD had de hogere aanwezigheid van lymfekliermetastasen in jonge [1], terwijl P-LVD een onafhankelijke risicofactor voor lymfeknoop metastase en prognose kunnen zijn [2]. Echter, de functie van I-LVD en P-LVD en hun correlatie met expressie VEGF's zijn nog niet opgehelderd.
Een aantal studies hebben de cruciale rol van VEGF's uitdrukkingen op tumorprogressie en prognose bij maagkanker aangetoond. VEGF-C en VEGF-D, twee leden van de VEGF-familie, zijn gedefinieerd als de lymfangiogene groeifactoren en spelen een belangrijke rol bij tumor lymfangiogenese via activatie van VEGFR-3, die voornamelijk tot expressie in lymfatische endotheliale cellen (LEC). VEGF-C is een dominante regulator van lymfevaten in zowel de vroege en gevorderde maagkanker [3, 4]. Verhoogde VEGF-C expressie hadden een significante correlatie met LVD, LVI en lymfeklier [5], maar de prognostische waarde blijft controversieel. VEGF-D werd betrokken bij lymfatische verspreiding van maagkanker cellen en een onafhankelijke prognostische marker kan zijn [6]. VEGFR-3 is ook aangegeven als een prognostische factor [6]. Een andere groeifactor, VEGF-A, die gereguleerde angiogenese, eveneens geacht lymfangiogenese stimuleren door binding aan VEGFR-2 onlangs. Verhoogde VEGF-A expressieniveau van maagkanker patiënten waren bewezen worden geassocieerd met microvasculaire dichtheid (MVD), hematogene metastase, peritoneale disseminateion en slechte prognose. Het blijft echter onbekend of beide van de intratumorale en peritumorale lymphtics gestimuleerd door de drie VEGF's uitgescheiden door tumorcellen, of dat de I-LVD en P-LVD play sterk verschillende biologische functies in lymfeknoop metastase en prognose bij maagkanker.
Methods
patiënten en tumor specimens
tumor monsters werden verkregen van 123 patiënten met primaire maagkanker die gastrectomy bij afdeling Heelkunde geaccepteerd, Tongji ziekenhuis van Tongji Universiteit van januari 2000 tot december 2003. Geen van hen preoperationele had ontvangen chemotherapie of radiotherapie behandeling. De onderzoekspopulatie bestond uit 80 mannen (65%) en 43 vrouwen (35%). De gemiddelde leeftijd op het moment van diagnose was 65 jaar (spreiding 28-87 jaar). Eenendertig gevallen van vroege maagkanker (EGC) en 92 gevallen van gevorderde maagkanker (AGC) waren betrokken bij. Histologische stadium was gebaseerd op UICC TNM classificatie. Andere klinische kenmerken zijn samengevat in Tabel 1. Alle patiënten werden opgevolgd klinisch ten minste 5 jaar na de operatie. De gemiddelde follow-up bedroeg 56 maanden (spreiding 6-85 maanden). Survival analyse werd uitgevoerd, met inbegrip van de totale overleving (OS), ziektevrije overleving (DFS) en kanker-specifieke overleving (CSS). OS, DFS en CSS werd berekend vanaf de datum van de operatie naar laatste contact voor levende patiënten, de datum van de laatste follow-up voor de ziekte-vrije patiënten, en de datum van maag-kanker-geïnduceerde dood, respectievelijk. Vier EGC gevallen en 52 AGC gevallen waren opgetreden recidief. Elf patiënten hadden peritoneale verspreiding, 26 patiënten lever metastase, en 19 gevallen een terugval in de maag na de operatie. Veertig patiënten overleden aan maagkanker. De huidige studie werd goedgekeurd door de Research Ethics Committee van Tongji ziekenhuis aangesloten bij Tongji University. De normale gastrische weefsels werden verzameld als controlemonsters. Alle resultaten werden bereikt door twee pathologen onafhankelijk van elkaar, en de middelen werden berekend voor elk geval op basis van de gegevens obtained.Table 1 correlaties van LVD met klinisch-pathologische parameters en VEGF's uitdrukkingen
Factoren
N
I-LVD
P-LVD


gemiddelde ± SD
P
gemiddelde ± SD
P
tumordifferentiatie
0,802
0,739
High gedifferentieerde
11
8,18 ± 2,44
12.07 ± 4.49
Mederately /slecht gedifferentieerde
112
8.00 ± 2.27
12.46 ± 3.60
tumorgrootte
< 0,001 Restaurant < 0,001 Restaurant < 3,2 cm
57
8.93 ± 2.34
11.18 ± 3.80
≥ 3,2 cm
66
7,23 ± 1,91
13.50 ± 3.21
Diepte van de invasie
0,433
0,026
pT1-2
69
8.16 ± 2.51
11.78 ± 3.52
pT3-4
54
7.83 ± 1.96
13.26 ± 3.71
lymfekliermetastasen
0,056 * Restaurant < 0,001
Negatief
57
8.47 ± 2.27
10.50 ± 3.42
Positieve
66
7.65 ± 2.24
13.98 ± 3.10
LVI
0.700 Restaurant < 0,001
Negatief
83
8.08 ± 2.33
11.23 ± 3.29
Positieve
40
7.91 ± 2.22
14.36 ± 3.44
VI
0,905 Restaurant < 0,001
Negatief
86
8,00 ± 2.38
11.65 ± 3.81
Positieve
37
8.05 ± 2.67
14.24 ± 2.53
TNM stadium
0,067 Restaurant < 0,001
I - II
71
8.34 ± 2.42
11.33 ± 3.29
III - IV
52
7.58 ± 2.01
13.92 ± 3.66
VEGF-A expressie
0,527
0,091
Low
44
7,84 ± 2,51
11.68 ± 3.54
hoge
79
8.26 ± 2.21
12.84 ± 3.69
VEGF-C expressie
0.092 *
0.003
Low
42
7,55 ± 2,37
11.06 ± 3.26
hoge
81
8.00 ± 2.34
13.13 ± 3.69
VEGF-D-expressie
0,514
0.005
Low
72
7.90 ± 2.47
11.65 ± 3.44
hoge
51
8.18 ± 1.99
13,53 ± 3.73
P
, t-test; P
*, Mann-Whitney U Electronics Test. Afkorting: LVD: lymfatische vaartuig dichtheid; LVI: lymfatische vaartuig invasie. VI:. Single immunohistochemie voor D2-40, VEGF-A veneuze invasie
, VEGF-C, VEGF-D en VEGFR-3
Voor immunohistichemical kleuring, 4 urn dikke paraffine ingebedde dia's werden gesneden uit elke studie blok. Secties werden behandeld met 0,3% H 2O 2 gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Voor antigen retrieval, werden de objectglaasjes verwarmd in een microgolfoven met 0,01 mmol /l natriumcitraat (pH 6,0). Schijfjes werden geïncubeerd bij 4 ° C geïncubeerd in een vochtige tray met primaire antilichamen, VEGF-A (monoklonaal antilichaam, 1: 100, DAKO), VEGF-C (geiten polyklonaal antilichaam, 1: 100, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), VEGF-D (geiten polyklonaal antilichaam, 1: 100, Santa Cruz), VEGFR-3 (geiten polyklonaal antilichaam, 1: 100, Santa Cruz) en D2-40 (monoklonaal antilichaam, 1: 100, DAKO), respectievelijk. De objectglaasjes werden driemaal gespoeld met 0,1 mmol /L PBS gedurende 2 minuten, en gedurende 30 min bij kamertemperatuur met geit anti-konijn /muis mierikswortel peroxidase (Envision, DAKO, CA) om het doel te identificeren. De coupes werden ontwikkeld met 3 '3-diaminobenzidine. De normale geit IgG werd dienden als negatieve controle reactie voor kleuring van VEGF-C, VEGF-D en VEGFR-3, en de normale konijn IgG werd dienden als negatieve controle reactie voor kleuring van VEGF-A en D2-40.
dubbele immunohistochemische kleuring voor D2-40 /CD34
de dubbele immunohistochemische kleuring voor D2-40 /CD34 werd verder verwerkt om de specificiteit van D2-40 expressie in lymfatische endotheel te evalueren. Het voorstel werd volgens de instructies van de fabrikant (No: 95-9999, Histostain-DS Kit, Zymed, CA). In paraffine ingebedde 4 pm secties werden van paraffine ontdaan en gerehydrateerd met xyleen. De plaatjes werden ondergedompeld in peroxidase quenching oplossing 10 min. Na overnacht geïncubeerd bij 4 ° C met primaire antilichamen tegen CD34 (monoklonaal antilichaam, 1: 100, DAKO, Carpinteria, CA), werden de coupes behandeld met serum blokkeeroplossing, vervolgens worden geïncubeerd met gebiotinyleerd secundair antilichaam (DAKO ). Vervolgens werd het alkalische fosfatase conjugaat gebruikt om elke sectie voor 10 min. En vervolgens werden de coupes behandeld met het substraat chromogeen mengsel en dubbele kleuring versterker. Het serum blokkerende oplossing werd opnieuw aangebracht, werden de dia's geïncubeerd met een primair antilichaam tegen D2-40 (muis monoklonaal antilichaam, 1: 200, GM36190, Gene Tech Company Limited, Shanghai, China) gedurende 60 minuten en de gebiotinyleerde tweede anti-immunoglobuline (Ig) (DAKO) werd behandeld. Na toepassing met enzymconjugaat van 10 minuten werden de objectglaasjes geïncubeerd met het mengsel van substraatbuffer, chromogeenoplossing en 0,6% waterstofperoxide voor HRP en gecontroleerd onder een microscoop. Kraanwater met 0,05% Tween-20 beëindigde de reactie. Voor negatieve controles, werden de secties gekleurd met een niet-immune serum in plaats van dezelfde concentratie van primair antilichaam. De CD34 positieve bloedvaten toonde de intense rode vlek, en de D2-40 positieve lymfevaten toonde de donkerpaarse vlek.
Dubbele kleuring voor D2-40 /Ki-67
Voor het detecteren van de proliferatieve activiteit van de lymfevaten de werkwijze van dubbele immunokleuring voor D2-40 /Ki-67 werd uitgevoerd. De D2-40 antilichaam werd gebruikt om lymfevaten endotheel vlek, samen met Ki-67 (konijn monoklonaal antilichaam, 1: 200, Santa Cruz, USA) om proliferatieve cellen vlek. Ki-67 kleuring (rood) is ontwikkeld met alkalische fosfatase geconjugeerd secundair antilichaam en vervolgens D2-40 kleuring (bruin) werd ontwikkeld met peroxidase-geconjugeerd secundair antilichaam. Proliferatieve lymfevaten werden bevestigd door Ki-67 positief lood kernen die ook had gelijktijdig positieve cytoplasmatische kleuring in D2-40 positieve cellen. Het tarief van de dubbel-gelabelde schepen werd bepaald door het tellen van de kernen van tumor-geassocieerde D2-40-positieve vaten (100 kernen in elke tumor) [7].
Assesment van LVD
Intratumoral LVD (hot spots waren gevestigd bij tumorcentrum) en peritumorale LVD (hot spots zich aan de omtrek weefsel binnen 2 mm van de tumor naast de invasieve voorkant) afzonderlijk [2, 7-9] onderzocht. Kwantitatieve analyse van lymfatische dichtheid schip werd uitgevoerd in secties die single-gekleurd voor D2-40 waren. Vijf gebieden met de meeste lymfevaten gebieden ( "hot spots") werden op × 40 vergroting gekozen door lichtmicroscopie. LVD werd bepaald door het tellen van alle gekleurde schepen op x 200 vergroting. Het gemiddelde aantal lymfevaten beoordeeld werd bepaald als LVD. Lymfevat invasie (LVI) gedetecteerd aanwezig wanneer ten minste één tumorcel cluster was D2-40 positieve vaten [10]. Maken en tellen werden onafhankelijk uitgevoerd door twee onderzoekers die hadden geen klinische gegevens van de patiënten. De gemiddelde P-LVD en I-LVD werden berekend voor elk geval.
Assesment van VEGFs en VEGFR-3 uitdrukkingen
Positieve kleuring van VEGF-A, -C en -D expressie werd gedefinieerd als de eerdere studies [6 , 11]. Kleuring resultaten voor de drie bovengenoemde VEGF's werden semiquantitatively beoordeeld door een immunohistochemische score in combinatie met het percentage van de tumorcellen tonen specifieke immunoreactiviteit. Kleurintensiteit werd gegeven met vier kwaliteiten: none (0), zwak (1), matig (2) en sterke (3). Het percentage positieve carcinoomcellen werd met de kwaliteiten: 0 (0%) 1 (1% ~ 10%), 2 (11% ~ 49%), 3 (50% ~ 100%), respectievelijk. De totale score werd berekend door de kleurintensiteit en het percentage positieve tumorcellen. De mediaan van de score werd geselecteerd als afsnijdniveau volgens welke tumoren werden onderverdeeld in lage (0 ~ 3) en hoge-expressie (4 ~ 6) tumoren [6, 11]. VEGFR-3-positieve vaten werden bepaald zoals eerder beschreven [12]. De schepen van de drie hot spots gebieden werden geteld bij 400 × vergroting. Kleuring werd als positief beschouwd wanneer meer dan 5% van endotheel vertoonde een kleuring [6]. Peritumoraal VEGFR-3-positieve vaten (P-VEGFR-3) en intratumorale VEGFR-3-positieve vaten (I-VEGFR-3) werden beoordeeld zoals hierboven LVD.

Statistische analyse Statistische analyse werd uitgevoerd met het Statistics pakket voor de Social Science software (versie 11.5, SPSS Inc, Chicago, IL). Monsters werden verdeeld in twee categorieën volgens de mediane waarden van I-LVD en P-LVD, respectievelijk. De correlaties van de I-LVD en P-LVD met clinicopathologic parameters en VEGF's uitingen werden geanalyseerd door onafhankelijke steekproeven t Electronics Test of Mann-Whitney U Electronics Test. De correlaties van VEGFR-3 expressie met klinische parameters werden geanalyseerd met Pearson chikwadraattoetsen. De factoren over lymfekliermetastasen bij maagkanker werden uitgevoerd met behulp van de multivariant logistische regressie-analyse. Survival curves werden verkregen met behulp Kalplan-Meier-methode en vergeleken door log-rank test. Multivariate survival analyse werd geëvalueerd met behulp van proportionele hazard methode Cox's. Al de statistische analyse was twee kanten met betekenis gedefinieerd als P Restaurant < 0.05.
Resultaten
Intratumoral en peritumorale lymfatische kenmerken bij maagkanker
De D2-40-positieve lymfevaten hadden onregelmatige morfologie en dunwandige lumen. Lymfevaten gastrische weefsels werden meestal in de laag submucosa (figuur 1). De lymfevaten (D2-40-stand) en bloedvaten (CD34-stand) duidelijk onderscheiden door verdere dubbele kleuring (figuur 2). Intratumorale lymfevaten meestal werden ingestort, kleine en onregelmatig (figuur 3), maar toonde noncollapsed lymfevaten geopend lumen, en soms bevatte binnendringende tumorcellen clusters (figuur 4). De peritumoraal lymfevaten in de oppervlakkige en diepe deel van submucosa waren uitgebreid met de lymfatische holten verwijd (figuur 5, figuur 6). Het lymfevatensysteem invasie waargenomen in 38 gevallen. Geen significante correlatie gevonden tussen de nummers van LVD in tumor centrum en in controle weefsels (8,02 ± 2,28 versus 8,13 ± 1,04, P Restaurant > 0,05). Echter, het aantal P-LVD (12,15 ± 3,75) waren significant hoger dan in controle weefsels en tumorcentrum (P
< 0,05). Geen statistische verschillen gevonden tussen de twee methoden voor het detecteren van lymfevaten (single kleuring voor D2-40 en dubbele kleuring voor D2-40 /CD34) (I-LVD, 8,02 ± 2,28 versus 7,80 ± 2,33; P-LVD, 12,15 ± 3,75 vs 12.42 ± 3.67, P Restaurant > 0,05). Figuur 1 De D2-40-positieve lymphantics vooral gevestigd aan de laag van submucosa in de maag weefsel (pijlen). IHC, vergroting:. × 200
Figuur 2 De dubbele immunohistochemische kleuring voor D2-40 en CD34 duidelijk onderscheiden van de lymfevaten (zwarte pijl) uit de bloedvaten (rode pijl). . IHC, vergroting: × 400
Figuur 3 De intratumorale lymfevaten bij maagkanker waren ingestort (pijl); Dubbele immunohistochemische kleuring, vergroting:. × 200
Figuur 4 De binnendringende kankercellen cluster aanwezig in lymfatische vat invasie (LVI) waren. Dubbele immunohistochemische kleuring voor D2-40 /CD34, vergroting:. × 400
Figuur 5 De peritumorale lymfevaten bij maagkanker werden uitgebreid met verwijde lumen gelegen aan de oppervlakkige submucosa. IHC, vergroting:. × 200
Figuur 6 De peritumorale lymfevaten bij maagkanker werden uitgebreid met verwijde lumen gelegen aan diep deel van submucosa. IHC, vergroting:. × 200
correlaties van I-LVD en P-LVD met clinicopathologic parameters en VEGF's uitdrukkingen
De correlaties van de I-LVD en P-LVD met Clinicopathologische parameters in Tabel 1. Verhoogde werden getoond I- LVD was significant geassocieerd met een kleinere grootte van de tumor (P Restaurant < 0,001). Geen correlaties gevonden tussen I-LVD en VEGF's uitdrukkingen, terwijl de P-LVD was significant gecorreleerd met grotere grootte van de tumor (P Restaurant < 0,001), de diepte van de invasie (P
= 0,026), lymfeklier metastase (P Restaurant < 0,001), LVI (P Restaurant < 0,001), veneuze invasie (VI) (P Restaurant < 0,001), TNM stadium (P Restaurant < 0,001), VEGF-C ( P
= 0,003) en VEGF-D expressie (P
= 0.005).
expressie van de drie VEGF's toonden een positieve cytoplasmatische kleuring in maagkanker cellen. Hoge expressie van VEGF-A (figuur 7), VEGF-C (Figuur 8) en VEGF-D (figuur 9) werden waargenomen bij 64,2% (79/123), 65,9% (81/123) en 41,5% (51 /123) van monsters, respectievelijk. Noch ik, noch P-LVD-LVD bleek significant geassocieerd met VEGF-A expressie (P Restaurant > 0,05). Figuur 7 VEGF-A expressie in het cytoplasma bij maagkanker. IHC, vergroting:. × 400
Figuur 8 VEGF-C-expressie in het cytoplasma bij maagkanker. IHC, vergroting:. × 400
Figuur 9 VEGF-D-expressie in het cytoplasma bij maagkanker. IHC, vergroting:. × 200
proliferatieve activiteiten intra- en peritumorale lymfevaten
Proliferatieve lymfevaten gevonden in de tumor periferie (figuur 10). Het tarief van de Ki-67-positieve lymfatische vaartuig kernen in de tumor periferie was (0,81 ± 0,13)%. Geen proliferatieve lymfevatensysteem werd gevonden in de tumor (Figuur 11). Lymfevaten invasie kon worden waargenomen in de peritumorale weefsels (figuur 12). Figuur 10 Ki-67-positieve nuclei lymfevaten (pijlen) werden gedetecteerd in de tumor periferie. Dubbele kleuring voor D2-40 /Ki-67, vergroting:. × 400
Figuur 11 No Ki-67 positieve uitdrukking in de intratumorale lymphatics kernen. Dubbele kleuring voor D2-40 /Ki-67, vergroting:. × 400
Figuur 12 lymfevaten invasie werd gedetecteerd in de peritumorale weefsel (pijlen). Dubbele kleuring voor D2-40 /Ki-67, vergroting:. × 400
VEGFR-3 expressie in lymfevaten Ondernemingen De VEGFR-3-positieve uitdrukking in de tumor periferie (P-VEGFR-3) werd gevonden in 55 van de 123 gevallen, soms met kankercel invasie clusters (figuur 13). Slechts 34 van de 123 gevallen had VEGFR-3-positieve uitdrukking in het tumorcentrum (I-VEGFR-3) (figuur 14). Deze schepen waren meestal dunwandige, onregelmatig gevormde en bevatte geen of weinig RBC's. Figuur 13 De VEGFR-3-positieve expressie in het cytoplasma endotheelcellen in de tumor periferie (P-VEGFR-3), soms met kankercel invasie clusters (pijlen). IHC, vergroting:. × 400
Figuur 14 De VEGFR-3-positieve uitdrukkingen werden gevestigd bij tumor centrum (pijlen). . IHC, vergroting: × 200
In perifere tumor weefsels, VEGFR-3 uitdrukkingen waren significant eerder gecorreleerd met VEGF-C hoge expressie (P Restaurant < 0,000), VEGF-D hoge expressie (P =
0,043), verhoogde P-LVD (P
< 0,001) en de aanwezigheid van LVI (P
= 0,003) dan bij VEGF-A expressie verhoogde I-LVD, veneuze invasie en lymfeklier (P Restaurant > 0,05). Er werden geen correlaties gevonden tussen I-VEGFR-3-expressie en klinische parameters (P
> 0,05). (Tabel 2) Tabel 2 Correlaties van VEGFR-3 expressie op differenr tumor locatie met klinische parameters
Factoren
N

I-VEGFR-3
P-VEGFR-3


N (%)
P

N (%)
P
VEGF-A expressie
0,107
0,067
Low
44
16 (36,36)
15 (34,09)
hoge
79
18 (22.78)
40 (50,63)
VEGF-C expressie
0,795
< 0.001
Low
42
11 (26.19)
9 (21,43)
Hoge
81
23 (28,40)
46 (56,79)
VEGF D expressie
0,968
0,043
Low
72
20 (27,78)
27 (37.50)
hoge
51
14 (27,45)
28 (54.90)
P-LVD
0,813 Restaurant < 0,001 Restaurant < 14
60
16 (26.67)
10 (16,67)
≥ 14
63
18 (28.57)
45 (71,43)
I-LVD
0,412
0,153 Restaurant < 8
58
14 (24.14)
22 (37,93)
≥ 8
65
20 (30,77)
33 (50,77)
lymfekliermetastasen
0,934
0.190
Negatief
55
19 (34,55)
21 (38.18)
Positieve
68
15 (22.06)
34 (50.00)
LVI
0,681
0.003
Negatieve
76
22 (28.95)
26 (34,21)
Positieve
47
12 (25,53)
29 (61,70)
VI
0,387
0,448
Negatief
87
26 (29,89)
37 (42,53)
Positieve
36
8 (22,22)
18 (50.00)
Afkorting: LVD: lymfatische vaartuig dichtheid; LVI: lymfatische vaartuig invasie; VI: veneuze invasie; I-VEGFR-3: VEGFR-3 positieve expressie in de tumor center; P-VEGFR-3: VEGFR-3 positieve uitdrukking in de tumor periferie
Voorspellende waarde van LVD voor lymfeknoop metastase
Door multivariate logistische regressieanalyse in Tabel 3, VEGF-C expressie en P-LVD. waren significant asscoiated met lymfeklier metastasen (P
= 0.024, P
= 0,045, respectievelijk). I-LVD, VEGF-A, VEGF-D en P-VEGFR-3-expressie heeft de voorspellende waarde voor lymfekliermetastase bij maagkanker vertonen. (Tabel 3) Tabel 3 Multivariate logistische regressie-analyse voor lymfklier metastase
Factoren
Odds verhouding
95% CI

P
P-LVD
3,548
1,030 -12,226
0,045
I-LVD
1.300
0,964-1,754
0,085
VEGF-A
0.510
0,138-1,884
0,313
VEGF-C
4,069
1,198-13,820
0,024
VEGF-D
3,162
,834-11,992
0,091
P-VEGFR-3
2,919
,747-11,403
0,123
Afkorting: LVD: lymfatische vaartuig dichtheid; P-VEGFR-3. VEGFR-3 positieve uitdrukking op de tumor periferie
prognostische betekenis van I-LVD en P-LVD
On univariate survival analyse, P-LVD werd geassocieerd met een slechte algehele overleving (Figuur 15, P Restaurant < 0,001), ziektevrije overleving (Figuur 16, P Restaurant < 0,001) en kanker-specifieke overleving (Figuur 17, P Restaurant < 0,001). Echter, ik-LVD werd gecorreleerd met een niet-significant trend naar alle hierboven respectievelijk (totale overleving, P
= 0,5835, figuur 18; ziektevrije overleving, P
= 0,2844, figuur 19; kanker-specifieke overleving, P
= 0,6246, figuur 20). Figuur 15 Relatie tussen P-LVD met een totale overleving (P < 0,001).
Figuur 16 Relatie tussen P-LVD met ziektevrije overleving (P < 0,001).
Figuur 17 Relatie tussen P-LVD met kanker-specifieke overleving (P < 0,001)..
Figuur 18 Relatie tussen I-LVD met een totale overleving (P = 0,5825)
Figuur 19 Relatie tussen I-LVD met ziektevrije overleving (P = 0,2844) .
Figuur 20 Relatie tussen I-LVD met kanker-specifieke overleving (P = 0,6246).
Multivariate regressieanalyse indicateded dat P-LVD een onafhankelijke prognostische factor voor zowel de totale overleving (P = 0,045
zou kunnen zijn ) en ziektevrije overleving (p = 0,031
), ondanks kankerspecifieke overleving. Bovendien, de aanwezigheid van LVI en TNM stadium zou kunnen dienen als onafhankelijke voorspellers voor alle drie de overblijfselen (LVI, P
= 0,040, 0,043, 0,039, TNM stadium, P
= 0,048, 0,001, 0,001, tabel 4) . VEGF-A expressie was de onafhankelijke prognostische predictor alleen voor de algehele overleving (P
= 0,033). Geen statistisch significante correlatie voor I-LVD, VEGF-C, VEGF-D en P-VEGFR-3 met een van de overblijfselen werden gevonden. (Tabel 4) Tabel 4 Cox regressieanalyse van onafhankelijke factoren die van invloed ziektevrije overleving, kanker-specifieke overleving en de totale overleving
Factoren
kanker-specifieke overleving
ziektevrije overleving
Totale overleving

OR (95% CI)

P
OR (95% CI)
P
OR (95% CI)
P

P-LVD
2,099 (0,91-4,87)
0.084
2,418 (1,08-5,40)
0,031
2,895 (1,02-8,19)
0,045
I-LVD
1.205 (0,56-2,63)
0,639
1.325 (0,62-2,85)
0,472 1,959
(0.90-4.24)
0.088
VEGF-A
1.386(0.50-3.83)
0.528
1.364(0.67-2.78)
0.391
2.437(1.10-5.45)
0.030
VEGF-C
2.423(0.89-6.63)
0.085
1.630(0.77-3.47)
0.205
1.562 (0,79-3,34)
0.182
VEGF-D
0,511 (0,19-1,36)
0,178
1,916 (0,90-4,10)
0.094
1.621 (0,81-3,98)
0.190
LVI
2,716 (1,05-7,04)
0.040
2,477 (1,03-5,97)
0,043
2,578 (1,05-6,34)
0,039
LNM
2.115 (0,68-6,60)
0,197
2,428 (1,18-5,02)
0.017
3,426 (1.66-7.06)
0.001
VI
2.943(0.89-9.77)
0.078
1.697(0.75-3.87)
0.208
1.477(0.63-3.48)
0.373
P-VEGFR-3
1. 499 (0,98-2,31)
0,067
1.099 (0,53-2,28)
0.800
1.402 (0,68-2,90)
0,361
TNM stadium
1,523 (1,00-2,31)
0,048
1,674 (1,25-2,25)
0.001
1,656 (1,23-2,23)
0.001
Afkorting: P-LVD: peritumorale lymfatische vaartuig dichtheid; I-LVD: intratumorale lymfatische vaartuig dichtheid; LVI: lymfatische vaartuig invasie; LNM: lymfeklier metastase; VI: veneuze invasie; P-VEGFR-3. VEGFR-3 positieve uitdrukking op de tumor periferie
Discussie
Onlangs heeft de D2-40 antilichaam, een nieuwe marker voor lymfatische endotheel, werd geïdentificeerd als de specifiek antilichaam tegen menselijke podoplanin [13] . Vele studies hebben aangegeven immunokleuring van D2-40 specifiek is voor de evaluatie van lymfatische invasie en lymfatische microvaatje dichtheid in menselijke kankers, met inbegrip van maagkanker [14-17]. In deze studie, LVD en lymfevaten invasie werden geïdentificeerd door kleuring D2-40 en bevestigd door dubbele kleuring voor D2-40 en CD34, die duidelijk onderscheiden lymfevaten van bloedvaten verder.

• P27kip1, gereguleerd door glycogeen synthase kinase-3β resulteert in HMBA-geïnduceerde differentiatie van menselijke maagkanker cellen
• Een retrospectieve cohort studie bij patiënten met maag en lever kanker: de impact van comorbiditeit en etniciteit over kanker zorg en de resultaten