Izražanje genov analiza Helicobacter pylori okuženih in visoko soli s prehrano obdelan miške želodca modelu tumorja: identifikacija CD177 kot nova prognostični dejavnik pri bolnikih z rakom želodca

Izražanje genov analiza Helicobacter pylori
okuženimi in visoko soli s prehrano obdelan miške želodca modelu tumorja: identifikacija CD177 kot nova prognostični dejavnik pri bolnikih z rakom želodca
Abstract
Ozadje
Helicobacter pylori
(H. pylori
) okužbe in prekomerno uživanje soli so znane kot pomembne dejavnike tveganja za raka na želodcu pri ljudeh. Vendar interakcije teh dveh dejavnikov z izražanja genov profili med želodca rakotvornost ostajajo nejasne. V tej študiji smo raziskovali globalno izražanje genov, povezanih z želodčno kancerogenosti in prognozo raka človeške želodčne uporablja model miške.
Metode
Če želite kandidatke genov, ki sodelujejo v želodcu rakotvornosti smo najprej zgradili miško-rakotvorna povzroča želodca modela tumor v kombinaciji s H. pylori
okužbe in prehrano visoke soli. C57BL /6J miši so dobile N
metil-N
-nitrosourea v svojem pitne vode in žrtvovali po 40 tednih. Živali mešano skupino cepimo s H. pylori
in hranili prehrane z visoko soli. Gene izraz profili v žleznega želodca miši so preiskovala oligonukleotidov mikromrež. Drugič, smo preučili tudi razpoložljivost gena kandidatke kot prognostični dejavnik za človekove bolnike. Imunohistokemično analiza CD177, eden od up-reguliranih genov, je bila izvedena v človeških naprednih želodčnih vzorcih raka za ocenjevanje povezave z prognozo.
Rezultati
množico tumorja želodca pri miših, rakotvorne bila zdravljena znatno povečal s kombinacijo H. pylori
okužbe in prehrano visoke soli. V analizi mikromrež, 35 in 31 več kot dva-krat up-urejena in navzdol reguliranih genov, oziroma so bile odkrite v H. pylori
-infection in visoki soli v prehrani v kombinaciji skupini v primerjavi z drugimi skupinami. Kvantitativne RT-PCR potrdili pomembno prekomerno ekspresijo dveh kandidatnih genih, vključno Cd177
in Reg3g
. Na imunohistokemičnim analizo CD177 v človeških naprednih želodca vzorcih raka, je bil nad-izražanje kaže v 33 (60,0%), v 55 primerih je pomembno korelira z ugodno prognozo (P
= 0.0294). Multivariatna analiza, vključno clinicopathological dejavnikov, kot spremenljivki pokazala visoko izražanje CD177 biti neodvisen napovedni dejavnik za celokupno preživetje.
Sklepe
Ti rezultati kažejo, da je naš model miške v kombinaciji s H. pylori
okužbe in prehrane high-soli je uporabna za izražanje genov profiliranje želodčnega rakotvornosti, ki dokazuje, da je CD177 roman prognostični dejavnik za raka na želodcu. To je prvo poročilo, ki prikazuje napovedno korelacijo med CD177 izražanja in trdno vedenje tumorja. Rak
Ključne besede
Cd177 želodca Helicobacter pylori
Mikromrežni Salt Ozadje
rak želodca je četrti najpogostejši rak in drugi najpogostejši vzrok smrti, povezanih z rakom na svetu [1]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) je zdaj priznana kot pomemben dejavnik tveganja za kronične razvoj gastritis in želodca raka [2]. Poleg tega se je izkazalo, okoljske in gostiteljske dejavniki tudi vplivajo želodčne rakotvornosti in sol (natrijev klorid, NaCl) in slano hrano, so posebnega pomena, ki temelji na dokazih iz števila epidemioloških in eksperimentalnih raziskav [3-6]. Tako, kombinirana izpostavljenost H. pylori zdi
okužba in prekomerno uživanje soli, da je zelo pomembno za razvoj in napredovanje želodčnih tumorjev, čeprav natančnih mehanizmov, zlasti v smislu izražanja genov profilov, je treba še pojasniti.
Visoka prepustnost mikromrež tehnologija zagotavlja močno orodje za celovite analize genov, ki se že uporabljajo za ocenjevanje izražanje genov vzorce v človeških vzorcih in živalskih modelih želodčnih motenj [7-16]. Čeprav so mnogi raziskovalci osredotočeni na izražanje genov v H. pylori
zdravljene želodca celične linije [17-19], rezultati v celični kulturi, ne nujno v korelaciji z izražanje specifičnih genov v in vivo
mikrookolja ki prikazujejo gostitelja imunski odzivi in ​​strome-epitelijskih interakcije v raka. Rakotvorna obdelan Mongolski peščene so bili uporabljeni kot koristen živalskem modelu H. pylori
-associated želodčne rakotvornost [20-24], in smo že poročali, da je sinergistično interakcija med H. pylori
okužbe in visoko soli vnos pospešuje kronična vnetja in razvoj tumorjev v želodcih teh živali [25, 26]. Žal je le malo informacij je na voljo za gerbil genoma, ki ovira genetske in molekularno analizo. Zato je pozornost usmerjena na modelih miško [12, 13], ter vzpostavitev modela miške za raka na želodcu featuring soli in je potrebno H. pylori
izpostavljenosti za preiskave ciljanje genov, ki sodelujejo pri želodčnem rakotvornost.
Prejšnje študije mikromrež uporabo glodalcev modelov ni razlikovanja in označevanje profile izražanja, ki temeljijo na interakciji s H. pylori
okužba in vnos soli. V tej študiji smo preučili izražanje genov v želodčni sluznici v H. pylori
okuženimi in visoko soli s prehrano obdelan miške želodca modelu tumorja oligonukleotidov mikromrež in našel dva kandidatke up-urejena genov vključno Cd177
in Reg3g
. Prav tako smo raziskovali izražanje CD177 v človeških naprednih želodčnih raka z imunohistokemijo, in pridobil dokaze kot potencialni prognostični dejavnik za želodčne rakotvornost.
Metode
Cepljenje s H. pylori
H. pylori
smo pripravili po enaki metodi, kot je opisano predhodno [27, 28]. Na kratko, je H. pylori
(Sydney sev 1) inokuliramo na brucelo agar ploščah (Becton Dickinson, Cockeysville, MD, ZDA), ki vsebuje 7% (v /v) toplotno inaktiviranim fetalnim govejim serumom (FBS) in inkubirali pri 37 ° C pod mikroaerofilnih pogojih pri visoki vlagi 2 dni. Nato smo bakterije rastejo na ploščah vnesene Brucella brozge (Becton Dickinson), dopolnjenem s 7% (v /v) FBS in inkubirali pod enakimi pogoji 24-h. Po 24-h postu, so bile živali znotraj gastrically nacepili H. pylori
(1,0 x 10 8 enot, ki tvorijo kolonije). Pred inokulacijo, so juhe kulture H. pylori
preveri pod fazno kontrastnim mikroskopom za bakterijsko obliko in mobilnost.
Živali in eksperimentalni protokol
šestinpetdeset specifično brez patogenov moški, 5- ali 6 -week starih C57BL /6J miši (CLEA Japonska, Tokio, Japonska), so bile uporabljene v tej študiji. Vse živali so bile nastanjene v plastične kletke na trdega-chip posteljnino v klimatizirani biološko nevarnost sobi s 12-h svetlobe /12-h temnega cikla, in omogočiti prost dostop do hrane in vode po vsej. Poskusna zasnova je odobril odbor za živali Nega z Aichi Cancer Center Research Institute, in živali so skrbeli v skladu s smernicami ustanove, kot tudi smernice za pravilno izvedbo poskusov na živalih (Science svet Japonske, 1. junija 2006 ).
načrt poskusa je prikazan na sliki 1A. Miši so bile razdeljene na 4 skupine (skupin A-D); 21, 5, 15 in 15 miši so bili dodeljeni A, B, C in D skupini, v tem zaporedju, na začetku poskusa. Živali skupin B in D smo inokulirali s H. pylori
znotraj gastrically na nadomestnih tednov (skupaj 7-krat), medtem ko so bile miši iz druge skupine, inokulirali sam z Brucella juho. so imele vse miši N
metil-N
-nitrosourea (MNU, Sigma Chemical, St Louis, MO, ZDA) v vodo za pitje v koncentraciji 120 ppm na nadomestnih tednov (celotna izpostavljenost je bila 5 tednov) . V ta namen je MNU sveže raztopili v destilirani vodi trikrat na teden. Miši iz skupin C in D prejel CE-2 prehrane (bazalno vsebnost natrija v 0,36%, CLEA Japonska), ki vsebuje 10% NaCl. V obdobju izpostavljenosti, ena žival iz skupine B, ki je eden od skupine C in šest skupini D je umrl ali postal umirale in so bili izključeni iz poskusa. Pri 40 tednih, so ostale živali podvržemo globoko anestezijo in laparotomijo z izrezu želodcu. Slika 1 Eksperimentalni načrt in histopatološke ugotovitve. A: Eksperimentalni načrt. Pet do šest tednov starih moških C57BL /6J miši smo inokulirali s H. pylori
SS1 sev (skupin B in D) ali Brucella juhe (skupin A in C). Vse živali so uporabili 120 ppm men v njihove pitne vode na nadomestnih tednov (celotne izpostavljenosti, 5 tednov). Miši iz skupin C in D so imeli bazalno dieto (CE-2), ki vsebuje 10% NaCl. B: histopatološke ugotovitve za MNU inducirane miših želodčnih tumorjev. (A in b) želodca adenom v pilorusa regiji izvedeni MNU-obdelanega in H. pylori
okuženimi miših (skupina B). (C in d) Adenokarcinom želodca opazili v skupini B. Opomba gostoto visoko celic in celične in strukturno atipijo. Bar = 200 (a in c) ali 100 mikrometrov (b in d).
Histološka
Za histološko preiskavo so želodcev so bile določene v 10% nevtralnem-zapufrano formalina 24-h rezine vzdolž vzdolžne osi na trakove enake širine in vdelali v parafin. Štiri Lun debele odseki so bili pripravljeni in obarvali s hematoksilinom in eozinom (H &E) za histološko opazovanje. Tumorji so bile razvrščene v adenoma in adenokarcinom temelji na celični in morfoloških atipičnosti in invazivne rasti na submucosa, kot smo poročali že prej [21].
Priprava RNA in oligonukleotida uporabo analize mikromrež
Total RNA je bila vzeta iz celotnega želodčne sluznice, vključno s tako tumor in periferna tkiva z uporabo RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen, Hilden, Nemčija) in njegove kakovosti pregleda s sistemom za mikročip elektroforezo (i-chip SV1210; Hitachi Chemical, Tokio, Japonska). so bili izbrani vzorci visoko kakovostnih in združeni za vsako skupino, da bi se izognili individualne razlike za presojo oligonukleotid mikromrež (skupina A, n = 3, B, n = 4, C, n = 6, D, n = 7). CodeLink Mouse Whole Genome Bioarray (Applied Mikromreže, Tempe, AZ, ZDA), ki vsebuje 35,587 sklopov sonda na čipu je bila uporabljena za analizo izražanja genov profilov. Hibridizacija, predelavo in skeniranje smo izvedli Filgen, Inc. (Nagoya, Japonska), ki optično branje podatkov slike analizirali s pomočjo programskega paketa (Mikromrežni orodje Data Analysis, Filgen). Popolno-povezava hierarhično grozdenje je preučila tudi na štiri skupine, ki uporabljajo podskupino usposobljeni sonde (Filgen).
Kvantitativna realnem času RT-PCR izraznih profilov v miši želodcu
Relativna kvantitativno realnem času RT-PCR smo izvedli uporabo StepOne Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, ZDA) z miško specifične gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH
) gena kot notranje kontrole. Po zdravljenju DNaza, so prvi sklop cDNA sintetiziramo iz celotne RNA uporabo nadpisano Vilo cDNA zbirno Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA). PCR smo izvedli v bistvu po navodilih proizvajalca z uporabo QuantiTect SYBR Green PCR Kit (Qiagen). V začetnih oligonukleotidov zaporedja za vsak gen, so navedene v tabeli 1. Specifičnost reakcij PCR smo potrdili s pomočjo programa talilnega krivulje dobili s programsko opremo StepOne in elektroforeza vzorcev PCR v 3% agaroznem gelu. Ravni izraz za mRNA so normalizirane na raven mRNA za GAPDH
in v primerjavi s kontrolnimi miši (skupina A), ki ga ΔΔCT method.Table 1 temeljni premaz sekvenc za relativno količinsko realnem času RT-PCR
Gene

Zaporedja
dolžina vozila
pristopu ni.
GAPDH
5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 '
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 '
Cd177
5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3'
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g

5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 '
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3'
Muc13
5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 '
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 '
GAPDH
gliceraldehid-3-fosfat dehidrogenaze, Reg3g
regeneracijo-otočkov izhaja protein 3 gama, Muc13
mucin 13.
bolniki in tumorske osebki
A skupno 55 primerov primarnega napredovalega raka želodca, kirurško odstranjenimi na Aichi Cancer Hospital Center (Nagoya, Japonska), med letoma 1995 in 2002, je bilo preiskanih po pridobitvi privolitev. Študija je odobrila etični odbor Aichi Cancer Center. Bolniki so bili vsi moški, povprečna starost in mediana nadaljnje obdobje je bilo 58,6 ± 10,2 let in 83 tednov, v tem zaporedju. Noben prejela preoperativno kemoterapijo ali radioterapijo. Karcinomi s sosednjim sluznice tkivo so bile določene in vdelali v parafin in prerezana za obarvanje s H &E. Razvrstitev tumorja uprizoritve in diagnozo naprednih primerih so bile izvedene v skladu z japonsko klasifikaciji želodčni karcinomi [29]. Rak je vdrla v muscularis Propria (T2 za klasifikacijo TNM) je subserosa (T3), ali korena in trebušne votline (T4A), včasih vključuje sosednjih organov (T4b).
Imunohistokemija uporabo človeškega želodca raka tkivo
preučila smo izražanje CD177, za katere je na voljo komercialna primarno protitelo, v človeških želodčnih tkiva raka z imunohistokemijo. Po inhibicijo endogene aktivnosti peroksidaze s potopitvijo v 3% raztopini vodikovega peroksida /metanola, je pridobivanje antigena izvedemo z 10 mM citratnega pufra (pH 6,0), v mikrovalovni pečici 10 min pri 98 ° C. Nato smo sekcije inkubirali z miško monoklonsko anti-CD177 protitelesa (klon 4C4, razredčenim 1: 100, Abnova, Taipei, Tajvan). Obarvanjem za CD177 je bila izvedena s pomočjo Vectastain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, BURLINGAME, CA, ZDA) in vezava vizualizirali z 0,05% 3,3'-diaminobenzidine. Rezultati CD177 imunskim barvanjem v neoplastične celice so bile razvrščene v štiri stopinje; razred 0 (ni, 0-10% pozitivnih celic), razred 1 (šibka, 10-30%), razred 2 (zmerna, 30-60%), in razred 3 (močna, več kot 60%), ki temelji na deležu obarvane celice, in primeri, ki kažejo zmerno do močno obarvane, so bile obravnavane kot pozitivne.
Statistična analiza
Chi-kvadrat test s popravkom Bonferroni je bila uporabljena za oceno incidence tumorja želodca. Količinske vrednosti, vključno z množico tumorja in relativnega izražanja mRNA so zastopali sredstva ± SD ali SE, in razlike med sredstvi smo statistično analizirali z ANOVA ali testa Kruskal-Wallis sledi test Tukey za multiple primerjave. Celokupnega preživetja je bila ocenjena po metodi Kaplan-Meier in test log-rang za primerjavo. Korelacije med CD177 izražanja in clinicopathological dejavnike smo analizirali z ANOVA ali hi-kvadrat test. Multivariatna analiza je bila opravljena, da preveri, ali prekomerno ekspresijo je CD177 neodvisen napovedni dejavnik pomočjo Cox proporcionalni-nevarnosti regresijski model. P
vrednosti < 0.05 naj bi bile statistično značilne.
Rezultati
pojavnost in multiplicitete v želodčnih tumorjev
dejanskega števila miši in opazovanih primerov in multiplicitete v želodčnih tumorjev so povzeti v tabeli 2. tumorji razvili v želodčni sluznici vseh MNU zdravljenih skupinah (skupine AD) (slika 1B). V high-soli skupin prehrano obdelan (skupine C in D), je bila incidenca tumorja želodca, v skupini D (H. pylori
okuženimi; 100%) je bila bistveno višja od tiste, v skupini C (niso okuženi; 50,0 %) (P
< 0,05). V osnovni prehrani skupinah (skupine A in B), se je incidenca povečala tudi s H. pylori
-infection (skupina A, 61,9% in skupine B, 100%), čeprav brez statistično pomembna. V multiplicitete skupnih tumorjev v obeh H. pylori
okuženimi skupin (skupine B, 3,3 ± 1,0 tumorji /miške in D, 2,6 ± 1,1) so bili precej višji od tistih, ki niso okužene skupine (skupine A, 0,9 ± 0,8 in skupina C, 1,0 ± 1,2) (P
< 0,05). Velikega števila adenokarcinomom želodca v skupini D (2,1 ± 1,4) je bila nekoliko višja kot v skupini B (1,8 ± 1,0) in znatno povečala vrednost skupine C (0,8 ± 1,0) (P
< 0,05). V nasprotju s tem so multiplicitete iz adenomov v skupinah A in D (0,1 ± 0,4 in 0,4 ± 0,5, v tem zaporedju) bistveno nižja kot v skupini B (1,5 ± 0,6) (P
< 0,05 in 0,01) .table 2 Pogostnost in množica želodčnih tumorjev v MNU zdravljenih miših ABB Group
dejansko število
zdravljenje
pojavnost (%)
mnogoterosti (št. za tumor /mouse)
Adenoma
karcinom
Skupaj tumor
Adenoma
karcinom
Skupaj tumor


21
MNU
3 (14,3)
13 (61,9)
13 (61,9)
0,1 ± 0.4a
0,8 ± 0,7
0,9 ± 0,8
b
4
MNU + H. pylori
4 (100) b
4 (100)
4 (100)
1,5 ± 0,6
1,8 ± 1,0
3,3 ± 1.0c
C
14
MNU + 10% NaCl
2 (14,3)
6 (42,9)
7 (50.0)
0,2 ± 0,6
0,8 ± 1,0
1,0 ± 1,2
D
9
MNU + H. pylori
+ 10% NaCl
4 (44,4)
8 (88.8)
9 (100) d
0,4 ​​± 0.5e
2,1 ± 1.4d
2,6 ± 1.1D
vrednosti za množico so izražene kot sredstvo ± SD. Incidenca so bili na splošno ocenil hi-kvadrat testa, sledijo parno analizo z Bonferronijev popravek. Multiplicitete so večinoma analizirali z ANOVA sledi preizkus Tukey za multiple primerjave. AP
< 0,01 vs. ABB Group B, BP
< 0,01 vs. ABB Group A, cP
< 0.05 vs. ABB Group A, dP
< 0.05 vs. ABB Group C, ep
< 0,05 vs. ABB Group B.
Izražanje genov profiliranje v žlezno želodcev s oligonukleotid mikromrež
Z oligonukleotidnih mikromrež, v primerjavi z ne-okuženih in bazalno-prehrana tretirana skupina (skupina A), je bilo 34 genov up-urejena in 169 so navzdol urediti z več kot dvakrat, v H. pylori
okuženimi miši (skupina B), 56 do regulirane in 129 dol -regulated pri miših visoke soli s prehrano obdelan (skupina C), in 69 do regulirane in 214 navzdol urejeno v kombinirani skupini (skupina D) (slika 2A). Vzeta skupaj, kot je prikazano v tabeli 3, smo ugotovili, da je bilo 35 geni navzgor regulirano in 31 genov smo navzdol regulirano več kot dva-krat le s kombinacijo H. pylori
infekcije in prehrane visoke soli. Poleg tega je bila hierarhična analiza povezovanje izvaja na štirih skupin s skupno 303 usposobljenih sond, ki uporabljajo grozdenje algoritem popolno-spoj (slika 3). Enaintrideset sonde vključno Cd177
, Reg3g
in Muc13
bilo potrjeno, da je v skupini sond up-urejena le v skupini D. Naknadna analiza v tej študiji je bila osredotočena na teh genov, zato, ker je je menilo, da bi se geni v kateri je bila ekspresija spremenila le v skupini s kombinirano povezana z želodčno karcinogenezo in napredovanje pri ljudeh. Slika 2 Globalna analiza genov v žleznega želodca MNU zdravljenih miših z uporabo oligonukleotida mikromrež. A: Število genov navzgor ali navzdol regulirano več kot dva-krat v želodcu MNU zdravljenih miših. V diagramu Vennov je, krogi kažejo navzgor (levo) ali navzdol regulirano (desno) genov v želodcu MNU zdravljenih miših s H. pylori
okužbe, prehrana visoki soli ali njihove kombinacije. Osenčeno območje predstavlja za pomikanje navzgor ali navzdol regulirane genov več kot dva-krat le s kombinacijo. B: Kvantitativno realnem času RT-PCR analizo treh izbranih up-reguliranih genov (Cd177
, Reg3g
in Muc13
) v želodcih iz MNU zdravljenih miših. raven izražanja genov v vsakem vzorcu smo normalizirali s GAPDH
kot notranje kontrole z uporabo metode ΔΔCT. Relativne stopnje izraženosti so zastopali glede na X-krat sprememb v skupini A (fiksni kot 1,0). Statistična analiza je bila opravljena s testom Kruskal-Wallis za splošno analizo in test Tukey za multiple primerjave. Palice, SE; * P
< 0,01 vs. ABB Group A in < 0.05 vs. ABB Group C; †, P
< 0.01 vs.
Skupina C.
Tabela 3 reguliranih genov po kombinaciji okužbe H. pylori in prehrani z visokim soli v miške želodčne sluznice
pristopu ni.
Simbol

geni /beljakovine
Proste kratno spremembe
Up-reguliranih genov
XM_357640
Igk-V8
imunoglobulin kappa verige spremenljivih 8 (V8)
14,4
XM_001472541
Ighg
imunoglobulin težke verige (gama polipeptid)
9.2
NM_026862
Cd177
CD177 antigen
7,3
NM_011260
Reg3g
regeneracijo, otočkov izhaja 3 gama
6,1
NM_023137
UBD
ubikvitina D
4.3
XM_144817
Igk-V34
imunoglobulin kappa verige spremenljivka 34 (V34)
4,1
NM_007675
Ceacam10
karcinoembrionski povezane z antigenom celične adhezije molekule 10
3.7
NM_183322
Khdc1a
KH domene, ki vsebujejo 1A
3.3
NM_011475
Sprr2i
mala prolin-rich protein 2I
3,2
NM_175165
Tprg
povezane Transformation protein 63 urejeno
3.2
NM_175406
Atp6v0d2
ATPaze, H + prevažanje , lizosomalne V0 podenota D2
3.0
NM_009703
Araf
proti-raf mišje sarkom 3611 virusnega onkogena homolog
2,6
NM_026822
Lce1b
Late roženimi ovojnice 1B
2,5
NM_016958
Krt14
keratin 14
2.5
NM_212487
Krt78
Keratin 78
2.4
NM_009807
Casp1
kaspazne 1
2.4
NM_146037
Kcnk13
kalijev kanal, podskupino K, član 13
2.4
NM_019450
Il1f6
interlevkin 1 družina, član 6
2.3
NM_008827
PGF
Placentarna rastni faktor
2.3
XM_893506
Klk12
kallikrein povezano-peptidaze 12
2.3
NM_016887
Cldn7
Claudin 7
2.3
NM_029360
Tm4sf5
Transmembranski 4 član naddružina 5
2.2
NM_172301
Ccnb1
ciklin B1
2.2
NM_010739
Muc13
mucin 13, epitelijskih transmembranski
2,2
NM_011165
Prl4a1
prolaktina družine 4, podskupino A, član 1
2.2
NM_010162
EXT1
Exostoses (več) 1
2.2
NM_011704
Vnn1
Vanin 1
2.1
NM_011082
Pigr
Polimerni imunoglobulin receptor
2,1
NM_007769
Dmbt1
črtano pri malignih možganskih tumorjev 1
2.1
NM_022984
Retn
Resistin
2.1
NM_173037
Tmco 7
transmembranski in navite spirale domene 7
2.1
NM_009100
Rptn
Repetin
2.1
NM_007630
Ccnb2
ciklin B2
2.1
NM_001081060
Slc9a3
Solute prevoznik družina 9 (natrija /vodik izmenjevalnik), član 3
2.0
NM_146588
Olfr1030
Vohalno receptor 1030
2.0
Dol-regulirani geni
NM_008753
Oaz1
ornitin dekarboksilaza antizyme 1
0,31
NM_027126
Hfe2
tip Hemochromatosis 2 (juvenilni) (humani homolog)
0,33
NM_053206
Magee2
melanom antigen, družino E, 2
0,33
NM_010924
Nnmt
nikotinamid N-metiltransferaza
0,41
NM_026260
Tctn3
Tektonski družinski član 3
0,41
NM_181039
Lphn1
Latrophilin 1
0,43
NM_008312
Htr2c
5-hidroksitriptamin (serotonin) receptor 2C
0,43
NM_146667
Olfr740
Vohalno receptor 740
0,44
NM_007550
bLM
Bloom sindrom homolog (človek)
0,44
NM_011243
RaRb
retinojska kislina receptor, beta
0,44
NM_184052
IGF1
inzulinu podobnega rastnega faktorja 1
0,45
NM_013893
Reg3d
regeneracijo, otoček, ki se pridobiva 3 Delta
0,46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin 1
0,46
NM_029550
Keg1
ledvice izražene gene 1
0.46
NM_019388
CD86
CD86 antigen
0,46
NM_011316
Saa4
serumskega amiloida A 4
0,47
NM_007811
Cyp26a1
citokrom P450, družina 26, podskupino A polipeptid 1
0,47
NM_011538
Tbx6
T-box 6
0,48
NM_011086
Pip5k3
fosfatidil-3-fosfatnega /fosfatidilinozitol 5-kinaze, tip III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, citoskeletnim povezan protein
0,48
NM_007858
Diap1
Prozornega homolog 1 (Drosophila)
0,48
NM_053271
Rims2
urejanju sinaptični membrane eksocitozi 2
0,48
NM_153163
Cadps2
Ca2 + -dependent aktivator beljakovine za izločanje 2
0,49
NM_007541
Bglap1
Bone gama carboxyglutamate beljakovin 1
0,49
NM_031871
Ghdc
GH3 domene, ki vsebujejo
0,49
NM_025545
Aptx
Aprataxin
0,49
NM_177322
Agtr1a
angiotenzina II, tip 1a
0,49
NM_026872
Ubap2
-ubikvitina povezan protein 2
0,49
NM_028045
Erv3
endogeno retrovirusni zaporedje 3
0,49
NM_011641
Trp63
povezane Transformation protein 63
0,49
Slika 3 Hierarhična analiza povezovanje štirih eksperimentalnih skupin MNU zdravljenih miših. Podatki izraz iz 303 usposobljenih sond (levo). Štiri eksperimentalne skupine so bile razvrščene v dveh delih (skupine A /C) in (skupine B /D), ki temeljijo na podobnosti pri vzorcev izražanja. Vsaka vrstica predstavlja sondo in vsak stolpec predstavlja eksperimentalno skupino (skupine A-D). Kot je prikazano v barvnem bar, zelena označuje up-regulacije; rdeče kaže navzdol uredbe; in črna kaže nobenih sprememb. Enaintrideset sonde predstavljala skupek sond up-urejena le v skupini D (desno).
Celotne rezultate te analize mikromrež so bili predloženi in so zlahka dostopni iz javnih zbirk podatkov NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) z številka pristop GSE29444 (velikost vzorca: GSM728857-60).
kvantitativna realnem času RT-PCR analizo izražanja genov profilov v MNU zdravljeni miško želodcev
Relativna kvantitativno realnem času RT-PCR analizo treh izbranih navzgor reguliranih genov (Cd177
, Reg3g
in Muc13
) v H. pylori
okuženimi in visoko sol miši-prehrana obdelan potrdili povečano izražanje Cd177
in Reg3g
, kot je prikazano na sliki 2B, z velikimi razlikami. Čeprav je izraz raven Muc13
v skupini D večja od vseh drugih skupin, ni bilo statistično značilnih razlik med njimi (P
= 0,0712 v primerjavi z ABB Group C).
Imunohistokemičnim izražanje CD177 v človeški naprednih želodca raka in korelacijo z clinicopathological dejavniki
na imunohistokemičnim analizo človeške želodčne tkiv rakavih je CD177 opazili samo pri membranah in cytoplasms iz infiltrirana nevtrofilcev, temveč tudi v želodčnih rakavih celicah tako dobro in slabo diferenciranih adenokarcinomov ( slika 4A). Rakave celice tipa pečat obroč celic (2 primerov), so bili negativni za CD177. Med 55 želodčnih primerov raka, zmerne do močne izražanje CD177 opazili pri 33 (60,0%) (tabela 4). Slika 4 Imunohistokemija za CD177 v napredovalem raku človeške želodčne in povezanost s splošno stopnjo preživetja. A: Imunohistokemično analiza CD177 izražanja človeške želodčne tkivu raka. (A in b) Negativni obarvanje (none šibko) za CD177 v adenokarcinomom želodca. CD177 izraz je prisotna le v infiltracije nevtrofilcev, medtem ko so neoplastične celice dobro diferenciranim (a) ali slabo diferenciranega (b) karcinoma negativna. Original povečava, × 100 (insert, × 400). (C in d) Opomba pozitiven (zmerna do močna) izražanja CD177 v dobro diferenciranega (c) ali slabo diferenciranih (d) želodca rakavih celic. Original povečava, × 100 (insert, × 400). B:. Primerjava Kaplan-Meier krivulje kumulativne preživetja za CD177 pozitivnih in negativnih primerov raka želodca
Tabela 4 CD177 izraz v želodcu karcinomov in korelacija z clinicopathological dejavnikov
zadevi ni
. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric adenokarcinomov
55
18
15
17
5
starosti
let (sredstva ± SD)
55,3 ± 10,4
60,2 ± 8,13
59,8 ± 11,0
60,4 ± 13,0
0.5039
histološko razvrstitev
No /zmerno diferenciranega tipa *
21
6
9
4
2
0,1904
Slabo diferencirane /Signet-ring tip celic **
34
12
6
13
3
globina invazije †
T1-3
27
5
10
10
2
0.2011
T4
26
11
5
7
3
limfnih node metastaze
N0
6
1
2
2
1
0,7869
N1-3
49
17
13
15
4
* črevesne tip Lauren, ** Lauren je vrsta difuzna, † Case število se je zmanjšalo za triinpetdeset, ker je globina invazije ni bila razvrščena v dveh primerih, ‡ smo izvedli ANOVA in hi-kvadrat test za starost in drugih dejavnikov, v tem zaporedju.
spremljanje obdobje od bolnikov je bila od 9 do 606 tednov (mediana = 83 tednov). Petletna stopnja preživetja za CD177 pozitivnih in negativnih bila 39,4% in 18,2%, v tem zaporedju. Iz analize krivulje preživetja Kaplan-Meier je CD177-pozitiven izraz, povezan z boljšo celokupno preživetje (P
= 0.0294, log-rank test) (slika 4B). Ni bilo statistično značilno korelacijo CD177 izražanja s starostjo, histološko razvrščanja, globina invazije, in bezgavkah metastaze (tabela 4).
Analizo Multivariatno za splošno preživetje človeške želodčne primerov raka
Uporaba Cox sorazmernih tveganj modela , multivariatna analiza clinicopathological spremenljivk, vključno s starostjo bolnika, tumorja histološko klasifikacijo, globina invazije, bezgavkah metastaze in CD177 izražanja (tabela 5), ​​je pokazala zadnja, ki je neodvisen dejavnik za skupno preživetje (P
= 0,0323) . Vsi avtorji prebrali in potrdil končni rokopis.

• Kurkumin izboljšuje izražanje SCF /c-kit skozi olajševalnih oksidativni stres in aktivacije NF-κB v želodčnih tkivih diabetične gastropareze rats
• Pomanjkanje prehrana povečuje tveganje za nastanek raka na želodcu mortality