Genų ekspresijos analizė Helicobacter pylori infekuotų ir aukštos druskos dietos gydytų pelių skrandžio naviko modelio identifikavimas CD177 kaip naują prognostinis faktorius pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu

Genų ekspresijos analizė Helicobacter pylori
-infected ir aukštos druskos dietos gydytų pelių skrandžio naviko modelio identifikavimas CD177 kaip naują prognostinis faktorius pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu, pervežimas tezės
Background pervežimas Helicobacter pylori
(H. pylori
) infekcija ir pernelyg druskos vartojimas yra žinomas kaip svarbiausių rizikos veiksnių, skrandžio vėžiu žmonėms. Tačiau sąveikos šių dviejų veiksnių, kurių genų ekspresijos profilius metu skrandžio kancerogenezėje lieka neaiški. Šioje studijoje, mes ištirti pasaulio genų ekspresiją, susijusių su skrandžio kancerogenezėje ir prognozės žmogaus skrandžio vėžio naudojant pelės modelį.
Metodai
Norėdami sužinoti kandidates genus skrandžio kancerogenezėje, mes pirmiausia sukonstravo kancerogenas sukeltos pele skrandžio navikas modelis kartu su H. pylori infekcija
ir aukštos druskos dietos. C57BL /6J pelėms buvo duota N
-metil-N
-nitrosourea savo geriamojo vandens ir paaukojo po 40 savaičių. Gyvūnai kombinacijos grupės buvo pasėta H. pylori parsisiųsti ir šeriami aukštos druskos dietos. Genų ekspresijos profilius liaukų skrandžio ir pelių buvo tiriamas oligonukleidų microarray. Antra, mes išnagrinėjo kandidato geno kaip prognostinis faktorius sergančių žmonių prieinamumą. Imunohistocheminis analizė CD177, vienas iš iki reguliuojamų genų, buvo atliktas žmogaus išplitusiu skrandžio vėžiu egzempliorių įvertinti asociacijos prognozę.
Rezultatai
skrandžio naviko kancerogenai gydytų pelių gausos buvo žymiai padidėjo kartu H. pylori
infekcijos ir aukštos druskos dietos. Į mikrogardelių sistemoje analizės, 35 ir 31 daugiau nei du kartus iki reguliuojama ir žemyn-reguliuojamų genų, atitinkamai, buvo aptikta į H. pylori
-infection ir aukštos druskos dietos kartu grupėje, lyginant su kitomis grupėmis. Kiekybinė PGR patvirtino reikšmingas per išraiška dviejų kandidačių genų, įskaitant Cd177
ir Reg3g
. Dėl imunohistocheminio analizės CD177 žmogaus išplitusiu skrandžio vėžiu egzempliorių, per išraiška buvo akivaizdus 33 (60,0%) iš 55 atvejų žymiai koreliacijos su palanki prognozė (P
= 0.0294). Daugiamatė analizė, įskaitant klinikos veiksnių kaip kintamuosius atskleidė aukštą raišką CD177 būti nepriklausoma prognostinis faktorius bendro išgyvenamumo.
Išvadas
Šie rezultatai rodo, kad mūsų pelės modelis kartu su H. pylori
infekcijos ir aukštos druskos dietos yra naudinga genų ekspresijos skrandžio kancerogenezėje, pateikdamas įrodymus, kad CD177 yra naujas prognostinis faktorius skrandžio vėžio. Tai pirmoji ataskaita rodo prognostinę koreliaciją tarp CD177 saviraiškos ir solidinių navikų elgesį.
Raktiniai žodžiai
Cd177 Skrandžio vėžys Helicobacter pylori
mikrogardeliq Druskos faktai
Skrandžio vėžys yra ketvirtoji dažniausia vėžio ir antroji pagrindinė priežastis, vėžio susijusių mirties visame pasaulyje [1]. Helicobacter pylori
(H. pylori
) dabar pripažįstamas kaip svarbus rizikos faktorius lėtiniu gastritu ir skrandžio vėžio vystymosi [2]. Be to, taip pat buvo įrodyta aplinkos ir priimančiosios veiksnių įtakos skrandžio Kancerogeninis ir druska (natrio chloridas, NaCl), ir sūrus maistas yra ypač svarbus, remiantis įrodymais iš epidemiologinių ir eksperimentinių tyrimų [3-6] numeriu. Taigi, bendras poveikis H. pylori
infekcija ir pernelyg druskos vartojimas atrodo labai svarbus kuriant ir progresavimo skrandžio auglių, nors išsamių mechanizmų, ypač kalbant apie genų ekspresijos profilius, dar reikia išsiaiškinti.
Aukšto pralaidumas Mikrogardelė technologija suteikia galingą įrankį išsamią genų analizę, jau taikomas įvertinti genų ekspresijos modelius abiejose žmogaus mėginiai ir gyvūnų modelių skrandžio sutrikimų [7-16]. Nors daugelis mokslininkai orientuota į genų ekspresijos H. pylori
gydomiems skrandžio ląstelių linijos [17-19], rezultatai ląstelių kultūroje, nebūtinai koreliuoja su išraiškos konkrečių genų in vivo pervežimas mikroaplinkos featuring priimančiosios imuninę atsakymai ir stromos-epitelio sąveikos vėžio. Kancerogenas gydytų Mongolijos smiltpelės buvo naudojami kaip naudingas gyvūnų modelio H. pylori
-associated skrandžio kancerogenezės [20-24], o mes anksčiau pranešė, kad sinergetinis sąveika tarp H. pylori
infekcijos ir didelio druskos vartojimas pagreitina lėtinis uždegimas ir naviko vystymąsi šių gyvūnų [25, 26] skrandžius. Deja, yra mažai informacijos, kad Smiltpelės genomo, trukdo genetinę ir molekulinė analizė. Todėl dėmesys buvo sutelktas į pelės modelius [12, 13], ir sukurti pelės modelio skrandžio vėžio featuring druska ir H. pylori
ekspozicija yra reikalinga tyrimams skirtomis genus skrandžio kancerogenezėje.
Ankstesnis microarray studijas naudojant graužikų modelių nebuvo išskirti ir apibūdinti raiškos profilius remiantis H. sąveikos pylori
infekcija ir druskos vartojimas. Šiame tyrime mes išnagrinėjo genų ekspresiją skrandžio gleivinės vienoje ar kitoje H. pylori
-infected ir aukštos druskos dietos gydytų pelių skrandžio naviko modelio oligonukleidų microarray ir rado dvi kandidates up-reguliuojama genų įskaitant Cd177
ir Reg3g
. Mes taip pat tyrė CD177 išraiška žmogaus išplitusiu skrandžio vėžiu imunohistocheminiu ir gauti įrodymai kaip potencialus prognostinis faktorius skrandžio kancerogenezėje.
Metodai
Sėjimas su H. pylori pervežimas pervežimas H. pylori
buvo paruošti tuo pačiu metodu, kaip aprašyta anksčiau [27, 28]. Trumpai, H. pylori
(Sidnėjus padermės 1) inokuliuojama ant Brucella agaro lėkštelėse ( "Becton Dickinson, Cockeysville, MD, JAV), kurių sudėtyje yra 7% (v /v) šilumos-inaktyvuota vaisiaus jaučio serumo (FBS) ir inkubuojama 37 ° C temperatūroje ° C pagal microaerophilic sąlygomis esant didelei oro drėgmei 2 dienas. Tada, auginamos ant plokštelių bakterijos buvo įvesta į Brucella sultinio ( "Becton Dickinson), papildytoje su 7% (v /v) FBS ir inkubuojami tomis pačiomis sąlygomis, skirtų 24-h. Po 24-H pasninko, gyvūnai buvo viduje gastrically užsėti H. pylori
(1,0 × 10 8 kolonijas sudarančių vienetų). Prieš sėjant, sultinys kultūros H. pylori pervežimas buvo
tikrinamas pagal fazinio kontrasto mikroskopu bakterijų formos ir mobilumą. Gyvūnai ir eksperimentinės protokolas
penkiasdešimt šeši konkretaus patogenais neužkrėstų patinas, 5 arba 6 -week senumo C57BL /6J pelėms (CLEA Japonija, Tokijas, Japonija) buvo naudojami šiame tyrime. Visi gyvūnai buvo laikomi plastikiniuose narvuose ant kietmedžio drožlių patalynė oro kondicionieriumi biologinio pavojaus kambaryje su 12 h šviesos /12 h tamsos ciklo, ir leido laisvai patekti į maisto ir vandens visoje. Eksperimentinis dizainas buvo patvirtintas Gyvūnų priežiūros komiteto Aichi vėžio centro tyrimų institutas, o gyvūnai buvo prižiūrimi pagal įstaigoje patvirtintas gaires, taip pat už tinkamą elgesį Gyvūnų eksperimentai (mokslo tarybos Japonijoje, birželio 1, 2006 gairių ).
eksperimentinis dizainas pavaizduotas 1a paveiksle. Pelės buvo suskirstyti į 4 grupes (grupės A-D); 21, 5, 15, ir 15 pelių buvo priskirtas A, B, C, ir D grupių, atitinkamai, tuo eksperimento pradžios. Gyvūnai grupių B ir D buvo pasėta H. pylori pervežimas vidaus gastrically antrą savaites (iš viso 7 kartus), o peles kitų grupių buvo pasėta Brucella sultinio vieni. Visi pelėms buvo duota N
-metil-N
-nitrosourea (MNU Sigma chemijos, St Louis, Misūrio valstija, JAV) savo geriamojo vandens 120 ppm antrą savaites koncentracija (bendroji ekspozicija buvo 5 savaites) , Šiam tikslui MNU buvo šviežiai ištirpinamas distiliuotame tris kartus vandens per savaitę. Pelės Groups C ir D gavo CE-2 mitybą (bazinio natrio kiekis 0,36%, CLEA Japonija), kurių sudėtyje yra 10% NaCl. Poveikio metu mirė arba tapo gaištančių vienas gyvūnas B Group, viena iš C grupės ir šešių D grupėje ir jie buvo pašalinti iš eksperimento. Ne 40 savaičių, likusiosios gyvūnai buvo tiriami iki tamsiai anestezijos ir laparotomija su iškirpimo skrandį. 1 pav Eksperimentinis dizainas ir histopatologiniai duomenys. A: Eksperimentinis dizainas. Penkių iki šešių savaičių vyrų C57BL /6J pelių buvo pasėta H. pylori pervežimas SS1 štamo (grupės B ir D) arba Brucella sultinio (grupės A ir C). Visi gyvūnai buvo skiriama 120 ppm mnu savo geriamojo vandens kas antrą savaitę (bendros pozicijos, 5 savaites). Pelės Groups C ir D buvo suteiktas bazinio dietos (CE-2), kuriame yra 10% NaCl. B histopatologiniai duomenys MNU sukeltos pelėmis skrandžio navikų. (A ir b) Skrandžio adenomos į prievarčio regione yra MNU gydytų ir H. pylori
-infected pele (B grupė). (C ir d) Skrandžio adenokarcinoma pastebėtas B grupės Pastaba aukštą ląstelių tankį ir ląstelių ir struktūrinį atipijos. Baras = 200 (A ir C), arba 100 mkm (b ir d).
Histologinis
For histologinio tyrimo, kad skrandžiai buvo nustatytas 10% neutralus buferinis formalino 24-h, griežinėliais išilgai išilginės ašies į juosteles vienodo pločio, ir įterptais parafinu. Keturių mkm storio sekcijos buvo parengta ir tamsintas hematoksilinu ir eozinu (H & e) histologinio stebėjimu. Navikai buvo suskirstyti į adenoma ir adenokarcinoma remiantis ląstelių ir morfologinės atipijos ir invazinės augimo iki submucosa kaip mes pranešta anksčiau [21].
RNR rengimas ir oligonukleidų mikrogardeliq analizė
viso RNR buvo išskirta iš viso skrandžio gleivinės įskaitant tiek naviko ir periferinių audinių naudojant RNeasy Plius Mini Kit (Qiagen, Hilden, Vokietija) ir jo kokybę patikrinti su mikroschema elektroforezės sistemos (i-lustas SV1210; Hitachi cheminis, Tokijas, Japonija). Aukštos kokybės mėginiai buvo atrinkti, ir sujungtos kiekvienos grupės, kad būtų išvengta individualų skirtumą oligonukleotidas mikrogardelių vertinimo (A grupė, n = 3; B, n = 4; C, N = 6; D, n = 7). CodeLink Pelės visą genomą Bioarray (Applied Mikrogardelių, Tempė, Arizona, JAV), kurių sudėtyje yra 35,587 probe rinkinius per mikroschema buvo naudojamas analizuoti genų ekspresijos profilius. Hibridizacija, apdorojimo, ir skenavimas buvo atliktas Filgen, Inc. (Nagoja, Japonija), skenavimo duomenų vaizdai analizuojami naudojant programinį paketą (mikrogardeliq duomenų analizės įrankis, Filgen). Užbaigti-jungtis hierarchinė grupuojama taip pat buvo nagrinėjami keturių grupių naudojant kvalifikuotą zondas poaibį (Filgen).
Kiekybinis realaus laiko PGR išraiškos profilių pelėmis skrandžio
Santykinis kiekybinė realaus laiko AT-PGR buvo atliekama naudojant StepOne realiojo laiko PGR sistema (taikoma BIOSYSTEMS Foster City, CA, JAV) su pelės specifinis gliceraldehido-3-fosfato dehidrogenazės (GAPDH pervežimas) geno, kaip vidaus kontrolės. Po dezoksiribonukleazės gydymo, First Strand kDNR buvo sintetinamas iš viso RNR naudojant viršuje VILO sintezei komplektas (Invitrogen, Karlovi Varai, CA, JAV). PGR buvo atliekama iš esmės pagal gamintojo nurodymus naudojant QuantiTect SYBR Žalioji PCR Kit (Qiagen). Grunto sekas kiekvieno geno, yra išvardyti 1 lentelėje specifika PGR reakcijų buvo patvirtinta naudojant lydalo kreivė numatytos programos su StepOne programinės įrangos ir elektroforezės PGR mėginių 3% agarozės gelius. Sąvoka lygiai mRNR buvo normalizuotas į iRNR lygio GAPDH parsisiųsti ir palyginti su kontrolinių pelių (A grupė) Iki ΔΔCT method.Table 1 PRIMER sekas santykinė realaus laiko PGR
Gene

sekos
Prekės ilgis
prisijungimas Nr.
GAPDH
5'-AACGGATTTGGCCGTATTG-3 "
140
NM_008084
5'-TTGCCGTGAGTGGAGTCATA-3 "
Cd177
5'-AGGGGTGCCACTCACTGTTA-3"
128
NM_026862
5'-CCGATTGTTTTGGAGTCACC-3
Reg3g

5'-GTATGGATTGGGCTCCATGA-3 "
106
NM_011260
5'-GATTCGTCTCCCAGTTGATG-3"
Muc13
5'-CCTAATCCCTACGCAAACCA-3 "
124
NM_010739
5'-TCTGCCCATTTCTCCTTGTC-3 "
GAPDH
gliceraldehido-3-fosfato dehidrogenazės, Reg3g
regeneruoja salelių kilmės baltymų 3 gama, Muc13
mucino 13.
pacientai ir naviko pavyzdžiai
55 atvejų pirminės išplitusiu skrandžio vėžiu, chirurginiu rezekcijos Aichi vėžio centro ligoninės (Nagoja, Japonija) tarp 1995 ir 2002 iš viso, buvo tiriama gavus informuoto sutikimo. Tyrimas patvirtino etikos komiteto Aichi vėžio centro. visų pacientų buvo vyriškos lyties, o vidutinis amžius ir vidutinė kontrolinio stebėjimo laikotarpio trukmė buvo 58,6 ± 10,2 metų ir 83 savaites, atitinkamai. Nėra gavo priešoperacinė chemoterapija arba radioterapija. Karcinomos gretimų gleivinės audinio buvo fiksuotas ir įdėta į parafiną ir suskirstyta dažymui su H & E. Klasifikacija naviko stadija ir diagnostikos pažangių atvejais buvo pagamintas pagal japonų klasifikatoriaus Skrandžio karcinomos [29]. Į vėžio įsiveržė į muscularis propria (T2 TNM klasifikaciją), tuo subserosa (T3), arba serosa ir pilvaplėvės ertmę (T4A), kartais įtraukiant gretimų organų (T4b).
Imunohistocheminis naudojant žmogaus skrandžio vėžio audinio
Mes išnagrinėjome išraišką CD177, kuriai komercinis pirminis antikūnas buvo prieinama, žmogaus skrandžio vėžio audiniuose imunohistocheminiu. Po to, kai slopinimo endogeninio peroksidazės aktyvumo panardinant į 3% vandenilio peroksido /metanolio tirpalo, antigenas paieškos buvo atliktas su 10 mM citrato buferio (pH 6,0), mikrobangų krosnelėje, 10 min 98 ° C temperatūroje. Tada skyriai buvo inkubuojami su pele monokloninis anti-CD177 antikūnas (klonas 4C4, praskiesto 1: 100, Abnova, Taipėjus, Taivanas). Dažymo ir CD177 buvo atliekama naudojant Vectastain Elito ABC rinkinį (Vector Laboratories, Burlingame, CA, JAV) ir įrišimo ryškinamos 0,05% 3,3'-diaminobenzidinas. Dėl CD177 imunodažymu į navikinių ląstelių rezultatai buvo suskirstyti į keturias laipsnių; Įvertinimas: 0 (nėra, 0-10% teigiamų ląstelių), 1 klasė (silpnas, 10-30%), 2 klasė (vidutinio sunkumo, 30-60%), o 3 įvertinimas (stiprus, daugiau nei 60%) grindžiamas santykiu Dėmėti ląstelės, ir atvejai, rodantys vidutinio stiprios dažymo buvo laikomas teigiamu.
statistinė analizė Viesbutis The Chi kvadrato testas su Bonferroni korekcijos buvo naudojamas įvertinti sutrikimus skrandžio naviko. Kiekybiniai reikšmės, įskaitant gausos naviko ir santykinio išraiška mRNR atstovavo priemonėmis ± SD ar SE ir skirtumai tarp priemonių buvo statistiškai analizuojami ANOVA arba Kruskal-Wallis testą, po kurio Tukey testas daugeliui lyginimų. Bendras išgyvenamumas buvo įvertintas naudojant Kaplan-Meier metodą ir log-rank testą palyginimų. Koreliacija tarp CD177 saviraiškos ir klinikos veiksnių buvo analizuojami ANOVA ar chi-square testą. Daugiamatė analizė buvo atliekama siekiant patikrinti, ar CD177 per išraiška buvo nepriklausoma prognostinis faktorius naudojant Cox proporcinio rizikos regresijos modelį. P
vertės < 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas.
Rezultatai
sutrikimus ir kartotinumai skrandžio navikų
veiksmingą skaičių pelių ir pastebėtų paplitimu ir daugiskaitos skrandžio navikų yra apibendrinti 2 lentelėje navikų sukurtas skrandžio gleivinės visų MNU gydytų grupių (Grupės AD) (1B pav.) Be didelio druskos dietos gydytų grupių (grupės C ir D), skrandžio navikų D grupėje (H. pylori
-infected; 100%) buvo reikšmingai didesnis nei C grupė (neužkrečiama; 50,0 %) (P
< 0,05). Be bazinių dietos grupių (A ir B grupių), dažnis taip pat buvo padidintas H. pylori pervežimas -infection (A grupė, 61,9% ir B GROUP, 100%), nors ir be statistinio reikšmingumo. Iš viso navikų abiejų H. pylori
-infected grupių kartotinumai (B grupė, 3,3 ± 1,0 navikai /pelės ir D grupė, 2,6 ± 1,1) buvo ženkliai didesnis nei neužkrečiama grupes (A grupė, 0,9 ± 0,8 ir C grupė, 1,0 ± 1,2) (P
< 0,05). Skrandžio adenokarcinoma D grupėje (2,1 ± 1,4) įvairovė buvo šiek tiek didesnis nei, kad B grupėje (1,8 ± 1,0) ir žymiai padidėjo per C grupė vertės (0,8 ± 1,0) (p
< 0,05). Priešingai, iš adenomų kartotinumai grupėse A ir D (0,1 ± 0,4 ir 0,4 ± 0,5, atitinkamai) buvo gerokai mažesnis nei B grupėje (1,5 ± 0,6) (p
< 0,05 ir 0,01) .table 2 Sergamumas ir įvairovė skrandžio navikų MNU gydytų pelių
Grupės
Efektyvus skaičius
Gydymas
dažnis (%)
įvairovė (Nr. iš navikas /pelė)
adenoma
karcinoma
viso naviko
adenoma
karcinoma
viso naviko


21
MNU
3 (14,3)
13 (61,9)
13 (61,9) 0,1 ± 0.4a
0,8 ± 0,7
0,9 ± 0,8
b
4
MNU + H.pylori
4 (100); b pervežimas 4 (100) pervežimas 4 (100)
1,5 ± 0,6
1,8 ± 1,0
3,3 ± 1.0c
C
14
MNU + 10% NaCl,
2 (14.3)
6 (42,9)
7 (50,0)
0,2 ± 0,6
0,8 ± 1,0
1,0 ± 1,2
D
9
MNU + H.pylori
+ 10% NaCl,
4 (44,4)
8 (88,8)
9 (100) r
0,4 ​​± 0.5 * e
2,1 ± 1.4D
2,6 ± 1.1D
vertės gausos yra išreikštas reiškia ± SD. Dažnis paprastai buvo įvertintas chi kvadrato testas, po poravimas analizės Bonferroni korekcija. Kartotinumai paprastai buvo analizuojami ANOVA, o po to Tukey bandymo išsėtinės palyginimas. AP
< 0,01 vs
B grupė, BP
< 0,01 vs
grupė, cP
< 0,05 vs
grupė DP
< 0,05 vs
C grupė EP
< 0,05 vs
Grupė B
Genų ekspresijos į liaukų skrandžius pagal oligonukleotidas mikrogardeliq
Su Oligonųkleotidų mikrogardelių, palyginti su neužkrečiama ir bazinio dieta gydytų grupėje (A grupė), 34 genai buvo iki reguliuojama ir 169 buvo žemyn reguliuojama daugiau nei du kartus per H. pylori
-infected pelėms (B grupė), 56 iki reguliuojama ir 129 žemyn -regulated aukštos druskos dietos gydytų pelių (C grupė), ir 69 iki reguliuojama ir 214 žemyn reguliuojama pagal Kombinuotąją grupės (D grupė) (2A pav.) Paimti kartu, kaip parodyta 3 lentelėje, mes nustatėme, kad 35 genai buvo iki reguliuojama ir 31 genai buvo žemyn reguliuojama daugiau nei du kartus tik H. pylori
infekcijos ir aukštos-druskų kiekio dietos derinys. Be to, hierarchinė grupavimas analizė buvo atlikta keturių grupių su 303 kvalifikuotų zondai, naudojant visiškai susiejimo grupavimo algoritmą (3 paveikslas) viso. Trisdešimt vienas zondai įskaitant Cd177
, Reg3g
ir Muc13
buvo patvirtinta, kad per zondai klasterio iki reguliuojama tik Grupė D. vėlesnei analizei šiame tyrime buvo skiriamas šių genų, nes tai buvo manoma, kad genai, kurioje išraiška buvo pakeista tik Kombinuotosios grupės gali būti susijęs su skrandžio kancerogenezėje ir progresavimo žmonėms. 2 pav Global genų analizę liaukų skrandžio ir MNU gydytų pelių naudojant oligonukleotido mikrogardeliq. A: Taškų genų aukštyn arba žemyn reguliuojama daugiau nei du kartus atsižvelgiant į MNU gydytų pelių pilvo. Be Veno anketa schemoje, apskritimai rodo aukštyn (kairėje) arba žemyn reguliuojama (dešinėje) genus į MNU gydytų pelių su H. pylori infekcija,
aukštos druskos dietos ar jų derinys skrandį. Tamsesniame plotas žymi tiekėjų ir žemyn reguliuojamų genų daugiau nei du kartus tik kartu. B: Kiekybinis realaus laiko PGR analizė trijų atrinkti iki reguliuojamų genų (Cd177
, Reg3g
ir Muc13
) Atsižvelgiant į MNU gydytų pelių skrandžius. Ekspresijos lygis kiekvienoje imties genų buvo normalizavosi GAPDH
kaip vidaus kontrolės, naudojant ΔΔCT metodą. Santykiniai ekspresijos lygis atstovavo X-kartų kaita, palyginti su A grupės (fiksuoto kaip 1,0). Statistinė analizė buvo atlikta pagal Kruskal-Wallis testas bendros analizės ir Tukey testas kelių palyginimui. Barai, SE; *, P
< 0,01 vs
grupė A ir < 0,05 vs
C grupė; † P
< 0.01 vs
C grupės
3 lentelė reguliuojamų genų kombinacija H. pylori infekcija ir aukštos druskos dietos pelės skrandžio gleivinės
prisijungimas Nr.
Akcija

genai /baltymai
Nemokama Sulenkite pakeitimus

Iki reguliuojamų genų
XM_357640
IGK V8
imunoglobulinas kapa grandinės kintamos 8 (V8)
14,4
XM_001472541
Ighg
imunoglobulino sunkiosios grandinės (gama polipeptidas)
9,2
NM_026862
Cd177
CD177 antigeno
7,3
NM_011260
Reg3g
Atstatantis salelių gautas 3 gama
6.1 pervežimas NM_023137 pervežimas UBD
ubikvitino D
4.3
XM_144817
IGK-v34
imunoglobulinas kapa grandinės kintamąjį 34 (v34)
4,1
NM_007675
Ceacam10
karcinoembrioninius antigeno susijusių ląstelių adhezijos molekulės 10
3,7
NM_183322
Khdc1a
KH domeną, turintį 1A
3.3 pervežimas NM_011475
Sprr2i
Mažas prolino turtinga baltymų 2I
3.2
NM_175165
Tprg
transformacija susiję baltymai 63 reguliuojamą
3.2 pervežimas NM_175406
Atp6v0d2 pervežimas ATPazės, H + transportavimas , lizosominio V0 subvieneto D2
3,0
NM_009703
Araf
v-Raf pelių sarkoma 3611 virusinė onkogeno homologas
2,6 pervežimas NM_026822 pervežimas Lce1b pervežimas Vėlyvas cornified voko 1B
2,5
NM_016958
Krt14
keratino 14
2.5
NM_212487
Krt78
keratino 78
2,4
NM_009807
Casp1
kaspazės 1
2,4
NM_146037
Kcnk13
Kalio kanalų, pošeimio K narys 13
NM_019450
Il1f6
Interleukinas 1 šeimos narys 6
2,3
2.4 NM_008827
PGF
placentos augimo veiksnys
2,3 pervežimas XM_893506 pervežimas Klk12
kalikreino susijusiomis peptidazės 12
2,3
NM_016887
Cldn7
Claudin 7
2,3
NM_029360
Tm4sf5
transmembranines 4 superšeimai narys 5 2.2
NM_172301
Ccnb1
cikloniniai B1
2,2
NM_010739
Muc13
mucino 13, epitelio transmembraninis
2.2 pervežimas NM_011165 pervežimas Prl4a1 pervežimas prolaktino šeimos 4 pošeimiui A, narys 1
2,2
NM_010162
EXT1
Exostoses (kartotinis) 1
2,2
NM_011704
Vnn1
Vanin 1
2,1
NM_011082
Pigr
polimerinės imunoglobulinas receptorių
2.1 pervežimas NM_007769 pervežimas Dmbt1 pervežimas Ištrinta piktybinių smegenų auglių 1
2,1
NM_022984
Retn
Resistin
2,1
NM_173037
Tmco 7 pervežimas transmembranines ir apvynioti-rite domeno 7
2,1
NM_009100
Rptn
Repetin
2,1
NM_007630
Ccnb2
cikloniniai B2
2,1
NM_001081060
Slc9a3
tirpinio vežėjas šeimos 9 (natrio vandenilio /šilumokaitis), narys 3
2,0
NM_146588
Olfr1030
Uoslės receptorių 1030
2,0
žemyn reguliuojamų genų
NM_008753
Oaz1
Ornithine dekarboksilazės antizyme 1
0,31
NM_027126
Hfe2
hemochromatosis 2 tipo (nepilnamečių) (žmogaus homologas)
0,33
NM_053206
Magee2
Melanomos antigenas, šeimos E 2
0,33
NM_010924
Nnmt
nikotinamido N- metiltransferazė
0,41
NM_026260
Tctn3
Tektonika šeimos narys 3
0,41
NM_181039
Lphn1
Latrophilin 1
0.43
NM_008312
Htr2c
5-hidroksitriptamino (serotonino) receptorių 2C
0.43
NM_146667
Olfr740
Uoslės receptorių 740
0,44
NM_007550
Blm
žydėti sindromas homologas (žmogaus)
0,44
NM_011243
RaRb
retino rūgšties receptorių, beta
0,44 pervežimas NM_184052 pervežimas IGF1
insuliną panašaus augimo faktoriaus 1
0,45
NM_013893
Reg3d
regeneruojama Islet gautas 3 Delta
0,46
NM_008645
Mug1
Murinoglobulin 1
0,46
NM_029550
Keg1
Inkstų išreiškė genų 1
0,46
NM_019388
CD86
CD86 antigeno
0,46 pervežimas NM_011316 pervežimas Saa4 pervežimas serumo amiloido A 4
0,47
NM_007811
Cyp26a1
citochromo P450 fermentų, šeima 26, pošeimiui A, polipeptidas 1
0,47
NM_011538
Tbx6
, T-6 langelis
0,48
NM_011086
Pip5k3
fosfatidil-3-fosfatinio /fosfatidil 5-kinazės, tipas III
0.48
NM_133723
Asph
Aspartate-beta-hydroxylase
0.48
NM_001081390
Palld
Palladin, Citoskeletas susijęs baltymas
0,48
NM_007858
Diap1
Ažūriniai homologas 1 (Drosophila)
0,48
NM_053271
Rims2
reguliavimas sinapsių membrana egzocitozės būdu 2
0,48
NM_153163
Cadps2
Ca2 + -dependent aktyvatorius baltymai sekrecijos 2
0,49
NM_007541
Bglap1
Kaulų gama carboxyglutamate baltymų 1
0,49
NM_031871
Ghdc
GH3 domeną, turintį
0,49 pervežimas NM_025545 pervežimas Aptx pervežimas Aprataxin pervežimas 0,49 pervežimas NM_177322 pervežimas Agtr1a pervežimas angiotenzino II receptorių, tipo 1a
0,49 pervežimas NM_026872
Ubap2
Ubikvitino susijęs baltymas 2
0,49
NM_028045
Erv3
endogeniniai retrovirusų seka 3
0,49
NM_011641
Trp63
transformacija susiję baltymai 63
0,49
3 pav Hierarchinis grupavimas analizė keturių eksperimentinių grupių MNU gydytų pelių. Expression duomenys 303 kvalifikuotų zondai (kairėje). Keturi eksperimentinės grupės buvo suskirstyti į dvi grupes (grupės A /C) ir (grupės B /D), remiantis panašumų išraiškos būdus. Kiekvienoje eilutėje yra zondą ir kiekvienas stulpelis reiškia eksperimentinę grupę (grupes A-D). Kaip parodyta spalvos juosta, žalia rodo iki reguliavimą; raudona rodo žemyn reguliavimą; ir juoda rodo jokių pokyčių. Trisdešimt vienas zondai sudaro keletą zondų klasteris iki reguliuojama tik D grupėje (dešinėje).
Visą rezultatus šio mikrogardeliq analizė buvo pateikta ir yra lengvai surandami iš viešos duomenų bazės NCBI genų ekspresijos Omnibus (GEO), kurio prisijungimas skaičius GSE29444 (imties numeris: GSM728857-60).
kiekybinis realaus laiko PGR analizė genų ekspresijos profilius mnu gydytų pele skrandžiai
Santykinis kiekybinė realaus laiko PGR analizė trijų pasirinktas aukštyn reguliuojamų genų (Cd177
, Reg3g
ir Muc13
) H. pylori
-infected ir aukštos druskos dieta gydytų pelių patvirtino padidintą išraišką Cd177
ir Reg3g
, kaip parodyta 2B pav, skirtingu mastu. Nors išraiška lygis Muc13
D grupėje buvo didesnis nei visų kitų grupių, nebuvo statistinis reikšmingumas tarp jų (p
= 0,0712 vs
C grupė).
Imunohistocheminiais išraišką CD177 į žmogaus išplitusiu skrandžio vėžiu ir koreliacija su klinikos veiksnių
dėl imunohistocheminio analize žmogaus skrandžio vėžio audiniuose, CD177 buvo pastebėta ne tik membranas ir cytoplasms iš infiltruotų neutrofilų, bet ir skrandžio vėžio ląstelių abiejų gerai ir blogai diferencijuotų adenokarcinomos ( 4A pav.) Vėžio ląstelės antspaudo žiedas ląstelių tipo (2 atvejai) buvo neigiami CD177. Tarp 55 skrandžio vėžio atvejų, vidutinio sunkumo stipri išraiška CD177 buvo pastebėtas 33 (60,0%) (4 lentelė). 4 pav imunohistocheminis už CD177 žmogaus išplitusiu skrandžio vėžiu ir koreliacijos su bendru išgyvenamumas. A: Imunohistocheminis analizė CD177 išraiška žmogaus skrandžio vėžio audinyje. (A ir b) Neigiamas dažymo (nė vienas silpnas) už CD177 į skrandžio adenokarcinoma. CD177 išraiška būna tik infiltrating neutrofilų o neoplastines ląsteles gerai diferencijuota (a) arba prastai diferencijuota (b) karcinoma yra neigiamas. Originalus priartinimas, x 100 (intarpo, × 400). (C ir d) Pastaba teigiamas (nuo vidutinio iki stipraus) išraiškos CD177 į gerai diferencijuota (C) arba blogai diferencijuotų (d) skrandžio vėžio ląsteles. Originalus priartinimas, x 100 (intarpo, × 400). B. Palyginimas Kaplan-Meier išgyvenimo sukauptas kreivių už CD177 teigiamų ir neigiamų skrandžio vėžio atvejų
4 lentelė CD177 išraiška skrandžio karcinoma ir jo koreliacija su klinikos veiksnių
byloje Nr
. CD177 Over-expression

Pvalue‡

Positive

Negative

Strong

Moderate

Weak

None

Gastric adenokarcinomos
55
18
15
17
5
Amžius
metai (priemonė ± SN)
55,3 ± 10,4
60,2 ± 8,13
59,8 ± 11,0
60,4 ± 13,0
0.5039
histologinis klasifikaciją
Na /vidutiniškai diferencijuota tipą *
21
6
9
4
2
0,1904
blogai diferencijuoti /Signet žiedas ląstelių tipas **
34
12
6
13 3
Gylis invazijos †
T1-3
27 10
10
2
0.2011 pervežimas T4
26
11
5
7
3
limfos pervežimas 5 pervežimas mazgas metastazės
N0
6 1
2
2
1
0,7869
N1-3
49
17
13
15
4
* Lauren anketa žarnyno tipas ** Lauren anketa difuzinis tipas, † skaičius buvo sumažintas iki penkiasdešimt trys, nes invazijos gylis nebuvo priskiriami dviem atvejais ‡ ANOVA ir Chi kvadrato testas buvo atliekamas pagal amžių ir kitus veiksnius, atitinkamai.
sekami pacientų svyravo nuo 9 iki 606 savaičių (mediana = 83 savaičių). Penkerių metų išgyvenamumas dėl CD177-teigiamas ir neigiamas buvo 39,4% ir 18,2%, atitinkamai. Nuo Kaplan-Meier išgyvenamumo kreivės analizę, CD177 teigiamas išraiška buvo susijęs su geresniu bendro išgyvenamumo (P
= 0.0294, log-rank testas) (4B pav.) Nebuvo statistiškai reikšminga koreliacija iš CD177 išraiškos su amžiumi, histologinio klasifikavimo, gylis invazijos, ir limfmazgių metastazių (4 lentelė).
Dispersinės analizės dėl bendro išgyvenamumo žmogaus skrandžio vėžio atvejų pervežimas Naudojant Cox proporcinės rizikos modelį , daugiamatis analizė klinikos kintamųjų, įskaitant paciento amžių, naviko histologinio klasifikavimo, invazijos gylis, limfmazgių metastazių ir CD177 išraiškos (5 lentelė), paaiškėjo paskutinis būti nepriklausoma veiksnys bendram išgyvenamumui (p
= 0,0323) , Visi autoriai skaityti ir patvirtino galutinį rankraštį.

• Kurkuminas pagerina išraišką SCF /c-KIT per lengvinančių oksidacinį stresą ir NF-κB aktyvacijos skrandžio audinių diabetinės gastroparezę rats
• Mityba trūkumas didina skrandžio vėžio riziką mortality