PLoS ONE: Kohonneet Interleukiini-32 ilmentyminen liittyy Helicobacter pylori-Related gastriitti

tiivistelmä

Background

interleukiini-32 (IL-32) on äskettäin löydetty tulehdusta edistävä sytokiini osallistuu tulehdussairaudet. Olemme tutkineet IL-32 ja sen sääntelyn mekanismi tulehdusreaktio sairastavien potilaiden Helicobacter pylori
( H. Pylori
) infektio.

Suunnittelu ja menetelmät

IL-32-mRNA ja proteiinin ilmentyminen mahalaukun kudoksissa havaittiin kvantitatiivisen reaaliaikaisen PCR ja immunohistokemia. Sääntely IL-32 ihmisen mahalaukun epiteeli solulinjaa AGS tutkittiin eri sytokiinien stimulaation ja eri H. pylori
rasitusta infektio.

Tulokset

Mahalaukun IL-32-mRNA ja proteiinin ilmentyminen olivat koholla potilailla, joilla H. pylori
infektio ja korreloi positiivisesti gastriitti. Vuonna H. pylori
infektoiduista potilaista, mRNA tasolla IL-32 korreloi myös, että proinflammatoristen sytokiinien IL-1β: n ja TNF-α. In vitro
IL-1β ja TNF-α voisi upregulate IL-32-mRNA ja proteiini tasolla AGS soluissa, joka oli riippuvainen NF-KB signaalireitin. Sääntely IL-32 ilmentyminen vasteena H. pylori
infektion voisi haitata käyttämällä neutraloivat vasta-aineet estävät IL-1β ja TNF-α. Lisäksi H. pylori
infektoiduista AGS soluissa indusoi myös IL-32-mRNA ja proteiinin ilmentyminen, joka oli riippuvainen CagA.

Johtopäätökset

IL-32 taso on kohonnut potilailla, joilla H . pylori
infektio ja sen ilmentymistä säädellään proinflammatoristen ärsykkeitä, mikä viittaa siihen, että IL-32 voi olla rooli patogeneesissä H. pylori
-aiheiset gastriitti.

Citation: Peng L-s, Zhuang Y, Li W-h, Zhou Y-y, Wang T-t, Chen N, et al. (2014) Kohonnut interleukiini-32 ilmentyminen liittyy Helicobacter pylori
liittyviä gastriitti. PLoS ONE 9 (3): e88270. doi: 10,1371 /journal.pone.0088270

Editor: Ivo G. Boneca, Institut Pasteur Pariisi, Ranska

vastaanotettu: 24 elokuu 2013; Hyväksytty: 8. tammikuuta 2014; Julkaistu: 14 maaliskuu 2014

Copyright: © 2014 Peng et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustusta lääketieteen Nuorten koulutus Project Kiinan kansan vapautusarmeija (13QNP108) ja National Basic Research Program of China (973 Program, No. 2009CB522606). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Helicobacter pylori
( H. pylori
) on gram-negatiivinen, mikroaerofiilisessä bakteeri, joka colonizes mahassa noin 50% väestöstä maailmanlaajuisesti. Jatkuvat infektio H. pylori
aiheuttaa kroonisen ja pysyviä gastriitti ja lisää riskiä mahahaavan ja mahasyövän.

H. pylori
infektoiduista mahalaukun limakalvo on ominaista immuunisolujen soluttautumista ja tulehduksellisten tekijöiden. Th1 ja Th2-vasteen raportoidaan välittävän immuunivastetta H. pylori
, ja Th1 vasteen uskotaan olevan vallitseva [1]. Silloin induktio Th17 vasteen H. pylori
infektoiduista vatsa on vahvistettu [2]. Sitä paitsi Th1, Th2 ja Th17 soluja, säätelijä-T-solujen (Tregs) on myös tärkeä rooli H. pylori
-aiheiset gastriitti [3]. Samaan aikaan, proinflammtory sytokiinit, kuten IL-1β: n, TNF-α: n ja IL-6 on myös osoitettu olevan koholla H. pylori
infektoiduista vatsa [4], ja nämä sytokiinit voivat vaikuttaa T-solujen immuunivasteen tulehdussairauksiin viittaa siihen, että tulehduksellinen tekijät voivat olla ratkaiseva H. pylori
-aiheiset mahalaukun tulehdus. Kuitenkin tarkka mekanismi prosessi ei ole täysin selvitetty.

IL-32 on juuri tunnistettuja proinflammatoristen tuottamaa sytokiinia immuunisolujen (NK-solut, T-solut, monosyytit) ja ei-immuunisolujen (endoteelisolujen epiteelisolut) [5] - [7]. Se oli alun perin kloonattiin geeni aiheuttama IL-2 ja nimeltään NK-4, mutta sen toiminta oli tuntematon vuoteen 2005 [5], [8]. On kuusi silmukointivarianteista lukien IL-32α, β, γ, δ, ε, ja ζ, ja erilaisia ​​rooleja ovat potentiaalisesti pelataan sen eri isoformit. Kuitenkin, tietyn reseptorin IL-32 ei ole vielä löydetty, mutta neutrofiilien proteinaasi 3 sitoutuu IL-32, jolla on suuri affiniteetti [9]. IL-32 on tärkeä rooli erilaisissa tulehdussairauksissa ja sen ilmentyminen on osoitettu korreloivan vakavuuden tautien nivelreuman, Crohnin taudin ja atooppinen dermatiitti [10] - [12]. Lisäksi IL-32 oli hiljaista joissakin tartuntatautien kuten H. pylori
infektion [13] - [16]. Kuitenkin yhdistyksen välillä IL-32 ilmentyminen ja H. pylori
indusoimaan gastriitti ja sen tarkka sääntely mekanismi kuten onko auto- /parakriininen vaikutuksia IL-32 voi olla mukana prosessissa oli eivät ole tiedossa.

Tässä tutkimuksessa olemme havainneet IL -32 ilmentyminen biopsianäytteistä sairastavien potilaiden H. pylori
infektio ja analysoidaan suhdetta mahan IL-32 tason ja vakavuus limakalvon tulehdus. Myöhemmin selvitimme vaikutus proinflammatoristen ärsykkeiden ja H. pylori
tartunnan IL-32 ilmentyminen ihmisen mahalaukun epiteelin solulinjoissa. Tulokset osoittavat, että IL-32 voi olla mukana patogeneesiin H. pylori
-aiheiset gastriitti.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Ihmisen mahalaukun limakalvon koepaloja kerättiin rutiini tähystys on Xinqiao sairaalan kolmannen Military Medical University . Veri saatiin samasta aiheesta, joille tehtiin tähystys varten H. pylori
serologisissa testeissä. Tutkimuksen hyväksyi eettisen komitean Xinqiao Hospital, kolmas Military Medical University. Kirjallinen suostumus saatiin kultakin kohteelta.

Oppiaineet

Mahalaukun kudokset ja veri kerättiin 54 potilasta (mies /nainen = 27/27; keski-ikä 47 ± 1,2 vuotta) H. pylori
infektio joille tehtiin tähystys on Xinqiao sairaalan kolmannen Military Medical University. H. pylori
infektio vahvistettiin nopean ureaasi testi, serologia testi, ^{13C-ureahengitystesti ja histologia. Potilaat luokiteltiin H. pylori
positiivinen, jos kaksi neljästä testit olivat positiivisia. Normaali mahalaukun kudoksia 47 koehenkilöä (mies /nainen = 23/24; keski-ikä 47 ± 1,3 vuotta), joilla oli negatiiviset tulokset kaikissa neljässä testien otettiin kontrolleiksi.}

kudosnäytteistä ja histologia Assessment

Biopsianäytteet otettiin aiheista jokaisessa tähystykseen. Yksi on jäädytettiin välittömästi nestemäisessä typessä ja säilytettiin -80 ° C: ssa RNA: n uutto. Loput koepalanäytteistä kiinnitettiin formaliiniin ja upotettiin parafiiniin. Hematoksyliini-eosiini (H &E) värjätyt leikkeet tutkittiin kaksi kokenutta histopathologist. Histologinen vakavuus gastriitti luokiteltiin normaalista vaikeaan perustuu tiheys soluttautua mononukleaaristen ja liuskatumaisten solujen vakiintuneita kriteereitä [17], [18].

Cell Culture

Mahalaukun epiteelin line AGS (ATCC, American Type Culture Collection), viljeltiin 37 ° C: ssa ja 5% CO _{2 Hamin F12 (Hyclone, Logan, UT, USA), joka sisälsi 10% vasikan sikiön seerumia (FCS). AGS Solut ympättiin kuudella-kuoppalevyille tiheyteen 1 x 10 ^{6 solua /kuoppa ja niitä stimuloitiin 10 ng /ml TNF-α ja /tai 10 ng /ml IL-1β (PeproTech, Rocky Hill, NJ , YHDYSVALLAT); solut kerättiin ilmoitetuilla aikoina analysointiin IL-32-mRNA ja proteiinin ilmentymisen. Sillä signaalireitin inhibitioanalyysi, NF-KB-estäjä (BAY 11-7082), MEK1 /2-estäjä (U0126), p38 /MAPK-estäjä (SB203580), JNK estäjä (SP600125), JAK -estäjä I (kaikki 10 uM ja kaikki Calbiochem, San Diego, CA, USA), tai ajoneuvon DMSO: ta (Sigma, Saint Louis, MO, USA) lisättiin soluviljelmään 1 tunti ennen sytokiini stimulaatiota.}}

infektio AGS Solut, joissa H. pylori

H. pylori
11637 -kannan ja sen isogeenisistä CagA-negatiivinen mutanttikanta (CagA ^{- kanta) kasvatettiin brain-heart infusion, jotka sisälsivät 10% kaniinin verta 37 ° C: ssa mikroaerofiilisissä olosuhteissa (5% O _{2 , 10% CO 2, 85% N 2). H. pylori
pestiin pois viljelymaljoille PBS: llä ja sentrifugoitiin nopeudella 2500 x g 5 minuutin ajan, ennen kuin se suspensoitiin uudelleen PBS: ssä optisen tiheyden kvantifiointi 600 nm: ssä (1 OD 600 = 1 x 10 9 H. pylori Twitter /ml). Infektiokertoimella (MOI) 1, 10, ja 100 on käytetty infektoimaan AGS-soluja. Neutralointia varten määrityksiä, neutraloivia vasta-aineita TNF-α (nTNF-α, 1 ug /ml, Biolegend) tai IL-1β (NIL-1β, 1 ug /ml, eBioscience) lisättiin on yhteisviljelmä järjestelmässä.}}

RNA: n eristäminen ja kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR

RNA uutettiin kudosnäytteistä tai soluja TRIzolia reagent® (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ja käänteiskopioitiin cDNA käyttämällä ReverTra Ace (TOYOBO, Osaka, Japani). Kvantitatiivisen tosiaikaisen PCR suorittaman iQ5 Detection System (Bio-Rad, USA). PCR-alukkeet suunniteltiin ylittää eksonin intronin rajan ja jota käytetään havaitsemaan mRNA: n IL-32, TNF-α, IL-1β ja β-aktiini ja niiden sekvenssit ovat seuraavat: IL-32, eteenpäin, 5 ' -ACGACTTCAAAGAGGGCTACC-3 '; käänteinen, 5'-GCCTCGGCACCGTAATCCAT-3 '; TNF-α, eteenpäin, 5'-TCTCTAATCAGCCCTCTGGC-3 '; käänteinen, 5'-ATGAGGTACAGGCCCTCTGA-3 '; IL-1β, eteenpäin, 5'-GTTCTTTGAAGCTGATGGCC-3 '; käänteinen, 5'-GTGGTCGGAGATTCGTAGCT-3 '; β-aktiini, eteenpäin, 5'-TTCCTTCCTGGGCATGGAGTCC-3 '; käänteinen, 5'-TGGCGTACAGGTCTTTGCGG-3 '. β-aktiini on käytetty sisäisenä kontrollina. Suhteellinen geenien ilmentyminen laskettiin kertainen muutos mukaan ΔΔCt menetelmällä.

immunohistokemia

Neljäkymmentä parafinoidut näytteet leikattiin 5-um: n leikkeitä. Kun se on parafiini ja sammutettua, osat sitraattipuskurissa (pH = 6,0), tehtiin lämmön aiheuttamalle antigeenin haku mikroaaltouunissa ja käsiteltiin 3% vetyperoksidilla. Inkuboinnin jälkeen kanin anti-ihmis-IL-32 (Abcam, MA, USA) yli yön 4 ° C: ssa, Objektilasit käsiteltiin piparjuuriperoksidaasi-konjugoidulla sekundaarisella anti-kani-vasta-ainetta (Zhongshan Golden Bridge Biotech., Peking, Kiina) ja sen jälkeen substraattia 3,3'-diaminobentsidiinitetrahydrokloridilla (DAB). Isotyyppiä vasta-ainetta käytettiin negatiivisena kontrollina. Kuvat otettiin mikroskoopin varustettu digitaalikameralla Nikon Eclipse 80i (Tokio, Japani). Semi-kvantitatiivinen analyysi Immunohistokemian kussakin jaksossa valittiin arvioimiseksi IL-32 immunovärjääminen mahalaukun kudosten ja luokiteltiin seuraavasti: pisteet 0, ei ilmaisu; pisteet 1, alhainen ilmaisu; pisteet 2, väli- ilmaisu; Pisteet: 3, korkean ilmentymisen.

Western Blot

Solut pestiin jääkylmällä PBS: llä ja sitten hajotettiin hajotuspuskuriin (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 1 mM EDTA: ta, 1 mM EGTA, 1% Triton X-100, 2,5 mM natriumpyrofosfaatti, 1 mM glyserofosfaatti, 1 mM Na3VO4, 1 ug /ml leupeptiiniä ja proteaasi-inhibiittori). Proteiinipitoisuus mitattiin BCA-proteiinin määrityskittiä (Boster, Wuhan, Kiina). Solulysaatit erotettiin 12% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin polyvinylideenidifluoridi kalvo. Membraanit blokattiin 1 tunnin ajan 3% naudan seerumin albumiinia Tris-puskuroitu suolaliuos-Tween huoneenlämpötilassa ja inkuboitiin sitten yön yli 4 ° C: ssa kaniinin anti-ihmisen IL-32 (Abcam, MA, USA) tai hiiren anti- ihmisen β-aktiini ((Tianjin Sungene Biotech Co., Ltd, Kiina). Piparjuuriperoksidaasi-konjugoitua sekundaarista vasta-ainetta käytettiin mukaisesti valmistajan instructures. Kiinnostuksen kohteena olevia proteiineja visualisoitiin käyttämällä Supersignal® West Dura Kesto alustan reagenssia (Thermo, IL , USA).

tilastollinen analyysi

Kaikki tulokset yhteenvetona keskiarvona ± keskivirhe keskiarvon (SEM), ja tilastollinen analyysi suoritettiin käyttämällä GraphPad Prism 5.0 Software. erot kahden ryhmiä analysoitiin U-testi ja useita ryhmiä analysoitiin yksisuuntainen varianssianalyysi (ANOVA). Kun vaihtelut havaittiin, Spearmanin korrelaatio käytettiin arvioimaan määrin yhdistyksen välillä muuttujien. P < 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

tulokset

Kohonneita IL-32-mRNA-taso havaittu potilailla, joilla on H. pylori
Infektio

tutkimiseksi, onko IL-32 on mukana patogeneesiin H. pylori
aiheuttama gastriitti, ensin määritetään IL-32 mRNA: n ekspression mahalaukun koepala yksilöitä aiheista ja ilman H. pylori
infektio. Kuten on esitetty kuviossa. 1A, IL-32: n ilmentyminen oli merkitsevästi korkeampi H. pylori
positiivisia näytteitä kuin että H. pylori
-negatiivinen näytteet (P < 0,001). Sen arvioimiseksi, onko IL-32 liittyi aste tulehduksen H. pylori
infektoiduista mahalaukun näytteitä, jaoimme näytteet normaaliin ja lievä, keskivaikea ja vaikea gastriitti ryhmät perustuvat histologia arviointiin kuvatulla Materiaalit ja menetelmät. Tulokset osoittivat, että IL-32-mRNA: n tasot H. pylori
positiivisia näytteitä korreloi positiivisesti aste mahalaukun tulehdus (Fig. 1 B). Lisäksi taso IL-32-mRNA oli myös positiivinen korrelaatio TNF-α ja IL-1β mRNA tasolla (Kuva. 1 C).

Lisääntynyt IL-32 Protein Expression potilailla, joilla on H. pylori
Infektio

visualisoimiseksi IL-32 ilmentyminen mahalaukun biopsianäytteistä, immunohistokemiallisella värjäyksellä IL-32 suoritettiin parafiiniin upotetut kudokset. Kuten on esitetty kuviossa. 2B, muutamia IL-32-tuottavia soluja havaittiin H. pylori
-negatiivinen mahan kudoksissa, kun taas H. pylori
positiivisia mahan kudoksissa, havaitsimme, että IL-32-proteiinin ilmentyminen lisääntyi merkittävästi (Fig. 2C). Lisäksi, semi-kvantitatiivinen arviointi IL-32 immunoreaktiivisuus vahvisti, että IL-32 mahalaukun kudoksissa H. pylori
infektoiduista potilaille proteiinin taso oli myös merkitsevästi lisääntynyt verrattuna kuin H. pylori
-negatiivinen mahan kudoksissa ja lievä gastriitti.

IL-32-mRNA ja proteiini taso oli voimistuvan TNF-α ja IL-1β

Koska olemme löytäneet positiivinen suhde IL -32 mRNA-tasoja ja aste mahalaukun tulehdus mahalaukun kudoksissa ja korrelaatio IL-32-mRNA ja IL-1β ja TNF-α-mRNA: t, sääntelyä proinflammatoristen sytokiinien IL-32-mRNA tutkittiin AGS soluissa. Kuten on esitetty kuviossa. 3A, sen jälkeen kun on käsitelty sytokiinien 24 tuntia, IL-32-mRNA: n taso oli merkittävästi voimistunut: 5,0 ± 0,5-kertaisesti TNF-α, 6,9 ± 0,5-kertaisesti IL-1β, ja 11,2 ± 1,4-kertaisesti IL-1β ja TNF-α. Tämä vaikutus oli täysin riippuvainen NF-KB signalointireitin esikäsittelynä NF-KB estäjä BAY 11-7082, mutta ei JNK, p38 /MAPK, MEK1 /2 tai JAK /STAT signalointi inhibiittorit estivät induktio IL-32-mRNA stimulaation jälkeen TNF-α: n tai IL-1β (Fig. 3C). Lisäksi Western blot vahvisti, että IL-32-proteiinin taso indusoi myös TNF-α ja /tai IL-1β stimulaation, joka riippui NF-KB-signalointireitin (Fig. 3B ja D). Me seuraavaksi tutkitaan, TNF-α tai IL-1β oli mukana H. pylori
indusoima ylössäätely IL-32 ilmentyminen. AGS solut infektoitiin H. pylori
ja samanaikaisesti käsiteltiin neutraloivat vasta-aineet estävät TNF-α: n tai IL-1β. Kuten on esitetty kuviossa. 3E, H
. pylori
indusoimaan IL-32-proteiinin ilmentyminen väheni huomattavasti käyttämällä osoitti sytokiinien-estäviä vasta-aineita.

H. pylori
indusoimaan IL-32 Expression

lisätutkimuksia välitön vaikutus H. pylori
on IL-32 mahalaukun epiteelisolujen, AGS solut infektoitiin H. pylori
MOI 1, 10, ja 100. Kuten kuviossa. 4A ja B, IL-32-mRNA ja proteiini kohoamiseen jälkeen H. pylori
infektion annoksesta riippuvalla tavalla. Seuraavaksi me analysoi, H. pylori
rasitusta eroja edistäisi eri IL-32. Solut infektoitiin H. pylori 11637
rasitusta ja CagA ^{- rasitusta. Vaikka CagA - kanta infektio hieman lisäsi IL-32 AGS soluissa induktio IL-32-mRNA ja proteiini tasolla CagA - kanta infektio oli huomattavasti alhaisempi kuin niiden, H. pylori 11637
kannan infektio (Fig. 4C ja D).}

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että mahalaukun IL-32 oli merkittävästi kohonnut potilailla, joilla H . pylori
infektio sekä mRNA ja proteiini tasoilla. Lisääntynyt IL-32 mRNA-tasolla korreloi vakavuuden mahalaukun tulehdus. Lisäksi, IL-32-mRNA: n tasot olivat myös korreloivat TNF-α: n ja IL-1β-mRNA-tasoja on H. pylori
positiivinen mahalaukun kudosnäytteistä, ja jompikumpi sytokiinien voisi upregulate IL-32-mRNA ja proteiini tasolla. Lisäksi olemme havainneet, että H. pylori
infektio mahalaukun epiteelisolujen linjojen indusoi myös IL-32-mRNA ja proteiinin ilmentymisen. Nämä tulokset osoittavat, että IL-32 todennäköisesti osallistuu mahalaukun tulehdusta sairastavien potilaiden H. pylori
infektio.

IL-32 on hiljattain kuvattu proinflammtory liittyvä tekijä monissa tulehdussairauksissa, kuten sivuontelontulehduksille, ehto enimmäkseen aiheuttama grampositiiviset bakteerit infektion [19], [20]. Kohonnut IL-32 oli sitten raportoitu HCV ja HBV-tartunnan maksan ja korreloivan vakavuuden maksan tulehdusta ja maksafibroosi [15], [21]. Tässä tutkimuksessa osoitimme, että IL-32 mRNA-tasolla oli merkittävästi kohonnut potilailla, joilla H. pylori
infektio, ja korkea korrelaatio IL-32-mRNA ja mahalaukun tulehdusta havaittiin myös, mikä viittaa siihen, että IL-32 voi olla tärkeä rooli H. pylori
tartunnan vatsaan. Lisäksi, immunohistokemia käytetään havaitsemaan lähteen IL-32, ja tulokset osoittivat, että IL-32 on ilmaistu mahalaukun epiteelisoluissa ja sen erittäin ilmentymistä havaittiin H. pylori
positiivinen mahalaukun kudoksiin. Koska IL-32: n havaittiin indusoivan IL-8 mahalaukun epiteelisolujen ja esti proangiogeeninen tekijä VEGF eritystä keuhkoputken epiteelisolujen [16], [22], ja meillä on myös havaittu IL-32-mRNA: n taso korreloi positiivisesti IL-8 ilmentyminen (dataa ei esitetty). On kohtuullista, että IL-32 vaikuttaa toiminta mahalaukun epiteelisolujen H. pylori
tartunnan vatsaan.

Klassinen mahalaukun tulehdus H. pylori
infektio voi vaikuttaa soluttautua immuunisolujen ja tulehduksellisten sytokiinien, myöhemmin voi sisältää äskettäin löydetty IL-32 [19] - [22]. Tutkimuksessamme havaitsimme, että in vitro TNF-α ja /tai IL-1β stimuloitujen AGS solujen upregulate IL-32-mRNA ja proteiinin ilmentyminen, jotka tukivat positiivinen suhde IL-32 ja TNF-α ja IL-1β in vivo . Kuitenkin, Th17 sytokiini (IL-17A, IL-17F: ksi, IL-6), Th2 sytokiini IL-4, Tregs sytokiinin TGF-β1 ja Th1 sytokiini IFN-y: kaikki ei onnistunut indusoimaan IL-32-mRNA: n ja proteiinin ilmentymistä järjestelmä, vaikka kaikki asiaankuuluvat immuunijärjestelmän solutyyppejä ja sytokiinien ilmoitettiin tunkeutua H. pylori
tartunnan mahaan (katso kuva S1). Nämä tulokset viittaavat siihen, että IL-32 on todennäköisesti tuotettu ennen infiltraatiota näiden solujen, joka tukee raportissa, että IL-32 indusoi dendriittisolujen kypsymistä ja edistää Th1 ja Th17 polarisaatio [23]. Lisäksi induktio IL-32-mRNA: n ja proteiinin TNF-α: n tai IL-1β esti NF-KB: n estäjä BY 11-7082, mikä osoittaa, että molekyyli mekanismin taustalla tämä prosessi on todennäköisesti NF-KB riippuvainen. Mielenkiintoista, käyttämällä neutraloivat vasta-aineet estämään TNF-α tai IL-1β rinnakkain H. pylori
infektio, havaitsimme, että IL-32-proteiinin taso oli merkittävästi vähentynyt. Siksi meidän tulokset osoittivat, että epiteelin sytokiinien (TNF-α ja IL-1β) vastaus H. pylori
infektio olivat tärkeitä sääntelyn IL-32 ilmentyminen.

Tulokset osoittivat myös, että IL-32-mRNA ja proteiini taso korotettiin annoksesta riippuvalla tavalla seuraavat H. pylori
infektio, mikä viittaa siihen, että vaikutus H. pylori
tartunnan IL32 ilme on suoraan fysiologinen. Lisäksi CagA mutaatiot H. pylori
voisi merkittävästi heikentää IL-32 AGS soluissa, mikä osoittaa, että H. pylori
indusoimaan IL-32 säätelyä oli riippuvainen CagA. H. pylori
ilmaista monien proteiinien helpottaa sen synnyssä [24]. UreB on myös tärkeä virulenssi proteiinia asuttaminen H. pylori
ja välittämän H. pylori
indusoima toimintahäiriö mahalaukun este [25], [26]. Huomasimme, että UreB mutaatiot myös heikennettyjä H. pylori
indusoimaan IL-32 mRNA ilmaisu (katso kuva S2). Siksi IL-32 ilmentyminen oli pääasiassa säätelee translokaatio CagA osaksi epiteelisolujen ja muut virulenssi proteiinit saattavat myös vaikuttaa patogeeninen reaktio H. pylori
mahahapon epiteelisoluihin.

Yhteenvetona tietomme osoittivat, että IL-32 ilmentyminen oli kohonnut potilailla, joilla H. pylori
infektio ja korreloi vakavuuden mahalaukun tulehdus. Sääntely IL-32 ilmentyminen vasteena H. pylori
infektio riippuu eri eri tekijöistä. Nämä tiedot yhdessä viittaavat siihen, että IL-32 voi olla tärkeä rooli patogeneesissä gastriitti aiheuttamien H. pylori
infektio.

tukeminen Information
Kuva S1.
AGS-soluja siirrostettiin kuusi-kuoppalevyille tiheyteen 1 x 10 ^{6 solua /kuoppa ja niitä stimuloitiin 10 ng /ml Th17 sytokiinin (IL-17A, IL-17F: ksi, IL-6), Th2 sytokiinin IL-4, Tregs sytokiinin TGF-β1 ja Th1 sytokiinin IFN-γ: ssa 24 tuntia, ja solut kerättiin analyysiä varten IL-32-mRNA: n ja proteiinin ilmentyminen. Tiedot ovat keskiarvo ± SEM kolmesta erillisestä kokeesta ja yksi edustaja blotti on esitetty.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0088270.s001
(TIF) B Kuva S2.
H. pylori
kannan 26695 kasvatettiin Brain Heart-infuusio, jotka sisälsivät 10% kaniinin verta 37 ° C: ssa mikroaerofiilisissä olosuhteissa (5% O _{2, 10% CO 2, 85% N 2 ), ja sen isogeenisistä ureaasi alayksikköä B-negatiivinen mutanttikanta (UreB - kanta) saatiin ennen kuvattu [27]. Infektiokertoimella (MOI) 100 käytettiin infektoimaan AGS ja GES-1-soluissa. Solut kerättiin analyysiä varten IL-32 mRNA ilmaisu. Tiedot ovat keskiarvo ± SEM kolmesta erillisestä kokeesta. * P
< 0,05; ** P
< 0,01; *** P
< 0,001.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0088270.s002
(TIF) B}}

• PLoS ONE: atrofinen gastriitti: Vastaava Factor Osteoporoosi Vanhukset Women
• Plos Pathogens: Caveolin-1 suojaa B6129 Hiiret Helicobacter pylori Gastritis