Plasman mRNA ekspressiotasot BRCA1 ja TS mahdollisina ennustavan biomarkkereita kemoterapiaa mahalaukun cancer

plasmassa mRNA ekspressiotasot BRCA1 ja TS mahdollisina ennustavan biomarkkereita kemoterapiaa mahasyövän
Abstract
Tavoite
Henkilökohtainen kemoterapia perustuu ennakoivaan biomarkkerit voivat maksimoida tehokkuus. Kuitenkin kasvainkudoksen saatu aikaan alustavan diagnoosin ei heijasta geneettisiä muutoksia havaittiin aikaan taudin etenemistä. Olemme tutki plasman mRNA voi olla korvike kasvainten tasoilla ennustamisessa kemosensitiivisyys. Tool Menetelmät
150 mahasyöpäpotilaista, mRNA tasot BRCA1 ja TS arvioitiin plasman ja pariksi kasvainkudoksen. Mann-Whitneyn U-testiä käytettiin vertaamaan mRNA: n ekspression tasojen kasvaimen näytteiden, joilla in vitro
herkkyys tai resistenssi doketakselin ja pemetreksedin. Kaikki tilastolliset testit olivat kaksipuolisia.
Tulokset
oli merkittäviä korrelaatioita plasman ja kasvaimen mRNA tasot BRCA1 (rho = 0,696, P < 0,001) ja TS (rho = 0,620, P < 0,001). BRCA1 plasmassa (dosetakseli-herkkä: 1,25; dosetakselia kestävä: 0,50, P
< 0,001) ja kasvaimen (dosetakseli-herkkä: 8.81; dosetakselia kestävä: 4,88, P
< 0,001) olivat positiivisesti liittyvä doketakselin herkkyys. TS plasmassa (pemetreksediä herkkien: 0,90; pemetreksedin kestävä: 1,82, P
< 0,001) ja kasvaimen (pemetreksediin herkkien: 6,56; pemetreksedin kestävä: 16.69, P
< 0,001) olivat negatiivisesti liittyvä pemetreksedin herkkyys.
Johtopäätökset
Plasma mRNA ekspressiotasot peilaavat kuin kasvain ja voi olla lupaava tehtävä potentiaalisina ennustavan biomarkkereita kemoterapiaa.
avainsanat
Plasma mRNA Mahasyöpää Kemosensitiivisyys Ennakoiva biomarkkereiden HDRA Johdanto
standardi ensilinjan kemoterapian paikallisesti levinneen tai metastaattisen mahasyöpä on sisplatiinin tai oksaliplatiini yhdessä muiden lääkkeiden, kuten doketakselin ja pemetreksedi [1], [2]. Kuitenkin eloonjäämismediaani edelleen niukka - noin vuoden. Ei Vakiolähestymistapa toisen linjan hoito on olemassa, vaikka doketakselin on osoittanut jonkin verran toimintaa [3]. Henkilökohtainen kemoterapia perustuu mRNA ilmaisun ennustavien biomarkkereiden voisi auttaa maksimoimaan hoidon tehokkuuden ja pidentää elinaikaa näillä potilailla [3] - [8].
Rintasyöpä alttius geeni 1 (BRCA1), olennainen osa useita DNA-vaurioiden korjaus reittejä ja reittejä mukana soluvasteiden mikrotubulusten vahinkoa, katsotaan olevan ero modulaattori selviytymisen sisplatiinin ja taksaanien. Prekliiniset ja kliiniset tutkimukset ovat raportoineet, että BRCA1 taso kasvaimen liittyy sisplatiinin ja taksaanien kemosensitiivisyys. Kasvaimen korkea ilmentyminen BRCA1 on 800-to-yli 1000-kertaisesti herkkä dosetakselia, mutta 10-1000-kertaisesti resistentti sisplatiinia [4]. Olemme aiemmin havaittu, että BRCA1 mRNA tasot effusions olivat negatiivisesti yhteydessä platinaa herkkyys mutta positiivisessa yhteydessä doketakselin herkkyyttä mahasyöpäpotilaista [5]. Näitä havaintoja validoitu mahalaukun saavilla potilailla toisen linjan dosetakseli: Keskimääräinen elinaika oli 9,5 kuukautta heikosti BRCA1 tasojen primäärikasvain, 19,1 niillä, joilla välitasojen, ja 25,8 kuukautta niissä, joilla on korkea (P
= 0,006 ) [3]. Pemetreksedi on uudenlainen vesiliukoisia kinatsoliini folaatin analoginen, toimii suoran ja konkreettisen tymidylaattisynteesin (TS) estäjä. Alhainen ilmentyminen tymidylaattisynteesin (TS) on raportoitu liittyvän vasteen pemetreksedille perustuva hoito keuhkosyövän [7], [8].
Tuumorikudos on merkittävä lähde biomarker tutkimus tällä hetkellä. Kuitenkin, tuumorikudos voidaan joskus olla riittämätön geeniekspressioanalyysiä varten. Lisäksi tuumorikudoksessa on saatu aikaan alkuperäisen diagnoosin ei välttämättä heijasta geneettisiä muutoksia havaittiin aikaan sairauden etenemisen [9], koska metastaattisen ja primaareja kasvaimia samasta potilaasta voi vaihdella genomista, epigeneettinen ja transcriptomic tasolla [9] - [ ,,,0],13]. Lisäksi alustava kemoterapia voi itse muuttaa geenin ekspressiotasot [14], [15]. Kiertävä kasvain solutonta nukleiinihappojen voisi siis olla hyödyllinen, ei-invasiivisia työkalu seuranta muutosten aikana hoidon [10], ettei enää tarvetta uudelleen biopsia aikaan määritettäessä paras hoito. Lisäksi, se voi olla hyödyllinen korvike, kun vain pieni määrä tuumori-kudos on saatavilla. Meidän aiempi kokemus keuhkosyöpä osoittaneet, että epidermaalisen kasvutekijän reseptorin (EGFR) mutaatiot seerumin voisi olla hyvä ennustavan merkkiaine keuhkosyöpään potilailla, EGFR-tyrosiinikinaasi-inhibiittorit [16]. Lisäksi plasman TS mRNA voidaan havaita ei-invasiivisesti veren ennen leikkausta ja ekspressiotaso plasman TS oli suuri potentiaali ennustavan biomarkkereita raltitreksedi herkkyyttä mahasyövässä [17]. Tähän mennessä on kuitenkin tiedetään vain vähän mahdollisesta käytöstä plasman mRNA ennustamiseen kemosensitiivisyys doketakselin ja pemetreksediä. Lisäksi, vaikka RNA vapautuu verenkiertoon on stabiili [10], [18], jossa on tällä hetkellä käytettävissä olevia menetelmiä, vain pieni määrä mRNA voidaan saada plasmasta tai seerumista, joka rajoittaa sekä tehoa mRNA uuttamalla ja johdonmukaisuuden mRNA määrityksiä [10].
tässä tutkimuksessa, hyväksyimme käytännöllinen ja kätevä tapa plasma mRNA tunnistus, joka perustuu RNA puhdistus ja kvantitatiivinen RT-PCR (qRT-PCR), ja käytetään tätä menetelmää tutkia plasman mRNA-tasoja voidaan olla korvike kasvainten tasoilla ennustamisessa kemosensitiivisyys - ensimmäinen pilottitutkimus 40 potilasta ja sitten yhteensä kohortin 150 potilailla.
Materiaalit ja menetelmät
potilaat
Lokakuusta 2010 heinäkuussa 2011 150 tuoreeltaan poistettuna mahalaukun kasvaimet ja pariksi verinäytteitä samasta potilaista saatiin Syöpätautien ja General Surgery, rumputorni sairaala, Nanjing, Kiina. Kaikki potilaat eivät ole saaneet kemoterapiaa ennen leikkausta. Tuoretta mahalaukun kasvaimet ja verinäytteitä pidettiin 4 ° C: ssa ja lähetetään laboratorioon 15 minuutin sisällä kokoelma.
Tutkimuksen hyväksyi Institutional eettinen Review Board of Drum Tower sairaalan sidoksissa Medical School of Nanjing University, ja kirjallinen suostumus saatiin kaikilla potilailla. Kaikki eläinkokeet suoritettiin mukaisesti Kiinan koordinointikomitea Cancer Research säännöistä eläinten hyvinvointia koskeva ja eläinsuojelulaki. Kaikki analyysit, myös huumeiden herkkyys testaus, geenien ilmentymisen analyysi ja eläinkokeet, suoritettiin eri tutkijat toimivat erikseen tietämättä tuloksia muihin määrityksiin.
Tutkimusasetelma
Ensin toteutettiin pilottitutkimus 40 potilailla (kuvio 1A). Kunkin kasvaimen näyte, herkkyys doketakselin ja pemetreksediä tutkittiin in vitro
by histoculture huumeiden vastemääritystä (HDRA) [19] ja in vivo
mukaan vierassiirrännäiset immuunivajausta hiiren malleissa [20] (Additional tiedosto 1: Kuva S1 , AB saatavilla verkossa). Lisäksi sekä hiiren ksenografteissa ja alkuperäinen tuore kasvain näytteet olivat formaliini-kiinnitetyille ja parafiiniin upotetut (FFPE) analysointia varten BRCA1 ja TS mRNA: n ilmentymisen. BRCA1 ja TS ilmentyminen analysoitiin myös pariksi verinäytteistä. Kuvio 1 vuokaavio potilaan disposition ja kokeita. Pilottitutkimuksessa 40 potilasta (A) ja yhteensä kohortin 150 mahasyöpäpotilaista (B).
Tulosten perusteella pilotti tutkimuksessa olemme sitoutuneet vahvistamaan havaintomme kokonaismäärän kohortissa 150 mahasyöpäpotilaista (kuvio 1 B ). Tässä kohortissa, samoja menettelyjä tehtiin, lukuun ottamatta in vivo
testaus kemosensitiivisyys. MRNA-tasot plasmassa ja FFPE kasvainkudoksissa BRCA1- ja TS arvioitiin ja Mann-Whitneyn U-testiä käytettiin vertaamaan mRNA: n ekspression tasojen kasvaimen näytteiden, joilla in vitro
herkkyys tai resistenssi doketakselin ja pemetreksedin.
täydelliset tiedot kaikista menetelmistä, katso Additional tiedosto 1, saatavilla verkossa.
in vitro
kemosensi- pilottitutkimuksen ja koko kohortin
Fresh kasvainten kudokset lähetettiin laboratorioon 4 ° C Hanksin tasapainotettu suolaliuosta ja 1% penisilliini /streptomysiiniä. Näytteet pestiin Hanksin tasapainotettua suolaliuosta kahdesti ja jauhettiin pieniksi palasiksi, noin 10 mg, joka asetettiin sitten valmis kollageenin pintojen 24-kuoppaisilla mikrotiitterilevyillä. Levyjä inkuboitiin 7 päivää 37 ° C: n läsnä ollessa lääkkeet liuotetaan RPMI 1640-alustassa, joka sisälsi 20% naudan sikiön seerumia ja pidettiin kostutetussa ilmakehässä, joka sisälsi 95% ilmaa-5% CO 2. Lääkkeiden pitoisuudet olivat 100 ug /ml dosetakselia [21], ja 400 ug /ml pemetreksediä [7]. HDRA menettelyt suoritettiin ilmoittama Furukawa ja kollegat [19] pienin muutoksin. Inhibitio laskettiin käyttäen seuraavaa kaavaa: esto (%) = (1-T /C) x 100, jossa T on keskimääräinen absorbanssi kasvaimen /paino ja C on keskimääräinen absorbanssi ohjaus kasvaimen /paino. Kaikki näytteet luokiteltiin herkkä ja kestävä ryhmiä käyttämällä pienintä P
arvon menetelmällä muuttama Lausen ja Schumacher [22].
In vivo
kemosensi- pilottitutkimuksen
Jokainen vasta-poistetun kirurginen kasvaimen kudos paloitellaan 3 x 3 x 3 mm 3, joka istutettiin 30 minuuttia 9-18 atymisiin immuunivajausta hiiriä, kutsutaan "paneeli". Kussakin paneelissa kun kasvain kasvoi kooltaan 50-100 mm 3, hiiriä ksenograftit satunnaistettiin dosetakselin 15 mg /kg /vrk, ip tai pemetreksedin 20 mg /kg /vrk, ip tai ei käsittely (ohjaus). Yksittäiset kasvaimen tilavuutta (V) laskettiin kaavalla "V = (pituus x leveys x leveys) /2" ja verrattiin arvoihin, jotka on hoidon alussa, jolloin saadaan kasvaimen suhteellisen tilavuuden. Mediaani käsitelty hallittavaa arvojen suhteellisen kasvaimen tilavuuden oli nimetty "esto in vivo
" ja arviointiin käytettiin herkkyys doketakselia tai pemetreksediä.
MRNA ilmaisun pilottitutkimus ja koko kohortin
Kaksi ml verta kerättiin EDTA-putkiin ennen leikkausta, pidettiin 4 ° C: ssa ja lähetetään laboratorioon 15 minuutin kuluessa. Kokonais-RNA plasmasta uutettiin TRIzol LS ja kloroformilla ja puhdistettiin kanssa PureLink RNA Mini Kit (Ambion, Carlsbad, CA, USA). Kokonais-RNA FFPE kasvainkudoksista uutettiin mukaisesti oma menettelyä (eurooppalainen patentti numero EP1945764-B1). Sen jälkeen kun RNA: n eristäminen ja puhdistaminen, M-MLV-käänteistranskriptaasia Kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) käytettiin cDNA-Q-PCR: ekspression havaitsemiseksi β-aktiini (ACTB - käytetään endogeeninen kontrolli) ja geenit tutkitaan . Kukin erä reaktion mukana positiivisena kontrollina kaupallisista ihmisen keuhkojen ja maksan RNA: ta (Stratagene, La Jolla, CA, USA), kuten kalibraattorit ja negatiiviset kontrollit ilman RNA: n ja käänteistranskriptaasia. Templaatti-cDNA monistettiin erityisiä alukkeita ja koettimia käyttäen Taqman Universal Master Mix (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Suhteellinen geenien ilmentymisen kvantitatiivinen laskettiin vertailevan Ct menetelmällä. Lopputulokset määritettiin kaavalla mRNA ilmaisun taso = 2 - △△ Ct [6], [23] ja analysoitiin Stratagene ohjelmiston.
Uusittavuus ja vakautta geenin ilmentymisen määritys plasman
toistettavuus geeni-ilmentymisen määritys testattiin samanaikaisesti kahdella menetelmällä. Ensimmäisen menetelmän, verinäytteet viidestä potilaasta kerättiin ensimmäisenä päivänä viides päivä ennen leikkausta samaan aikaan joka päivä. Tänä aikana potilaat eivät saaneet solunsalpaajia eivätkä erityiskohtelua. Geeniekspressiotasot (korkea /väli vs matala) määritettiin kullekin näytteelle, ja prosenttiosuus identtiset tulokset laskettiin kullekin potilaalle. Toisen menetelmän, otettiin verta kerran ylimääräisestä kymmenen potilasta, ja kukin näyte jaettiin viiteen erissä. Geeniekspressiotasot (korkea /väli vs matala) määritettiin kustakin näytteestä, ja prosenttiosuus identtiset tulokset laskettiin kullekin potilaalle. Uusittavuus korko määriteltiin keskiarvo kaikkien 15 prosenttia (5 potilasta menetelmä yhden ja 10 potilasta menetelmä kaksi).
Testaamiseksi vakautta verinäytteiden, eri plasma- näytettä samasta näytteestä valmistettiin alla erilliset ehdot. Alikvootteja inkuboitiin huoneenlämpötilassa tai jään päällä 30 min, 1 h, 1,5 h ja 2 h. qRT-PCR suoritettiin sitten, ja raaka ACt arvot eri geenin verrattiin standardin protokollan (ACt = Ct geeni-Ct ACTB).
Tilastolliset analyysit
Mann-Whitneyn U- testi ja Kruskal-Wallisin testiä käytettiin testissä assosiaatioita mRNA-tasoja ja kliiniset ominaisuudet ja välillä herkkyyttä kunkin kemoterapia-aineen ja kliinisiä tekijöitä. Spearmanin testiä käytettiin arvioimaan korrelaatio in vivo
ja in vitro
inhibiitionopeudet ja plasmaan ja kasvaimen mRNA ekspressiotasot. Mann-Whitneyn U-testiä käytettiin vertaamaan mRNA: n ekspression tasojen kasvaimen näytteiden, joilla in vitro
herkkyys tai resistenssi doketakselin ja pemetreksedin. Vastaanotin toimii ominaisuudet (ROC) konstruoitiin arvioida herkkyys, spesifisyys, ja vastaavat alueet käyrien alla (AUC) kanssa 95%: n luottamusväli (CI). Olemme tutkineet optimoitu cut-off-arvon ennustamiseen maksimoimalla summa herkkyyden ja spesifisyyden sekä minimoida yleinen virhe (neliöjuuri summan [1-herkkyys] 2 + [1-eritelmien kaupunki] 2) ja minimoimalla etäisyys raja-arvo on vasemmassa yläkulmassa on ROC-käyrä [24]. Kaikki tilastolliset testit olivat kaksipuolisia, ja merkitsevyys asetettiin P
< 0,05 (kaksipuolinen). Kaikki analyysit suoritettiin käyttäen SPSS versio 16.0.
Tulokset
ominaisuudet kaikista potilaista on esitetty taulukossa 1. Suurin osa potilaista oli miehiä (73,3%), ja vallitseva histologia oli adenokarsinooma. Yhdeksänkymmentäneljä (62,7%) potilaista oli vaiheen III tauti. Imusolmukemetastaaseja oli läsnä 115 (76,7%) patients.Table 1 Potilasominaisuudet
Ominaisuus
Pilottitutkimus
Yhteensä kohortti *
N = 40

N = 150
N (%)
N (%)
ikä, v, mediaani (alue)
63 (40-83)
64 (29-84)
Sukupuoli
Mies
31 (77,5) B 110 (73,3) B Nainen
9 (22,5)
40 (26,7)
Kasvain site
Distal mahaan
12 (30,0)
57 (34,0) B proksimaalinen mahan
19 (47,5)
62 (41,3)
Koko vatsan
9 (22.5)
37 (24,7) B Stage
I
4 (10,0)
17 (11,3) B II
9 (22,5)
34 (22,7)
III
25 (62,5)
94 (62,7) B IV
2 (5,0) B-5 (3,3) B Histologinen asteen
1
0
3 (2,0) B-2
8 (20,0)
31 (20,7) B 3
22 (55,0)
71 (47,3) B Mixed 1-2
0
2 (1,3) B Mixed 2-3
10 (25,0)
43 (28,7) B Imusolmuke etäpesäke
Ei
9 (22,5)
35 (23,3) B Kyllä
31 (77,5) B 115 (76,7) B * yhteensä kohortti koostui alkuperäisestä 40 potilasta mukana pilottitutkimuksessa lisättynä 110 potilasta.
toistettavuus plasman mRNA havaitseminen oli 92% ja BRCA1, ja 89% TS. MRNA ekspressiotasot olivat vakaat jälkeen huoneenlämmössä tai jäillä inkuboinnin 30 min, 1 h, 1,5 h ja 2 h (Additional tiedosto 1: Kuva S2, saatavilla verkossa).
Pilottitutkimus
Herkkyys dosetakselille ja pemetreksedi onnistuneesti arvioitava 40 tuoreen kasvain näytteitä HDRA. Yksitoista paneelit immunopuutoksesta hiirten (9-18 hiirtä paneeli, 148 hiiret yhteensä) ihmisperäinen -ksenografteja onnistunut kaikilta 40 kirurgisista näytteistä in vivo
analyysin herkkyyttä. Spearmanin testi osoitti merkittävää korrelaatiota in vitro
ja in vivo
eston hinnat doketakseli (rho = 0,900, P
< 0,001) ja pemetreksediä (rho = 0,836, P
<0,001) (Additional tiedosto 1: Kuva S3, AB, saatavilla verkossa).
BRCA1 mRNA onnistuneesti arvioitiin kaikissa 40 kasvain näytteet, 32 pariksi verinäytteitä ja 10 paneelien hiiren malleja, kun taas TS mRNA-tasoja onnistuneesti arvioitiin kaikissa 40 kasvain näytteissä, kaikki 40 verinäytettä ja 9 paneelien hiiren malleja. Spearmanin testi osoitti korrelaatiota plasman ja kasvaimen mRNA tasot BRCA1 (rho = 0,647, P
< 0,001) sekä plasman ja kasvaimen tasoja TS (rho = 0,615, P
< 0,001) (Additional tiedosto 1: Kuva S4, AB, saatavilla verkossa). Sekä plasma ja kasvainten BRCA1 tasot korreloivat doketakselin herkkyys (rho = 0,492, P
= 0,004 ja rho = 0,527, P
< 0,001, tässä järjestyksessä), ja sekä plasman ja kasvaimen TS tasot korreloivat pemetreksedin vastus ( rho = -0,627, P
< 0,001 ja rho = -0,443, P
= 0,004, vastaavasti, Spearmanin testi) (Additional tiedosto 1: Kuva S5, AD, saatavilla verkossa). BRCA1-mRNA-tasot olivat korkeammat dosetakselia herkkä kuin doketakseli kestävä hiiri malleja (11,26 vs. 2,63; P
< 0,001), kun taas TS tasot olivat korkeammat pemetreksedin kestävä kuin pemetreksedin herkkien hiirten ( 3,34 vs. 7,27; P
= 0,013, Mann-Whitneyn U-testi) (Additional tiedosto 1: Kuva S6, AB, saatavilla verkossa).
Yhteensä kohortti
BRCA1 ja TS-mRNA onnistuneesti arvioitiin kasvaimen kudokset kaikista 150 potilasta. Rikkomusten määrä plasmassa oli 82.00% ja BRCA1 ja 90,67% TS. Keskimääräinen mRNA-tasot plasmassa ja kasvaimen esitetään Additional tiedosto 1: Taulukko S1, saatavilla verkossa. Ei ollut merkittävää yhdistyksen välillä kliinisiä piirteitä ja mRNA ekspressiotasot BRCA1 tai TS (P > 0,05).
Oli positiivinen korrelaatio plasman ja kasvaimen mRNA tasot BRCA1 (rho = 0,696, P
<0,001) ja TS (rho = 0,620, P
< 0,001, Spearmanin testi) (kuvio 2A-B). Mitään eroja lähtötilanteesta havaittiin mukaan plasman mRNA-tasoja, kasvain mRNA-tasoja, tai in vitro
kemosensitiivisyys. Kuvio 2 väliset korrelaatiot plasman ja kasvaimen mRNA: n ilmentymisen tasoa (A) BRCA1 ja (B) TS 150 mahasyöpäpotilaista. Oli merkittävä korrelaatio plasman ja kasvaimen mRNA ekspressiotasot Molempien geenien (P
< 0,001, tässä järjestyksessä).
BRCA1 plasmassa (dosetakseli-herkkä: 1,25; dosetakselia kestävä: 0,50, P
< 0,001) ja kasvaimen (dosetakseli-herkkä: 8.81; dosetakselia kestävä: 4,88, P
< 0,001) on positiivisessa yhteydessä doketakselin herkkyys. BRCA1 plasmassa ja kasvaimen olivat suuremmat dosetakselia herkkä kuin doketakseli kestävä ryhmä. TS plasmassa (pemetreksediä herkkien: 0,90; pemetreksedin kestävä: 1,82, P
< 0,001) ja kasvaimen (pemetreksediin herkkien: 6,56; pemetreksedin kestävä: 16.69, P
< 0,001) olivat negatiivisesti liittyvä pemetreksedin herkkyys. TS plasmassa ja kasvaimen olivat alemmat pemetreksedi-herkkä kuin pemetreksedin kestävä ryhmä. (Kuva 3A-D, Mann-Whitneyn U-testi). Kuvio 3 In vitro kemosensitiivisyys liittyy plasman ja kasvaimen ekspressiotasojen BRCA1and TS 150 mahalaukun syöpäpotilailla. BRCA1 plasmassa (A) ja kasvaimen (B) olivat suuremmat dosetakselia herkkä kuin doketakseli kestävä ryhmä. TS plasmassa (C) ja kasvaimen (D) olivat alemmat pemetreksedin herkkä kuin pemetreksedin kestävä ryhmä. Viivat sisällä laatikot merkitään medians. Viikset of rasiakuvaajien: SE, 95% CI.
Herkkyys ennustettaessa kemosensitiivisyys vaihteli 63%: sta 71% plasman ja 70%: sta 78% kasvaimen mRNA. Spesifisyys vaihteli 78%: sta 90% plasman ja 79% kasvaimen mRNA (taulukko 2, kuva 4) .table 2 herkkyys ja spesifisyys plasman ja kasvaimen geeniekspressiotasot ennustamiseen kemosensitiivisyys
Geenien ilmentyminen

Solunsalpaajalääkeaineet
N
Optimal cut-off
Herkkyys
spesifisyys
AUC (95% CI) B
P
Plasma
BRCA1
Doketakseli
123
0,76
63%
90%
0,77 (0,67-0,87) B <0,001
TS
Pemetreksediä
136
1,01
71%
78%
0,78 (0,69-0,87) B < 0,001
Kasvain
BRCA1
Doketakseli
123
6,09
70%
79%
0,75 (0,66-0,84) B < 0,001
TS
Pemetreksediä
136
8,08
78%
79%
0,83 (0,76-0,90) B < 0,001
kuvio 4 ROC käyrät osoittavat herkkyys ja plasman ja kasvaimen geeniekspression ennakoinnissa kemosensitiivisyys . (A) BRCA1 ja doketakseli (n = 123); (B) TS ja pemetreksediä (n = 136).
Keskustelu
Tässä tutkimuksessa, BRCA1 ja TS mRNA plasmassa korreloivat tasoilla pariksi FFPE kasvainkudoksessa. BRCA1 ja TS-mRNA-tasot sekä plasmassa ja kasvaimessa liittyy in vitro
kemosensitiivisyys juuri eksplantoidun mahasyöpä. Lisäksi plasman mRNA osoitti huomattavaa herkkyyttä ja spesifisyyttä ennustamisessa kemosensitiivisyys. Yhdessä nämä tulokset osoittavat, että plasman mRNA peilit kasvain-mRNA ja se voi osoittautua hyödylliseksi välineeksi ennustamiseksi kemosensitiivisyys.
Menetelmä loimme havaita plasman mRNA, joka perustuu RNA väkevöimisen puhdistuspylvääseen mahdollistaa tarkemman, herkkä ja toistettavissa oleva toteaminen , helpompi käsittely ja nopeampia tuloksia [10], [25], joten se toteutettavissa tavanomaisesta geenien ilmentymisen analyysi päivittäisessä kliinisessä työssä [25]. Kuitenkin saastuminen mRNA ei-kasvain lähteistä, kuten aktivoitujen lymfosyyttien, stroomasolut tai kiertävien tuumorisolujen, ei voida sulkea pois [10], [26], [27] ja voi osittain selittää, miksi korrelaatio plasman ja kasvaimen ilme oli vähemmän kuin täydellinen.
Lisäksi kasvaimen heterogeenisyys voi selittää joidenkin vaihtelua samoin. Spesifisyys vaihteli 78%: sta 90% plasman, kun taas 79% kasvaimen. Vähemmän täydellinen spesifisyys kasvaimen saattaa johtua heterogeenisyys kasvain itse kudoksesta, joka myös tukee plasman käyttöön mRNA: n ennustamiseksi herkkyyttä.
Viimeaikaiset tutkimukset ovat tarkastelleet soluttoman mRNA useiden geenien ekspression, kuten TS [28], β-kateniinin [29], hTERT [26], [30], [31], CK19 [32], [33], MUC1 [34], CXCR4 [35], BMI-1 [35 ], Her-2 [36] ja DKK1 [24], nämä tutkimukset ovat keskittyneet käytön solutonta mRNA varhaisen diagnoosin, kasvaimen pysähdyspaikan ja taudin seuranta. Sen sijaan parhaan tietomme mukaan esillä oleva tutkimus on ensimmäinen, tutkia mahdollista roolia plasman mRNA ennustamiseen doketakselin ja pemetreksedi kemosensitiivisyys kiinteitä kasvaimia. Tulosten perusteella näyttää lupaavalta rooli plasma mRNA: n ilmentymisen kuin ennakoiva biomarkkereiden mahasyövän ja osoitettava käytöstä plasman mRNA valinnassa kemoterapiaa potilaiden ilman uudelleen biopsia aikaan sairauden etenemisen. Lisäksi plasman mRNA voi myös olla hyötyä seurataan potilaan kohdellaan neoadjuvant tai adjuvanttihoidon. Hoitosuunnitelman näille potilaille voitaisiin tuottaa niiden mRNA kemosensitiivisyys profiilia. Esimerkiksi mahasyövän potilailla, joilla on alhainen plasman TS mRNA voidaan hoitaa pemetreksedillä kemoterapian, kun taas ne, joilla on korkea plasman BRCA1 voisivat hyötyä dosetakselin.
Huolimatta meidän pitäisi huomata, että tutkimus voi olla joitakin rajoituksia. Nykyinen tutkimus perustuu potilaita, jotka ovat terapia-naiiveja. Keräämällä niiden plasma ennen leikkausta ja kasvainten oikean leikkauksen jälkeen, voisimme osoitti plasman mRNA arvoa seurataan potilaan kohdellaan neoadjuvant tai adjuvanttihoidon. Sitten havaitsemisen herkkyyden ja arvon poimien kiertävän mRNA varhaisesta etäpesäkkeitä erityisesti potilaille varata toisen linjan kemoterapia on vielä epäselvä. Nyt olemme myös suorittavat lisätutkimuksia potilailla, joilla on etäpesäkkeitä ja voi vastaanottaa leikkaukseen tai vastaanottaa toisen linjan kemoterapia. Meillä on uusimmat tulokset lähitulevaisuudessa, joka sisältää sisältöä edellä.
Päätelmä
Lopuksi plasmassa mRNA ekspressiotasot BRCA1 ja TS voisi peili kuin kasvain ja voi olla lupaava tehtävä potentiaalisina ennustava biomarkkereita doketakselin ja peretrexed mahasyövän. Nämä tulokset ovat alustavia ja ainoastaan ​​suggestiivinen tässä vaiheessa, ja jokainen näistä pariksi biomarkkereiden-kemoterapian hypoteeseja on validoitu ennen kuin niitä käytettiin rutiininomaisesti päivittäin kliinisessä käytännössä. Kliininen tutkimus on parhaillaan suunniteltu voidakseen varmistaa roolin räätälöidä hoito perustuu plasman mRNA ilmaus BRCA1 ja TS.
Muita tiedosto
toteaa
Jie Shen, Jia Wei vaikutti yhtä tähän työhön.
julistukset
Kiitokset
työtä tukivat avustuksia National Natural Science Foundation of China (Grants nro 81401969, 81300339), Major International (Regional) Joint Research Project of China (Grant No. 81220108023 ), ja Top Six Talents Project Jiangsun maakunnassa (Grant nro 2011ws005). Työ Tohtori Rosell laboratoriossa rahoitetaan osittain avustusta La Caixa Foundation.
Rooli rahoituslähteen
rahoituslähteet ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu, tietojen analysointia, tietojen tulkinta, tai kirjallisesti raportissa.
Elektroninen oheismateriaali
12967_2014_355_MOESM1_ESM.doc Additional tiedosto 1: täydentävä Methods. Taulukko S1. Mean mRNA plasmassa ja kasvaimen. Kuva S1. Alkuperäisestä kasvaimesta ja pariksi hiiri ksenograftit. (A) Morfologia alkuperäisestä kasvaimesta diagnosoitu adenokarsinooma osittaisella limakalvojen cell carcinoma. (B) Pariksi ksenografteina immuunivajausta hiirissä, vahvisti hematoksyliini- eosiini värjäystä. Ei ollut merkittäviä morfologisia eroja alkuperäisen kasvaimen näytteen ja pariksi vierassiirrännäiset hiiren malleissa. Kuva S2. Validointi vakautta plasma mRNA. Plasman mRNA-tasot kaikkien geenien olivat vakaita jälkeen joutua eri olosuhteissa. Kuva S3. Korrelaatioita in vitro
ja in vivo
eston hinnat (A) doketakseli ja (B) pemetreksedin pilottitutkimuksen. Kuva S4. Korrelaatio plasma ja kasvaimen mRNA: n ilmentymisen (A) BRCA1 (n = 32) ja (B) TS (n = 40) pilottitutkimus. Kuva S5. Korrelaatiot mRNA ekspressiotasot ja in vitro
kemosensi- pilottitutkimuksen. (A) Kasvaimen BRCA1 ja doketakseli herkkyys; (B) plasman BRCA1 ja doketakseli herkkyys; (C) kasvaimen TS ja pemetreksedi herkkyys; ja (D) plasman TS ja pemetreksedi herkkyys. Kuva S6. mRNA ekspressiotasot ja in vivo
kemosensitiivisyys. Käyttämällä kasvaininhibitioaktiivisuuden cut-off 50%, hiiri malleja jaettiin (A) dosetakseli-herkkä ja dosetakseli kestävä alaryhmiin ja (B) pemetreksediin-herkkä ja pemetreksedi kestävä alaryhmiin. BRCA1-mRNA-tasot (pisteet) olivat suuremmat dosetakselia herkkä ryhmässä kuin doketakseli kestävä ryhmä (P
< 0,001), ja TS tasot (pisteet) olivat korkeammat pemetreksedin kestävä ryhmässä kuin pemetrexed- herkkä ryhmä (P
= 0,013). (DOC 666 KB) Tekijät "alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville
Alla linkkejä kirjoittajien alkuperäiset toimitti asiakirjat kuville. 12967_2014_355_MOESM2_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 1 12967_2014_355_MOESM3_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 2 12967_2014_355_MOESM4_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 3 12967_2014_355_MOESM5_ESM.gif Kirjoittajien alkuperäinen tiedosto kuvio 4 Kilpailevat kiinnostusta
Kirjoittajat ilmoittavat, että ne ei ole kilpailevia kiinnostusta.
Tekijät maksuosuudet
JS, JW, WXG ja BRL suunniteltu tutkimus- ja kirjoitti paperille. JS, HW, LXY, ZZZ, LX ja CC suoritettu tutkimus. Vuoden alusta, XPQ ja JW analysoitua tietoa. TB ja RR muokata paperin. Kaikki kirjoittajat luettu ja hyväksytty lopullinen käsikirjoitus.

• Rooli CCL22-CCR4 akselia etäpesäkkeiden mahalaukun syövän solujen omental valkoisia täpliä
• Prognostiset vaikutukset 25-hydroksi-D-tasot mahasyövän