Notre étude a examiné la relation entre les altérations de MYC et caractéristiques clinico dans les cancers gastriques. Nous avons évalué l'effet de MYC Citation:. De Souza CRT, Leal MF, Calcagno DQ, Costa Sozinho EK, Borges BdN, Monténégro RC et al. (2013) MYC Editeur: Masaru Katoh, National Cancer Center, le Japon Reçu 30 Janvier 2013; Accepté 12 Avril 2013; Publié: 22 mai 2013 Droit d'auteur: © 2013 de Souza et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités Financement:. Les auteurs sont reconnaissants à Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq; CRTdS, AKCRdS, SEBdS, RRB et MDACs) et Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP; DQC et MFL) qui prennent en charge cette étude sous forme de subventions et de bourses. Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent Introduction le cancer gastrique est le quatrième type le plus fréquent de cancer et reste la deuxième cause de décès liés au cancer dans le monde [1]. Ce cancer est généralement diagnostiqué à un stade avancé et la thérapie curative unique disponible nécessite une résection chirurgicale [2]. Ainsi, le cancer gastrique est un problème sérieux de santé publique dans le monde. Une meilleure compréhension de la biologie de cette tumeur est critique et peut être utile pour guider la gestion des patients, ainsi que de développer de nouvelles options thérapeutiques. MYC MYC la compréhension de MYC Ethique Déclaration Tous les échantillons ont été obtenus avec le consentement éclairé écrit et l'approbation de l'hôpital universitaire (Belém, Pará, Brésil) comités d'éthique ( numéro de protocole:. 142004) des échantillons cliniques 125 adénocarcinome gastrique et 67 tissus gastriques non néoplasiques (échantillons de contrôle correspondants) ont été obtenus chirurgicalement chez des patients de l'hôpital universitaire João de Barros Barreto en Pará État, Brésil. Tous les sujets ne sont pas exposées à une chimiothérapie ou une radiothérapie avant la chirurgie. Tumeurs gastriques ont été classés selon Lauren [17] et les tumeurs ont été organisées en utilisant des critères standards par TNM [18]. Les caractéristiques clinico-pathologiques sont présentés dans les tableaux 1 et 2. échantillons de tumeur et de contrôle ont été disséqués rapidement congelés dans l'azote liquide jusqu'à ce que la purification de l'acide nucléique. Une autre partie des mêmes tissus a été fixé au formol et inclus en paraffine. Pour le fluorescent hybridation (FISH) le test in situ de l'échantillon de la tumeur restante a été ventilé comme décrit précédemment [19]. immunohistochimique analyses pour la protéine MYC étaient effectuée sur les articles 125 fixés au formol, paraffine tumorales. La coloration immunohistochimique a été réalisée selon Calcagno et al. L'ADN génomique (ADNg) a été extrait en utilisant le kit QIAamp DNA Mini (Qiagen, Allemagne) suivant les instructions du fabricant. L'ARN total a été extrait avec trois Reagent® (Life Technologies, USA) selon le protocole du fabricant. L'ADN et l'ARN concentration et la qualité ont été déterminées à l'aide du spectrophotomètre NanoDrop (Kisker, Allemagne). l'intégrité de l'ARN a été déterminée par électrophorèse sur gel (1% de gels d'agarose). Tous les échantillons ont été conservés à -80 ° C jusqu'à utilisation. Pour quantifier les niveaux d'ARNm de MYC quantification relative (RQ) de l'expression du gène a été calculée selon la Livak et Schmittgen [20]. L'échantillon de contrôle correspondant a été désigné comme un calibrateur de chaque tumeur. FISH et qPCR de nombre ont été utilisés pour évaluer les MYC qPCR a été réalisée à l'aide quantitative TaqMan CNV (Life Technologies, États-Unis) pour le MYC MYC Le modèle de méthylation et la fréquence du MYC Les réactions de PCR ont été réalisées avec 0,1 pmol /L dNTP, 2 pmol /L de MgCl 2, 0,5 pmol d'amorces, 1,25 U de Taq ADN polymerase et 100 ng d'ADN au bisulfite modifié. Après dénaturation initiale de 5 min à 94 ° C, 40 cycles à 9 à 4 ° C pendant 45 s, de 52,4 ° C pendant 45 s et 72 ° C pendant 30 secondes furent effectués, suivis d'une extension finale pendant 5 min à 72 ° C. Les produits de PCR ont été directement chargés sur 3% des gels d'agarose et électrophorèse. Le gel a été coloré avec SYBR® Safe DNA Gel Stain (Vie Technolgies, USA) et directement visualisé sous illumination UV. En tant que contrôle positif de toutes les réactions MSP, un échantillon ADNg a été complètement méthylé en utilisant CpG méthylase (SssI, New England Biolabs, USA) en suivant les instructions du fabricant. . En outre, les amorces pour de type sauvage ont été utilisés pour surveiller la conversion complète de l'ADN obtenu dans la réaction bisulfite Des échantillons ont été stratifiés comme: 1) échantillons hypométhylée lorsque le produit d'amplification positive a été détectée que dans la PCR avec des amorces spécifiques pour les séquences non méthylés; 2) lorsque l'amplification hyperméthylé échantillons positifs n'a été détectée que dans la PCR avec des amorces spécifiques pour les séquences méthylées; 3) échantillons méthylés partielles lorsque l'amplification positive a été détectée dans la PCR avec les deux ensembles d'amorces. Les trois exons du MYC Les réactions de PCR ont été réalisées avec 0,1 pmol /L des dNTP, 2 pmol /L de MgCl 2, 0,5 mol /L d'amorces, 1 U de Taq polymérase, et de 100 ng d'ADN. Les conditions de PCR étaient 95 ° C pendant 10 min, puis 35 cycles de 1 min de dénaturation à 95 ° C, 1 min à la température de recuit (allant de 59 à 61 ° C) et 1 min d'extension à 72 ° C. Les amplicons ont été séparés sur un gel d'agarose à 2% coloré avec SYBR® Safe Stain DNA Gel (Vie Technolgies, USA) et directement visualisés sous illumination UV. amplicons ont été séquences en utilisant la méthode de Sanger [27]. Le séquençage direct a été réalisée en utilisant le kit de séquençage de cycle Big DYE® Terminatorv3.1 (Life Technologies, USA) et analysé sur un PRISM® 3130 analyseur génétique ABI (Life Technologies, USA) en utilisant Pop 7 polymère. La recherche in silico de mutation a été réalisée en utilisant le Chromas Pro 1.5 (Technelysium Pty Ltd, Australie). La séquence de référence était Gene ID: 4609 (NCBI). Des variantes avec moins de 1% la fréquence des allèles mineurs ont été signalés. Pathogénicité des mutations faux-sens a été évaluée par l'analyse in silico en utilisant PolyPhen (http://genetics.bwh.harvard.edu/pph/) et EIPD (http://sift.jcvi.org). MYC La normalité de la distribution pour les variables quantitatives a été testée par le test de Shapiro-Wilk. Les données qui ne sont pas normalement distribuées ont été transformées (transformation z-score) dans une distribution normale pour l'analyse. Analyse des MYC la corrélation entre l'expression de l'ARNm et le nombre de copies a été analysée par le test de Pearson, dans lequel une valeur de son coefficient de corrélation (r) inférieur à 0,30 a été déterminé comme une faible corrélation, de 0,30 à 0,70 en tant que corrélation moyen, et ci-dessus 0,70 comme une forte corrélation. Dans toutes les analyses, l'intervalle de confiance est de 95% et p Résultats MYC MYC protéine nucléaire a été trouvé positif dans 76,8% (96/125) des tumeurs gastriques (figure 1). MYC expression de la protéine a été plus fréquemment observée dans le type intestinal que les tumeurs de type diffus ( p Le niveau d'expression de MYC Gain de MYC FISH et qPCR analyses ont montré que l'augmentation de MYC Tous les échantillons de cancer gastrique ont présenté une amplification positive avec un jeu d'amorces non méthylé. Fait intéressant, 86,4% des échantillons de cancer ont été hypométhylé. D'autre part, la présence de séquences non méthylés à MYC du promoteur a été observée chez 28,4% des échantillons témoins (échantillons partiels méthylés), ce qui suggère la perte de méthylation dans ces échantillons (figure 3). spécificité et MSP Les résultats des amorces ont été confirmées en utilisant le séquençage bisulfite PCR (BSP) approche [29] dans lequel nous avons choisi au hasard cinq échantillons hypométhylée; cinq échantillons hyperméthylés et cinq échantillons partiels méthylés (données non présentées). MYC en ce qui concerne le séquençage des gènes, aucune nouvelle mutation a été détectée dans les tumeurs gastriques. Treize échantillons (10,4%) de tumeurs présentés au moins une mutation connue, avec des variantes sur moins de 1% mineur fréquence allélique. Au total, 18 mutations ont été identifiées, avec 4 échantillons présentant des mutations concomitants. Dans exon 1, cinq avec GG et quatre avec CG à rs117856857; un avec GG à rs73707292; et quatre avec CT à rs4645949. Dans exon 2, concernant les mutations faux-sens, deux tumeurs hébergeaient une mutation au niveau du codon 47 résultant en un changement de la tyrosine en histidine (rs114570780; EIPD prédiction = délétère; prédiction PolyPhen = probablement dommageable), et deux au niveau du codon 72 résultant en un changement de proline à sérine (rs28933407; EIPD prédiction = tolérée; prédiction PolyPhen = probablement endommager). Toutes les tumeurs avec une mutation dans l'exon 2 a présenté une ou deux mutations connues dans l'exon 1. Les exons 2 mutations ont été détectées uniquement dans les tumeurs de type diffus à un stade avancé. Aucune mutation a été identifiée dans l'exon 3. La présence de connue MYC Discussion la protéine MYC a un effet sur environ 15% des gènes dans le génome humain [30]. Ainsi, MYC déréglementation peut entraîner des altérations dans différentes voies biologiques impliquées dans l'initiation du cancer et de la progression [5]. Cependant, jusqu'à ce jour, la relation entre les altérations de MYC et paramètres clinicopathologiques n'a pas été bien compris. Nos échantillons ont présenté un ratio hommes-femmes de 02h01 et la majorité des patients étaient plus âgés de cinquante-cinq ans. En outre, le cancer gastrique de type intestinal était plus fréquent que le type diffus et les tumeurs étaient plus fréquentes chez les non-cardia. Ces données épidémiologiques sont en accord avec des études précédentes [28], [31] - [33]. translocations chromosomiques dans le MYC MYC surexpression est décrit comme allant de 15,6% à 100% dans les cancers gastriques primaires [9]. in vitro Dans la présente étude, 76,8% des tumeurs gastriques a montré MYC immunoréactivité et toutes les tumeurs, type intestinal et diffus, a présenté une expression accrue de l'ARNm par rapport à leurs témoins appariés. De plus, nous avons observé que MYC immunoréactivité et augmentation de l'expression de l'ARNm ont été associés à l'extension tumorale plus profonde et la présence de métastases. Ces résultats suggèrent que MYC a un rôle dans l'invasivité de la tumeur, les métastases, et donc l'agressivité, ce qui corrobore une étude précédente [37]. Bien que certaines analyses ont présenté une petite taille de l'effet, ces résultats sont également en accord avec une étude précédente de notre groupe chez les primates non humains, dans lequel nous avons démontré une augmentation continue de MYC Bien que, l'amplification du gène est pas nécessairement associé ou nécessaire pour sa surexpression, notre étude montre que MYC immunoréactivité, MYC méthylation de l'ADN est un mécanisme puissant de répression de la transcription. méthylation-modèles génomiques appropriés deviennent profondément altérées dans les cellules cancéreuses: les gains (hyperméthylation) et pertes (hypométhylation) des sites méthylés ont été observées [52], [53]. Hypométhylation à des promoteurs spécifiques peut activer l'expression aberrante d'oncogènes et de perte de l'empreinte dans certains loci [44]. Jusqu'à présent, peu d'études ont examiné la relation entre le motif de méthylation de MYC Suzuki et al. Au meilleur de notre connaissance, MYC Selon la classification Laurén, adénocarcinome gastrique est classé principalement en types intestinaux et diffuses [17]. le cancer gastrique de type intestinal progresse par un certain nombre d'étapes successives, en commençant par la gastrite atrophique suivie d'une métaplasie intestinale, une néoplasie intraepitelial et le carcinome [66]. D'autre part, le type diffus en général ne se développe pas de lésions précancéreuses [67], [68]. Dans la présente étude, nous avons observé que le type intestinal présenté plus fréquent immunoréactivité MYC, ainsi qu'un nombre plus élevé de MYC de les copies que les tumeurs de type diffus, ce qui corrobore des études antérieures de notre groupe [10] , [22], [28], [38]. En outre, MYC En conclusion, nos données suggèrent que MYC
expression de l'ARNm et son immunoréactivité de la protéine, ainsi que la variation du nombre de copies, l'ADN méthylation du promoteur, et des mutations ponctuelles dans 125 adénocarcinomes gastriques et 67 des tissus non néoplasiques paried. Nous avons observé que 77% des tumeurs présenté MYC immunoréactivité qui a été significativement associée à une expression accrue de l'ARNm ( p
< 0,05). Ces observations ont été associées à l'extension tumorale plus profonde et la présence de métastases ( p
< 0,05). MYC expression de la protéine a également été plus fréquemment observée dans de type intestinal que dans les tumeurs de type diffus ( p
< 0,001). En outre, MYC de l'ARNm et l'expression des protéines ont été associés de façon significative avec son nombre de copies ( p
< 0,05). Le gain des copies de MYC a été associée à d'apparition tardive, de type intestinal, le stade tumoral avancé, et la présence de métastases à distance ( p
< 0,05). Un hypométhylée MYC du promoteur a été détectée dans 86,4% des échantillons de tumeurs. MYC
hypométhylation a été associée à de type diffus, le stade tumoral avancé, l'extension tumorale plus profonde, et la présence de métastases ganglionnaires ( p
< 0,05). De plus, dix-huit échantillons de tumeurs ont présenté au moins une mutation connue. La présence de MYC
mutations a été associée à de type diffus tumeur ( p
< 0,001). Nos résultats ont montré que MYC
déréglementation a été principalement associée à des caractéristiques de mauvais pronostic et également renforcé la présence de différentes voies impliquées dans l'intestin de type et de type diffus carcinogenèse gastrique. Ainsi, nos résultats suggèrent que myc
peut être un marqueur utile pour la stratification clinique et le pronostic
Déréglementation dans le cancer gastrique et ses implications clinicopathologiques. PLoS ONE 8 (5): e64420. doi: 10.1371 /journal.pone.0064420
est l'un des oncogènes les plus étudiés découlant de son association avec un grand nombre de maladies [3]. MYC joue un rôle dans plusieurs fonctions fondamentales de biologie cellulaire, y compris la régulation de la croissance et la prolifération cellulaire, le métabolisme, la différenciation, l'apoptose et l'angiogenèse (pour une revue voir [4], [5]). Par conséquent, MYC est un intégrateur de signaux extracellulaires et intracellulaires et son phénotype cellulaire dépend de l'emplacement de tissu [6], [7]. Sans surprise, la déréglementation des fonctions de MYC contribue au phénotype tumoral.
déréglementation en raison de l'amplification génique [8], [9], translocation chromosomique ou l'insertion [10], [11] , des mutations [12], et les modifications épigénétiques [13], [14], a été rapporté dans différents types de cancers, en particulier dans le cancer gastrique. expression MYC est souvent élevée ou déréglementé en néoplasmes humains [4], et semble être au carrefour de plusieurs voies importantes et les processus impliqués dans la cancérogenèse [15], qui est un événement clé dans la carcinogenèse gastrique [9]. Auparavant, notre groupe a démontré que MYC
expression de l'ARNm et copier nombre augmente au cours des étapes successives de type intestinal carcinogenèse gastrique dans un modèle primate non humain [16], ce qui suggère que MYC
peut être impliqué dans l'initiation de la tumeur gastrique et la progression.
la biologie est d'une importance primordiale pour élucider son rôle dans la pathogenèse du cancer gastrique. Jusqu'à ce jour, il n'y a pas d'étude corrélant MYC
mutation, amplification, protéine /niveaux d'ARNm, et la méthylation dans ce néoplasie. Ici, nous avons évalué la relation entre les altérations de MYC et caractéristiques clinico dans le cancer gastrique. En outre, MYC
expression de l'ARNm et de protéines immunoréactivité, ainsi que plusieurs mécanismes moléculaires précédemment liés à sa déréglementation comme nombre de copies variation (CNV), mutation, et méthylation de l'ADN, ont été analysés dans le même ensemble de cancer gastrique échantillons.
Matériels et méthodes
MYC immunoréactivité
[10]. des sections de tissu tumoral (3 ou 4 mm d'épaisseur) ont été déparaffinées dans du xylene et réhydratées dans une série graduée d'éthanol. Après la récupération de l'épitope induite par la chaleur, les sections de tissu ont été incubées avec un anticorps monoclonal de souris primaire contre MYC (dilution 1:50; sc-40, Santa Cruz Biotechnology, Etats-Unis et Zymed®, États-Unis). Un kit universel anticorps secondaire conjugué à la peroxydase (système LSAB, DakoCytomation, USA) a été utilisé pour le système de détection. Nous avons utilisé 3,30-diamino-benzidine /H 2O 2 (Dakocytomation, Danemark) comme chromogène et hématoxyline comme contre-coloration. Toute tache nucléaire avec ou sans coloration cytoplasmique a été considéré comme un résultat positif, indépendamment de l'intensité. Un cas de MYC-positif a été défini comme ayant 10% ou plus de cellules tumorales positives pour cette protéine.
acide nucléique extraction
MYC
expression de l'ARNm
, l'ARN total a été isolé à partir de 49 tissus normaux et tumoraux appariés en utilisant Trizol (Life Technologies, États-Unis). L'ARN a été transcrit de manière inverse à l'aide du kit High-Capacity Archive ADNc selon le protocole du fabricant (Life Technologies, États-Unis). L'ADN complémentaire a été ensuite amplifié par PCR en temps réel en utilisant les sondes TaqMan achetées telles Assays-sur-demande Produits pour Gene Expression (Life Technologies, États-Unis) sur un 7500 rapide PCR en temps réel (Life Technologies, USA). gène GAPDH de a été choisi comme témoin interne pour l'entrée inverse de l'ARN et l'efficacité de la transcription. Tout en temps réel transcription inverse PCR quantitative (RT-qPCR) ont été réalisées en triple pour les deux gène cible ( MYC
: Hs00153408_m1) et le contrôle interne ( GAPDH
: NM_002046.3).
MYC
copier
nombre de copies dans un sous-ensemble de 49 tumeurs, la même que celle utilisée dans l'étude de l'expression. FISH a été effectuée selon le protocole de Pinkel et al.
[21] avec les modifications introduites par Calcagno et al.
[22]. Les cellules ont été hybridées avec Spectre orange
Probe (LSI Vysis /Abbott, Inc., IL) pour le MYC
région du gène (8q24.12-q24.13) et les noyaux ont été contre 4 ', 6-diamidino-2-phénylindole antifade. La fluorescence a été détectée en utilisant un microscope à fluorescence Olympus BX41 (Olympus, Japon), avec des filtres d'excitation pour les 4 ', 6-diamidino-2-phénylindole (260 nm) et de rhodamine (570 mn). Pour chaque cas, 200 noyaux en interphase ont été analysées à l'aide d'une ASI système d'analyse d'image (Applied Spectral Imaging, Israël). signaux positifs MYC
génétiques apparaissent comme des taches rouges dans les noyaux et ont été marqués en utilisant les critères de Hopman et al.
[23]. Pour éviter toute interprétation erronée en raison d'une erreur technique, les noyaux de lymphocytes normaux et des tissus gastrique normale ont été utilisées comme témoin. Les résultats de FISH ont été présentés comme le pourcentage de MYC
amplification par une cellule, dans laquelle nous avons calculé le pourcentage de cellules montrant 3 ou plusieurs signaux pour la MYC de la sonde par cellule.
gène (Hs01764918_cn) et pour le contrôle interne RNAse P
(Ƹ3326). Les réactions de qPCR Multiplex ont été réalisées en quadruple avec ADNg selon le protocole et le cyclisme les conditions du fabricant à 7500 rapide PCR en temps réel (Life Technologies, USA). Le nombre relatif de copie a été estimée pour chaque échantillon en utilisant la copie de l'appelant Software V1.0 (Life Technologies, États-Unis). gDNAs commerciaux humaines (G1521 et G1471, Promega, USA) ont été utilisés pour le calibrage
méthylation
MYC
génotypage
gène ont été sélectionnés pour l'analyse de mutations dans les 125 échantillons de cancer gastrique. Les amorces suivantes ont été conçues pour l'amplification par PCR et séquençage: exon 1 F5'-TTTATAATGCGAGGGTCTGGA-3 'et R5'-GCATTCGACTCATCTCAGCA-3' (taille du produit attendu de 654 pb); 'exon 2-F5' CTGCCTCCCGCTTTGTGT-3' et R5'-TTTGATGAAGGTCTCGTCGT-3 '(taille du produit attendu de 423 paires de bases), F5'-TGGGAGGAGACATGGTGAA-3' et R5'-TGCCAATGAAAATGGGAAAG-3 '(taille du produit attendu de 507 pb); 'exon 3-F5' TGTCCAGAGACCTTTCTAACGTAT-3' et 5'-CCGTAGCTGTTCAAGTTTGTG-3 '(taille du produit attendu de 663 paires de bases), 5'-TGTCCGTCCAAGCAGAGG-3' et 5'-TGATGAAAACAAACAGGGATG-3 '(taille du produit attendu de 639 pb).
L'analyse statistique
méthylation, immunoréactivité odds ratio de mutation, ou ses produits (OR) pour les fonctions clinicophatological a été estimée par régression logistique. L'âge au prélèvement de tissu gastrique a été défini comme covariable dans le modèle de régression.
expression de l'ARNm et le nombre de copies ont été réalisées par le modèle linéaire général (GLM) avec ajustement pour l'âge, qui fournit la taille de l'effet et a observé la puissance (OP) de chaque analyse. La taille de l'effet pour les analyses GLM a été basée sur Eta Squared (η 2), dans lequel 0,15 et ci-dessous a été déterminée comme une petite taille de l'effet, de 0,16 à 0,40 en tant que taille de l'effet moyen, et au-dessus de 0,40 comme une grande taille de l'effet.
valeurs inférieures à 0,05 ont été considérées comme significatives.
amplification est connu pour être lié à haute teneur en protéines /expression de l'ARNm dans la carcinogenèse gastrique [28], cependant, au mieux de notre connaissance, peu d'études ont été réalisées pour décrire le rôle de la méthylation et les mutations MYC de ce processus. Pour atteindre cet objectif, nous avons analysé 125 cas dans lesquels 68% étaient des hommes et 32% étaient des femmes. L'âge moyen de notre ensemble de l'échantillon était de 62 ans (intervalle de 26-89 ans). Une fréquence légèrement plus élevée de type intestinal (56,8%) et (58,4%) des tumeurs non-cardic ont été observés (tableau 1 et 2).
< 0,001, OR = 7,856, IC à 95% = 2,803 à 22,013) (tableau 1). MYC immunocoloration a également été associée à d'apparition tardive (p = 0,026, OR = 3,276; IC à 95% = 1,152 à 9,315), l'extension de la tumeur plus profonde ( p = 0,045
, OR = 2,975, IC à 95% = 1.027 -8,623), et la présence de métastases à distance ( p
< 0,001, OR = 17,682, IC à 95% = 3,914 à 79,882) (tableau 1). Futhermore, MYC immunoréactivité a été associée à l'expression de l'ARNm augmenté ( p
= 0,003, η 2 = 0,178, OP = 0,870) et MYC
nombre de copies par FISH ( p
= 0,009, η 2 = 0,139, OP = 0,759) et par qPCR ( p
= 0,003, η 2 = 0,177, OP = 0,869) (tableau 1).
ARNm était plus élevé dans tous les échantillons de tumeur que leurs contrôles appariés (RQ = 3,39 ± 0,14; intervalle de 1,57 à 5,18). Une augmentation de MYC
expression de l'ARNm a été associée à l'extension tumorale plus profonde ( p
= 0,006, η 2 = 0,152, OP = 0,801), la présence de métastases ganglionnaires ( p = 0,023
, η 2 = 0,107, OP = 0,632) et de métastases à distance ( p
< 0,001, η 2 = 0,788, OP = 1) (Tableau 2 ). En outre, le niveau d'ARNm a été directement corrélée à la MYC
nombre de copies ( p
< 0,01; r = 0,716).
exemplaires a été trouvée dans tous les échantillons d'adénocarcinome gastrique par FISH et qPCR essais. Par FISH, le pourcentage moyen de cellules présentant MYC
amplification était de 72,1% (intervalle de 50 à 83,5% de cellules avec amplification) (Figure 2 A et B). La moyenne de MYC de les copies par qPCR était de 4,5 (intervalle de 3 à 9 copies) (Figure 2 C).
nombre de copies a été associée à d'apparition tardive ( p
< 0,001; η 2 = 0,257, OP = 0,976; p = 0,025
; η 2 = 0,103, OP = 0,662, respectivement), de type intestinal cancer ( p = 0,037
; η 2 = 0,091, OP = 0,557; p
= 0,009; η 2 = 0,139, OP = 0,762, respectivement), et la présence de métastases à distance ( p
= 0,001; η 2 = 0,221, OP = 0,942; p
< 0,001; η 2 = 0,356, OP = 0,999, respectivement). En outre, MYC
amplification par FISH a été associée à des étapes de tumeurs avancées ( p = 0,037
; η 2 = 0,091, OP = 0,558), cependant, seulement deux tumeurs précoces étaient analysé dans ce sous-ensemble d'échantillons (tableau 2).
hypométhylation a été plus fréquemment observée dans le type diffus par rapport au cancer gastrique de type intestinal ( p
= 0,007; OR = 8,554; IC à 95% = 01,798 à 40,695, en utilisant de type diffus comme groupe de référence). En outre, MYC
hypométhylation a été associée à des étapes de tumeurs avancées ( p = 0,033
; OR = 6,602; IC à 95% = 1,162 à 37,501), l'extension de la tumeur plus profonde ( p
= 0,022; OR = 4,752; IC à 95% = 1,257 à 17,965), et la présence de métastases ganglionnaires ( p = 0,032
; OR = 5,12; IC à 95% = 1,149 à 22,814) (tableau 1).
mutations a été associé à des tumeurs de type diffus ( p
= 0,004, OR = 21,717, IC à 95% = 2,678 à 176,111; utilisant diffus type comme groupe de référence) et la présence de métastases à distance ( p = 0,032
, OR = 4,492, IC à 95% = 1,141 à 17,679).
locus est très commun dans les cancers hématopoïétiques. Cependant, dans les tumeurs humaines solides comme le cancer gastrique, MYC de les altérations sont souvent due à une amplification du gène [34]. En outre, MYC
est reconnu pour être le gène codant pour la protéine le plus souvent amplifié dans tous les types [35] du cancer. Dans la présente étude, nous avons observé trois ou plus MYC
copies du gène dans toutes les tumeurs gastriques étudiés, corroborant avec des études antérieures dans les tumeurs gastriques primaires des individus de notre population [10], [28], [36] - [39], ainsi que de l'Asie de l'Est et de l'Europe [40] - [42]. En outre, MYC
amplification a été observée dans le plasma [43] et dans des lignées cellulaires de cancer gastrique établis dans notre groupe [44] - [47]. De plus, notre groupe avait observé que clonale forte amplification de MYC
est moins fréquente dans le type diffus que dans de type intestinal cancer gastrique primaire [10], [22], [28], ce qui a été renforcée par cette étude.
études avec knocked-down MYC expression dans des lignées cellulaires de cancer gastrique ont démontré le rôle crucial de l'expression de MYC dans la croissance gastrique des cellules tumorales, la survie et le maintien des paramètres de cellules tumorales qui peuvent contribuer à un potentiel malin [48 ]. De plus, Mehndiratta et al.
, [49] a montré une diminution significative (40%) dans l'expression de MYC des deux ARNm et la protéine et ses cibles en aval à l'aide de siRNA.
expression de l'ARNm et le nombre de copies au cours de la étapes séquentielles de type intestinal carcinogenèse gastrique dans la N-méthyl-nitrosourée (MNU) traités par les primates non humains [16]. D'autre part, toute association entre MYC et le grade histologique, la localisation de la tumeur, métastase ganglionnaire, ou le stade pathologique a été détectée dans une étude sur le cancer gastrique développé dans une population chinoise [50], renforçant que l'origine ethnique de la population affligée peut conduire à biologiquement et cliniquement des sous-ensembles de cancer gastrique [51].
niveaux d'ARNm, et le nombre de copies étaient directement corrélées.
et son effet sur l'expression des gènes et sur les processus cancérigènes. MYC
hypométhylation a été précédemment associé à la progression et les métastases oncogènes induction dans un modèle de rat de cancer du foie [54] et dans des échantillons de cancer colorectal humain [55]. En outre, MYC
hypométhylation a également été associé à l'expression MYC de tumeurs gastriques [26], [56] - lignes [58] et de cellules [48]. Cependant, nous avons été incapables d'observer une association significative entre MYC
hypométhylation et son expression dans nos échantillons. Parmi d'autres facteurs, ce manque d'association peut être due à la présence de MYC
amplification dans toutes les tumeurs avec des promoteurs hypométhylée (86,4% des échantillons) et donc, le masquage de l'effet possible de cette modification épigénétique sur MYC
régulation transcriptionnelle.
[59] précédemment montré qu'un haut niveau de hypométhylation était un indicateur de mauvais pronostic dans les deux cancer de l'estomac et du côlon, et les altérations épigénétiques étaient fonction de l'âge, se produisant avant des altérations génétiques. Dans la présente étude, certains contrôles déjà présenté des séquences non méthylés dans le promoteur du MYC . De plus, nous avons démontré que MYC
hypométhylation a été associée à un phénotype plus agressif (de l'agressivité tumorale, la présence de métastases ganglionnaire, et les types histologiques de cancer). Ces résultats suggèrent que MYC
déméthylation peut être accumulée lors de la progression de la tumeur et cela pourrait être un événement commun dans carinogenesis gastrique [60], [61], étant donné que ce mécanisme a été observé pour d'autres gènes dans plusieurs types de tumeurs [ ,,,0],62], [63]. Comme il a déjà proposé pour l'ADN hypermethylation [64], l'hypométhylation de promoteur peut être utilisé comme une nouvelle génération de biomarqueurs et tient la promesse diagnostique et pronostique pour les cliniciens.
exons du gène n'a jamais été entièrement séquencé dans les tumeurs gastriques humaines. Ici, nous avons séquencé les trois exons de MYC
: exon 1 est une protéine non codante, les exons 2 et 3 sont codant pour une protéine [pour examen voir (Pelengaris & Khan, 2003)]. Nous ne avons trouvé aucune nouvelle mutation, cependant, nous avons observé que 4 tumeurs présentent des mutations faux-sens (de rs114570780 et rs28933407) sur exon 2. Ces mutations étaient dans une séquence conservée évolutionnaire de MYC
: le domaine de transactivation [4] , [65]. En outre, les mutations identifiées ont été considérées comme étant probablement endommageant en fonction du logiciel PolyPhen. Le changement de proline à sérine au niveau du codon 72 a également été précédemment rapporté comme une variante pathogène dans la base de données NCBI dbSNP (http://omim.org/). Ainsi, les deux mutations dans l'exon 2 peuvent affecter l'activité MYC dans les tumeurs gastriques. En outre, la présence de MYC
mutations a été associée à des métastases à distance. Toutefois, d'autres recherches sont nécessaires pour clarifier si Les mutations MYC de jouer un rôle dans le processus métastatique.
hypométhylation et mutations ponctuelles ont été plus fréquemment observés dans le type diffus par rapport aux tumeurs de type intestinal. Ainsi, nos résultats confirment que ces deux sous-types histologiques suivent différentes voies génétiques et peuvent être deux entités distinctes [67].
surexpression et promoteur hypométhylation peut avoir un rôle dans le processus de cancérogenèse gastrique. MYC
déréglementation a été associée principalement aux caractéristiques de mauvais pronostic. Nos résultats renforcent également la présence de différentes voies impliquées dans de type intestinal et de type diffus carcinogenèse gastrique. Ainsi, nos résultats suggèrent que MYC peut être un marqueur utile pour la stratification clinique et le pronostic.
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