PLoS ONE: CEACAM6 favorise Gastric invasion cancéreuses et les métastases en induisant une transition épithéliale-mésenchymateuse par voie PI3K /Akt Pathway

Résumé

surexprimée CEACAM6 dans les tissus tumoraux jouent un rôle important dans l'invasion, la métastase et la résistance à anoïkose dans une variété des cancers humains. Nous avons récemment rapporté que l'expression CEACAM6 est régulée positivement dans le cancer gastrique (GC) tissus et promu métastases GC. Nous rapportons ici que CEACAM6 favorise métastases péritonéales
vivo
et est négativement corrélé avec l'expression E-cadhérine dans les tissus du GC. Surexprimée CEACAM6 induite transition épithéliale-mésenchymateuse (EMT) en GC, tel que mesuré par des augmentations dans les marqueurs de l'EMT N-cadhérine, Vimentin et Slug tandis que l'expression E-cadhérine a été diminuée dans les cellules GC CEACAM6 surexprimant; résultats opposés ont été observés dans les cellules CEACAM6-taire. En outre, l'expression E-cadhérine était corrélée négativement avec la profondeur de l'invasion tumorale, métastase ganglionnaire et le stade TNM dans les tissus du GC. En outre, CEACAM6 matrice élevée métalloprotéinase-9 (MMP-9) l'activité en GC et-MMP-9 anticorps anti pourrait inverser l'invasion croissante et la migration induite par CEACAM6. CEACAM6 a également augmenté les taux de Akt phosphorylé, qui est impliquée dans la progression d'une variété de tumeurs humaines. Nous avons observé en outre que LY294002, un inhibiteur de la PI3K, pourrait inverser EMT CEACAM6 induite par la transition mésenchymateuses-épithéliale. Ces résultats suggèrent que CEACAM6 améliore l'invasion et les métastases en GC en favorisant EMT via la voie de signalisation PI3K /AKT

Citation:. Zang M, Zhang B, Zhang Y, Li J, Su L, Zhu Z, et al . (2014) CEACAM6 Favorise gastrique Invasion du cancer et métastase par Induire Transition épithéliale-mésenchymateuses via PI3K /AKT voie de signalisation. PLoS ONE 9 (11): e112908. doi: 10.1371 /journal.pone.0112908

Editeur: Chun-Ming Wong, Université de Hong Kong, Hong Kong

Reçu: 7 Août 2014; Accepté le 16 Octobre 2014; Publié le 14 Novembre, 2014

Droit d'auteur: © 2014 Zang et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données:. La auteurs confirment que toutes les données sous-jacentes les résultats sont entièrement disponibles sans restriction. Toutes les données pertinentes sont dans le papier

Financement:. Ce travail a été soutenu par des subventions de la National Science Foundation naturelles de la Chine (n ° 81172324, n ° 91229106, n ° 81272749, et n ° 81372231), et projet clé du Comité de Shanghai Education (n ° 12ZZ105 et No.12ZZ102) et de la Commission des sciences et de la technologie de la municipalité de Shanghai (n ° 13ZR1425600). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

GC est l'une des tumeurs les plus courantes malignes et un problème de santé majeur dans le monde entier, en particulier dans les pays d'Asie orientale tels que le Japon, la Corée, la Chine, où il est la deuxième cause de décès liés au cancer [1] - [3]. Carcinoembryonnaire molécule d'adhésion cellulaire liée antigène-6 (CEACAM6) est un glycosylphosphatidylinositol (GPI), membre de la superfamille des immunoglobulines lié en surexprimée dans une variété de cancers humains, en particulier les cancers gastro-intestinaux [4], et fonctionne comme une molécule d'adhésion intercellulaire [4] - [6]. Bien que CEACAM6 est une surface de cellule à ancre GPI glycoprotéine il manque un transmembranaire ou un domaine intracellulaire, mais est capable d'influencer les événements de signalisation intracellulaire et joue un rôle important dans la progression du cancer gastro-intestinal [4], [6] - [8]. des molécules ancrées par GPI sont souvent co-localisés aux petits microdomaines dans la membrane plasmique [9], qui peut activer les cascades de signalisation en aval telles que la signalisation de l'intégrine voie [10]. CEACAM6 agit comme un oncogène dans des tumeurs et favorise l'invasion du cancer, les métastases, et la résistance à anoïkose chimiorésistance, et inhibe la différenciation [7], [8], [11]. Nous avons récemment rapporté que l'expression de CEACAM6 est régulée positivement et associée à des métastases ganglionnaires dans les tissus du GC [12]. Cependant, les mécanismes par lesquels les influences CEACAM6 transduction du signal intracellulaire en GC restent à déterminer.

épithéliale-mésenchymateuse transition (EMT) est non seulement un processus physiologique au cours du développement embryonnaire ou la régénération des tissus, mais aussi un élément pathologique la progression du cancer, impliquant une métastase tumorale, l'apoptose et la résistance à la sénescence [13] - [15]. EMT indique toujours un pronostic clinique pauvres dans les cancers humains. Un certain nombre de mécanismes pertinents pour EMT initiation ont été documentés, y compris le TGF-β, IL-6, PI3K /AKT, RAF /MAPK et voies SRC [15] - [18]. Dans notre étude précédente, nous avons observé l'activation de SRC induite CEACAM6 dans les cellules du GC [12], et observé une augmentation du nombre de cellules CEACAM6 surexprimant broche en forme par rapport aux cellules témoins. Par conséquent, nous étions très intéressés à déterminer la relation entre CEACAM6 et EMT dans les cellules du GC. Bien que la corrélation négative entre CEACAM6 et EMT a été enregistrée dans les carcinomes pancréatiques [19], les mécanismes par lesquels CEACAM6 réglemente EMT sont mal compris.

Dans cette étude, nous avons encore examiné les effets et les voies potentielles de CEACAM6 en GC invasion et la métastase, et étudié sa corrélation avec EMT.

Matériel et méthodes

Ethique Déclaration

consentement éclairé écrit dans l'étude a été obtenue à partir de tous les participants. Le protocole d'étude a été approuvé par le comité d'éthique de l'Hôpital Ruijin, École de médecine de l'Université de Shanghai Jiao Tong. procédures animales ont été réalisées selon un protocole approuvé par le Comité institutionnel des animaux soin et l'utilisation (IACUC) à Shanghai Jiao Tong University, Shanghai, Chine.

Les lignées cellulaires et des échantillons de tissus

L'humain lignées de cellules GC SGC-7901, MKN-45 et MKN-28 ont été achetés auprès des instituts de Shanghai pour les sciences biologiques, l'Académie chinoise des sciences. Les cellules ont été cultivées à 37 ° C dans 5% de CO _{2 et la saturation d'humidité dans le milieu RPMI-1640 contenant du sérum bovin fœtal à 10%.}

tumeur gastrique et les tissus non tumoraux adjacents ont été obtenus auprès de 93 patients atteints de GC qui ont subi une chirurgie curative à Shanghai School of Medicine hôpital affilié Ruijin Université Jiaotong de 2010 à 2013. Les patients se composait de 69 hommes et 24 femmes avec un âge moyen de 62,1 ans (extrêmes, 30-85 ans). Aucun des patients avaient reçu une chimiothérapie ou une radiothérapie avant la chirurgie. les données clinicopathologiques ont été recueillies et la mise en scène de la tumeur pathologique a été déterminée selon la classification UICC TNM. typage histologique a été réalisée par au moins deux pathologistes experts travaillant indépendamment de manière à double insu. Cette étude a été approuvée par le Comité d'éthique de l'Hôpital Ruijin de Shanghai, et tous les patients ont été pleinement informé des procédures expérimentales.

La construction du vecteur et de transfection

pleine longueur CEACAM6 ADNc a été obtenu par RT- PCR à partir d'ARN total extrait à partir d'échantillons de GC. Les séquences d'amorce étaient 5'-CCGGAATTCCCATGGGACCCCCCTCAGCCC-3 '(avant) et 5'-TCCCCCGGGGCTATATCAGAGCCACCCTGG-3' (inverse). Nous avons assemblé un pIRES2-eGFP-CEACAM6 construire en insérant CEACAM6 ADNc dans pIRES2-eGFP vecteur. Nous avons ensuite transfecté pIRES2-eGFP-CEACAM6 ou pIRES2-eGFP vecteur dans les cellules SGC-7901 et MKN-45 en utilisant Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, États-Unis) conformément au protocole du fabricant. Des clones stables ont été sélectionnés par un traitement continu avec G418 (1,2 mg /ml; Gibco, New York, USA):

Vecteur lentiviral construction

Basé sur les données génétiques de CEACAM6 humaines, une paire de séquences d'oligonucléotides. et des séquences de contrôle négatif ont été conçus et synthétisés par Shanghai Novobio Scientific Co., Ltd. séquences shRNA étaient les suivantes: CEACAM6, 5'-CACCGCCGGACAGTTCCATGTATACGAATATACATGGAACTGTCCGG-3 '(avant), et 5'-AAAACCGGACAGTTCCATGTATATTCGTATACATGGAACTGTCCGGC-3' (inverse); contrôle, 5'-CACCGCTACACAAATCAGCGATTTCGAAAAATCGCTGATTTGTGTAG-3 '(avant), et 5'-AAAACTACACAAATCAGCGATTTTTCGAAATCGCTGATTTGTGTAGC-3' (inverse). CEACAM6 shRNA a été sous-cloné dans lentiviral vecteur pL /shRNA /F pour obtenir une construction pL /shRNA /SHR-CEACAM6. Puis pL /shRNA /SHR-CEACAM6 ou contrôler les vecteurs lentiviraux ont été transfectées dans MKN-28 cellules de GC. les cellules transfectées de manière stable ont été sélectionnées par un traitement avec 5 ug /ml de blasticidine et ont été utilisés pour l'identification et de plus amples recherches.

Western blot

Les cellules ont été récoltées et lysées en utilisant un tampon RIPA (Solarbio, Beijing, Chine ) contenant 1% d'inhibiteurs de la protéase PMSF. Un kit de dosage BCA (Pierce, Rockford, États-Unis) a été utilisé pour mesurer la concentration totale en protéines. Des quantités équivalentes de protéine ont été séparées par 10% de SDS-PAGE et les protéines résolues transférées sur des membranes de PVDF. Les membranes ont été bloquées avec 5% de lait écrémé pendant 2 heures et ensuite incubées avec des anticorps primaires pendant une nuit à 4 ° C. Les anticorps primaires ont été les suivants: CEACAM6 (1:500; Abcam, USA), E-cadhérine (1:500; Cell Signaling Technology (CST), États-Unis), la N-cadhérine (1:500; CST, USA), vimentine ( 1:1000; CST, USA), Slug (1:500; CST, USA), p-AKT (Ser473) (1:1000; CST, USA), AKT totale (1:1000; CST, USA) et GAPDH ( 1:10000; Abcam, États-Unis). Les membranes ont été ensuite incubées avec l'anticorps secondaire pendant 2 h à température ambiante et ont été visualisées en utilisant un système de détection de chimioluminescence amplifiée (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, USA) conformément au protocole du fabricant.

Immunofluorescence

cellules ont été cultivées sur des lamelles pendant 24 h, puis fixées avec du paraformaldehyde à 4% pendant 15 min. Les cellules ont été lavées avec du PBS, puis perméabilisées avec 0,5% de Triton X-100 pendant 20 minutes et bloquées avec 5% de BSA pendant 30 minutes à température ambiante. On a ensuite coloré les cellules avec l'anticorps CEACAM6 (01h50; Abcam) à 37 ° C pendant 2 h, suivie d'une incubation avec un anticorps secondaire fluorescent pendant 1 h à température ambiante. Les noyaux ont été colorés avec DAPI. Anticorps rhodamine phalloïdine (1:150; cytosquelette) a été utilisé pour visualiser le cytosquelette des cellules GC. Les lames ont été analysées et imagé sur un microscope à fluorescence.

immunohistochimie

Sections de 4 um d'épaisseur ont été découpées dans des blocs de tissus inclus dans la paraffine puis déparaffinées et réhydratées. coloration immunohistochimique de coupes a été réalisée selon le protocole DAKO, en utilisant des souris anti-CEACAM6 (1:100; Abcam) et E-cadhérine (1:100; cSt) à 4 ° C pendant une nuit. Les lames ont été ensuite incubées avec un anticorps secondaire marqué à la HRP et visualisées par la diaminobenzidine. Deux pathologistes qui ont été aveuglés à toutes les données des patients évalués indépendamment et ont marqué les sections. Immunohistochimie tache score = cellules positives partition + coloration score d'intensité. Le pourcentage de cellules positives a été notée comme suit: 0 (10%), 1 (10-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) et 4 (> 75%). l'intensité de la coloration immunohistochimique a été notée comme suit: 0 (pas de coloration), 1 (faible coloration), 2 (coloration brune), et 3 (coloration brun foncé). Les scores totaux de ≥3 ont été définies comme positives pour simplifier l'analyse des données. Pour analyser la corrélation entre CEACAM6 et d'expression E-cadhérine, Image-Pro Plus version 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Bethesda, MD, USA) a été utilisé pour quantifier l'expression de CEACAM6 et E-cadhérine sur 20 échantillons.

gélatine zymographie

Pour examiner MMP-9 activité, zymographie a été réalisée en utilisant 10% de gels SDS-pAGE contenant 1 mg /ml de gélatine (Sigma). En bref, les cellules ont été cultivées GC dans un milieu RPMI-1640 exempt de sérum pendant 24 h et le surnageant a ensuite été recueilli et centrifugé à 1000 rpm pendant 5 min. Les gels ont été lavés deux fois dans du tampon de renaturation (2,5% de Triton X-100) pendant 30 min à chaque fois pour éliminer le SDS après électrophorèse, puis mis à incuber à 37 ° C pendant 24 h dans un tampon de réaction (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 5 mM de CaCl2, 150 mM de NaCl). On a ensuite coloré les gels avec 0,5% de bleu brillant de Coomassie R-250 pendant 2 heures et on l'a décoloré les gels dans un tampon (30% de methanol, d'acide acétique à 10%). bandes transparentes claires en arrière-plan de la coloration au bleu représentent les activités de gélatinase.

migration cellulaire et l'invasion des essais

Pour la migration cellulaire et l'invasion des essais, un total de 1 x 10 ^{5 cellules ont été en suspension dans sans sérum RPMI-1640 avec ou sans MMP-9 anticorps (Abcam, 2 ug /200 ul) et étalées dans transwell chambres (8 pm pour plaque de 24 puits; Corning Costar, NY, USA) avec ou sans Matrigel ( BD Bioscience, CA, USA) selon les protocoles du fabricant. Pour les deux essais, un milieu contenant 10% de FBS a été ajouté à la chambre inférieure en tant que facteur chimiotactique. Après 24 h de culture, les cellules ont été fixées par le formol à 10% et colorées par 0,5% de violet cristallisé. Enfin, les cellules dans la chambre inférieure ont été photographiés et comptés par microscopie inversée.}

modèle de xénogreffe de souris Nude

Quatre semaines vieux mâle BALB /c souris nude (Institut de Zoologie, China Academy of Sciences) ont été utilisées pour évaluer le rôle de CEACAM6 dans péritonéale propagation
vivo
. Les souris nues ont été logés dans un environnement exempt d'organismes pathogènes spécifiques à l'Unité des animaux de laboratoire, École de médecine, Université de Shanghai Jiao Tong, Chine. Les souris ont reçu des soins humains et les protocoles d'études ont été réalisées selon un protocole approuvé par le Comité des soins et l'utilisation des animaux institutionnels (IACUC) à Shanghai Jiao Tong University, Shanghai, Chine. Un total de 2 × 10 ^{6 SGC-7901-CEACAM6 ou cellules SGC-7901-NC ont été injectés dans cinq souris cavité abdominale de chaque groupe (randomisation). Les souris ont été euthanasiées le 30e jour après l'injection, et les masses abdominales ont été imagées et photographiés. Toutes les expériences ont été réalisées en conformité avec les recommandations officielles de la communauté animale chinoise.}

Statistiques

Student t
-test a été utilisé pour examiner les différences statistiques entre les deux groupes . Les corrélations entre l'expression E-cadhérine dans les tissus du GC et les paramètres clinicopathologiques et l'expression de CEACAM6 ont été analysés par chi-carré ou test exact de Fisher ou Pearson analyse de coefficient de corrélation. Les données sont présentées sous forme de moyenne ± écart-type. P
< 0,05 et P
. ≪ 0,01 a été considérée comme statistiquement significative et très significative, respectivement

Résultats

CEACAM6 affecte la morphologie des cellules et la cytosquelette

Nos résultats précédents impliquaient que les cellules MKN-28 GC expriment intrinsèquement des niveaux élevés de CEACAM6, tandis que les cellules SGC-7901 et MKN-45 GC expriment des niveaux faibles [12]. La surexpression de CEACAM6 dans SGC-7901 et MKN-45 cellules GC et de l'atténuation de l'expression CEACAM6 dans les cellules MKN-28 GC par pL /shRNA /SHR-CEACAM6 vecteurs lentiviraux ont été confirmés au niveau des protéines par analyse western blot (Fig. 1A). tests d'immunofluorescence ont toujours montré que les cellules SGC-7901-CEACAM6 exprimé plus de protéines que CEACAM6 SGC-7901-NC cellules (Fig. 1B).

Fait intéressant, la morphologie des cellules a été modifié à la suite CEACAM6 l'atténuation et la surexpression. Par comparaison avec les cellules témoins, les cellules CGT-7901-CEACAM6 et MKN-45-CEACAM6 présentaient une morphologie plus mésenchymateuses analogue, et sont en fuseau et fusiformes (Fig. 1C). A l'inverse, la transition typique de la morphologie epitheliale mésenchymateuses a été détectée dans les cellules MKN-28-SH par rapport aux cellules MKN-28-nc (Fig. 1C). Toutefois, il était difficile de savoir si CEACAM6 surexpression a eu un effet sur le cytosquelette, ainsi coloration immunofluorescence de coloration F-actine a été réalisée. Fait intéressant, les cellules en forme fusiforme-plus grande taille ont été observés pour MKN-45-CEACAM6 et lignes SGC-7901-CEACAM6 par rapport aux cellules témoins (Fig. 1D).

CEACAM6 est associée négativement à la E-cadhérine dans tissus GC

l'analyse immunohistochimique a été utilisé pour déterminer les niveaux d'expression E-cadhérine dans les tissus cancéreux et les tissus non tumoraux adjacents appariés. La coloration immunohistochimique a montré une expression E-cadhérine était plus faible dans les tissus tumoraux que celle dans les tissus non tumoraux adjacents, et a révélé que la E-cadhérine est principalement situé dans la cytomembranaire des cellules épithéliales (Fig. 2D, E, F). Ensuite, nous avons étudié la relation entre l'expression E-cadhérine et les caractéristiques clinico de GC, et a constaté que downregulated E-cadhérine était associée à une profondeur de l'invasion ( P
= 0,046), métastase ganglionnaire ( P
= 0,013), et le stade TNM ( P
= 0,035), mais pas avec d'autres facteurs clinicopathologiques y compris le sexe, l'âge, ou la différenciation (tableau 1). En outre, CEACAM6 était corrélée négativement avec EMT dans les carcinomes pancréatiques [19] et CEACAM6 suppression pourrait augmenter l'activité du promoteur E-cadhérine dans le cancer colorectal [20].

En outre, nous avons étudié la corrélation entre la E-cadhérine et d'expression CEACAM6 en glucocorticoïdes par série section immunohistochimie (20 échantillons). l'expression CEACAM6 dans les tissus tumoraux est plus élevé que dans les tissus appariés non tumorales (Fig. 2A, B, C), en accord avec nos résultats précédents [12]. Fait intéressant, nous avons constaté que l'expression CEACAM6 était négativement corrélé avec l'expression E-cadhérine dans les tissus du GC par Pearson analyse du coefficient de corrélation ( P
< 0,01;. La figure 2G).

CEACAM6 induit EMT dans cellules GC

protéines liées à EMT-dans les cellules du GC ont été évalués par une analyse western blot. Nous avons observé que la N-cadhérine, les taux de protéine Slug vimentine et ont augmenté, tandis que la E-cadhérine a été diminuée dans les cellules surexprimant CEACAM6 par rapport à leurs cellules témoins respectifs (fig. 3A, B). les résultats ont été obtenus après Converse CEACAM6 a été renversé en MKN-28 cellules (Fig. 3C, D). Ces résultats suggèrent un rôle fonctionnel pour CEACAM6 dans la régulation de l'EMT dans les cellules du GC. En outre, ces observations dans les cellules du GC étaient similaires avec les résultats dans le tissu GC.

CEACAM6 élève l'activité de MMP-9 dans les cellules du GC

Il est bien connu que l'adhérence, la dégradation et la migration sont enjeux majeurs dans les métastases du cancer. Zymographie sur gélatine a été effectuée pour examiner les effets de CEACAM6 sur l'activité de MMP-9, ce qui est important dans la dégradation de l'ECM. MMP-9 dans l'activité SGC-7901-CEACAM6 et les cellules MKN-45-CEACAM6 a été augmentée par rapport à leurs groupes témoins (Fig. 4A, B). Nous avons ensuite cherché à déterminer si l'augmentation de l'activité de MMP-9 induite par CEACAM6 dans des cellules GC a donné lieu à une augmentation réelle du nombre d'envahir les cellules et la migration. Nous avons examiné ainsi la contribution des anti-MMP-9 anticorps actif ou PBS aux cellules GC CEACAM6 surexprimant. Comme prévu, il y avait des différences significatives dans le nombre d'envahir et la migration des cellules dans des cellules d'anticorps traités par rapport aux cellules traitées avec du STP ( P
< 0,01;. La figure 4C, D, E, F).

CEACAM6 upregulates AKT phosphorylée dans les cellules du GC

Nous avons déjà pu observer que l'activité SRC a été induite par CEACAM6 dans les cellules GC SGC-7901. AKT est une protéine en aval du SRC et est considérablement associée à une OGD, l'invasion et les métastases dans la progression tumorale. Nous avons donc évalué l'activité de AKT dans les cellules GC CEACAM6 surexprimant. Transfert de Western a montré que la phosphorylation de Akt à la serine 473 a été fortement augmentée dans les cellules surexprimant CEACAM6 GC par rapport aux groupes témoins (Fig. 5A, B). Afin d'examiner si des changements de l'EMT ont été induites par CEACAM6 via la voie PI3K /AKT, les cellules CGT-7901-CEACAM6 et MKN-45-CEACAM6 ont été traitées avec 100 nM LY294002 pendant 24 h. Fait intéressant, la E-cadhérine a été augmentée et la N-cadhérine a été réduite dans les cellules surexprimant CEACAM6 LY294002 traités par rapport aux témoins, tel que mesuré par analyse par Western blot (Fig. 5C et D).

CEACAM6 favorise la propagation du péritoine in vivo

Enfin, nous avons examiné les effets de la surexpression CEACAM6 sur péritonéale propagation et la métastase
vivo
. Nous avons injecté SGC-7901-CEACAM6 et SGC-7901-NC cellules dans les abdomens de souris nues. propagation péritonéale étendue a été observée dans le groupe SGC-7901-CEACAM6 par rapport au groupe SGC-7901-NC (Fig. 6A). Il y avait des nodules péritonéaux significativement plus visibles dans le groupe SGC-7901-CEACAM6 que dans le groupe témoin (5.400 ± 0.510 vs
1.400 ± 0.245, P
. ≪ 0,01;. La figure 6B ). En outre, la surexpression de CEACAM6 améliorer la métastase
vivo
a également été rapporté dans le cancer du pancréas [19].

Discussion

GC est la deuxième cause des décès liés au cancer dans le monde [1]. Des preuves croissantes indiquent que CEACAM6 joue un rôle important dans le cancer gastro-intestinal progression [7], [20] - [22], et CEACAM6 est plus largement distribué que le CEA (CEACAM5) dans les tissus normaux, avec une expression significative dans de nombreux épithéliums [4]. influences CEACAM6 événements de signalisation intracellulaire par homophile et l'adhérence hétérophiles avec d'autres CEACAMs ou intégrines [23], [24]. Le but de cette étude était d'examiner les contributions des protéines GPI ancrées CEACAM6 dans la progression de la GC.

Fait intéressant, nous avons observé que la morphologie des cellules et de la structure du cytosquelette a été modifiée par surexpression stable et downregulation CEACAM6 dans les cellules du GC. CEACAM6 cellules surexprimant mésenchymateuses étaient plus ressemblant et présentent une forme de broche et fusiforme, en plus des fibres de stress d'actine ont été détectés par rapport aux groupes de contrôle, dans un processus défini comme EMT. Le phénotype des cellules mésenchymateuses lui confère des propriétés migratoires et invasives plus [15]. Cette observation est cohérente avec la
vivo
résultats grâce à quoi CEACAM6 induit une vaste péritonéale propagation chez la souris nude. MET a été observée silençage suivante de CEACAM6 dans les cellules du GC. Ces observations ont démontré que CEACAM6 peut être impliqué dans l'induction de l'EMT en GC. Nous avons ensuite étudié la corrélation entre CEACAM6 et E-cadhérine, un marqueur de l'EMT, dans les tissus du GC par coloration immunohistochimique. Comme prévu, la corrélation négative significative a été observée entre CEACAM6 et E-cadhérine et E-cadhérine expression a été associée à la profondeur de l'invasion tumorale, métastase ganglionnaire et le stade TNM dans les tissus du GC. En outre, CEACAM6 promu métastase ganglionnaire ( P
= 0,001) dans 98 tissus GC dans notre précédente étude [12]. Résultats précédents ont montré que CEACAM6 atténuation augmentation de l'activité du promoteur E-cadhérine dans le cancer colorectal [20]. Sur la base des résultats mentionnés ci-dessus, nous avons postulé que CEACAM6 promu invasion GC et les métastases en induisant EMT et peut servir de marqueur mésenchymateuses.

métastase est la principale cause de décès associé au cancer, mais a été difficile à étudier car elle implique une série d'événements stochastiques rares. Un certain nombre de voies de signalisation potentiels pertinents pour les métastases du cancer ont été illustrés, y compris la voie PI3K /AKT, MAPK /ERK, FAK-SRC, JAK /STAT, NF-kβ et voies MMP [25] - [27]. Dans cette étude, la surexpression de CEACAM6 élevée MMP-9 activité et-MMP-9 anticorps anti pourrait inverser les propriétés invasives et migratoires croissants induits par CEACAM6. initiation EMT est significativement corrélée avec les métastases du cancer, et induit propriétés de cellules souches, empêche l'apoptose et la sénescence, et contribue à l'immunosuppression dans la progression du cancer [15]. EMT peut être induite par l'activation de la voie de signalisation PI3K /AKT [28], [29]. les fonctions de CEACAM6 comme une molécule d'adhésion intercellulaire et peuvent former de plus grands radeaux lipidiques en interaction avec elle-même ou d'autres CEACAMs, activant ainsi les cascades de signalisation en aval, tels que les intégrines et les voies PI3K /AKT [10], [30]. Par conséquent, nous avons examiné les effets de la surexpression CEACAM6 sur les niveaux de phosphorylation de Akt dans des cellules GC. les niveaux d'AKT phosphorylée ont été augmentés dans les cellules surexprimant CEACAM6, en accord avec les résultats antérieurs ont noté dans les cancers du pancréas [8], [11]. Selon ces observations, nous proposons une hypothèse selon laquelle EMT induite CEACAM6-produit par l'activation de la cascade de signalisation dans GC PI3K /AKT. En outre, les cellules surexprimant CEACAM6 traitées avec LY294002, un inhibiteur de PI3K, a subi une inversion de TEM par MET. Ainsi, nous concluons que CEACAM6 induit EMT en activant la voie de signalisation en GC et peut servir comme une cible potentielle dans le traitement de la tumeur PI3K /AKT.

En conclusion, nous avons montré que CEACAM6 agit comme un oncogène par la promotion de l'EMT via l'activation PI3K /AKT en GC. En outre, E-cadhérine est nettement downregulated dans les tissus du GC que les tissus non tumoraux adjacents appariés. CEACAM6 favorise l'invasion et les métastases
in vitro
et
vivo
, et peut être un nouveau marqueur diagnostique et pronostique potentiel et nouvelle cible pour GC thérapie.

soutien Liste S1 information. The ARRIVER lignes directrices. Toutes les expériences in vivo dans notre manuscrit ont été exportés en conformité avec les lignes directrices ARRIVE
doi:. 10.1371 /journal.pone.0112908.s001
(DOC)

Remerciements

Nous tient à remercier Xuehua Chen et Zhang Jianian pour l'assistance technique, à Beiqin Yu pour son soutien matériel.

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