PLOS NËMMEN: CEACAM6 förderen Gastric Cancer Missiounen an Metastasen vun via PI3K /AKT sécher Passerelle Epithelial-Mesenchymal Transitioun Pinguin

Wat VerfÜgung

Overexpressed CEACAM6 zu entholl Stoffer spillt eng wichteg Roll an der Invasioun, Metastasen an anoikis Resistenz zu enger Rei vu mënschlechen Cancers. Mir gemellt kuerzem datt CEACAM6 Ausdrock vun Gastric Kriibs (GC) Stoffer a gefördert GC Metastasen upregulated ass. Hei, mir Rapport datt CEACAM6 peritoneal Investitiounen zu ënnerstëtzt VerfÜgung VIVO VerfÜgung an ass negatif mat E-cadherin Ausdrock am GC Stoffer soll. Overexpressed CEACAM6 entschlof epithelial-mesenchymal Transitioun (EMT) zu GC, wéi déi Erhéijunge vun de EMT lues gemooss N-cadherin, Vimentin an Slug iwwerdeems E-cadherin Ausdrock war zu CEACAM6-overexpressing GC Zellen ofgeholl; misst Resultater goufen am CEACAM6-entsat Zellen observéiert. Doriwwer eraus, war E-cadherin Ausdrock negatif mat Déift vun entholl Invasioun, lymph Node Metastasen an TNM Etapp am GC Stoffer soll. Ausserdeem, CEACAM6 nik Matrixentgasung metalloproteinase-9 (MMP-9) Aktivitéit am GC, an anti-MMP-9 antibody konnt den waarden Invasioun an Migratioun Géigendeel vun CEACAM6 entschlof. CEACAM6 fräi och de Niveau vun phosphorylated AKT, déi an de Werdegang vun enger Rei vu mënschlechen erhéijen Équipe ass. Mir observéiert weider dass LY294002, engem PI3K inhibitor, ëmgedréint konnt mesenchymal-epithelial Transitioun CEACAM6-entschlof EMT via. Dës Conclusiounen hindeit datt CEACAM6 Invasioun an Metastasen am GC verbessert duerch EMT via de PI3K /AKT sécher Passerelle Spur VerfÜgung

Fro:. Zang M, Zhang B, Zhang Y, Li J, Su L, Zhu Z, et al . (2014) CEACAM6 förderen Gastric Cancer Missiounen an Metastasen vun Pinguin Epithelial-Mesenchymal Transitioun via PI3K /AKT sécher Passerelle. PLoS NËMMEN 9 (11): e112908. Doi: 10.1371 /journal.pone.0112908 VerfÜgung

Redakter: Chun-Ming Wong, Universitéit vun Hong Kong, Hong Kong VerfÜgung

Arnaque: 7. August 2014; Akzeptéiert: 16 Oktober 2014; Publizéiert: 14. November 2014 VerfÜgung

Copyright: © 2014 Zang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Data Disponibilitéit:. D' Auteuren confirméieren datt all Daten d'Conclusiounen si voll sinn ouni Restriktioun Basisdaten. All Daten sinn bannent de Pabeier VerfÜgung

Funding:. Dës Aarbecht vun Stipendien aus der National Natural Science Foundation of China (Nr 81172324, Nr 91229106, Nr 81272749, an Nr 81372231) ënnerstëtzt huet, an Key Project vu Shanghai Education Comité (Nr 12ZZ105 an No.12ZZ102) a Wëssenschaft an Technologie Kommissioun vu Shanghai Gemeng (Nr 13ZR1425600). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

GC ass eent vun de meescht genannten malignant erhéijen an engem groussen Gesondheet Thema weltwäit, besonnesch am Osten asiatesch Länner wéi Japan, Korea, China, wou et déi zweet Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang ass den Doud [1] - [3]. Carcinoembryonic antigen-Zesummenhang Zell Haftung Protein 6 (CEACAM6) ass eng glycosylphosphatidylinositol (GPI) -linked immunoglobulin superfamily Member datt zu enger Rei vu mënschlechen Cancers overexpressed ass, virun allem gastrointestinal Cancers [4], a Fonctioun als intercellular Haftung Protein [4] - [6]. Obwuel CEACAM6 ass e-GPI verankert Zell Uewerfläch glycoprotein et engem transmembrane oder intracellular Domain Éloquence, mä et kënnen intracellular sécher Evenementer un Afloss a spillt eng wichteg Roll an Werdegang gastrointestinal Kriibs [4], [6] - [8]. GPI-verankert Molekülle oft sinn Co-en der ze kleng Membran microdomains an de Plasma Membran [9], déi afgerappt sécher CASCADES wéi d'integrin sécher Passerelle aktivéieren kann [10]. CEACAM6 Akten als oncogene an erhéijen an ënnerstëtzt Kriibs Invasioun, Metastasen, anoikis Resistenz an chemoresistance, an bremst dat [7], [8], [11]. Mir gemellt kuerzem datt CEACAM6 Ausdrock upregulated ass a mat lymph Node Metastasen am GC Stoffer verbonne [12]. Allerdéngs bleiwen d'Mechanismen duerch déi CEACAM6 Afloss intracellular Signal transduction am GC alles ze gin. VerfÜgung

Epithelial-mesenchymal Transitioun (EMT) ass net nëmmen eng Fro gestallt Prozess während embryonal Entwécklung oder Otemschwieregkeeten Erhuelung, mä och e agebousst Element an Kriibs Werdegang, sensibiliséieren entholl Metastasen, apoptosis an senescence Resistenz [13] - [15]. EMT bedeit ëmmer aarmséileg Medeziner hätt am mënschleche Cancers. Eng Zuel vun de Mechanismen relevant ze Initiatioun EMT hunn dokumentéiert ginn, dorënner d'TGF-β, IL-6, PI3K /AKT, RAF /MAPK, an SRC Weeër [15] - [18]. An eiser leschter Etude, observéiert mir CEACAM6-entschlof SRC Aktivéierung am GC Zellen [12], a observéiert fräi Zuelen vun CEACAM6-overexpressing Zellen spindle-gebuerene Verglach mat Kontroll Zellen. Dofir ware mer d'Relatioun tëschent CEACAM6 an EMT zu Bestëmmung am GC Zellen ganz interesséiert. Obwuel negativ Korrelatioun tëscht CEACAM6 an EMT gouf zu pancreatic carcinomas [19], d'Mechanismussen opgeholl duerch déi CEACAM6 EMT reguléieren si ganz wéineg verstan. VerfÜgung

An dëser Etude, iwwerpréift mer weider d'Effekter a Potential Curriculum vun CEACAM6 am GC Invasioun an Metastasen, a propagéieren seng Korrelatioun mat EMT. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

IFLA- breakpoint VerfÜgung

Schrëftlech Awëllegung vun der Etude gouf vun all de Bedeelegten kritt. D'Etude Protokoll war vun der Ethik Comité vun Ruijin Spidol, Shanghai JIAO Tong University School of Medezin virausgesat. Déier Prozedure goufen no engem vun de Finanzpolitiker Déier Care an Benotzt Comité (IACUC) op Shanghai JIAO Tong University, Shanghai, China guttgeheescht Protokoll gemaach. VerfÜgung

Zell Linnen an Otemschwieregkeeten uplanzen VerfÜgung

De Mënsch GC Zell Linnen SGC-7901, MKN-45 an MKN-28 goufen aus Shanghai Institut fir biologesch Sciences, Chinese Akademie vun de Wëssenschaften kaaft. Zellen sech cultured bei 37 ° C an 5% CO _{2 an Samschten Fiichtegkeet an RPMI-1640 mëttelfristeg 10% An et Bovine serum wouvun. VerfÜgung}

Gastric entholl an bascht Net-tumorous Otemschwieregkeeten sech aus 93 Patiente kritt mat GC, dee vun 2010 bis 2013. D'Patienten curative Agrëff op Shanghai Jiaotong University School of Medezin laizistesch Ruijin Hospital mécht aus 69 Männer a 24 Fraen mat engem mëttleren Alter vu 62,1 Joer (Rei, 30-85 Joer). Keen vun de Patienten hu radiotherapy Chimiotherapie virewech ze gesin kritt. Clinicopathological Donnéeën sech gesammelt an agebousst entholl Stadium war no der UICC TNM klasséieren alles. Histological ennerluecht war vun op d'mannst zwee Expert pathologists standing onofhängeg vun enger duebel-blinded Moud schaffen. Dës Etude gouf vun der Ethik Comité vun Shanghai Ruijin Hospital guttgeheescht, an all Patienten ware komplett vun de experimentell Prozeduren informéiert. VerfÜgung

Vecteure Bau an transfection VerfÜgung

Full-Längt CEACAM6 cDNA vun RT- kritt huet Hinnen alleguer aus total aus GC Echantillon ofgebaut RNS. D'primer Message huet 5'-CCGGAATTCCCATGGGACCCCCCTCAGCCC-3 "(no) an 5'-TCCCCCGGGGCTATATCAGAGCCACCCTGG-3" (ëmgedréint). Mir zesummegebaute pIRES2-eGFP-CEACAM6 andeems CEACAM6 cDNA an Vecteure pIRES2-eGFP bauen. Mir transfected nächst pIRES2-eGFP-CEACAM6 oder pIRES2-eGFP Vecteure an SGC-7901 an MKN-45 Zellen mat Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Karlsbad, USA) am Aklang mat de Protokoll d'Hiersteller. Stabil clones sech duerch bestänneg Behandlung mat G418 ausgewielt (1,2 mg /ml; Gibco, New York, USA) VerfÜgung

Lentiviral Vecteure Konstruktioun VerfÜgung

Baséierend op mënschlech CEACAM6 Gentherapie Donnéeën, Pair vu oligonucleotide Message. an negativ Kontroll Message huet sech entwéckelt a Wierderbuch vun Shanghai Novobio wëssenschaftlech Co., Ltd. shRNA Message sech wéi follegt zesummen: CEACAM6, 5'-CACCGCCGGACAGTTCCATGTATACGAATATACATGGAACTGTCCGG-3 "(no), an 5'-AAAACCGGACAGTTCCATGTATATTCGTATACATGGAACTGTCCGGC-3" (ëmgedréint); Kontroll, 5'-CACCGCTACACAAATCAGCGATTTCGAAAAATCGCTGATTTGTGTAG-3 "(no), an 5'-AAAACTACACAAATCAGCGATTTTTCGAAATCGCTGATTTGTGTAGC-3" (ëmgedréint). CEACAM6 shRNA war an pl /shRNA /F lentiviral Vecteure subcloned engem pl /shRNA /SHR-CEACAM6 bauen ze kréien. Dunn pl /shRNA /SHR-CEACAM6 oder lentiviral vectors Kontroll huet an MKN-28 GC Zellen transfected. Stably transfected Zellen sech duerch Behandlung mat 5 μg /ml blasticidin ausgewielt a sech fir Identifikatiouns- an weiderer Fuerschung benotzt ginn. VerfÜgung

Western blotting VerfÜgung

BTS sech gesammelt an lysed benotzt Ripa Prellbock (Solarbio, Peking, China ) mat 1% PMSF protease inhibitors. A BCA assay Kit (Pierce, Rockford, USA) war déi ganzen FAQ Konzentratioun ze moossen. Gläichwäerteg Montanten vun FAQ sech vun 10% SDS-PAGE getrennt, an d'Saach Proteinen ze PVDF Schläimhait transferéiert. D'Schläimhait sech fir 2 h mat 5% z'iesse Mëllech gespaart an dann mat der Primärschoul antibodies Nuecht op 4 ° C incubated. Primärschoul antibodies sech wéi follegt zesummen: CEACAM6 (1:500; Abcam, USA), E-cadherin (1:500; Zell sécher Technology (CST), USA), N-cadherin (1:500; CST, USA), Vimentin ( 1:1000; CST, USA), Slug (1:500; CST, USA), p-AKT (Ser473) (1:1000; CST, USA), total AKT (1:1000; CST, USA) an GAPDH ( 1:10000; Abcam, USA). Schläimhait sech dann mat Première antibody fir 2 h bei Raumtemperatur incubated an huet mat enger verstäerkter chemiluminescence erkennen System (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, USA) am Aklang mat de Protokoll d'Hiersteller visualized. VerfÜgung

Immunofluorescent staining VerfÜgung

BTS sech cultured op coverslips fir 24 h an duerno mat 4% paraformaldehyde fir 15 min fest. Zellen sech mat PBS gewäsch, dann permeabilized mat 0,5% Triton X-100 fir 20 min an den 30 min bei Raumtemperatur mat 5% BSA gespaart. Mir Kierchefënster nächst d'Zellen mat CEACAM6 antibody (1:50; Abcam) bei 37 ° C fir 2 h, gefollegt vun incubation mat unisse Secondaire antibody fir 1 h bei Raumtemperatur. D'Käre sech mat DAPI Kierchefënster. Rhodamine phalloidin antibody (1:150; Cytoskeleton) benotzt gouf de cytoskeleton vun GC Zellen ze visualiséieren. Drënner waren op enger fluorescence microscope analyséiert a Radioberäich. VerfÜgung

Immunohistochemistry VerfÜgung

Moment vun 4 μm-décke aus paraffin-Ënnerbewosstsinn Otemschwieregkeeten Bleck geschnidde goufen an dann deparaffinized an rehydrated. Immunohistochemical staining vun Rubriken war no der DAKO Protokoll gesuergt, Maus mat anti-CEACAM6 (1:100; Abcam) an E-cadherin (1:100; CST) bei 4 ° C Iwwernuechtung. Drënner waren dann mat HRP-Label Secondaire antibody an visualized vun diaminobenzidine incubated. Zwee pathologists deen un all Patient Donnéeën blinded sech onofhängeg évaluéiert an domatter de Sektiounen. Immunohistochemistry stain stoung = positiv Zell stoung + staining Intensitéit stoung. De Prozentsaz vun positive Zellen war domatter wéi follegt: 0 (10%), 1 (10-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) an 4 (> 75%). Immunohistochemical staining Intensitéit graded sech wéi follegt: 0 (keng staining), 1 (schwaach staining), 2 (brong staining), an 3 (brong staining). Total Fändelen vun ≥3 sech als positive definéiert Donnéeën Analyse ze vereinfachen. Fir d'Korrelatioun tëscht CEACAM6 an E-cadherin Ausdrock, Image-Pro Plus Versioun 6.0 (Media Cybernetics Galaxy, Bethesda, MD, USA) analyséieren war fréier d'Expressioun vun CEACAM6 an E-cadherin op 20 Echantillonen zu ofgedonkelt. VerfÜgung

gelatin zymography VerfÜgung

MMP-9 Aktivitéit ze iwwerpréifen, huet zymography standing 10% SDS-PAGE gels benotzt wouvun 1 mg /ml gelatin (Fläch). Kuerz, goufen cultured GC Zellen zu serum-gratis RPMI-1640 mëttelfristeg fir 24 h an der supernatant war dann um Ziichter 1000 fir 5 min gesammelt an centrifuged. D'gels sech zweemol zu renaturation Prellbock (2,5% Triton X-100) zou fir 30 min all Zäit SDS ewechzehuelen der electrophoresis an dann op 37 ° C fir 24 h an enger Reaktioun Prellbock (50 mm Tris-HCl pH 7.5, incubated 5 mM CaCl2, 150 mm NaCl). Mir Kierchefënster nächst der gels mat 0,5% Coomassie schéi blo R-250 fir 2 h an destained der gels zu Prellbock (30% methanol, 10% acetic Seier). Kloer transparent Bands am Hannergrond vum bloen staining representéiert der gelatinase Aktivitéiten. VerfÜgung

Zell Wanderung an Invasioun assays VerfÜgung

Fir Zell Wanderung an Invasioun assays, eng total vun 1 × 10 5 Zellen sech zu serum-gratis RPMI-1640 suspendéiert mat oder ouni MMP-9 antibody (Abcam, 2 μg /200 ech) an zu transwell CHAMBERS (8 μm fir 24-gutt zappen; Corning ëmsou, NY, USA) plated mat oder ouni Matrigel ( BD Bioscience, CA, USA) laut der Ëmwelt- d'Hiersteller. Fir souwuel assays, mëttel- wouvun war 10% FBS un der ënneschter ëmkomm wéi e chemoattractant notéiert. No 24 h Kultur, goufen Zellen vun 10% formalin an Kierchefënster vun 0,5% glaskloer mauve fest. Endlech, Zellen am ënneschten Chambre sech duerch Inverted microscopy fotografeschen an gezielt. VerfÜgung

gewaltege Sträit Maus xenograft Modell VerfÜgung

Véier-Woch-alen Mann BALB /c Sauna Mais (Institut vun Zoologie, China Academy vun Sciences) waren benotzt d'Roll vun CEACAM6 zu peritoneal Verbreedung zu VerfÜgung VIVO VerfÜgung ze diskutéieren. Sauna Mais sech op eng bestëmmten pathogen-gratis Ëmwelt an d'Déieren schafft Eenheetspräis, School vun Medezin, Shanghai JIAO Tong University, China waren. Mais scho human Pfleeg an der Etude Ëmwelt- goufen higeriicht no engem Protokoll Accord vun de Finanzpolitiker Déieren Care an Benotzt Comité (IACUC) op Shanghai JIAO Tong University, Shanghai, China. A Ganzen 2 × 10 6 SGC-7901-CEACAM6 oder SGC-7901-NC Zellen sech an fënnef Mais postwendend misse Discours vun all Grupp (randomisation) heijen. Mais sech op de 30. Dag no Sprëtz euthanized, an der postwendend misse geréckelt goufen am Eenzelne an fotografeschen. All Experimenter waren am Aklang mat der offizieller Recommandatioune vun der chinesescher Déier Communautéit gesuergt. VerfÜgung

Statistics VerfÜgung

Student d' t VerfÜgung Azeton benotzt gouf d'Statistik Differenzen tëscht den zwou Gruppen ënnersicht . Kennenzeléieren tëscht E-cadherin Ausdrock am GC Stoffer an clinicopathological Parameteren an CEACAM6 Ausdrock sech duerch Chi-Feld oder Fisher d'exakt Tester oder Pearson Korrelatioun souguer gemaach Analyse analyséiert. Date sinn als mengen ± Fils gewisen. P VerfÜgung &Si besteet; 0,05 a P VerfÜgung &Si besteet;. 0,01 war statistesch relevant considéréiert an héich relevant, bzw. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

CEACAM6 schellt Zell Wirklechkeet an d' cytoskeleton VerfÜgung

Eis virdrun Resultater implizit datt MKN-28 GC Zellen u héijen Niveau vun CEACAM6 auszedrécken, hierkommen SGC-7901 an MKN-45 GC Zellen nidderegen Niveau [12] auszedrécken. Overexpression vun CEACAM6 zu SGC-7901 an MKN-45 GC Zellen an attenuation vun CEACAM6 Ausdrock vun MKN-28 GC Zellen vun pl /shRNA /SHR-CEACAM6 lentiviral vectors sech op d'FAQ Niveau vum südwestlechen blot Analyse (Figebam. 1A) confirméiert. Immunofluorescence assays zougedréckt ëmmer dass SGC-7901-CEACAM6 Zellen wéi SGC-7901-NC méi CEACAM6 FAQ ausgedréckt Zellen (Figebam. 1B). VerfÜgung

Spannen, war Zell Wirklechkeet folgenden CEACAM6 attenuation an overexpression verännert. Am Verglach mat der Kontroll Zellen, SGC-7901-CEACAM6 an MKN-45-CEACAM6 Zellen e méi mesenchymal-wëll Wirklechkeet Schatzkummer, an huet spindle- an fusiform-gebuerene (Figebam. 1c). Ëmgedréit, typesch Iwwergank vum mesenchymal Wirklechkeet ze epithelial war zu MKN-28-Ok Zellen am Verglach mat MKN-28-NC Zellen (Figebam. 1c) fonnt. Allerdéngs, et war kloer wann CEACAM6 overexpression en Effet op d'cytoskeleton haten, also immunofluorescent staining vun F-actin staining gesuergt huet. Spannen, méi grouss-Stad fusiform-gebuerene Zellen sech fir MKN-45-CEACAM6 an observéiert SGC-7901-CEACAM6 Linnen am Verglach mat der Kontroll Zellen (Figebam. 1D). VerfÜgung

ass CEACAM6 negatif mat E-cadherin assoziéiert an GC Stoffer VerfÜgung

Immunohistochemical Analyse gouf benotzt den Niveau vun der E-cadherin Ausdrock zu Kriibs Stoffer ze bestëmmen a vläit bascht net-tumorous Stoffer. Immunohistochemical staining zougedréckt E-cadherin Ausdrock niddreg zu entholl Stoffer wéi dat zu bascht Net-tumorous Stoffer, an Teamchef E-cadherin haaptsächlech an der cytomembrane vun epithelial Zellen wellkomm ass (Figebam. 2D, E, F). Next, ze propagéieren mir d'Relatioun tëscht E-cadherin Ausdrock an clinicopathological Charakteristike vun GC, an fonnt dass downregulated E-cadherin mat Déift vun Invasioun verbonne war ( P VerfÜgung = 0.046), lymph Node Metastasen ( P VerfÜgung = 0.013), an TNM Etapp ( P VerfÜgung = 0.035), mä net mat aneren clinicopathological Faktoren dorënner Geschlecht, Alter, oder dat (Table 1). Zousätzlech war CEACAM6 negatif mat EMT soll zu pancreatic carcinomas [19] an CEACAM6 Ennerdréckung konnt E-cadherin Promoteur Aktivitéit zu colorectal Kriibs [20]. VerfÜgung

Weideren Erhéijung, ze propagéieren mir d'Korrelatioun tëscht E-cadherin an CEACAM6 Ausdrock zu GCs vun Serien Rubrik immunohistochemistry (20 Echantillon). CEACAM6 Ausdrock vun entholl Stoffer war méi héich wéi déi vun reagéiert Net-tumorous Stoffer (Figebam. 2A, B, C), konsequent mat eis virdrun Resultater [12]. Spannen, fonnt mir dass CEACAM6 Ausdrock negatif mat E-cadherin Ausdrock am GC Stoffer vun Pearson Korrelatioun souguer gemaach Analyse soll war ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,01;. Lalumi 2G). VerfÜgung

induces CEACAM6 EMT zu GC Zellen VerfÜgung

EMT-Zesummenhang Proteinen am GC Zellen sech duerch westlech blot Analyse bewäert. Mir gesinn, datt den N-cadherin, Vimentin an Slug FAQ Niveauen eropzesetzen, iwwerdeems E-cadherin zu CEACAM6-overexpressing Zellen am Verglach mat hirer jeeweileger Kontroll Zellen rofgaang war (Figebam. 3A, B). Converse Resultater kritt der CEACAM6 war zu MKN-28 Zellen (Figebam. 3C, D) Uewerschenkel. Dës Resultater ugeholl engem funktionell Roll fir CEACAM6 zu EMT am GC Zellen Regulatioun. Desweideren, goufen dës Observatiounen am GC Zellen ähnlech mat der Experienz am GC Otemschwieregkeeten. VerfÜgung

CEACAM6 der Aktivitéit vun MMP-9 am GC Zellen bestëmmt VerfÜgung

Et ass bekannt, datt Haftung, ofgeschnidden a Migratioun sinn gréisser Problemer an Kriibs Metastasen. Gelatin zymography war duerchgefouert d'Auswierkunge vun CEACAM6 op der Aktivitéit vun MMP-9 ënnersicht, déi vun ECM ofgeschnidden wichteg ass. MMP-9 Aktivitéit zu SGC-7901-CEACAM6 an MKN-45-CEACAM6 Zellen war fräi Verglach mat hirer Kontroll Gruppen (Figebam. 4A, B). Mir propagéieren nächst ob de verstäerkten Aktivitéit vun MMP-9 entschlof vun CEACAM6 am GC Zellen e richtegen increment zu der Zuel vun hypothetesch an wanderen Zellen. Mir iwwerpréift also de Bäitrag vun aktiv anti-MMP-9 antibody oder PBS zu CEACAM6-overexpressing GC Zellen. Wéi erwaart, huet et grouss Ënnerscheeder an der Zuel vun hypothetesch an wanderen Zellen zu antibody-behandelt Zellen am Verglach mat PBS-behandelt Zellen ( P VerfÜgung &Si besteet; 0,01;. Lalumi 4C, D, E, F).

CEACAM6 upregulates phosphorylated AKT am GC Zellen VerfÜgung

Mir gesi schonn datt SRC Aktivitéit vun CEACAM6 zu SGC-7901 GC Zellen entschlof war. AKT ass eng matgeholl FAQ vum SRC an ass dramatesch mat EMT, Iwwerfall a Metastasen zu entholl Werdegang assoziéiert. Mir bewäert dofir AKT Aktivitéit zu CEACAM6-overexpressing GC Zellen. Western blotting zougedréckt datt AKT phosphorylation um serine 473 Ofstand zu CEACAM6-overexpressing GC Zellen fräi war am Verglach mat der Kontroll Gruppen (Figebam. 5A, B). Ze iwwerpréifen, ob EMT Ännerunge vun CEACAM6 via de PI3K /AKT Passerelle entschlof waren, SGC-7901-CEACAM6 an MKN-45-CEACAM6 Zellen sech fir 24 h mat 100 nm LY294002 behandelt. Spannen, den E-cadherin fräi an N-cadherin war zu LY294002-behandelt CEACAM6-overexpressing Zellen am Verglach mat den Kontrollen reduzéiert, wéi déi westlech blot Analyse gemooss (Figebam. 5C, D). VerfÜgung

CEACAM6 ënnerstëtzt peritoneal Verbreedung Endlech zu VIVO VerfÜgung

, iwwerpréift mir d'Effete vun CEACAM6 overexpression op peritoneal Verbreedung an Metastasen zu VerfÜgung VIVO VerfÜgung. Mir heijen SGC-7901-CEACAM6 an SGC-7901-NC Zellen an der abdomens vun Sauna Mais. Extensiv peritoneal verbreet war an der SGC-7901-CEACAM6 Grupp am Verglach mat der SGC-7901-NC Grupp (Figebam. 6A) observéiert. Et goufen vill méi siichtbar peritoneal noverfollegt vun der SGC-7901-CEACAM6 Grupp wéi an der Kontroll Grupp (5.400 ± 0,510 vs VerfÜgung 1.400 ± 0,245, P VerfÜgung &Si besteet;. 0,01;. Lalumi 6B ). Ausserdeem, overexpression vun CEACAM6 Tempo Metastasen zu VerfÜgung VIVO VerfÜgung huet och zu pancreatic Kriibs [19] gemellt ginn. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

GC ass déi zweet Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud weltwäit [1]. Méi Beweiser datt CEACAM6 spillt eng wichteg Roll an gastrointestinal Kriibs Werdegang [7], [20] - [22], an CEACAM6 méi ass wäit verbreet wéi CEA (CEACAM5) zu normal Stoffer, mat däitlech Ausdrock an vill epithelia [4]. CEACAM6 Afloss intracellular sécher Evenementer duerch homophilic an heterophilic Haftung mat anere CEACAMs oder integrins [23], [24]. Den Zweck vun dëser Etude war d'Bäiträg vun GPI-verankert FAQ CEACAM6 am GC Werdegang ze iwwerpréifen. VerfÜgung

Spannen, mir observéiert datt Zell Wirklechkeet an cytoskeletal Struktur vun stabil upregulation an downregulation CEACAM6 am GC Zellen verännert gouf. CEACAM6-overexpressing Zellen sech méi mesenchymal-wëll an Schatzkummer engem spindle an fusiform Form, a méi actin Stress Faseren sech am Verglach mat der Kontroll Gruppe fonnt, zu engem Prozess als EMT definéiert. D'mesenchymal phenotype endows Zellen mat méi Opbau an invasiv Eegeschafte [15]. Dëst Observatioun war konsequent mat der zu VerfÜgung VIVO VerfÜgung Resultater woubäi CEACAM6 an Sauna Mais Verbreedung extensiv peritoneal entschlof. Erfëllt war folgenden silencing vun CEACAM6 am GC Zellen observéiert. Dës Observatioune bewisen, dass CEACAM6 zu Pinguin EMT am GC Équipe kann. Mir iwwerpréift nächst der Korrelatioun tëscht CEACAM6 an E-cadherin, engem Bewaacher vun EMT, am GC Stoffer vun immunohistochemical staining. Wéi erwaart, däitlech negativ Korrelatioun war tëscht CEACAM6 an E-cadherin, an E-cadherin Ausdrock war verbonne mat Déift vun entholl Invasioun, lymph Node Metastasen an TNM Etapp am GC Stoffer observéiert. Ausserdeem, gefördert CEACAM6 lymph Node Metastasen ( P VerfÜgung = 0.001) an 98 GC Stoffer an eiser leschter Etude [12]. Virdrun Resultater weisen, datt CEACAM6 attenuation E-cadherin Promoteur Aktivitéit zu colorectal Kriibs [20] fräi. Baséiert op der abovementioned Conclusiounen, postulated mir dass CEACAM6 GC Invasioun an Metastasen vun Pinguin EMT gefördert a kann als mesenchymal Bewaacher déngen. VerfÜgung

Metastasen den Haaptfiguren Ursaach vum Kriibs-verbonne Doud ass awer nach schwéier ginn, well et ze studéieren ëmfaasst eng Serie vun seelen, stochastic Evenementer. Eng Zuel vun Potential sécher Weeër relevant zu Kriibs Metastasen illustréiert goufen, dorënner d'PI3K /AKT, MAPK /Erk, FAK-SRC, Jak /aktuelle Wäert, NF-kβ, an MMPs Weeër [25] - [27]. An dëser Etude, overexpression vun CEACAM6 nik MMP-9 Aktivitéit, an anti-MMP-9 antibody konnt den waarden invasiv an Opbau Eegeschafte entschlof vun CEACAM6 ëmgedréint. EMT Initiatioun ass vill mat Kriibs Metastasen soll, an induces Zell Eegeschafte Desaccord, hält apoptosis an senescence, an dréit zu immunosuppression zu Werdegang Kriibs [15]. EMT kann duerch Aktivatioun vun der PI3K /AKT sécher Passerelle [28], [29] entschlof ginn. CEACAM6 Funktiounen als intercellular Haftung Protein a kann duerch proposéiert mat sech selwer oder aner CEACAMs grouss Lipid rafts Form, also d'afgerappt sécher CASCADES, wéi d'integrin an PI3K /AKT Weeër [10] activating, [30]. Dofir iwwerpréift mir d'Effete vun CEACAM6 overexpression op den Niveau vun AKT phosphorylation am GC Zellen. Phosphorylated AKT Niveau waren an CEACAM6-overexpressing Zellen fräi, konsequent mat virdrun Resultater bemierken zu pancreatic carcinomas [8], [11]. Laut dës Observatiounen, proposéieren mir eng Hypothes woubäi CEACAM6-entschlof EMT am GC duerch Aktivatioun vun der CASCADE PI3K /AKT existeiert sécher. Desweideren, CEACAM6-overexpressing mat LY294002 behandelt Zellen, engem PI3K inhibitor, mécht e reversal vun EMT via begéint. Sou, schléissen mir dass CEACAM6 EMT induces vun der PI3K /AKT activating Passerelle an GC sécher a kann als potentiell Zilscheif vun entholl Behandlung déngen. VerfÜgung

An Conclusioun, hu mir illustréiert dass CEACAM6 Akten als oncogene vun EMT Fördere via PI3K /AKT Aktivéierung am GC. Ausserdeem, ass E-cadherin Ofstand zu GC Stoffer wéi vläit bascht Net-tumorous Stoffer downregulated. CEACAM6 ënnerstëtzt Invasioun an Metastasen zu VerfÜgung kënschtlech VerfÜgung a zu VerfÜgung VIVO VerfÜgung, a vläicht e potentiellen neie diagnostic an prognostic Bewaacher geflitzt an Roman Zil fir GC gin Therapie. VerfÜgung

Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung Checklëschten S1. VerfÜgung D'ukommen Richtlinnen. All zu VIVO Experimenter an eiser mëttelalterlech Handschrëft sech am Aklang mat de Richtlinne ukommen exportéiert VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0112908.s001 VerfÜgung (Intrigue) VerfÜgung

Arbeschterlidder VerfÜgung

Mir géif gären Xuehua Chen an Jianian Zhang fir technesch Assistenz, fir Beiqin Yu fir hir materiell Ënnerstëtzung Merci. VerfÜgung

• PLOS NËMMEN: RABEX-5 Ass Upregulated an Spillt eng Oncogenic Roll an Gastric Cancer Entwécklung vun Activating der VEGF sécher Pathway
• PLOS NËMMEN: Ass Early Oral Verfiddere der Gastric Cancer befënnt machbar? A Konsequent Kritik an Meta-Analys vun zoufälleg Gesteiert Trials