Plos ONE: CEACAM6 Spodbuja Rak želodca Invasion in metastaz ga indukcijo epitelijskih-mezenhimskih Prehod preko PI3K /AKT signalizacijo Pathway

Povzetek

prekomerno CEACAM6 v tumorskih tkivih, igra pomembno vlogo v invazijo, metastaz in odpornost anoikis v različnih človeških rakavih obolenj. Pred kratkim smo poročali, da je CEACAM6 izražanje molekul želodčnega raka (PK) tkiva in spodbuja GC metastaz. Tu poročajo, da CEACAM6 spodbuja peritonealno metastaze v
vivo
in je v negativni korelaciji z E-kadherina izražanja v GC tkivih. Prekomerno CEACAM6 povzroča epitelijskih-mezenhimskih prehod (EMT) v GC, merjena z rastjo v EMT označevalcev N-kadherina, vimentina in polž, medtem ko E-kadherina izraz je bil v CEACAM6-prekomerno ekspresijo GC celic zmanjšalo; nasprotujoči si rezultati so bili v-CEACAM6 utišani celic opazili. Poleg tega je bila E-kadherina izraz negativni korelaciji s globine tumorske invazije, bezgavk metastaz in stopnji TNM v GC tkivih. Poleg tega lahko CEACAM6 povišana matrix metalo-9 (MMP-9) dejavnost v GC, in anti-MMP-9 protitelesa obrniti večjo invazijo in migracije s CEACAM6 povzročeno. CEACAM6 povečala tudi raven fosforiliranega AKT, ki sodeluje pri napredovanju različnih človeških tumorjev. nadalje smo ugotovili, da bi lahko LY294002, inhibitor PI3K, povratne CEACAM6 povzročeno EMT preko mezenhimskega-epitelijskih tranzicije. Te ugotovitve kažejo, da CEACAM6 krepi invazijo in metastaze v GC s spodbujanjem EMT preko PI3K /AKT signalne poti v

Navedba. Zang M, Zhang B, Zhang Y, Li J, Su L, Zhu Z, et al . (2014) CEACAM6 Spodbuja želodca Rak Invasion in metastaz ga indukcijo epitelijskih-mezenhimskih Prehod preko PI3K /AKT signalne poti. PLoS ONE 9 (11): e112908. doi: 10,1371 /journal.pone.0112908

Urednik: Chun-Ming Wong, University of Hong Kong, Hong Kong

Prejeto: 7. avgusta 2014; Sprejeto: 16. okt 2014; Objavljeno: 14. november 2014

Copyright: © 2014 Zang et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Data Zaloga:. avtorji potrjujejo, da so v celoti na voljo brez omejitev vse podatke, na katerih temeljijo ugotovitve. Vsi pomembni podatki so v dokumentu

Financiranje:. To delo je podprta s sredstvi iz državnega Natural Science Foundation Kitajske (št 81172324, št 91229106, št 81272749, in št 81372231), in ključ Projekt odbora Shanghai izobraževanje (št 12ZZ105 in No.12ZZ102) ter znanost in tehnologijo komisije občine Shanghai (št 13ZR1425600). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

GC je ena izmed najpogostejših malignih tumorjev in velik zdravstveni problem po vsem svetu, zlasti v vzhodnoazijskih državah, kot so Japonska, Koreja, Kitajska, kjer je drugi vzrok smrti zaradi raka [1] - [3]. Karcinoembrionski povezan antigen celične adhezije molekule 6 (CEACAM6) je glycosylphosphatidylinositol (GPI) -vezan imunoglobulin naddružina element, ki je močno izraženi pri številnih človeških rakavih obolenj, zlasti raka na prebavilih [4], in deluje kot medcelične adhezijske molekule [4] - [6]. Čeprav CEACAM6 je GPI-zasidrana celični površinski glikoprotein nima transmembranski ali znotrajcelični domeno, vendar je sposoben vplivati ​​na znotrajcelično signalizacijo dogodkov in igra pomembno vlogo v prebavnem napredovanje raka [4], [6] - [8]. GPI-zasidrana molekule so pogosto co-lokalizirani majhnim membranskih mikrodomen v membrani plazmi [9], ki se lahko aktivira nadaljnjim signalizacijskim kaskade kot je integrina signalne poti [10]. CEACAM6 deluje kot onkogen v tumorjih in spodbuja raka invazijo, metastaze, odpornost anoikis in chemoresistance, in zavira diferenciacijo [7], [8], [11]. Pred kratkim smo poročali, da je CEACAM6 izražanje molekul in so povezane z bezgavkah metastaze v GC tkiva [12]. Vendar pa so mehanizmi, preko katerih CEACAM6 vplivi intracelularni prenos signalov v GC je treba še določiti.

epitelijskih-mezenhimskih prehod (EMT) ni le fiziološki proces v času razvoja zarodka ali regeneracijo tkiva, ampak tudi patološki element napredovanje raka, ki vključuje tumorske metastaze, apoptoza in odpornost senescenco [13] - [15]. EMT vedno kaže slabo klinično prognozo v človeške raka. Številni mehanizmi, ki se nanašajo na EMT začetek so bile dokumentirane, vključno z TGF-ß, IL-6, PI3K /AKT, RAF /MAPK in SRC poti [15] - [18]. V naši prejšnji študiji smo ugotovili, CEACAM6 povzroča aktivacijo SRC v GC celic [12], in opazili povečano število celic vretenaste oblike, CEACAM6 čezmerno izraženim v primerjavi s kontrolnimi celicami. Zato smo bili zelo zainteresirani za določitev razmerja med CEACAM6 in EMT v GC celicah. Čeprav je bila negativna korelacija med CEACAM6 in EMT zabeležena v trebušne slinavke karcinomov [19], mehanizme, s katerimi CEACAM6 ureja EMT so slabo razumemo.

V tej raziskavi smo podrobneje proučiti učinke in možne poti za CEACAM6 v GC invazija in metastaze, in raziskati njeno skladnost z EMT.

materiali in metode

Etika Izjava

Pisna privolitev v študiji je bilo pridobljeno od vseh udeležencev. Protokol študije je odobril odbor za etiko bolnišnice Ruijin, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine. Postopki na živalih so bile izvedene v skladu s protokolom, ki ga Odbor za institucionalne živali Nega in uporabo (IACUC) na Shanghai Jiao Tong University, Šanghaj, Kitajska odobril.

Celične linije in vzorci tkiva

Človeško GC celične linije SGC-7901, MKN-45 in MKN-28 so bili kupljeni od Shanghai inštituti za biološke vede, kitajske akademije znanosti. Celice smo gojili pri 37 ° C v 5% CO _{2 in nasičenosti vlažnosti v RPMI-1640 medij vsebuje 10% fetalnega govejega seruma.}

želodca tumorja in sosednji non-tumorsko tkivo smo dobili od 93 bolnikov z GC, ki je doživel kurativno operacijo na Shanghai Jiaotong University School of Medicine odvisnimi Ruijin bolnišnici od leta 2010 do 2013. bolnikov je sestavljalo 69 moških in 24 žensk, s povprečno starostjo 62,1 let (razpon, 30-85 let). Nobeden od pacientov so prejeli radioterapijo ali kemoterapijo pred operacijo. Clinicopathological Podatki so bili zbrani in patološko tumor uprizoritev je bila določena v skladu s klasifikacijo UICC TNM. Histološka tipkanje bila izvedena z vsaj dvema strokovnih patologi neodvisno delajo v dvojno slepo način. Ta študija je odobril Odbor za etiko Shanghai Ruijin bolnišnice, in vsi bolniki so bili v celoti obveščeni o eksperimentalnih postopkov.

Vector gradnjo in transfekciji

Celovečerni CEACAM6 cDNA smo dobili z RT PCR iz celotne RNA izpisanih iz vzorcev GC. Temeljni premaz sekvence so bile 5'-CCGGAATTCCCATGGGACCCCCCTCAGCCC-3 '(naprej) in 5'-TCCCCCGGGGCTATATCAGAGCCACCCTGG-3' (nazaj). sestavljeni Mi pIRES2-eGFP-CEACAM6 konstrukt z vstavitvijo CEACAM6 cDNA v pIRES2-EGFP vektorja. Mi poleg transficirali pIRES2-EGFP-CEACAM6 ali pIRES2-EGFP vektor v SGC-7901 in MKN-45 celic z uporabo Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, ZDA) v skladu s protokolom proizvajalca. Stabilni klone s stalnim obdelavo izbrane G418 (1,2 mg /ml, Gibco, New York, ZDA)

lentivirusni vector gradnja

Na podlagi človekovih podatkov CEACAM6 genov, par oligonukleotidnih zaporedij. in negativne kontrolne sekvence so bile oblikovane in sintetizirali Shanghai Novobio znanstveni Co, so Ltd shRNA zaporedja, kot sledi: CEACAM6, 5'-CACCGCCGGACAGTTCCATGTATACGAATATACATGGAACTGTCCGG-3 "(naprej) in 5'-AAAACCGGACAGTTCCATGTATATTCGTATACATGGAACTGTCCGGC-3 '(nazaj); Kontrola, 5'-CACCGCTACACAAATCAGCGATTTCGAAAAATCGCTGATTTGTGTAG-3 '(naprej) in 5'-AAAACTACACAAATCAGCGATTTTTCGAAATCGCTGATTTGTGTAGC-3' (nazaj). CEACAM6 shRNA subkloniramo v pL /shRNA /F lentivirusni vektor da dobimo pL /shRNA /SHR-CEACAM6 konstrukt. Nato so pL /shRNA /SHR-CEACAM6 ali nadzor lentivirusni vektorjev transfektirali v MKN-28 GC celic. Stabilno transficirane celice so bile z obdelavo izbrane 5 ug /ml blasticidin in so bili uporabljeni za identifikacijo in nadaljnje raziskave.

Western blot

Celice so bile pridelane in lizirali s pomočjo RIPA medpomnilnika (Solarbio, Peking, Kitajska ), ki vsebujejo inhibitorje PMSF proteaze 1%. BCA test Komplet (Pierce, Rockford, ZDA) je bila uporabljena za merjenje skupna koncentracija proteinov. Enakovredne količine beljakovin so ločeni z 10% SDS-PAGE, in rešiti proteini prenese na PVDF membrane. Membrane smo blokirali s 5% posnetega mleka 2 h in nato inkubiramo s primarnimi protitelesi, preko noči pri 4 ° C. Primarna protitelesa so bili naslednji: CEACAM6 (1:500; Abcam, ZDA), E-kadherina (1:500; Cell Signaling Technology (CST), ZDA), N-kadherina (1:500, CST, ZDA), vimentina ( 1:1000, CST, ZDA), Slug (1:500, CST, ZDA), p-AKT (Ser473) (1:1000, CST, ZDA), skupno AKT (1:1000, CST, ZDA) in GAPDH ( 1:10000, Abcam, ZDA). Membrane smo nato inkubirali s sekundarnih protiteles za 2 uri na sobni temperaturi, smo prikazali s pomočjo sistema za izboljšano zaznavanje kemiluminescenca (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, ZDA) v skladu s protokolom proizvajalca.

imunofluorescenčni madeži

Celice smo gojili na coverslips za 24 h in potem pritrjen s 4% paraformaldehida v 15 min. Celice smo sprali s PBS, nato permeabiliziramo z 0,5% Triton X-100 za 20 minut in blokirali s 5% BSA 30 minut pri sobni temperaturi. Naslednjič obarvamo celice z CEACAM6 protitelesa (1:50; Abcam) pri 37 ° C 2 h, čemur sledi inkubacija s fluorescenčno sekundarnih protiteles za 1 uro pri sobni temperaturi. Jedra smo obarvali z DAPI. Rodamin phalloidin protitelesa (1:150; Citoskelet) je bila uporabljena za vizualizacijo citoskeleta z GC celic. Ploščice smo analizirali in posnel na fluorescenčnim mikroskopom.

Imunohistokemija

Področja 4 m debela bili izrezani iz blokov tkivno parafin vgrajeni in nato deparaffinized in hidracijo. Imunohistokemijsko odsekov je bila izvedena v skladu s protokolom DAKO, z uporabo miške anti-CEACAM6 (1:100; Abcam) in E-kadherina (1:100; CST) pri 4 ° C preko noči. Ploščice smo potem inkubirali s HRP-označenega sekundarnega protitelesa in vizualiziramo z diaminobenzidine. Dva patologi, ki so bili zaslepljeni, da vseh podatkov o bolnikih neodvisno oceniti in dosegel dele. Imunohistokemija madež ocena = pozitivne celice ocena + obarvanje oceno intenzivnosti. Odstotek pozitivnih celic, je dosegel takole: 0 (10%), 1 (10-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) in 4 (> 75%). Imunohistokemični intenzivnost obarvanja je bila ocenjena kot sledi: 0 (ni obarvanja), 1 (šibko obarvanje), 2 (rjavo obarvanje) in 3 (temno rjavo obarvanje). Skupaj mnogo ≥ 3 so bili opredeljeni kot pozitiven za poenostavitev analize podatkov. Za analizo korelacije med CEACAM6 in E-kadherina izražanja, Image-Pro Plus različica 6.0 (Media Kibernetika, Inc., Bethesda, MD, USA), je bila uporabljena za količinsko izražanje CEACAM6 in E-kadherina na 20 vzorcev.

želatina cimografijo

Da bi preučili MMP-9 aktivnosti, je cimografijo izvede z uporabo 10% SDS-PAGE gela vsebuje 1 mg /ml želatino (Sigma). Na kratko so GC celice gojimo v seruma RPMI-1640 medij za 24 ur in supernatant smo nato zbrali in centrifugirali pri 1000 obratih 5 minut. Geli speremo dvakrat v renaturacijo pufru (2,5% Triton X-100) za 30 minut vsakič odstraniti SDS po elektroforezi in nato inkubiramo pri 37 ° C 24 ur v reakcijskem pufru (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 5 mM CaCl2, 150 mM NaCl). Naslednjič obarvajo gela z 0,5% Coomassie briljantno modro R-250 za 2 uri in razbarvamo gela v pufru (30% metanola, 10% ocetne kisline). Jasna prozorni trakovi v modri madeži zastopa dejavnosti gelatinaza.

migracijo celic in invazijo testi

Za migracije celic in invazijo testov je bilo skupno 1 × 10 ^{5 celic suspendiramo v brez seruma RPMI-1640 z ali brez MMP-9 protitelesa (Abcam, 2 g /200 ul) in prekrita v transwell komori (8 mikrometrskimi za 24 vdolbinami; Corning Costar, NY, ZDA) z ali brez Matrigel ( BD Bioscience, CA, USA) po protokolih proizvajalca. Pri obeh testih smo medij, ki vsebuje 10% FBS doda spodnji komori kot chemoattractant. Po 24 h kulturi, so celice določi 10% formalinom in obarvamo za 0,5% kristal vijolično. Na koncu so bile celice v spodnjem domu fotografirali in s štetjem obrnjenem mikroskopijo.}

Nude mouse ksenogenskega modela

Štiri tedne star moški BALB /c golih miši (Inštitut za zoologijo, Kitajska akademija znanosti), so bili uporabljeni za oceno vloge CEACAM6 v trebušni votlini širi v
vivo
. Nude miši so nastanjeni v specifičnih povzročiteljev bolezni brez okolja v enoti za živali Laboratory, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University, Kitajska. Miši prejel humano nego in študijski protokoli so bile izvedene v skladu s protokolom, ki ga Odbor za institucionalne živali Nega in uporabo (IACUC), odobrenega na Shanghai Jiao Tong University, Šanghaj, Kitajska. Skupno 2 × 10 ^{6 SGC-7901-CEACAM6 ali SGC-7901-NC celice vbrizgali v pet miši trebušno votlino vsake skupine (naključne). Miši so se žrtvovati, na 30. dan po injiciranju in trebušne mase so posneli in fotografirali. Vse poskuse smo izvajali v skladu z uradnimi priporočili kitajske skupnosti živali.}

Statistika

Študent je t
-test bila uporabljena preučiti statistične razlike med obema skupinama . Korelacije med E-kadherina izražanja v GC tkiv in clinicopathological parametrov in CEACAM6 izražanja smo analizirali s hi-kvadrat ali Fisherjev preskusov ali Pearson analize korelacijskim koeficientom. Podatki so prikazani kot povprečje ± SD. P
< 0,05 in P
. ≪ 0,01 štela statistično pomembne in zelo pomembne, oziroma

Rezultati

CEACAM6 vpliva na celično morfologijo in Citoskelet

Naši rezultati prejšnjih pomenilo, da MKN-28 GC celice same po sebi izražajo visoko stopnjo CEACAM6, medtem SGC-7901 in MKN-45 GC celice izražajo nizko stopnjo [12]. Čezmerno CEACAM6 v SGC-7901 in MKN-45 GC celic in slabljenje CEACAM6 izražanja v MKN-28 GC celic z pL /shRNA /SHR-CEACAM6 lentivirusni vektorjev so bile potrjene na ravni proteina, ki ga zahodni blot analizo (sl. 1A). Imunofluorescenčnega testi vedno pokazala, da SGC-7901-CEACAM6 celice izražena več CEACAM6 beljakovin kot SGC-7901-NC celice (sl. 1B).

Zanimivo je, da je celična morfologija spremeni po CEACAM6 slabljenje in prekomerno. V primerjavi s kontrolnimi celicami, SGC-7901-CEACAM6 in MKN-45-CEACAM6 celice razstavljene bolj mezenhimskih podobno morfologijo in so spindle- in fusiform v obliki (sl. 1C). Nasprotno pa je bila tipična prehod iz mezenhimskih do epitelijskega morfologijo odkriti v MKN-28-sh celic v primerjavi z MKN-28-nc celic (sl. 1C). Vendar pa je bilo jasno, če bi CEACAM6 prekomerno vpliva na citoskeleta, s tem imunofluorescenčni barvanje F-aktina barvanjem bila izvedena. Zanimivo je, da so za MKN-45-CEACAM6 in opazili večje velika-fusiform oblike celice SGC-7901-CEACAM6 linije v primerjavi s kontrolnimi celicami (sl. 1D).

je CEACAM6 negativno povezana z E-kadherina v GC tkiva

Imunohistokemijsko analiza je bila uporabljena za določitev stopnje E-kadherina izražanja v tumorskih tkivih in seznanjenih sosednjih non-tumorskih tkivih. Imunohistokemijsko pokazala E-kadherina izraz je bila nižja v tumorskih tkivih, kot da je v sosednjih niso tumorskih tkiv in je pokazala, da je E-kadherina nahaja v glavnem v cytomembrane epitelnih celic (sl. 2D, E, F). Dostavo, smo raziskovali odnos med E-kadherina izražanja in clinicopathological značilnosti GC in ugotovili, da je bil navzdol reguliranih E-kadherina povezana z globino invazije ( P
= 0,046), bezgavkah metastaze ( P
= 0,013), in stopnja TNM ( P
= 0,035), ne pa tudi z drugimi clinicopathological dejavnikov, vključno spola, starosti ali diferenciacijo (tabela 1). Poleg tega je bil CEACAM6 negativno povezana z EMT v trebušne slinavke karcinomov [19] in CEACAM6 zatiranju lahko poveča aktivnost promotorja E-kadherina pri raku debelega črevesa in [20].

Poleg tega smo raziskovali povezavo med E-kadherina in CEACAM6 izražanja v GK s serijsko oddelku imunohistokemiji (20 vzorcev). CEACAM6 izraz v tumorskih tkivih, je bila višja kot v izravnanih non-tumorskih tkivih (sl. 2A, B, C), v skladu s svojimi prejšnjimi rezultati [12]. Zanimivo je, da smo ugotovili, da je bil CEACAM6 izraz negativno povezana z E-kadherina izražanja v GC tkiv, ki ga Pearson analizo korelacijskim koeficientom ( P
< 0,01;. Slika 2G).

CEACAM6 povzroča EMT v GC celice

povezanih z EMT beljakovin GC celic je bila ovrednotena z western blot analizo. Opazili smo, da N-kadherina je bila povečana vimentina Ravni Slug proteinski, medtem ko je E-kadherina zmanjšala-CEACAM6 prekomerno ekspresijo celic v primerjavi s svojimi kontrolnimi celicami (sl. 3A, B). Converse rezultati so bili doseženi potem, ko je CEACAM6 podrli v MKN-28 celic (sl. 3C, D). Ti rezultati predlagal funkcionalno vlogo CEACAM6 pri urejanju EMT v GC celicah. Poleg tega so bile te ugotovitve v GC celic Podobno je z ugotovitvami v GC tkiva.

CEACAM6 povzdigne aktivnost MMP-9 v GC celicah

Znano je, da so oprijem, degradacija in migracije Najpomembnejša vprašanja raka metastaze. Želatina cimografijo je bila izvedena, naj preuči učinke CEACAM6 na aktivnost MMP-9, ki je pomembna za razgradnjo ECM. MMP-9 dejavnost SGC-7901-CEACAM6 in MKN-45-CEACAM6 celic smo primerjali z njihovo kontrolnih skupinah (sl. 4A, B). Naslednjič raziskali, ali je povečana aktivnost MMP-9, ki ga CEACAM6 inducira v GC celicah povzročila pravi prirastek števila vdrla in migracijo celic. Tako smo preučili prispevek aktivne anti-MMP-9 protitelesa ali PBS do CEACAM6-prekomerno ekspresijo GC celic. Kot je bilo pričakovati, so bile razlike v številu preplavljajo in migracijo celic v celicah, protiteles zdravljenih v primerjavi s PBS-obdelanih celic ( P
< 0,01;. Slika 4C, D, E, F).

CEACAM6 upregulates fosforiliranega AKT v GC celicah

smo že opazili, da je SRC dejavnost, ki jih povzroča CEACAM6 v SGC-7901 GC celic. AKT je protein dolvodno od ZRS in je močno povezana z EMT, invazijo in metastaze v napredovanje tumorja. Zato smo ocenili Akt aktivnosti v CEACAM6-prekomerno ekspresijo GC celic. Western blot pokazala, da je AKT fosforilacijo na serin 473 v CEACAM6-prekomerno ekspresijo GC celic znatno poveča v primerjavi s kontrolnimi skupinami (sl. 5A, B). Da preveri, ali so bile spremembe EMT jih povzroča CEACAM6 preko PI3K /AKT steze, so SGC-7901-CEACAM6 in MKN-45-CEACAM6 celice, zdravljenih s 100 nM LY294002 24 ur. Zanimivo je, da je E-kadherina povečala in N-kadherina se je zmanjšala v celicah, CEACAM6 prekomerno ekspresijo-LY294002 obdelan v primerjavi s kontrolami, merjeno po zahodni blot analizo (sl. 5C, D).

CEACAM6 spodbuja peritonealno širjenje in vivo

na koncu smo preučili učinke CEACAM6 prekomerno na širjenje trebušni votlini in metastaz v
vivo
. Mi vbrizga SGC-7901-CEACAM6 in SGC-7901-NC celice v trebuhi golih miših. Obsežno peritonealno širjenje opazili v skupini SGC-7901-CEACAM6 v primerjavi s skupino SGC-7901-NC (sl. 6A). Bilo je precej bolj vidne peritonealno vozlički v skupini SGC-7901-CEACAM6 kot v kontrolni skupini (5,400 ± 0,510 vs
1,400 ± 0,245, P
. ≪ 0,01;. Slika 6B ). Poleg tega čezmernim CEACAM6 krepitev metastaze v
vivo
so poročali tudi pri raku trebušne slinavke [19].

Pogovor

GC je drugi vzrok smrti, povezanih z rakom na svetu [1]. Vse več dokazov kaže, da ima CEACAM6 pomembno vlogo pri raku prebavil napredovanja [7], [20] - [22], in CEACAM6 bolj razširjen kot CEA (CEACAM5) v normalnih tkivih, s pomembnim izražanja v mnogih epitela [4]. CEACAM6 vplivi znotrajcelične signalne prireditev v okviru homophilic in heterophilic oprijema z drugimi CEACAMs ali integrinov [23], [24]. Namen te raziskave je bil preučiti prispevke GPI-zasidrana beljakovin CEACAM6 v napredovanje GC.

Zanimivo je, da smo ugotovili, da je celična morfologija in citoskeletnim struktura spremenila stabilna uravnavanjem in downregulation CEACAM6 v GC celicah. -CEACAM6 prekomerno ekspresijo celice so bile bolj mezenhimskih podobni in pokazal vretena in fusiform obliko in več aktin stresa vlaken smo primerjali s kontrolnimi skupinami odkrite v postopku definiran kot EMT. Mezenhimske fenotip endows celic z več migracijskih in invazivnih lastnosti [15]. Ta ugotovitev je bila v skladu s v
vivo
Rezultati katerim CEACAM6 sprožilo obsežno peritonealno širi v golih miših. MET opazili naslednje utišanje CEACAM6 v GC celicah. Te ugotovitve so pokazale, da se CEACAM6 lahko sodelujejo pri spodbujanju EMT v GC. Mi poleg preučila povezavo med CEACAM6 in E-kadherina, marker EMT, v GC tkivih imunohistokemičnim barvanjem. Kot je bilo pričakovati, so opazili pomembno negativno korelacijo med CEACAM6 in E-kadherina in E-kadherina izraz je bila povezana z globino tumorske invazije, bezgavk metastaz in stopnji TNM v GC tkivih. Poleg tega CEACAM6 spodbujati limfnega vozla metastaze ( P
= 0,001) v 98 GC tkivih v prejšnji raziskavi [12]. Prejšnji rezultati so pokazali, da CEACAM6 slabljenje poveča E-kadherina promotor dejavnost kolorektalnega raka [20]. Na podlagi zgoraj navedenih ugotovitev, smo domnevali, da CEACAM6 spodbuja GC invazijo in metastaze s prepričevanjem EMT in lahko služi kot mezenhimskega označevalec.

Metastasis je vodilni vzrok za raka, povezanih smrti, vendar je bilo težko raziskovati, ker je vključuje vrsto redkih, naključnih dogodkih. Število možnih poti za signalizacijo, pomembnih za raka metastaze so bili prikazani, vključno z PI3K /AKT, MAPK /ERK, FAK-SRC, JAK /STAT, NF-kβ in MMP poti [25] - [27]. V tej študiji čezmernim CEACAM6 povišano MMP-9 aktivnosti, in anti-MMP-9 protitelesa lahko obrne povečanega invazivne in migracijske lastnosti, ki jih CEACAM6 zdravila. EMT začetek je pomembno povezana z rakom metastaz in povzroča izvornih celic lastnosti, preprečuje apoptozo in staranje, ter prispeva k imunosupresijski napredovanja raka [15]. EMT lahko inducirano preko aktivacije PI3K /AKT signalne poti [28], [29]. CEACAM6 deluje kot medcelične adhezijske molekule in lahko tvorijo večje lipidov splave, ki v stiku s samim seboj in drugimi CEACAMs, s čimer se aktivira signalne kaskade na nižji stopnji, kot je integrin in PI3K /Akt poteh [10], [30]. Zato smo pregledali učinke CEACAM6 prekomerno na ravni AKT fosforilacije v GC celicah. Fosforilirata ravni AKT so v-CEACAM6 prekomerno ekspresijo celic povečala, v skladu s prejšnjimi rezultati navedeno v trebušne slinavke karcinomov [8], [11]. V skladu s temi ugotovitvami, predlagamo hipotezo, po katerem se pojavi, CEACAM6 povzroča EMT preko aktivacije PI3K /AKT signalne kaskade v GC. Poleg tega so celice-CEACAM6 čezmerno izraženim zdravljeni z LY294002, inhibitor PI3K, doživela preobrat EMT preko MET. Tako sklepamo, da CEACAM6 inducira EMT z aktiviranjem PI3K /AKT signalne poti v GC in lahko služi kot potencialni cilj pri zdravljenju tumorjev.

Na koncu smo pokazali, da bi CEACAM6 deluje kot onkogen s spodbujanjem EMT prek aktivacije PI3K /AKT v PK. Poleg tega je E-kadherina izrazito navzdol reguliranih v GC tkivih kot parnih sosednjih niso tumorskih tkiv. CEACAM6 spodbuja invazijo in metastaze v
vitro
in v
vivo
, in je lahko potencialno nove diagnostične in prognostične dvojno podajo in nov cilj za GC terapija.

dodatne informacije
Checklist S1.
ARRIVE smernice. Vse in vivo poskusi v našem rokopisu so bili izvoženi v skladu s prispejo smernicah
doi:. 10,1371 /journal.pone.0112908.s001
(DOC)

Priznanja

zahvaljujem se Xuehua Chen in Jianian Zhang za tehnično pomoč, da Beiqin Yu za njeno materialno podporo.

• Plos ONE: RABEX-5 je molekul in Plays onkogeni vlogo želodčnega raka razvoj s Aktiviranje VEGF signalne poti
• Plos ONE: Je Early krmljenje po želodca raka kirurgijo izvedljiva? Sistematični pregled in metaanaliza randomiziranih kontroliranih preskušanj