PLoS ONE: Katepsin E je marker želučane diferencijacije i pečatni-Ring stanice karcinoma želuca: nova prijedloga na želučani Tumorigenesis

Sažetak pregled

Rak želuca (GC) predstavlja različite histološke značajke, iako je mehanizam u pozadini njegova raznolikost rijetko razjašnjen. To se uglavnom svrstati u dobro diferenciranim cjevasti adenokarcinom (tub1), umjereno diferencirani cjevasti adenokarcinom (tub2), slabo diferencirani adenokarcinom (POR), karcinom pečatnjak-prsten (sig), mucinozni adenokarcinom (muc) i papilarni adenokarcinom (PAP). Do pregleda, otkrili smo katepsina E (CTSE) pregled izražava univerzalno u sig-tipa, povremeno u por tipa, a rijetko u tub1 /tub2 tipa GC staničnim linijama. U kirurški reseciranih primjeraka, CTSE je imuno na 50/51 sig-tipa (98,0%), 3/10 tub1 tipa (30,0%), 7/18 tub2 tipa (38,9%), 15/26 por tipa ( 57,7%), 4/10 PAP-tipa (40,0%), a 0/3 MUC-tipa (0,0%) GC. U endoskopski-reseciranih primjeraka, 6/7 sig-tip (85,7%), 7/52 tub1 tipa (13,7%), 5/12 tub2 tipa (41,7%), 2/7 PAP-tip (28,6%) GC i 0/6 adenom (0.0%) izrazio CTSE. Za ne-malignih tkiva CTSE općenito se izražava u normalnom fundusa, pilorusa i kardijalne žlijezde želucu, već u drugim teško probavnih organa. U pretkarcinomsku intestinalne metaplazije u želucu, CTSE uglavnom se promatra u mješovitim želučane i crijevne-tipa i manjkav u samo-crijevnom tipa. CTSE izraz u pozitivnoj korelaciji s želuca marker MUC5AC ( p izvoznici < 0.0001) i negativnoj korelaciji s crijevna marker MUC2 ( p pregled = 0.0019). Za sig tipa GC, u oba tumora i pozadine sluznice, ekspresija MUC5AC i CTSE je visoka, dok onaj MUC2 je niska, što ukazuje da je sig tipa GC odražava značajke pozadinskog sluznice. Za želuca adenoma i tub1 /tub2 tipa GC, više nediferencirane tumori imaju tendenciju da imaju viši stupanj ekspresije CTSE s MUC5AC i niže izražavanja MUC2 u tumorima, ali oni imaju tendenciju da se prezentiraju nižu ekspresiju CTSE, MUC5AC i MUC2 u pozadini sluznici. Oni ukazuju da je više malignih želuca adenokarcinom s jačim želuca i slabije crijevne svojstva imaju tendenciju da proizlaze iz pozadine sluznice sa smanjenim oba želučani i crijevni značajke. U zaključku, CTSE je znak i želuca diferencijacije i karcinom stanica pečatnjak-prstena, koja bi trebala rasvijetliti mehanizam želučane tumorigenezi pregled

Izvor:. Konno-Shimizu M, Yamamichi N, Inada Ki, Kageyama- Yahara N, Shiogama K, Takahashi Y, et al. (2013) Katepsin E je marker želučane diferencijacije i pečatni-Ring stanice karcinoma želuca: nova sugestija o želučani nastanku tumora. PLoS ONE 8 (2): e56766. doi: 10,1371 /journal.pone.0056766 pregled

Urednik: Anthony W.I. Eto, Kineskog sveučilišta u Hong Kongu, Hong Kong pregled

Primljeno: 20. studeni 2012; Prihvaćeno: 14 siječnja 2013; Objavljeno: 22. veljača 2013 pregled

Copyright: © 2013 Konno-Shimizu i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan u sklopu koje grant od Sato Spomen zaklade za istraživanje raka, u sklopu koje grant istraživanja od raka Nakayama instituta, u sklopu koje grant istraživanja iz Zaklade za poticanje istraživanje raka, a također djelomično Grant-in Potpore za mlade znanstvenike (b) od Ministarstva obrazovanja, kulture, športa, znanosti i tehnologije (MEXT). No, svi donatori imali nikakvu ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca (GC) je četvrti najčešći karcinom i drugi uzrok smrti od raka povezane s cijelom svijetu, unatoč postupnom smanjenju njene učestalosti i smrtnosti [1], [2]. Poznato je da želučana malignost predstavlja različite histološkoj [3]. Najkorišteniji klasifikacija karcinoma želuca je Lauren klasifikacija što razlikuje u tankom crijevu (diferencirane) tip GC i difuzna (nediferencirani) tip GC [4]. Lauren tipkanje je običan i jednostavan za razumjeti, premda je pojednostavljivanje često dovodi do nemogućnosti odražava precizne karakteristike malignosti želuca [3]. U detaljnije japanskom klasifikaciji karcinoma želuca [5], koji je sličan klasifikaciji SZO [6], želuca adenokarcinom je razvrstan u šest kategorija: dobro diferencirani cjevasti adenokarcinoma (tub1), umjereno diferencirani cjevasti adenokarcinom (tub2), slabo diferencirani adenokarcinom (por), karcinom pečatnjak-prsten (sig), mucinouse adenokarcinom (MUC) i papilarni adenokarcinom (PAP). Općenito govoreći, Lauren je difuzno (nediferencirani) tip uključuje udjelu, značajnih- i MUC tipa GC, a Lauren je crijevna (diferencirane) tip obuhvaća tub1-, tub2- i kič tipa GC [3]. Pregled

Među raznim histoloških tipova GC, usredotočili smo se na karcinom stanica pečatnjak-prsten (SRCC) želuca (sig tipa GC). SRCC je mucin za izlučivanje adenokarcinom, u kojoj Intracitoplazmatsko mucin komprimira svoje jezgre dati stanicama karakterističan "pečat-prsten" izgled [7]. Dok SRCC je izvijestila da se porijeklom iz različitih tkiva, želudac je najčešći organ podrijetla [7], [8]. Unatoč čestim učestalosti SRCC među želučanog malignoma, kliničkopatološkim značajke sig tipa GC još uvijek kontroverzno; neke ranije studije su izvijestili da stanica pečatnjak-prsten histologiju predstavlja bolju prognozu [9], [10], [11], dok druge studije su izvijestili da histologija SRCC je znak prilično lošiju prognozu [8], [12], [ ,,,0],13], [14]. Pod takvim pozadini, pokušali smo pronaći nove specifične markere gena za sig tipa GC. U većini prethodnih studija [15], [16], [17], sig tipa GC je bio analizirati zajedno s por tipa i muc tipa, jer su ove tri vrste GC kategorizirati u tipu difuzne Laurenov. Međutim, mnogi izvještaji ukazuju da je sig tipa GC je sasvim drugačiji od udjelu ili MUC tipa GC, s gledišta molekularnih svojstava ili malignim potencijalima [3], [13], [18]. Dakle, analizirali smo sig tipa GC neovisno o udjelu i MUC tipa GC. Pregled

Među velikim brojem gena, prikazan smo nekoliko onih poput kadherina
obiteljskim genima [19 ], [20], ljudski mucin
geni [21], vimentin pregled [22], katepsin pregled obiteljskim genima [23], [24], [25] itd, čiji su izrazi su izvijestili da se razlikuje između Laurenov crijevnih i difuznog tipa GC. Glavna svrha ovog istraživanja je pronalaženje trag neriješenom karcinogeneze u sig tipa GC kroz identificiranje njegovih specifičnih gena biljega. Očekivali smo da je naša rasprava će dovesti do nepoznatih uzvodno regulatornih gena (kao što su posebnim faktorima transkripcije) određivanje svojstava sig tipa GC. Neki transkripcijski faktori koji se odnose na gastrointestinalni svojstva su razjašnjene, kao što su CDX
obiteljskim genima [26], [27], gli
obitelji gena [28], i SOX2
[29], no vjerujemo ne nekoliko ključnih gena za gastrointestinalnog diferencijacije i želučane onkogcnczom dalje ostaju neotkrivena. Druga svrha ovog istraživanja je analizirati vrlo ranoj fazi želučane tumorigenezi se temelji na ekspresiju identificiranih novih marker gena. Ne samo s naglaskom na sig tipa GC, mi i dalje izazov za procjenu svih vrsta ranih GC slučajevima analizom identificirano izraz marker gena u oba lezije tumora i susjedna sluznice. Uvjereni smo naš rad bi trebao biti ključ za približavanje kontroverzne značajke sig tipa GC, a trebao bi biti dovesti do razjašnjavanja različite histološke karakteristike želuca malignosti. Pregled

Materijali i metode pregled

Stanična kultura pregled

Dvadeset želuca, kolorektalni deset i dva negastrointestinalnih raka stanične linije održavane u DMEM uz 10% fetalnog telećeg seruma (Gibco /Invitrogen, Carlsbad, CA), na 37 ° C [30], [31]. Sve stanične linije su kupljeni od American Type Culture Collection, Riken Cell banke ili stanica informacijski centar za biomedicinska istraživanja Instituta za razvoj, starenje i rak, Tohoku University. Imena i histološka tipova koji se koriste stanične linije raka opisano detaljno u Popratni dokument S1. Za demetiliranje DNA reagensa i inhibitora histon deacetilaze (HDAC), 5-aza-2'-deoksicitidina (5-aza-DC, Sigma-Aldrich) na 2 ug /ml ili trihostatin A (TSA, Sigma-Aldrich) na 100 ng /ml je dodano u medij kulture. pregled

RT-PCR pregled

ukupna stanična RNA se dobiva kada se koristi za izolaciju RNA ISOGEN reaent (Wako, Osaka, Japan) kako je prethodno opisano [30]. Semi-kvantitativni RT-PCR pomoću Superscript jednom koraku reakcije koristeći Platinum Taq (Gibco /Invitrogen). Parovi primera i RT-PCR postupke koristiti za određivanje razine ekspresije E-kadherina (CDH-1) Netlogu, LI-kadherina (CDH-17) pregled, MUC5AC pregled, MUC6 pregled, MUC2 pregled, CTSE (Katepsin E) pregled, CTSD (Katepsin D) pregled, CTSB (Katepsin B) pregled, CTSL (Katepsin L) pregled i GAPDH pregled prikazani su u tablici S1.

Western blot-pregled

cijelih stanica ekstrakti (20 ug svakog) lizirane i kuhana s 1 x puferom za uzorkovanje [30] su razdvojeni elektroforezom na 12,5% SDS poliakrilamidnim gelovima, prenose na nitroceluloznu membranu (Hybond-N, Amersham, Freiburg, Njemačka) i imunološki s anti-humanim katepsina E antitijela (# AF1294, R &D Systems, Minneapolis, MN) ili anti-humanim β-aktin (C4) antitijela (# sc-47.778, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA). Za druga protutijela, peroksidaza (HRP), koje je konjugirano anti-kozji IgG (H + L) magaraca antitijela (ˁ-035-003, Jackson, Baltimore, PA) i peroksidaza hrena (HRP), koje je konjugirano anti-mišjeg IgG (H + L) kozjeg antitijela (# A90-216P, Bethyl, Montgomery, TX) su redom koriste. Posebne vrpce su detektirane Immunostar LD (Wako, Osaka, Japan) i LAS-4000 (Fuji film, Tokyo, Japan). Pregled

Imunohistokem pregled

provedena su Deparaffinization i endogene peroksidaze inaktivacija kliničkih tkiva kao što je prethodno opisano [3]. Za CTSE, primarni imunobojanje s anti-ljudskim CTSE kozjeg poliklonalnog antitijela (# AF1294, R &D Systems) na 1:100 razrjeđenje je provedena tijekom 16 sati pri sobnoj temperaturi. Nakon ispiranja u PBS-u (fosfatnom puferu soli) tri puta, a sekundarna imunobojanje Histofine Simple Stain MAX-PO (G) (Nichirei, Tokyo, Japan) je provedena tijekom 30 min na sobnoj temperaturi. Nakon ispiranja u PBS tri puta, reakcijski produkti su vizualizirani u 20 mg /dl 3,3'-diaminobenzidin otopine Tetrahidroklorid sadrži kap 30% 'H-sub> <2O sub> 2, a zatim isprati PBS. Nuklearna counterstaining ostvaren sa Mayerovim hemalaunom. Za MUC5AC i MUC2, hidratirane zagrijavanje u 1 mM EDTA puferu (pH 8,0) na 120 ° C, najprije je provedena u loncu (Delicio 6L t-FAL, Rumily, Francuska) tijekom 10 minuta za pronalaženje antigena. Primarni imunološko s anti-MUC5AC protutijela (NCL-MUC-5AC, Novocastra, Newcastle-upon-Tyne, Velika Britanija) po 1:200 razrjeđivanje ili anti-MUC2 antitijela (NCL-NUC-2, Novocastra) na 1:500 razrjeđenje je provedena tijekom 16 sati pri sobnoj temperaturi. Nakon ispiranja u PBS tri puta, sekundarni imunobojanje Histofine Simple Stain MAX-PO (G) (Nichirei) je izvedena tijekom 30 min na sobnoj temperaturi. Sljedeći korak je bio isti kao CTSE imunološki bojanja. Sve imunološki sekcije su ocijenjeni samostalno dva patologa, uz HE umrljan i dijelovi PAS-obojena iz iste lezije. Pregled

Tumor Uzorci

Među želučanog tkiva raka zaokrene na Fujita zdravstva Medicinski fakultet Sveučilišta, odabrali smo 51 karcinoma želuca stanica pečatnjak-prsten (sig) uzoraka kirurški resected. Nadalje, 67 raka želuca kirurški primjerci ostalih pet vrsta želučanog adenokarcinoma (tub1, tub2, por, Pap i MUC) nasumično su odabrane iz iste banke. Za endoskopski reseciranih uzoraka, odabrali smo 84 uzoraka (78 slučajeva raka želuca i 6 želučanog adenom slučajeva) koji su se liječili u University of Tokyo bolnice od 2005. do 2011. Za sve kliničkim uzorcima, pismeni informirani pristanak dobiveni su iz odgovarajućih pacijenata prema Deklaraciji Helsinkija. Ova studija je odobren od strane institucionalnih etičkog nadzora odbora za ljudska istrage na Fujita University Health, a također je odobren od strane etičkog povjerenstva Sveučilišta u Tokiju. Pregled

retrovirus vektora

Da biste generirali retrovirusnih vektora ekspresiju CdX2 pregled, Gli1 pregled, Gli3 pregled, CTSE pregled i SOX2 pregled, odgovarajuće cDNA su umetnuti u pMXs-IRES -puro (Cell Biolabs Inc., San Diego, CA) kao što slijedi. Za CdX2 pregled, pMXs-CdX2-TRES-puro generirana kao što je ranije [26] prijavljen. Gli1 pregled cDNA se dobiva iz PCR-XL-TOPO-Gli1 (Open Biosystems, Huntsville, AL) preko PCR amplifikacije uz korištenje primara 5'-agccagatctatgagcccatctctgggattc-3 'i 5'-agtagcggccgcccctactctttaggcactagagt-3'. Nakon dvostrukog BglII a ne ja, dobivena fragment je umetnut u BamH /nisam mjestu pMXs-TRES-puro (Cell Biolabs Inc., San Diego, CA) za generiranje pMXs-Gli1 Ires-puro. Gli3 pregled cDNA se dobiva iz PCR-XL-TOPO-Gli3 (Otvori Biosystems) pomoću PCR amplifikacije uz korištenje primara 5'-aatgcggccgctgatttccgttggt-3 'i 5'-tgcggatcctacgtgggcatttttg-3'. Nakon dvostrukog digestije sa BamH a ne ja, dobivena fragment je umetnut u BamH /nisam nalazišta pMXs Ires-puro generirati pMXs-Gli3 Ires-puro. CTSE pregled cDNA se dobiva iz pCMV-SPORT6-CTSE (Thermo Fisher Scientific, Madison, WI) putem PCR amplifikacije korištenjem primera 5'-ccgagatctatgaaacgctccttcttttg-3 'i 5' gggctcgagtaaaactgtcgaatgaaga-3 '. Nakon dvostrukog BglII i XhoI I., dobiveni fragment je umetnut u mjestima BamH /Xhol I. pMXs Ires-puro generirati pMXs-CTSE Ires-puro. SOX2 pregled cDNA se dobiva iz MKN-7 genomske DNA putem PCR amplifikacije uz korištenje primara 5'-atgtacaacatgatggagacggagct-3 'i 5'-tcacatgtgtgagaggggcagtgtg-3'. Amplificirani fragment je umetnut u EcoR V mjesta pT7Blue-T vektor (Novagen, Darmstadt, Njemačka), radi formiranja pT7Blue-SOX2. Nakon dvostrukog digestije sa BamH I i Sal I, dobiveni fragment je umetnut u mjesto BamH I /Xho I u pMXs Ires-puro generiranje pMXs-SOX2 Ires-puro. Kotransfekcijom tih plazmida s vezikularnog stomatitisa virusnog G proteina (VSV-G) plazmid ekspresije u Plat-GP prepackaging stanične linije (Cell Biolabs Inc.), odnosno, VSV-G-pseudotyped MuLV-based retrovirus vektori izražava CdX2
, Gli1 pregled, Gli3 pregled, CTSE pregled i SOX2 pregled su pripremljeni. pregled

Rezultati pregled

izražavanje katepsina E (CTSE) pregled je povezan s Nastao Histološka Tip želudac staničnim linijama karcinoma

za traženje marker gene za sig tipa GC, prikazan smo ekspresiju nekoliko gena izvijestio pokazati osebujan izričaj između Laurenov crijevnih i difuznog tipa GC. Izražavanje E-kadherina pregled ( CDH-1 pregled) [19], LI-kadherina pregled ( CDH-17 pregled) [20], MUG5AC pregled [21], MUC6 pregled [21], MUC2 pregled [21], vimentin pregled [22], CTSD
( katepsin D pregled) [23], [24], CTSE pregled ( katepsin E pregled) [23], [24], CTSB
( katepsina B pregled) [25], CTSL pregled ( katepsin L pregled) [25], i GAPDH pregled (interna kontrola) gena su procijenjena pomoću RT-PCR u 20 GC linija, zajedno s 12 tumorskih staničnih linija izvedenih iz drugih organa (Slika 1A). Zatim smo usmjereni pozornost na CTSE Netlogu, jer izražava u oba Kato-III i NUGC-4 izvedeni iz sig-tipa GC, a također i zato što nikad ne izražava u MKN-7 i H-111-TC poznato je da je nastao iz dobro diferenciranim cijevnog adenokarcinoma želuca (tub1 tipa GC, dokazna isprava S1). pregled

za ostale ispitanih gena, ekspresija CDH-1 pregled ( E kadherina pregled), koji su se često nedovoljan u Laurenov tipa difuzna GC [19], [32], [33], bio je neočekivano otkrivena u dva sig tipa stanica GC-izvedeni (Slika 1A). Također je bilo neočekivano da CDH-17 pregled ( LI-kadherina pregled), smatra se crijevna marker gena [20], [26], [27], izražava se u gotovo sve želučani stanične linije raka, uključujući sig-tipa (Slika 1a). Za ostale katepsin obiteljskim genima, CTSD pregled je izvijestila da se vrlo izražen u difuznom tipa GC i prognostički parametar za pacijente karcinom želuca [23], [34], ali rezultati RT-PCR pokazala je da svi ispitivani stanične linije raka jednako express CTSD pregled (Slika 1A). CTSB pregled i CTSL pregled su izvijestili da se povišen u želučanom karcinomu [35] i korelira s malignim imovine [36], ali specifičan izraz ni CTSB Netlogu ili CTSL pregled u sig tipa staničnim linijama GC-izvedeni mogao biti otkriven (Slika 1A). U cjelini, izraz profil CTSE pregled čini se da je sasvim drugačiji od drugih katepsin obiteljskim genima. Pregled

Sljedeći ocijenili odnos CTSE izražavanja i histološkom tipu staničnih linija 20 GC. Na temelju detaljnog nadzora književnosti opisane u "histološki tip tumora želučane staničnim linijama karcinoma" od Popratni dokument S1, 19 GC stanične linije mogu biti razvrstani po Lauren i japanski klasifikacija [3], [4], [5] (Tablica 1) , Prema klasifikaciji Lauren, 7 od 11 vrsta difuzna GC-izvedeni stanice i jedna od pet vrsta crijevne stanice GC-izvedeni izrazi CTSE (Tablica 1): CTSE pregled gena najčešće se izražava u difuznom tipu i manjkava u crijevna tipa GC. Povezanost između CTSE izražavanja i histološke značajke želučane malignosti dobiva jasnije kada se primjenjuje preciznije japanski klasifikacija. Među staničnim linijama iz difuznog tipa GC, to je napomenuti da NUGC-4 i Kato-III potječe iz sig-tipa GC snažno izraziti CTSE, dok je SH-10-TC i KE-97 je nastao iz MUC tipa GC su manjkavi u CTSE izraz. Za stanice izvedene iz por tipa GC, najčešći histološki oblik želuca malignosti [3], CTSE izraz je raznolika: MKN-45, KE-39, HuG1-PI, HuG1-N i AGS snažno izraziti CTSE, dok GCIY i HGC-27 su manjkavi u CTSE izražavanja. Naprotiv, među staničnih linija iz Laurenov crijevne tipa GC, naime tub1 i tub2 japanske klasifikacije, MKN-7, H-111-TC, MKN-74, a AZ521 nedostaje CTSE izraz, sa samo jednim izuzetkom NCI-N87 pokazujući očitu CTSE izraz. pregled

iz ovih rezultata, nagađa se da je ekspresija CTSE značajno korelira s histološkom tipu karcinoma želuca. Za druge rijetke vrste GC staničnim linijama, MKN-1, ECC-10 i ECC-12 su apsolutno nedovoljan u CTSE izraz (Slika 1A, Tablica 1). Pregled

Izražavanje katepsina E (CTSE ) pregled gen reguliran majorly na prepisivanje razini Netlogu

Korištenje 13 želuca, 5 kolorektalni i 2 drugim staničnim linijama raka, proizvodnja CTSE protein je analiziran pomoću Western blot (Slika 1B). 7 staničnih linija 20 i imunohistokemijski su ispitane (Slika S1). U obje analize CTSE pregled mRNA i proizvodnja CTSE proteina uglavnom su zajedno, što ukazuje na CTSE pregled izraz uglavnom je regulirano na razini transkripcije. Osim toga, sve-ili-nijedan izraz CTSE prikazano na RT-PCR, zapadnoj upijajući i imunohistokemijski predložio da želučane stanice raka će biti jasno svrstati u dvije kategorije:. CTSE-izražava vrsti i CTSE-manjkavo tipa pregled

istražiti regulaciju CTSE pregled gen, dvije glavne epigenetski lijekovi demethylating sredstvo 5-aza 2'-deoksicitidin-a inhibitor histon deacetilaze trihostatin a [37], primjenjuju se do pet GC stanične linije (Slika 1C) , Tri CTSE-izražavanja i dva CTSE nedostatkom GC stanične linije su tretirani, ali nismo mogli otkriti o svakoj promjeni CTSE pregled transkripcija (slika 1C). Za metilacije, mi smo također tražili CpG otoka u promotorske regije sugestivan ljudskog CTSE pregled gena pomoću dvije web stranice: "http://www.uscnorris.com/cpgislands2/cpg.aspx~~HEAD=pobj" pokazujući CpG otoku tragač i " http://www.ncbi.nlm.nih.gov "podržan od strane Nacionalnog centra za biotehnološke informacije (NCBI). Rezultati oba pretraživanja sugerirao da je promotor ljudskih CTSE pregled gen karakterizira niži postotak CpG dinukleotida (55%) i bez otoka CpG, koje su u skladu s našim rezultatima (Slika 1C).

Osim toga, istražili smo učinak četiri faktora transkripcije koje su prijavljene da regulira mnoge gastrointestinalne gene: CdX2 Netlogu [26], [27], gli pregled obitelji gena ( gli1 pregled i gli3 pregled) [28], i SOX2 pregled [29]. Pod stabilnim prijenosu CdX2 pregled, gli1 pregled, gli3 pregled i SOX2 pregled, međutim, nismo mogli otkriti očite promjene CTSE pregled izraz (Slika 1D). Trenutno, nismo mogli rasvijetliti regulatorni mehanizam CTSE pregled gen, koji bi trebao biti riješen u budućnosti. Pregled

Katepsin E (CTSE) Definitivno je Izraženo u pečatni prsten stanica karcinoma želuca pregled

Kako bi potvrdili nagađanja iz GC stanicama (Tablica 1, Slika 1a), što sljedeći put analizirali CTSE izraz u kliničkim uzorcima. Isprva su ocijenjeni 51 sig tipa uzorci GC kirurški resected. Nevjerojatno, očito bojenje CTSE zabilježeno je u svim 51 uzoraka ispitanih, a 50 od 51 slučajeva, CTSE-pozitivne stanice zauzeli više od 90% stanica raka u tumoru (Tablica 2). Pregled

Nakon toga, analizirani su 67 kirurški uzorci dobiveni iz GC slučajevima osim sig-tipa, što predstavljeni različiti obrasci CTSE izražavanja (tablica 2). CTSE izraz u por tipa GC očito veći je u odnosu na ostale četiri vrste GC, iako je bila znatno niža od one u sig tipa GC (tablica 2). Prevalencija CTSE pozitivnih stanica u tub1-, tub2-, pap- i MUC tipa GC je svakako manja, ali to nije tako niska kao i ostale normalne probavnih organa (Tablica 2). Tipični Imunobojanje slike CTSE u šest vrsta GC prikazani su na slici 2 (sig i tub1) i na slici S2 (tub2, Pap, por, a muc). Pregled

Na temelju rezultata kirurških uzoraka, možemo daljnjeg analizirani CTSE izraz 84 endoskopski reseciranih uzoraka želučane tumora. U usporedbi s kirurškim primjeraka, histologiju endoskopski resected tkiva je mnogo homogeniji; bilo je odatle očekuje se da veza između CTSE izražavanja i histologiju raka želuca može se preciznije analizirati. Oni čine 78 slučajeva ranoj fazi adenokarcinom (7 sig tipa, 52 tub1 tipa, 12 od tub2 tipa, a 7 od PAP-tipa GC) i 6 slučajeva prekanceroznih adenom (tablica 3). CTSE izraz signale, tub1-, tub2- i PAP tipa GC u endoskopski reseciranog tkiva nalik na kirurški reseciranih one s odgovarajućim histologiju (Tablice 2 i 3). Izračunati CTSE izraz rezultati (Tablica 3) jasno pokazuju tendenciju da CTSE svakako izražava u sig-tipa GC dok je sklon biti nedovoljan u tub1- i tub2 tipa GC. To bi trebao biti također napomenuti da želuca adenom, što se može smatrati više diferencirana histološke značajke u usporedbi s tub1 tipa GC, pokazala najjači nedostatak CTSE (tablica 3). Pregled

CTSE nije samo Pokazatelj pečatni prstenasta stanice karcinoma želuca, ali i želudac Diferencijacija Marker pregled

kako istražiti raspodjelu CTSE u normalnim crijevima i predtumorske želudac, imunološko CTSE se dalje primjenjuje na ne-kancerozne želuca i drugih organa probavnog trakta. U želucu bez atrofije i intestinalne metaplazije ekspresija CTSE jasno očitujc fundusnih i pilorusa žlijezda želuca (Slika S3D /S3A i S3E /S3B). Srčani žlijezde u želucu također izražavaju CTSE, iako je prilično slabiji od izražavanja u fundusnih ili pilorusa žlijezde (Slika S3F /S3C). Kontrastivno, CTSE rijetko se izražava u jednjak, duodenum, tanko crijevo i debelo crijevo (slika S4). Pregled

Mi i dalje ocjenjuju CTSE izraz u sluznici želuca s intestinalne metaplazije, poznatog pretkarcinomsku stanje želuca [26 ], [29], [38]. Kao što je prikazano na slici 3A, želučanih fundusa žlijezde i crijevne metaplastičnim žlijezde pokazuju kontrastivnu bojenje CTSE. Tipično, intestinalne metaplazije se svrstati u dvije kategorije: mješoviti želučane i crijevne-tipa (nepotpuna tip) i to isključivo crijevnom tipa (potpuna tip) [29], [38]. Dobro je poznato da je bivši jednom izražava kako MUC5AC (želučana marker mucina) i MUC2 (crijevna marker mucina), dok je potonji izražava ne MUG5AC ali MUC2 [29]. U obje vrste crijevnih metaplazije u želucu, utvrdili smo da je ekspresija CTSE je slična MUC5AC a nasuprot MUC2 (slika 3B i 3C). Pregled

Kako procijeniti povezanost CTSE izražavanja s MUC5AC i MUC2 izražavanja, njihova imunološko statistički je procijenjena korištenjem endoskopski resected 84 želučanog tumorskih tkiva (Tablica S2). Korelacija analize pokazale su da je ekspresija CTSE pozitivno povezane s želučanom marker MUC5AC ( p pregled i 0.0001) i negativno povezane sa crijevna marker MUC2 ( p pregled = 0.0019). Sintetički, zaključili smo da CTSE, kao MUC5AC, jedan je od želučanog diferencijacije markera. Pregled

Više Nediferencirani Tubular Adenokarcinom Obično nastaju iz pozadine sluznice s smanjena "želuca" i "crijevna" Značajke pregled

Da bi istražili inicijaciju korak želučanog tumorigenezi, pozadina sluznica ranog karcinoma i adenoma još ocijenjena, koristeći 84 endoskopski resected primjeraka. CTSE ekspresija nekanceroznog sluznici želuca u susjedstvu tumora lezije je procijenjena zajedno sa MUC5AC i MUC2 (Tablica 4). Za sig tipa GC, kako je tumor lezija i pozadine sluznicu uglavnom pokazali snažnu ekspresiju CTSE i MUC5AC, dok izraz MUC2 bila vrlo slaba na njih oboje (Tablica 4). Slični izraz obrasci tri markera u tumor i susjedni sluznice upućuju na to da početak sig tipa GC odražava značajke pozadini sluznice, s obzirom na "želuca" i "crijevna" diferencijacije. To jest, sig tipa GC sa non-crijevnih želučanih svojstava u početku se javlja iz pozadine sluznice s ne-crijevnih i želučanih sadržaja. Pregled

Za želučane adenoma i cijevnog adenokarcinoma (tub1 /tub2 tipa GC), kontrastivno, izraz profile tri markera su vrlo zanimljivi (Tablica 4). Više nediferencirane želučanih tumora imaju tendenciju povećati ekspresiju CTSE i MUC5AC u tumorskim lezijama (tub2 > >tub1 adenom), ali smanjuju ekspresiju tih želučanih markera u pozadini sluznice (tub2 < tub1 < adenom). Oni ukazuju na to da više nediferencirane (zato i maligni) želučanih tumora Seoske pokazati jaču želučane imovine, dok oni imaju tendenciju da će nastati iz pozadine sluznice sa smanjenim želučane značajke. S druge strane, više diferencirane želučanih tumora obično izraziti MUC2 u oba tumorskim lezijama i pozadine sluznice (adenom > tub1 > tub2). To upućuje na zaključak da je crijevna diferencijacija pozadine želučane sluznice dovodi do crijevno diferenciranih (stoga i manje malignih) želučanih tumora. Pregled

Za PAP tipa GC, izrazi CTSE, MUC5AC i MUC2 znatno su jaki u oba lezije tumora i okolna sluznica, koje su sasvim drugačije od ekspresije obrazaca tub1 /tub2 tipa GC (Tablica 4). Papa tipa GC je razvrstan u crijevnom tipa Laurenov zajedno s tub1 /tub2 tipa GC, ali naša sadašnja analiza sugerira da PAP-tip i tub1 /tub2 tipa GC ne treba tretirati u istoj kategoriji, sa stanovišta želučanih i crijevnih značajke. U našim prethodna izvješća analizira brm pregled [3], mogući ključ marker gen gut diferencijacije, izražavanja BRM u želučanom papilarni adenokarcinom (PAP) je sasvim drugačiji od cjevastog adenokarcinoma želuca (tub1 i tub2). Trenutno, mi smo uvjereni da histološka razlika između PAP tipa GC i tub1 /tub2 tipa GC treba strogo prepoznati.

Rasprava pregled

Uloge i regulacija katepsina E (CTSE), u ljudski želudac pregled

katepsin E (CTSE), non-lizosomni unutarstanični aspartatsku proteazu a, jedan je od obitelji proteaza katepsin [39], [40]. Još aspartinska proteaza katepsina D (CTSD) homolog CTSE, predstavlja glavnu proteolitičke aktivnosti u lizosomskog komponentu, ali funkcionalne uloge CTSE nisu razjašnjeni [24], [39]. Raspodjela obiju proteinaza je sasvim različit: CTSD univerzalno postojali u lizosomima različitih tkiva (u skladu sa rezultatom Slika 1A), a CTSE uglavnom izražen u stanicama imunološkog sustava, kao što su macropahges, limfocita, dendritičke stanice, itd [39 ]. Ekspresija CTSE u želucu također je objavljeno [23], [24], ali fiziološki i patološki funkciju želuca CTSE trenutačno nije poznat [39], [40]. U ovom istraživanju vrednovanje čak 202 kliničkih uzoraka želuca, jasno je pokazao CTSE je i želuca diferencijacija marker i marker karcinom želučani pečatnjak-prsten, ali značaj želučane CTSE izražavanja ostaje neizvjesna. Pregled

Da analizirati odnos CTSE izražavanja i onkogeni potencijal, proizveli smo retrovirus vektora u MuLV-based [26] koja nosi CTSE pregled gena i prenesen je u CTSE-deficijentnih želučanih staničnim linijama karcinoma: MKN-74, SH-10 -TC i MKN-1. Procijenili smo mogućnost mijenjanja želučanoj sluzi proizvodnje (Slika S5) ili njihovih morfoloških promjena, ali se više ne primjećuje promjena. Korištenjem ovih uspostavljene stanične linije, da dodatno izvesti i na nastajanje kolonija u mekom agaru [30] i indukcije apoptoze obradom aktinomicina D, kamptotecina i staurosporinom [41]. Međutim, mogli bismo otkriti učinak CTSE izražavanja na niti sidrište neovisnog rasta, niti otpornost na apoptozu uzrokovane lijekovima (podaci nisu prikazani) pregled

U nedavnom istraživanju, CTSE je izvijestila da su neki anti-onkogeni potencijal.: Kawakubo et al. pregled pokazali da CTSE posebno inducira zaustavljanje rasta i apoptozu u ljudskim staničnim linijama raka prostate katalizirajući proteolitičkog oslobađanja topljiv nekroze tumora apoptoze inducira ligand faktor vezane (staza) se s površine stanice [42 ]. Međutim, CTSE-manjkav miševa nije ni izložbeni raka sklone fenotip ni predstavljalo očitu želučanog poremećaja [43], [44], [45]. Trenutačno, to je stvar nagađanja da li prijavio antitumorska aktivnost CTSE mogao primijeniti želučani karcinom, uključujući karcinom stanica pečatnjak-prstena. Zajedno sa svojim unelucidated regulacije i fiziološke funkcije, efekti CTSE na želučane diferencijacije i tumorigenezi su temeljni problemi koje treba riješiti u budućnosti. Pregled

Želučani Canceration sa stanovišta "želuca" i "crijevna" vlasništvo Pozadina

• PLoS ONE: retinoičnom kiselinom aktivirano Ndrg1a potiskuje Wnt /beta-katenina signalizaciju kako bi se omogućilo Xenopus gušterače, Jednjak, želudac, i dvanaesnika Specifikacija
• PLoS ONE: Postoperativni kemoradioterapiji kombinaciji s epirubicin bazi triplet kemoterapiju za lokalno uznapredovalim karcinomom želuca ili gastroezofagealnog spoja