PLoS One: expressziós profil Stem Cell-rokon gének neoadjuváns kezelt gyomorrák: Egy NOTCH2, GSK3b és β-catenin Gene Signature jósolja Survival

absztrakt katalógusa

A rák őssejt (CSC) alapú génexpressziós társított prognózis különböző tumor típusok és CSC javasoljuk, hogy különösen a szereknek ellenálló. A vizsgálat célja az volt az első, hogy meghatározzák a prognosztikai jelentősége CSC kapcsolatos génexpresszió maradék tumorsejtek neoadjuváns kezelt gyomorrák (GC) betegeknél. Másodszor, azt kívántuk vizsgálni, hogy kifejezés változások között pre- és post-terápiás tumormintákban létezik, összhangban dúsítású gyógyszer rezisztens tumorsejtek. A kifejezés a 44 gén esetében analizáltuk 63 formalin-fixált, paraffinba ágyazott tumorminták részleges tumor regresszió (10-50% maradék tumor) után neoadjuváns kemoterápia által kvantitatív valós idejű PCR-rel az alacsony sűrűségű tömböket. Az aláírás kombinált GSK3b katalógusa ^{magas, β-catenin (CTNNB1) hotelben magas és NOTCH2 katalógusa alacsony expressziója erősen korrelál jobb túlélés (p < 0,001). A prognosztikai jelentősége ezeknek a géneknek is megállapították, elemezve publikus génexpressziós adatok. A kifejezés a 9 gén összehasonlítottuk között előre terápiás biopszia utáni terápiás kimetszett mintákat. Jelentős utáni terápiás növekedése NOTCH katalógusa 2, LGR5 katalógusa és POU5F1 katalógusa expressziót találtunk tumorokban különböző tumor regresszió fokozat. Nem szignifikáns eltérést figyeltünk meg a GSK3b katalógusa és CTNNB1 katalógusa. Immunhisztokémiai analízis igazolta kemoterápia által okozott növekedése intenzitásának NOTCH2 festés, de nem a százalékos NOTCH2. Mindent összevetve, a GSK3b, CTNNB1 katalógusa és NOTCH2 katalógusa kifejezés aláírás egy új, ígéretes prognosztikai paraméter GC. Az eredmények a differenciális expressziós analízise jelzi kiemelkedő szerepet NOTCH2 és a kemoterápia rezisztencia GC, amely úgy tűnik, hogy kapcsolatban hatása a gyógyszerek NOTCH2 kifejezés helyett dúsítású NOTCH2 kifejező tumorsejtek. Katalógusa}

Hivatkozás: Bauer L, Langer R, Becker K, Hapfelmeier A, Ott K, Novotny A, et al. (2012) expressziós profil Stem Cell-rokon gének neoadjuváns kezelt gyomorrák: A NOTCH2 katalógusa, GSK3b katalógusa és β-catenin katalógusa Gene Signature jósolja Survival. PLoS ONE 7 (9): e44566. doi: 10,1371 /journal.pone.0044566 katalógusa

Szerkesztő: Ju-Seog Lee, a Texasi Egyetem MD Anderson Cancer Center, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: May 16, 2012; Elfogadva: augusztus 8, 2012; Megjelent: szeptember 10, 2012 katalógusa

Copyright: © Bauer et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Finanszírozás: A tanulmány támogatta a Deutsche Krebshilfe Mildred Scheel Stiftung adhatnak számot 108524 GK és KB. A fenntartó nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

Speciális gastricus karcinómák (GC) gyakran kezelik Platin /5-fluor-uracil (5FU) - alapú neoadjuváns kemoterápia [1]. A cél ennek a terápia, többek között, hogy csökken a daganat műtét előtt, hogy növeljék a valószínűsége teljes eltávolítása, és ezáltal javítja a beteg túlélési. Azonban válasz alacsonyak, és teljes vagy subtotalis tumor regresszió figyelhető meg csak 20-40% -ánál [1], [2]. Így a kemoterápia rezisztencia egyik fő akadálya a sikeres kezelés. Katalógusa

A rákos őssejt hipotézis tumorsejtek heterogén, és a fokozott hatóanyag-rezisztencia nem egy adott fenotípus kisebbségi tumorsejtek - az ún úgynevezett rákot kezdeményező sejtek vagy a rák őssejtek (CSC) [3] - [5]. A növekedés a CSC népesség kemoterápia után igazolták [6], [7], és az őssejt alapú génexpressziós társult rossz prognózissal különböző tumorok, beleértve a gyomor-karcinómák [8] - [11]. A CSC hipotézis még ellentmondásos tárgyalt, de bizonyíték van a létezését CSC számos tumortípusban és molekuláris markert azonosítottak, amelyek preferenciálisan találhatók ezek a sejtek [4], [5]. Az aktiválás embrionális szignálfolyamato- mint a Wnt, Notch és Hedgehog utak, felvetődött, mint a hajtóereje a kialakulását CSC [4], [12]. Vonatkozó adatok a forrás és a létezését gyomor CSC marad meggyőzőek [13] - [17]. Egerekben csontvelői eredetű sejtek, vagy egy specifikus sejtpopuláció az antrumban expresszáló Wnt célmolekula LGR5, összefüggésbe hoztak CSC a gyomorban [17], [18]. Ezen túlmenően, a CD44 és CD24 már javasolták a specifikus sejtfelszíni markerek, de az adatok nem állnak összhangban [19], [20]. Katalógusa

A neoadjuváns kezelés protokollja GC kiváló lehetőséget biztosít, hogy vizsgálja meg a tumorsejtek előtt és a kemoterápia után a betegeknél. Ebben a tanulmányban azt kívánta megvilágítani egyrészt, hogy a kifejezés a feltételezett CSC kapcsolatos gének utáni terápiás reziduális tumor jósolja a betegek túlélési és a második, hogy az adott differenciáltan expresszáltak között előre terápiás biopszia, és a poszt-terápiás daganatminták összhangban dúsítású kemoterápiára rezisztens tumorsejtek által jósolt a CSC fogalom. A betegek csoportja, akik bizonyították jelentős daganat zsugorodását után neoadjuváns kemoterápia, de még mindig elég maradék tumorsejtek rendelkezésre az elemzéshez (10-50% maradék tumor) tekintették a legmegfelelőbb csoportot kezdeni szűrési elemzés prognosztikai releváns gének és hogy majd érdemleges különbségek génexpresszió között a pre- és post-terápiás tumor mintákban. Ezek vizsgálata reziduális tumorsejtek azonosítottunk egy génexpressziós mintázat felölelő GSK3b, CTNNB1 katalógusa és NOTCH2 katalógusa, amely erősen jósolja prognózis a betegek. Megmutatjuk, hogy milyen hatással van a GSK3b katalógusa és CTNNB1 katalógusa hogy ezt az aláírást nem függ a kemoterápia, és nagyobb valószínűséggel tükrözi tulajdonsága a primer tumor és adataink szintén arra utalnak, hogy az adott NOTCH2 katalógusa szerepet játszhat a kemoterápia rezisztencia GC. katalógusa

anyagok és módszerek katalógusa

a betegek katalógusa

összesen 480 beteg a lokálisan előrehaladott GC (CT3 /4 ) kezeltük neoadjuváns, platinanalógok /5-FU-alapú kemoterápia a Sebészeti Osztály a Technische Universität München között 1991 és 2007, és értékeljük a válasz alapján szabványosított kórszövettani protokoll [2] - [22]. Tumor regresszió sorolni 3 fokozat: tumor regresszió grade (TRG) 1, amely TRG1a (teljes tumor regresszió) és TRG1b (részösszeget tumor regresszió: < 10% maradék tumorsejtek /tumor ágy), TRG2 (részleges tumor regresszió: 10-50% maradék tumorsejtek /tumor ágy) és TRG3 (minimális vagy nincs tumor regresszió: > 50% reziduális tumor /tumor ágy). A 480 beteg, 121 beteg bizonyította TRG2 és 63. ezeket elemeztük ebben a vizsgálatban. A befogadás kritériuma volt a rendelkezésre álló elegendő tumorszövetben az elemzéshez a kezelt betegek legalább 50% -a a tervezett dózis a kemoterápia. A betegek jellemzőit és kezelési protokollok 1. táblázat mutatja, hogy meggyőződjön a reprezentatív jellegének 63 vizsgált beteg, megjelöli a klinikopatológiai paraméterek, mint a 121-pácienscsoporton és nem mutatott statisztikailag szignifikáns különbséget. Katalógusa

Kövesse -up számítottuk ki a kezelés első napján, amíg a dátum az utolsó kapcsolatot a betegeknél. A medián követési idő 77,1 hónap (tartomány: 28,5-108,5). A klinikai végpont a teljes túlélés volt (OS), melyet az az idő, az első napon a kemoterápia és a halál bármilyen okból. A medián OS 50,9 hónap (tartomány: 4,5-108,5, 95% CI: 25,6-76,3), és 37. 63 beteg halt meg a követés során. Ez a minta mérete és az események száma kellően nagy a következetes becslését minden hatásméret vizsgálták ebben a feltáró tanulmány [23], [24]. Katalógusa

Az összehasonlítás génexpresszió között megfelelő pre- és post-terápiás tumormintákban végeztünk betegek TRG2 és TRG3 (minden n = 22). katalógusa

az immunhisztokémiai analízis előtti és utáni terápiás tumor mintákban 21 beteg TRG1b, 21 beteg TRG2, 22 beteg TRG3 és 16 kezelt betegek műtét önmagában vontak be. A kiválasztás kritériuma ezen elemzések volt a rendelkezésre álló megfelelő megelőző terápiás biopszia utáni terápiás daganatok. Katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

A tanulmány és az emberi szövetek hagyta jóvá a helyi intézményi felülvizsgálati Tábla a Technische Universität München (referencia: 2158/08), és beleegyezését adta szerint intézményi szabályozás. katalógusa

RNS kivonása és a reverz transzkripció katalógusa

a teljes RNS-t vontunk ki formalin-fixált, paraffinba ágyazott (FFPE) szövetekben után kézi mikrodisszekcióban tumor területek, amely legalább 50% -os tumor sejteket. Az RNS-t tisztítjuk, fenolos és kloroformos extrakcióval és t reverz transzkripcióval leírtak [25].

Gene Expression Analysis

A 44 géneket, amelyeket elemzésre kiválasztott alapján azok szerepet játszhatnak a CSC biológia táblázat tartalmazza 2. génexpresszió analizáltuk kvantitatív valós idejű PCR (qRT-PCR) a rendelésre készült TaqMan® alacsony sűrűségű tömböket (Applied Biosystems Inc., Foster City, USA). Megfelelő referencia gének határozzák meg egy elemzést tíz jelölt referencia gének 8 gyomor carcinoma a geNorm-algoritmus [26]. IPO8 katalógusa, POLR2A katalógusa és UBC katalógusa elhatározták, hogy a legmegfelelőbb referencia gén és a normalizálás alapján mértani átlaga a három gén leírtak szerint végeztük [26] . Reagensek, kerékpározás feltételeit és szoftver tartalmazza az alátámasztó adatokat. Relatív génexpresszió mennyiségileg alkalmazásával összehasonlító ΔΔCt módszer [27].

Immunhisztokémia

A monoklonális NOTCH2 antitestet (C651.6DbHN) kapunk a fejlődési vizsgálatokban hibridóma Bank (DSHB, The University of Iowa, Department of Biology, Iowa City, USA). A festési eljárás és vizsgálata antitest specificitását Western blot ismerteti az alátámasztó adatokat és ábra S1A. Katalógusa

Az immunhisztokémiai is született vak módon két független kutató (L. B. és R.L). Citoplazmatikus és nukleáris festést külön értékeljük. Negatív, gyenge, közepes vagy erős festődés intenzitását pontoztuk, mint a 0, 1, 2 és 3, ill. A százalékos tumor sejtek foltos citoplazma /sejtmag pontoztuk, mint 0 (negatív), 1 (< 10%), 2 (10 a < 50%), 3 (50 a < 80%) és 4 (≥80 %). katalógusa

Statisztikai elemzés katalógusa

a feltételes következtetés teszteket alkalmaztunk az optimális cut-off értékek génexpresszió az egyesület a betegek túlélését és meghatározza a p-értékek megfelelnek a maximálisan kiválasztott statisztika [28]. A génexpressziós értékek eléri vagy meghaladja az optimális cut-off érték meghatározása a következő volt magas expressziós és génexpressziós alatti értékek a cut-off érték meghatározása a következő volt alacsony kifejezés. A túlélési arány a becslések szerint Kaplan-Meier görbék, és összehasonlították a log-rank teszt. Relatív kockázatok mérésével becsülik kockázati arányok (HR) származó Cox modellek. A többváltozós elemzés, lépésenkénti előre változó kiválasztás alapján történt likelihood ratio. Az arány a változók száma a modellben az események számát korlátozták 01:10 [24]. Katalógusa

összehasonlítását klinikopatológiai paramétereivel csoportok között végeztük Mann-Whitney-U teszt. A χ ^{2-próba és Fisher-féle egzakt tesztet használtunk az összehasonlítás a relatív frekvencia, ahol szükséges. Statisztikai különbségek génexpressziós között páros segítségével elemeztük a Wilcoxon tesztet. Katalógusa}

A nem felügyelt hierarchikus cluster analízist Cluster 3.0 szoftver [29] és a Java TreeView szoftver (verzió 1.1.5r2) [30]. Relatív mRNS expresszió adatokat log-transzformált, medián-központú és a normalizált alkalmazása előtt teljes kötés klaszterezést távolságban mátrix alapján Pearson-féle korrelációs (uncentred). Katalógusa

A kockázati pontszám alapján került kiszámításra összefoglalja a termékeket a szorzata a Cox regressziós együttható az egyes gének a modellben a normalizált génexpressziós értékek az egyes betegek számára lényegében leírt [31] (a részleteket lásd Anyagok és módszerek S1 és táblázatok S4 és S6). katalógusa

valamennyi statisztikai teszt két oldalú és végzett feltáró módon szignifikancia szint 0,05 SPSS 18.0 szoftver (SPSS Inc., Chicago, IL 11,5) és az R (R Alapítvány Statisztikai Computing, Bécs, Ausztria). katalógusa

a tanulmány megfelel a jelentési ajánlások tumormarker prognosztikai vizsgálatok (REMARK kritériumok) [32]. katalógusa

Analysis of Public microarray adatok katalógusa

publikus génexpressziós array adatait gyomor carcinoma leírással klinikai jellemzők és a betegek túlélését [33] kaptuk a BRB-Array Tools adatarchívum (http://linus.nci.nih.gov/~brb/DataArchive_New.html) és elemeztük BRB-Array Tools [34] (alátámasztó információk) . Csak előrehaladott gyomorrák karcinómák (T3 /4) (n = 58) vontunk be az elemzésbe. Az optimális cut-off értékek GSK3b katalógusa, CTNNB1 katalógusa, és NOTCH2 katalógusa kifejezés határoztuk meg az egyesület a betegek túlélését a feltételes következtetés vizsgálatok maximálisan kiválasztott statisztikák a fent leírt. katalógusa

Eredmények katalógusa

Gene Expression és a betegek túlélési katalógusa

a génexpressziós profilt a 63 daganatok betegek TRG2 kimutatta, hogy a magas szintű expresszióját GSK3b katalógusa, DNMT1 katalógusa és CTNNB1 katalógusa szignifikáns összefüggést mutattak a jobb túlélési (feltételes következtetés teszt: p = 0,006, 0,041, 0,043 és -kal). A mérsékelt kapcsolata jobb túlélési volt megfigyelhető magas kifejezése ABCG2 katalógusa és OLFM4 katalógusa (p = 0,051, p = 0,055), és az alacsony kifejeződése NOTCH2 katalógusa (p = 0,071) (3. táblázat). Az egyváltozós Cox-regressziós analízis azt mutatta, mintegy egybehangzó eredmények (4. táblázat). Katalógusa

A többváltozós Cox-féle regressziós analízis, GSK3b katalógusa, CTNNB1 katalógusa, DNMT1 katalógusa és a standard prognosztikai változók GC, nevezetesen YPT, YPN, YPM és reszekciós kategória kiderült GSK3b katalógusa a második legfontosabb független prognosztikai faktor (HR: 0,128, 95% CI: 0,033-0,492, p = 0,003), miután távoli áttét (táblázat S1). katalógusa

a klaszteranalízis magában foglalja az összes elemzett gén nem mutatott betegcsoportok, hogy kimutatható az egyesület az OS. A klaszteranalízis Wnt- és Notch jelátviteli asszociált gének termelt legjelentősebb egyesület OS, ha a GSK3b katalógusa, CTNNB1 katalógusa és NOTCH2 katalógusa vontak (p = 0,002) (1A és B). Az eredmények szerint a klaszter analízis, csoportosítottuk a betegeket három csoportra osztották különböző kombinációit magas vagy alacsony expressziója GSK3b katalógusa, CTNNB1 katalógusa és NOTCH2 katalógusa, amely határozta meg az optimális cut-off-értékeket génexpresszió együtt a túlélés. A csoport GSK3b katalógusa ^{magas, CTNNB1 katalógusa magas és NOTCH2 katalógusa alacsony expressziós mutatta a legjobb túlélési, míg a csoport GSK3b katalógusa alacsony, CTNNB1 katalógusa alacsony, NOTCH2 katalógusa magas expressziós volt a legrosszabb általános kimenetelét (p < 0,001, 1C).}

kiszámítása kockázati pontszám alapján a többváltozós Cox regressziós modell e három gének és dichotomisation a betegek szerint az optimális cut-off érték OS egy magas (n = 37) és alacsony (N = 26) kockázati csoport megmutatta statisztikailag szignifikáns különbség az OS (medián túlélés alacsony és a magas kockázatú betegek: nem érte el, és 37 hónap; p < 0,001). Ezen túlmenően, a különbség a megfelelő túlélési arány 1, 2, 3 és 5 év közötti alacsony és a magas kockázatú csoportba statisztikailag szignifikánsak voltak (táblázat S5).

differenciális génexpresszió elemzése között Megfelelő előtti és utáni -therapeutic tumorminták

következő meghatározni, hogy az expressziós szintek a gének, amelyek mutatott jelentős vagy mérsékelt Association OS (p < 0,1, 3. és 4. táblázat) különbözőek pre-terápiás biopsziák és a hozzájuk tartozó utáni -therapeutic tumor mintában. Továbbá, POU5F1 katalógusa, LGR5 katalógusa és CCND1 katalógusa elemezték, és a tumor minták betegek TRG2 vagy TRG3 (minden n = 22) vizsgálták. Katalógusa

a betegek TRG2, a kifejezés a NOTCH2 katalógusa, POU5F1 katalógusa és LGR5 katalógusa között jelentősen nőtt az elő- és a poszt-terápiás minták (p = 0,002, 0,028 és 0,017-kal) és kifejezése DNMT1 katalógusa csökkent (p = 0,009). A csoport TRG3, POU5F1 katalógusa mutatott szignifikáns növekedés (p = 0,002), míg a DNMT1 katalógusa és CCND1 katalógusa szignifikánsan csökkent (p = 0,002 és 0,007-kal) .

Ami a kifejezés a prognosztikai szempontból releváns gének GSK3b katalógusa és CTNNB1, katalógusa nincs statisztikailag szignifikáns különbség volt megfigyelhető a pre- és poszt-terápiás tumor mintákban ( 5. táblázat és táblázatok S2 és S3). katalógusa

elemzése publikus Array adatok katalógusa

Hogy értékelje az általános prognosztikai értéke a GSK3b katalógusa ^{magas, CTNNB1 katalógusa magas és NOTCH2 katalógusa alacsony expressziós mintázat, használtuk a nyilvánosan rendelkezésre álló kifejezés tömb adatállomány a gyomor carcinoma [33]. Az adathalmaz tartalmazza bíró gének és a vonatkozó klinikai adatok (OS tumorstádium) szükséges, hogy végre egy hasonló elemzését. Annak meghatározása, hogy az optimális cut-off értékek génexpresszió összefüggést a túléléssel és értékelése a kombinált kifejezés aláírását GSK3b katalógusa magas, CTNNB1 katalógusa magas és NOTCH2 katalógusa alacsony azonosított csoport 10 betegek szignifikánsan hosszabb volt a túléléssel (p = 0,017, medián OS: nem érte el), míg további 47 betegnél (medián OS: 14,0 mo, 95% CI: 8,7 -19,4) (1D). katalógusa}

kiszámítása kockázati pontszámot ebben a betegcsoportban és dichotomisation a betegek szerint az optimális cut-off érték OS mutatott lényegesen hosszabb OS az alacsony kockázatú csoportba (n = 27), mint a magas kockázati csoport (n = 30), bár a különbség nem volt statisztikailag szignifikáns (medián túlélési 21 versus 13 hónap, p = 0,110). Figyelembe véve a különbségek a megfelelő túlélési arány 1, 2 és 3 év igazolták analóg eredményeket a legszembetűnőbb különbség a 2 éves túlélési ráta 45% -a kis kockázatú betegek és 21% -a a nagy kockázatú betegek (p = 0,071 ) (táblázat S7). katalógusa

immunhisztokémiai elemzése NOTCH2 katalógusa

értékeli a különbségek génexpresszió között a páros pre- és post-terápiás tumorok fehérje szintjén végeztünk immunhisztokémiai és összpontosított NOTCH2 (ábra S1B és C). Elemeztük az azonos betegcsoportok, hogy már tanulmányozták az mRNS szintjén. Ezen túlmenően, 21 beteg TRG1b és a kontroll csoport 16 kezelt betegek műtét önmagában vontunk.

összehasonlítása citoplazmatikus festődés intenzitások között előre terápiás biopsziák és a megfelelő post-terápiás tumorok mutatott statisztikailag szignifikáns növekedését a festődés intenzitása a poszt-terápiás betegekből származó mintákban a TRG1b, 2 és 3 (p = 0,016, 0,001, és 0,017, sorrendben). Ezzel szemben nem figyeltek meg különbséget a kezelt betegek műtét önmagában (p = 0,438) (2. ábra). A százalékos megfestett sejtek jelentősen nem változott. A nukleáris festődést, jelentős csökkenést festődés intenzitása a poszt-terápiás tumormintára találtak a csoport TRG2 (p = 0,007), TRG3 (p = 0,015), valamint a kontroll csoportban nem kezeltük, a kemoterápia (p = 0,016) . Jelentős csökkenése a sejtek arányát festett sejtmagok volt megfigyelhető a csoport TRG1b (p = 0,005), TRG2 (p < 0,001), TRG3 (p = 0,003), valamint a kontroll csoportban (p = 0,001).

Vita katalógusa

a tanulmány elemzi a kifejeződése CSC kapcsolódó gének maradék gyomorrák sejtek után neoadjuváns kemoterápia azonosítottak egy gént aláírás olyan nagy prognosztikai tagjai GSK3b katalógusa, a β-catenin katalógusa gén CTNNB1 és NOTCH2 katalógusa. Érdekes, hogy a magas szintű expresszióját CTNNB1 katalógusa és GSK3b katalógusa arra járó megnövekedett túlélési. Β-catenin kulcsfontosságú molekula az átviteli Wnt jelátvitel a sejtmagba, és hajtja többszörös celluláris folyamatokat [35]. Aberráns Wnt jelátvitel igazolták akár 46% -a GC, és mind a Wnt / β-catenin
és proliferáció /szár sejt expressziós aláírások jelezve a megfelelő útvonal aktiválás kapcsolatban voltak csökkent a betegek túlélését [36]. CTNNB1
mRNS-szintek modulálására Wnt jelátvitel [37], és a Wnt aktivitás összefüggésbe hozták a rák stemness a vastagbélben [38]. Mivel ezek az adatok, a negatív egyesület CTNNB1 katalógusa kifejezést maradék tumorsejtek kemoterápia után és a túlélés a beteg várható lett volna. Azonban β
katenin is része az E-cadherin-catenin komplex és változtatások a jelen sejtadhéziós összetett összefüggésbe hoztak rosszabb prognózist különböző tumorok [39]. GC, ellentmondó eredményeket hozott a szövetség között β katalógusa katenin expressziója és a beteg prognózisa létezik [40], [41]. Katalógusa

Fontos megjegyezni, hogy a GSK3b is egy multifunkcionális fehérje részt vesznek különböző jelzési hálózatok és antagonizálja Wnt jelátvitel által közvetítésében lebomlásának β
katenin, bár egy Wnt-aktiváló funkció is leírták [42] - [44]. Fokozott expressziója GSK3b katalógusa járt kedvező prognózist a tanulmányban, amely összhangban van a jelentés nagyobb GSK3b katalógusa mRNS expressziós kapcsolódó jobb túlélést petefészek kiváló minőségű savós karcinóma [45 ].

a nagyobb NOTCH2 katalógusa expressziós szintje korrelál rosszabb túlélést a GC betegeknél. A Notch receptor család magában négy tag, és NOTCH1 és NOTCH2 hozták összefüggésbe, hogy fokozza a gyomorrák progressziója [46], [47]. Továbbá társulása NOTCH1 kifejezés rossz prognózisú számoltak [48], amely nincs összhangban a vizsgálat eredményeit; miatt azonban a különbségek a vizsgálati csoportokban, ezek az eredmények közvetlenül nem hasonlíthatók össze. katalógusa

Mivel a magasan szignifikáns összefüggést a gén aláírás felölelő CTNNB1 katalógusa, GSK3b katalógusa és NOTCH2 katalógusa a betegek túlélését és a jelentős kockázati pontszám-alapú besorolás a betegek egy magas és alacsony kockázatú csoportban, különösen érdekelt, ha ezt kemoterápiával kapcsolatos. Az összehasonlítás GSK3b katalógusa és CTNNB1 katalógusa expressziós szintjei között pre- és post-terápiás tumor minták nem mutattak egyértelmű különbséget, míg jelentős növekedést a kifejezés NOTCH2 katalógusa ben megtalált. Ez arra utal, hogy CTNNB1 katalógusa és GSK3b katalógusa kifejezés utalhat a tulajdonság a primer tumor, amely nem változtatja meg a kemoterápia és a NOTCH2 katalógusa kifejezést a reziduális tumorsejtek legalább részben kapcsolódik ez a kezelés. katalógusa

az elemzés prognosztikai jelentősége a három-gének publikus genomot expressziós adatok a fejlett GC bizonyított szignifikáns asszociációt a specifikus génexpressziós mintázata GSK3b katalógusa ^{magas, CTNNB1 katalógusa magas és NOTCH2 katalógusa alacsony expressziója és nőtt a betegek túlélését, és hasonló tendenciát figyelembe véve a kockázati pontszám alapú besorolás.}

Ez az eredmény alátámasztja azt az értelmezést, hogy a prognosztikai hatás figyelhető meg a tanulmány hátterében az ingatlan az elsődleges gyomor tumor, ami arra utal, kritikus szerepet játszik ezeknek a géneknek a biológia ezen daganatok. Ezen túlmenően, a prognosztikai megfigyelt hatás lehet fokozni növekedését expressziójának NOTCH2
a reziduális tumor kemoterápia után. Így, ha érvényesíteni prospektív vizsgálatban ez a három gén aláírás hasznos lehet rizikóstratifikáció GC betegek, és emellett lehet irányítani a posztoperatív kezelés után neoadjuváns kemoterápia. Katalógusa

Eredményeink emlékeztetnek egy nemrégiben készült tanulmány elemzésével CSC- származtatott gén aláírás, amely megjósolja a tumor kiújulásának a vastagbélben, és bizonyítja, hogy a megemelkedett expressziója Wnt célgének jelzi kedvező prognózist [48]. A szerzők bizonyítják, hogy ez a szövetség inkább tükrözi a differenciálás állapotát rosszindulatú szövetek helyett száma CSC [49]. Katalógusa

Figyelembe véve a változásokat a NOTCH2 katalógusa kifejezés közötti megfelelő pre- és post-terápiás tumorok, fontos megjegyezni, hogy összehasonlítjuk a génexpressziót a mRNS-szint, nem tud különbséget tenni, hogy ezek a változások tükrözik relatív dúsítása expresszáló sejtek a gén, hogy azok miatt a kemoterápiás szerek befolyásoló gén transzkripcióját a sejtek önmagában katalógusa, illetve hogy a változások tükrözik puszta mintavétel különbségeket. Ahhoz, hogy tisztázza ezt a kérdést elemeztük NOTCH2 fehérje expresszióját immunhisztokémiai és benne daganatok kezelt betegek a műtét önmagában. Ennek alapján a citoplazmatikus festődés, Eredményeink megerősítik növekedését NOTCH2 expresszió fehérje szinten a poszt-terápiás tumorok és ezek azt mutatják, hogy a megfigyelt különbségek valószínűleg korlátozódik kezelt betegek kemoterápia. Említésre, a növekedés a NOTCH2 expresszió kapcsolatban növekedett a citoplazmatikus festődés intenzitása inkább, mint hogy egy számának növekedése expresszáló sejtek NOTCH2. Ez az eredmény ellen érvel dúsítású alpopulációjában NOTCH2 expresszáló tumorsejtek, és nagyobb valószínűséggel javasol kemoterápia által kiváltott növekedés a génexpresszió a tumor sejtek, amelyek összefüggésben lehetnek a tumor biológiai jellemzői után neoadjuváns kezelést. Ugyanakkor világos különbséget ezek a lehetőségek korlátozott lehet a szemikvantitativ értékelését immunhisztokémiai festéssel. Mivel hasonló elváltozások magfestődést figyeltünk meg valamennyi tumor csoportok, köztük az ellenőrzési vettük ezeket a változásokat nem kapcsolódik a kemoterápia. Katalógusa

Függetlenül a mechanizmus és a valódi természetét a maradék expresszáló tumorsejtek NOTCH2
Eredményeink lehet terápiás következményei vannak. Notch jeladás vált, mint egy potenciális új terápiás célpont, és a gamma-szekretáz-inhibitorok, amelyek gátolják a feldolgozó a Notch receptorok, amelyek jelenleg értékelik a klinikai vizsgálatok során [50]. A tanulmány azt sugallja, hogy célzás Notch jelátvitel is jelenthet egy új stratégiát kell kezelni GC betegeknél. Mint egy rossz prognosztikai hatást csak társult NOTCH2 katalógusa és nem NOTCH1 katalógusa, adataink is jelzik, hogy a részletes jellemzése az egyes Notch receptorok és alapos funkcionális vizsgálat kötelező, és tovább erősen támogatja fejlesztése Notch Paralog-specifikus gátló szerek. katalógusa

a jelentős növekedés a POU5F1 katalógusa expressziót figyeltek meg a kemoterápia után az eltávolított egyedek a vizsgálatba. A POU5F1 transzkripciós faktor nélkülözhetetlen a fenntartásához önmegújító, és a magas expressziót maradék rákos sejtek után radiokemoterápia összefügg a rossz prognózissal vastagbélrák [51]. Érdekes módon azt is megfigyelték, fokozott expressziója LGR5 katalógusa, egy ígéretes bél CSC marker, a kemoterápia után tumorokban TRG2 [18]. Ezek az eredmények összhangban vannak a potenciális dúsítási a gyógyszer-rezisztens tumorsejtek expresszáló POU5F1 katalógusa vagy a LGR5 katalógusa, de a mögöttes mechanizmus ezek módosításokat, és a különleges tulajdonságai a expresszáló sejtek ezeket a géneket marad, hogy lehet meghatározni.

a mi vizsgálatban nem társítva túlélést figyeltük a sejtfelszíni molekulák CD44 vagy CD133, mindkettő már széles körben használják azonosítani vélt CSC különböző tumorokban [4] - [11]. Ez az eredmény alátámasztja legújabb eredmények bizonyítják, hogy ezek a sejtfelszíni molekulák nem azonosítják CSC primer gyomor tumorok. [20] katalógusa

Mindezzel együtt, az eredmények azt mutatják, hogy a kifejezés aláírása GSK3b katalógusa ^{magas, CTNNB1 katalógusa magas és NOTCH2 katalógusa alacsony kemoterápiára rezisztens maradék GC tumorsejtek erős előrejelzője kedvező beteg prognózisa. Ez prognosztikai jelentősége is kimutatták GC használó betegek publikus génexpressziós adatok. Az eredmények a differenciális expressziós analízisét a pre- és post-terápiás tumor mintában is azt sugallja, hogy a hatás az GSK3b katalógusa és CTNNB1 katalógusa hogy ezt az aláírást nem függ a kemoterápia, hanem összefüggő egy tulajdonság a primer tumor. Azt is jelzi, fontos szerepet kaphatnak a NOTCH2 és a kemoterápia rezisztencia GC, ami valószínűleg összefügg az értelemben a kemoterápiás szerek a NOTCH2 katalógusa kifejezés helyett dúsítású NOTCH2 katalógusa kifejező tumorsejt sejteket.}

Támogató információ
ábra S1.
Western blot és immunhisztokémiai az anti-NOTCH2 antitest. A) Az antitest ellen irányuló NOTCH2 intracelluláris domén specifikusan felismeri a teljes hosszúságú NOTCH2 fehérje felett a 250 kDa marker, valamint a hasított formákat NOTCH Extracelluláris csonka (NEXT) hez és Notch intracelluláris domén (NiCd) körülbelül 110 kDa. B) Egy gyenge citoplazmatikus immunhisztokémiai festéssel a pre-terápiás biopsziás minta és C) egy erős citoplazmatikus festődés a megfelelő post-terápiás tumor TRG2 látható. Scale sávok jelzik 50 um. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0044566.s001 katalógusa (TIF) hotelben táblázat S1.
többváltozós Cox regressziós analízissel. Génexpressziós GSK3b, CTNNB1, DNMT1 katalógusa, és a standard prognosztikai változók GC, YPT, YPN, YPM és reszekciós kategóriában szerepeltek a modellben. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0044566.s002 katalógusa (DOC) hotelben táblázat S2.
génexpressziós adatok a pre- és a megfelelő post-terápiás tumor minták betegek TRG2.
doi: 10,1371 /journal.pone.0044566.s003 katalógusa (DOC) katalógusa táblázat S3.

• PLoS One: A prognosztikai aratott nyirokcsomókban és a metasztatikus nyirokcsomó arányával gyomorrákos betegek: egy tanulmány eredményeit a 1101 Patients
• PLoS One: N-myc Downstream Szabályozott Gene 1 (NDRG1) Elősegíti metasztázis Emberi Scirrhous gyomorkarcinóma sejtek révén Epithelialis mesenchymalis Transition