Pasikeitimai E-cad ir beta-kateninai skrandžio cancer

pakeitimai, daromi dėl E-cad ir beta-kateninai skrandžio vėžio pervežimas tezės
Background
El cad-kateninai komplekso vaidina lemiamą vaidmenį epitelio somatinių ląstelių ląstelės adhezijos ir vyniojamojo architektūros techninės priežiūros. Pasipiktinimas formuluotę arba funkcija šio komplekso nukenčia tarpląstelinės adhezijos, su kuo sekusios ląstelių transformacijos ir naviko progresavimas.
Metodai
Mes studijavo E-cad ir beta-kateninai pakeitimus į 50 pirminės rinkinys skrandžio navikų naudojant praradimą heterozigotiškumu (LOH) analizė, genų mutacijų atranka, aptikti neįprastos nuorašai ir imunohistocheminis (IHC).
rezultatai
aukšto dažnio (75%) LOH buvo aptikta 16q22.1 kuriuose yra E -cadherin lokusas. Trys atvejai (6%) parodė identišką missense mutacija, A592T. Ši mutacija nėra tikėtina, kad tvirtai prisidėti prie skrandžio vėžio kancerogenezėje, dėl to, kad žemo dažnio (1,6%) šio mutacijos taip pat buvo nustatyta, 187 įprastų žmonių. Mes taip pat aptiko žemo dažnio (0,36%, 0%) šio mutacija 280 krūties navikų ir 444 kitų auglių, įskaitant gaubtinės ir tiesiosios žarnos, plaučių, gimdos gleivinės, kiaušidžių, sėklidžių, inkstų, skydliaukės karcinomos ir sarkomą, atitinkamai. Mes taip pat analizuojami netipiškų E-cad mRNR skrandžio navikų ir nustatė, kad 7 navikai (18%) buvo netipiškų mRNR be to, prie normalaus mRNR. Šie neįprastų mRNR gali sukelti nenormalius E-cad molekules, todėl silpna ląstelių ląstelių sukibimą ir invazinės elgesio karcinoma ląsteles. Sumažintas išraiška E-cad ir beta-kateninai buvo nustatyta ties 42% ir 28%, atitinkamai dažniu. Specialiai, 11 auglių (22%) eksponuojama teigiamą citoplazmos dažymas, β-kateninai IHC. Asociacija buvo rastas tarp sumažėjusio raiškos E-cad ir beta-kateninai. Be to, asociacija buvo aptiktas tarp sumažėjusio raiškos E-cad ir difuzinio histotype.
Išvada
Mūsų rezultatai patvirtina hipotezę, kad pakeitimai E-cad ir beta-kateninai vaidinti svarbų vaidmenį inicijuojant tyrimą ir progresavimą skrandžio vėžio .
faktai
E-cad (120 kDa; chromosoma 16q) yra klasikinis cad ir sudaro pagrindinę funkcinę komponentas lankymosi sankryžų tarp epitelio ląstelių [1]. Ji privalo per pavilnės baltymų serijų catenins (α, beta ir gama) į aktino citoskeleto [1]. Ši sąsaja tarp transmembranous cadherins ir aktino gijų citoskeleto būtina suformuoti stiprią ląstelių ląstelių sukibimą. Sveika El cad - kateninai kompleksas yra reikalingas palaikant normalų tarpląstelinės adhezijos. Atsižvelgiant į tai, kelios grupės pasiūlė, kad karcinoma, E-cad veikia kaip invazija slopinamojo molekulės, pavyzdžiui, kad jos nuostolis leidimai arba pagerina gretimų sveikų audinių invaziją. Imunohistocheminiais studijos žmogaus vėžio, įskaitant skrandžio vėžiu, dažnai parodė, kad invazinių karcinomos ir karcinomos in situ dalis
parodyti netipiškų lygius E-cad ir /arba kateninai išraiška, palyginti su jais susijusių normalaus audinio [2-4] , Apskritai, El cad ir kateninai dažymo yra stipri gerai diferencijuotų vėžio, kad išlaikyti savo mobilųjį lipnumą ir yra mažiau invazinės, bet mažinamas blogai diferencijuoti navikai, kurie prarado savo mobilųjį ląstelių sukibimą ir parodyti tvirtą invazinių elgesį [2, 3].
El cad dalyvauja kontaktinę slopinamas ląstelių augimą stimuliuoja ląstelių ciklo suėmimą [5]. Jis turi sugebėjimą slopinti ląstelių proliferaciją iki P27 dalyvauja ląstelių ciklo reglamentą [5] ląstelę, nors mechanizmas, pagal kurį El cad reguliuoja P27 vis dar neaišku. Todėl, El cad, paprastai apibūdinamas kaip [6], gali veikti kaip pagrindinis ekonomikos augimo /platinimo slopintuvas invazija slopintuvas.
Svarbi funkcija yra beta-kateninai ląstelių signalizacijos, buvo išaiškintas [7]. Jei mitoziniam signalo iš išorės ląstelių nėra, β-kateninai yra sugeriama komplekse su adenomatozinio polipozės coli (APC) geno produkto, serino treonino glikogeno sintetazės kinazės (GSK-3β) ir adapteris baltymų axin (arba homologas conductin), leidžianti fosforilinimas ir degradaciją nemokamai beta-kateninai pagal ubikvitino-proteasomos sistemos [8]. Kai mitozinis signalas yra priimtas WNT keliu, asociacija apie DG /WNT šeimos išskiriami glikoproteinų ir jų membranos receptorių frizzled, tai veda prie aktyvavimo netvarkingas (DSH) baltymų, kurie yra įdarbinti prie ląstelės membranos. Aktyvintas dsh downregulates baltymų kompleksas, taip, kad ji nebegali fosforilinti ß-kateninai, kuris po to yra nenuniokotos. Iš beta-kateninai spaudai nuo fosforilinimo ir skilimo kompleksas skatina β-kateninai stabilizavimo ir signalizacijos. Tai sukelia laisvo cystolic beta-kateninai kuri translocates į branduolį padidėjimas ir tiesiogiai jungiasi transkripcijos veiksniai LEF ir TCF, todėl genų ekspresijos aktyvacijos. Todėl β-kateninai atlieka skirtingas funkcijas E-cad-ląstele sukibimo ir WNT signalizacijos [8].
Praradimas E-cad lokuso ant ilgojo peties chromosomos 16 (16q22) atsiranda skrandžio (24 %), kepenų ląstelių (50%), skiltelinių krūties (50-100%) ir stemplės (66%) karcinomos [4, 9-12]. Yra buvę keletas pranešimų apie El cad genų mutacijų žmogaus vėžio [13]. Prastai diferencijuoti navikai, pavyzdžiui, skiltelinės krūties vėžio ir difuzinis tipo skrandžio vėžio, E-cad mutacijos vaidina svarbų vaidmenį navikų vystymuisi [14, 15]. Keletas tyrimų pranešė gemalo mutacijų E-cad geno šeimoms su paveldima difuzinio tipo skrandžio vėžio [16, 17]. Tik skrandžio vėžio mažuma gali būti apskaitomi elektroniniu cad mutacijų. Dažnas somatinės mutacijos β-kateninai geno buvo rasta mažų storosios žarnos adenomos ir žarnų tipo skrandžio vėžio [18, 19]. Dauguma mutacijų dalyvauja apie serines ar threonines iš GSK-3β fosforilinimo regione nuostolių. Genetiniai pakitimai beta-kateninai panaikinanti ląstelių ląstelių lipnumą pastebėtos dvi skrandžio vėžio ląstelių linijų, HSC39 ir 40a; tiek atsiranda iš to paties Sygnet ląstelių karcinoma, skrandžio ir parodyti difuzinio augimo modelį [20, 21]. Ši mutacija rezultatai nupjauto beta-kateninai kad trūksta regioną sąveikos su beta-kateninai. Transfekcijq šių ląstelių linijų su laukinio tipo beta-kateninai atstato ląstelių lipnumą [21].
Čia mes atliekame El cad ir beta-kateninai genų mutacija ir išraiškos analizė 50 pirminių skrandžio navikų serijos, siekiant suprasti geriau iš E-cad ir beta-kateninai į skrandžio vėžio kancerogenezėje pokyčių dalyvavimą.
medžiagos ir metodai
pavyzdžiai
įtraukti į tyrimą buvo 50 augliai ir atitinkami normalus mėginiai, iš kurių du navikai (17 ir 23) buvo iš tos pačios šeimos, likusi dalis atsitiktinis (1 lentelė). Šie atvejai buvo diagnozuoti iki patologijos skyrius, Universiteto ligoninės Islandijoje. Audinių buvo gautas šviežiai į operavimo arba iš parafine esančio medžiagos dieną. Informacija apie naviko stadiją, histotype ir kokybės, taip pat įsigijo iš tos pačios katedros. DNR PGR buvo išskirtas proteinazės K gydymo [22]. RNR už RT-PGR buvo išgauti naudojant Tri reagento (Molekulinė mokslinių tyrimų centras, USA Inc.). Dėl A592T mutacijos, mes tikrinami 187 įprastų žmonių, 280 krūties ir 444 kitų pacientai, sergantys gaubtinės ir tiesiosios žarnos, plaučių, endometriumo, kiaušidžių, sėklidžių, inkstų, skydliaukės karcinomos ir sarkomą. Visi individualūs identifikatoriai buvo pašalinta iš kontrolės mėginių iki tyrimo, ir taip tyrėjams buvo apakinti, kad mėginių identifikavimo kuris nebegali būti siejamas su konkrečiais asmenimis. Sutikimas buvo preziumuojama, kad pacientas pavyzdžius. Tais atvejais, 294 ir 728 su A592T mutacijos, mes analizuojami jų genealogija ir nustatė, kad nėra jokių kitų vėžio atvejų tokiais atvejais, kai 294 veislinis, bet ten buvo ir kitų 5 vėžio atvejų tokiais atvejais, kai 728 veislinis, įskaitant 2 prostatos vėžio 1 odai vėžys, plaučių vėžys 1 ir 1 vėžys neaiškios origin.Table 1 santrauka pakitimų E-cad ir beta-kateninai a 50 skrandžio navikų serijos.
Tumour

Stage

Type

Grade

LOH

E-cad genų mutacijų

Aberrant iRNR
El CAD
beta-cat
Imties



ne 16q22.1
ir polimorfizmas

E-cad
IHC IHC


1
T3N3
skirt
+
IVS1+6T→C
-
+/-
++/-∇
3
T3N1
squ
G1
+
IVS4+10C→G
ND
-
+/-
17
T3N1
diff
ND
GTG (Val) → GTC (Val) ne cd832
ND UAB -
- 23
susitiko
+
Persijos įlankos bendradarbiavimo tarybos (ALA) → ACC (Kt ) ne cd592 *
ND
+++ /- CR.LT +++ /- CR.LT 43
T3N2
skirt
+ -
-
- CR.LT +++ /- CR.LT 50
T3N1
skirt
-
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
165
T3N1
int
G3
ND
-
-
+++/-
+++/-∇
174
T3N2
int
G3
-
-
ND
+++/-
++/-
193
T3N2
int
G3
+
-
ND
-/+++
-/++
200
T3N1
int
G2
-
IVS4+10C→G
-
++/-
+++/-
231
T3N0
mi
G3
+
-
-
++/-
++/-∇
283
T3N0
int
G3
ND
-
ND
++/-
++/-
287
T3N1
int
G2
+
-
-
-/+
++/-
294
T3N1M1
mi
G4
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) prie cd592♦
-
++/-
++/-∇
304
T3N3
int
G2
-
-
-
-/+++
+/-
308
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
++/-
314
T3N1
diff
- CR.LT ŠMC (jo) → CAT (jo) ne cd632 -
+++ /- CR.LT ++ /- ∇
GGC (gli) → GGT (gli) ne cd865
360
T2N1
INT
G3
+
IVS4 + 10C → G
+ ♣
++ /- CR.LT +/-
369
susitiko
+
-
+♣
+++/-
++/-
433
T3N1
mi
G3
-
IVS4+10C→G
-
-/++
-/+
435
T2N0
int
G3
+
-
-
-/+++
-/++
443
T2N0
int
G4
-
-
-
+++/-
+++/-
451
T4N0
int
G2
ND
-
ND
+++/-
++/-
474
T3N1
int
G3
ND
-
ND
-
+/-
493
T3N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+/-
503
T3N1
int
G3
ND
-
-
-
+++/-
556
T3N2
int
G2
-
IVS1+6T→C
ND
++/-
+/-
5'UTR-71c → G
568
T3N2
mi
G3
+
-
+♣
++/-
++/-
612
T3N0
int
G2
ND
IVS4+10C→G
-
+++/-
+/-
AAC (Asn) → AAT (Asn) ne cd751
636
T3N1
skirt
+
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-∇
650
T2N0M1
int
G2
+
-
ND
-/+
++/-
675
T2N0
mi
G3
+
IVS4+10C→G
-
+/-
++/-∇
676
T3N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-∇
680
T3N1
mi
G3
+
IVS1+6T→C
-
++/-
++/-
AAC (Asn) → AAT (Asn) ne cd751
694
T3N1
int
G1
+
-
-
+++/-
+++/-
717
T3N1
int
G3
+
-
+♣
-/+++
+++/-
726
T2N1
int
G2
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
728
T3N0
int
G2
+
GCC(Ala)→ACC(Thr) prie cd592♦
-
-/+++
++/-
729
T3N1
int
G1
-
IVS1+6T→C
-
-/+++
+++/-
732
T2N1
int
G3
+
-
-
-/+++
+++/-
735
T4N3
diff
ND
AAC (Asn) → AAT (Asn) ne cd751 -
+++ /- CR.LT +++ /- ∇
738
T3N2
skirt
+ -
- -
-∇
750
susitiko
ND
AAC (Asn) → AAT (Asn) ne cd751
+♣
++/-
+++/-
755
T2N1
int
G2
ND
-
+♥
+++/-
++/-
808
T3N0
int
G1
+
ACG(Thr)→ACA(Thr) prie cd251
+♠
+++/-
++/-
811
T2N1
int
G2
+
-
-
+++/-
-/+
832
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-∇
855
T3N2
int
G2
+
-
-
+++/-
+++/-
875
T3N2
int
G2
-
IVS4+10C→G
ND
+++/-
+++/-
904
T2N0
int
G3
+
IVS4+10C→G
-
-/+++
++/-
Useful
30
3
7
21
14
viso
40
50
38
50
%
75 50

6
18
42
28
T navikas (dydis ir invaziškumo); N mazgas (laipsnis metastazių); M metastazės; G1, gerai diferencijuoti; G2, vidutiniškai diferencijuoti; G3 ", prastai diferencijuojamas; G4 ", o ne diferencijuoti; skirt, difuzinis (diferenciacijos laipsnis = G4); MI, mišri; INT, žarnyno; susitiko, metastazavusiu vėžinių tikriausiai skrandžio naviko; SQU, suragėjusių epitelio; LOH, praradimas heterozigotiškumo; El CAD E-cad; β-katė, β-kateninai; IHC, imunohistocheminis; CD, kodono; UTR, neišverstas regionas; + Teigiamas LOH, netipinė El CAD iRNR E-CAD ir β-katė IHC; - neigiamas LOH E-cad genų mutacija, netipinė El CAD iRNR E-CAD ir β-katė IHC; ND, o ne nustatoma ar nebuvo padaryta; +/-, ++ /- Ir +++ /-, daugiau nei 50% ląstelės teigiami; - /+, - /++ Ir - /+++, daugiau nei 50% ląstelės buvo neigiami; * Somatinių mutacijų; ♦ gemalo mutacija; ♣, įterpimo intronas 7 nuo 8 iki egzonų 7, sustabdyti kodono 374; ♥, išbraukta pastaruosius 72 bazių egzono 7, egzono 8 ir pirmųjų 124 bazių egzono 9, sustabdyti kodono 322; ♠, išbraukta egzonų 8 ir 9; išbraukta pastaruosius 84 bazių egzono 8, sustabdyti kodono 358; ∇ šie mėginiai taip pat parodė, citoplazmos dažymas, β-kateninai IHC
LOH nustatymo pervežimas MIKROSATELITŲ žymenų, naudojamų LOH analizės chromosomos 16q buvo:. D16S503, D16S496, D16S421, D16S545 ir D16S512 regiono 16q22.1 kuriuose yra E -cadherin lokusas (genomo duomenų bazė). Polimerazės grandininė reakcija (PGR) produktai buvo atskirtas akrilamido sekos gelio ir perkelti į teigiamai įkrautą nailono membranos, Hybond-N + (Amersham, Aylesbury, Jungtinė Karalystė) ir kepama mažiausiai 2 h, esant 80 ° C temperatūroje. Naudojamas vizualizuoti PGR produktai neradioaktyvus nustatymo metodas buvo aprašytas anksčiau [23]. Autoradiograms buvo apžiūrėti bent dviejų recenzentų, lyginant alelių intensyvumą nuo įprastos ir naviko DNR. Nebuvimas ar reikšmingai sumažėjo vieno alelio į naviko, palyginti su įprastu atskaitos mėginyje buvo laikoma LOH.
Mutacija atranka
Visi 16 egzonų E-cad genų ir egzono 3 β-kateninai geno buvo tikrinami dėl inaktyvuojančioms mutacijos su PGR SSCP (vieno kryptis raumeningumo polimorfizmas) analizės genomo DNR šablonus. Į e-cad ir beta-kateninai gruntai naudojami SSCP analizę buvo aprašyta mūsų ankstesniame straipsnyje [4], ir Park et al., [1999], atitinkamai, ir priteisė iš Pharmacia Biotech ar TAG Kopenhaga A /S. Genomo DNR buvo naudojamas 30 ng per 25 iL reakcijos mišinio, turinčio 5 pmol pirmyn ir atgal pradmenis, 2.5 nmol kiekvieno dNTP, 0,5 vienetų DynaZyme polimerazės. Mėginiai buvo amplifikuotos 35 ciklų, sudarytų iš 30 s denatūravimo 94 ° C temperatūroje, 30 S iš atkaitinimo ne 55-70 ° C, ir galiausiai 60 S nuo pratęsimo 72 ° C temperatūroje. Karšto pradžia buvo naudojamas pridedant papildomas pirmojo ciklo fermentą maždaug 70 ° C, po išankstinės inkubacijos metu 5 min, esant 94 ° C temperatūroje. A 4 mikrol, alikvotinė PGR produktų buvo sumaišyti su 7 įxL formamidas dažo (95% formamido, 0,05% bromfenolio mėlynasis ir 0,05% ksilenas oianolo), denatūruotas 94 ° C temperatūroje 10 min, o snapcooled ant ledo. Mėginiai, 2 pL buvo tuo pačiu metu analizuojami gauti per du denatūravimo poliakrilamido gelyje (5% akrilamido su 2% susiuvimas), arba, kurių sudėtyje yra 5% glicerolio arba trūksta glicerolio. Elektroforezės buvo atliktas 1 × erkinio encefalito ant vertikalių geliai ne 6W vienos nakties arba 6 valandas kambario temperatūroje. PGR produktai buvo ryškinamos mikrosatelitinių žymekliais. Mėginiai su nenormaliu mobilumo juostų vėl buvo dar didesnis 35 ciklus, kaip aprašyta aukščiau. Per 5 mikrol alikvotinė PGR produktų tada buvo inkubuojami su 10 V exonulease I ir 2 U krevečių šarminės fosfatazės pašalinti pernelyg didelių pradmenis ir dNTP (US70995, Amersham). Sekos abiejų krypčių lėmė termo sequenase DNR polimerazės (Termo Sequenase radioaktyvaus Terminatorius ciklas Sekos KIT, Amersham), naudojant dvi originalias PGR pradmenis. Mes atliko A592T mutacijos analizė dėl tų vėžio, išskyrus neaiškios kilmės vėžio, tokiais atvejais, kai 728 naudojant tiesioginį eiliškumą šeimoje.
Aberrant iRNR atrankos
1-5 mikrogramų visos RNR buvo transkribuoti į kDNR naudojant Pirma dalis kDNR sintezės komplektas (Amersham Pharmacia Biotech "). Visi mėginiai buvo ištirti E-cad kDNR trynimų ir intarpais. El cad kDNR buvo papildyta naudojant pradmenų poros EX7-rEx10 /2 ir Ex9 /2A-rEx11 už egzonų 7-10 koduojančių kalcio jungimosi vietų regione [24]. PGR produktai buvo vizualizuojami agarozės gelyje. Nenormalūs fragmentai buvo pašalintų ir sekos naudojant priekinės ir atbulinės pradmenis nustatyti į trynimų ir intarpais ribas. Čia mes naudojamas BigDye Terminatorius ciklo Sekos Ready Reakcijos rinkinį (Perkin-Elmer Foster City ĮA) ir automatizuoto sekwencer ABI PRISM ™ 3100 (Perkin-Elmer) sekos
Imunohistocheminiais dažymo pervežimas imunohistocheminis E-cad ir beta -catenin buvo atliktas 5-mikrometrai skyriuose iš parafino įterptųjų vėžinių audinių blokų su monokloninių antikūnų El cad 5H9 ir ​​ožkos anti-kateninai beta (tyrimų diagnostikos, Inc NJ, JAV), atitinkamai, naudojant aprašytą Hazelbag antigenas radimo protokolą ir kt. [1995]. Augliai buvo rūšiuojami pagal intensyvumą dažymo kaip neigiamas (-), silpnai teigiamas (+), vidutiniškai teigiamą (++) ir tvirtai teigiama (+++) pervežimas statistinės analizės pervežimas Χ 2 bandymas arba. tiksli Fišerio testas buvo naudojamas įvertinti tarp minėtų parametrų santykius.
rezultatai Viesbutis The iš LOH dažnumo 16q22.1 regione buvo 75% (1 lentelė).
Trys augliai (6%) parodė, tos pačios missense mutacija A592T egzono 12, iš kurių 2 atvejai turėjo gemalo mutacija, ir vienas atvejis turėjo somatinių mutacijų. Informacija aptiktų polimorfizmas buvo įtraukta 1. 1 280 (0,36%) krūties navikų lentelėje Trys iš 187 (1,6%) įprastų žmonių ir parodė šį gemalo mutacija. Mutacija nerastas 444 kitų navikų (2 lentelė) .table 2 dažnumas A592T missense mutacijos skrandžio vėžio, kitos vėžio ir įprastų žmonių
Kintamieji

A592T /Iš viso
%
Skrandžio vėžys
3/50
6
Krūties vėžys
1/280
0,36
Kita vėžys *
0/444 normalioje populiacijoje
3/187
1,6
* įskaitant gaubtinės ir tiesiosios žarnos, plaučių, endometriumo, kiaušidžių, sėklidžių, inkstų, skydliaukės karcinomos ir sarkomą.
0
Be to, 3 280 krūties navikų parodė kitą missense mutacijos GCC (ALA) → TCC (Ser) ne identiško kodono 592, iš kurių 2 atvejai buvo gonocitų linijos mutacija; trečia buvo neaišku, nes normalių audinių buvo nepasiekiama. Histologinis tipas, 4 krūties navikų buvo latako.
Tuo atveju, kai 728 šeimos, mes nustatėme, kad pacientas su odos vėžiu ir vienas iš pacientų, sergančių prostatos vėžiu parodė tą patį gemalo mutaciją kaip byla 728. Įdomu, jokių mutacijų buvo aptikta navikų mėginiuose šių dviejų atvejais. Tikriausiai, per auglių vystymuisi mutuotos aleliai buvo prarasta. Atsiradimo amžius atvejais su gemalo mutacijų kilmės buvo 78 metai, atvejų 728, 73 metų, dėl odos vėžio ir 76 metų, dėl prostatos vėžio.
Neaptikome mutacija iki SSCP ir DNR sekos egzono 3 β-kateninai geno 50 skrandžio navikų.
Septyni skrandžio navikai parodė netipiškų stenogramos E-cad. Augliai 360, 369, 568, 717 ir 750 rodoma įterpimo intronas 7 tarp ir 8 egzonų 7 Naviko 755 parodė naikinimui pastaruosius 72 bazių egzono 7, egzono 8 ir pirmųjų 124 bazių egzono 9. Naviko 808 rodomų du netipiškų mRNR, iš kurių vienas turėjo naikinimui ir 9 egzonų 8, ir vienu atveju išbraukus pastaruosius 84 bazių egzono 8 (1 lentelė).
Galiausiai, mes atliekame imunohistocheminės dažymas E-cad ir beta-kateninai. Regioninis svyravimas dažymo buvo aptikta visoje navikų. Į balais +/- ++ /- ir +++ /- kreiptis į daugiau nei 50% ląstelių teigiamų, ir balais priemonėmis - /+, - /++ ir - /+++ nurodant daugiau kaip 50% ląstelių neigiamas. Neigiamas (-) arba sumažėja (- /+ - /++ - /+++ ir +/-) išraiška E-cad ir beta-kateninai buvo aptiktas 21/50 (42%) ir 14/50 ( 28%) atvejų, atitinkamai. Be to, už β-kateninai IHC, 11 augliai taip pat parodė teigiamą citoplazmos dažymo (1 lentelė). Nemaža asociacija buvo nustatyta tarp neigiamo ar sumažintos raiškos E-cad ir beta-kateninai (p = 0,048, Χ 2 testas). Taip pat radome tarp sumažėjusio raiškos E-cad ir difuzinio histotype asociacija (p = 0,04, Fišerio tikslusis testas).
Diskusijos
Aukšto dažnio LOH ne 16q22.1 regione primygtinai siūlo, kad ten yra vienas ar daugiau navikas slopintuvas genų šiame regione, kurio praradimas gali sukelti kancerogenezės skrandžio vėžio. E-cad genas buvo susietas su chromosomų 16q22.1 [26]. buvo nustatytos sumažintos raiškos ir genų mutacijų E-cad kelių tipų vėžio, įskaitant skrandžio ir skiltelinės krūties vėžio, nurodant, kad E-cad genas yra navikas slopintuvas genų [2-4], [13-17, 27] , Šiame tyrime 3 atvejai (6%) parodė identišką missense mutacijos A592T. Kalcio ir privalomas motyvai esančių ekstra domenų 1-5 laikomi pagrindiniu elementu siekiant E-cad funkcija, nes sintetiniu molekulės su vienu amino rūgšties pakaitalas kalcio-privalomas motyvas neparodė lipnumą [28] , Be to, žmogaus ląstelių linijos MKN45 iš skrandžio vėžio, kurioje trūko įtemptą ląstelių-ląstelių sukibimą, 4-amino-rūgšties išbraukta buvo nustatyta, tuo tarp ir 7 egzonų 6 ribos, kurie buvo laikomi pakeisti konformaciją supančią raktas kalcio surišantis motyvai ir panaikinti lipnia turtą E-cad molekulių [29]. Vieno aminorūgščių pakeitimas šiame tyrime yra per penktą tarpląstelinio domeno E-cad, kur gali egzistuoti kalcio-privalomas motyvas. Tai įmanoma todėl, kad trimis atvejais mutacijos taip pat sunaikino funkcija E-cad. Įdomu tai, kad trys atvejai taip pat parodė, Loh ne 16q22.1, kuriame E-cad lokusas. Todėl jis gali būti laikoma, kad du genetinių įvykių, dėl kurių dezaktyvavimo geno įvyko dviejų alelių E-cad geno, atitinkamai. pirmiau pateiktas išvadas nurodė, kad E-cad genas yra naviko slopintuvas genų, nes ji atitinka klasikinį dviejų Hit teorija navikas slopintuvas genų [30]. Ankstesnės studijos skiltelinės krūties vėžio taip pat palaiko šią nuomonę [4, 14]. Ląstelių linija MKN45 minėta (blogai diferencijuotą adenokarcinoma) su silpna ląstelių ląstelių sukibimą, 12 bp rėmo ištrynimą E-cad geno ir nuostolių laukinio tipo alelio buvo aptikta [29]. Bet tai ląstelių linija vis dar smarkiai išraišką mRNR ir baltymų, o tai rodo, kad ne tik sumažinti išraiška, bet ir struktūriniai pakitimai patys gali sukelti nukenksminimo E-cad tarpininkaujant ląstelių adhezijos sistemos [29]. Todėl, viena rasti šiame tyrime aminorūgščių pakeitimas gali sukelti struktūros pokyčius E-cad ir yra ribotas ląstelių-ląstelių sukibimą, nors dviem iš šių atvejų (23 ir 294) parodė, pakankamai baltymo ekspresiją.
Įdomu tai, kad pačią seką variantas somatinių ir gemalo mutacijos buvo nustatyta, vienu metu skirtingų skrandžio pacientams. Byla 23 su somatinių mutacijų turėjo pasireiškimo amžius 56 metų, tačiau atvejai 294 ir 728 su gemalo mutacija turėjo prasidedančio amžiaus 71 ir 78 metų, atitinkamai. Vienas paaiškinimas šio reiškinio gali būti, kad antrojo alelio E-cad atveju 23 įvyko labai anksti, taip triggerring kancerogenezės gana anksti atveju 23. Tačiau yra ir kita galimybė, kad ši mutacija atveju 23 suvaidino savo vaidmenį tik progresavimo praradimas navikas, bet ne inicijavimą, kuriame kiti genetinių įvykių tikriausiai būtų galima atsakingas už skrandžio vėžio inicijavimą. Tačiau atvejai, 294 ir 728 su gemalo mutacijų buvo vėlyvos amžių. Tai gali būti dėl to, kad kitos alelio inaktyvacijai įvyko labai vėlai. Straipsnis pranešė, kad privalomi vežėjams, kurių pertrūkiais mutacijų El cad geno jų 80s ir 90s liko nepakitę [31]. Todėl toliau identifikavimas genetinių ir /arba aplinkosaugos modifikatorius, kad galėtų sudaro kintamos amžiaus pradžios turi būti atliktas. Specialiai, byla 294 turėjo tris navikai skrandyje, kuris atitinka genetiniai navikai paprastai yra kelis [30].
Dažnį (6%) mutacijų A592T 50 skrandžio navikų yra beveik keturis kartus, kad normalioje populiacijoje vėl rodo, kad ši mutacija iš tiesų prisidėjo prie tumorogenezės į skrandžio navikų pogrupyje. Be to, abi, 0,36% krūties navikų, ir jokių kitų navikų, parodė identišką gemalo mutacija, rodančių, kad gali būti histologinis skirtumas šiai mutacijai skrandžio vėžio ir kitų vėžio.
Tik kiti du atvejai eksponuojami A592T mutaciją į šeimos atvejis 728. specialiai, tai mutacija buvo aptikta tik atitinkantis sveikus audinius, bet ne auglio audinio, o tai rodo, kad mutuotos alelių per tumorogenezės buvo prarasta. Iš šių galime daryti išvadą, kad ši mutacija negali vaidinti vaidmenį prostatos ir odos vėžio tumorogenezės, tačiau ji gali būti skrandžio vėžio konkretus.
Galime daryti išvadą, kad A592T mutacija gali padidinti gyvenime rizika susirgti skrandžio vėžiu, bet yra aiškiai seka variantas mažai penetrantiškumas. Mūsų išvados iš dviejų skirtingų seka variantai kodone 592 (A592T ir A592S), kaip gemalo ir somatinių mutacijų, rodo, kad tai kodono yra mutacijų naviko patogenezės HotSpot.
Jautrumo ribos intarpais intronas 7 ir ištrynimo egzonų 8 ir R9 yra ne sandūrų vietų, pagal "GU-AG" taisyklė iRNR sandūrų. Jis gali būti spekuliuojama, kad šie pakitimai nebuvo sukurtas alternatyvus sandūrų, nes nėra įrodymų dėl alternatyvios sandūrų buvo rastos pelės El cad geno [32] ir nenormalaus mRNR buvo aptikta noncancerous audiniuose. Bent sandūrų vietose mutacijos turėtų būti atsakingas už e-cad mRNR pokyčių, nors nėra mutacijos buvo rasti DNR lygyje šiame tyrime, matyt, nes SSCP naudojamas mutacijų atranka turi mažą efektyvumą. Papildomi 2 išbrauktas parodė ribines vertes ne ne sandūrų vietose, kurios sandūrų neatitinka su GU-AG "taisyklė, galbūt, nurodančio, kad į genomo lygmenyje pertvarkymas gali sukelti netipiškų mRNR. Ankstesni tyrimai parodė, praleidžiant egzono 8 arba 9 skrandžio vėžio [24, 33]. Šie aberacijos gali sukelti E-cadherins prarasti kalcio privalomas motyvai dėl to, kad ir 9 egzonų 8, ir su pertrūkiais, molekulių, nes rėmelio mutacijų sukelia intarpais ir trynimų, pagaliau, palengvinančios sklaida karcinoma ląstelių stoka.
Sumažinta išraišką E- cad ir β-kateninai buvo rasta kai kurių vėžio formų, įskaitant skrandžio vėžio [8]. Nevienalytis ar nestabili išraiška tiek E-cad ir beta-kateninai visoje navikų buvo rasta. Buvo įrodyta, kad 40% adenokarcinomų El cad lygio buvo iškeltas jų intravaskulinė naviko komponentų, palyginti su jų patenka už kraujagyslių skyriais [34]. Vienas iš galimų paaiškinimų gali būti, kad iš karcinoma įėjimas į intravaskulinės dėtuve yra susijęs su E-cad išraiškos ląstelę, ir kad po to išeiti į patenka už kraujagyslių audinių yra susijęs su downregulation [35]. Nuo e-cad ir β-kateninai yra esminiai komponentai sudaro ląstelių ląstelių sukibimą kompleksą, nuostolių iš jų gali sukelti komplekso funkcija, kuri gali sukelti silpną ląstelių ląstelių sukibimą ir suteikia invazinių savybių dėl naviko sutrikdymo , Be to, sumažintas ląstelių-Ląstelės adhezijos yra susijęs su kontaktas prarandamas slopinimo proliferacijos, tokiu būdu leidžiant pabėgti nuo augimas valdymo signalą, pagaliau suveikimo kancerogenezės žmogaus vėžio [8]. Šiame tyrime buvo nustatyta tarp nenormalaus raiškos E-cad ir beta-kateninai asociacija, rodo, kad E-cad privalomo gali sukelti beta-kateninai perskirstymą iš ląstelių membranos į citoplazmą nuostolių. Padidėjęs nemokamai β-kateninai citoplazmoje gali translocate į branduolį ir sukelti aktyvavimo genų ekspresiją. Tai yra palaikoma į išvadas, kad du atvejai (676 ir 738) buvo neigiama dažymo į vidinio paviršiaus membranos ir teigiamą dažymo metodą dalyvaujant citoplazmoje, tuo pačiu metu. Tačiau yra ir kitų 9 navikai (1 lentelė), kuriame vidutinio stiprumo arba stipriais dažymo membranos taip pat eksponuojami teigiamą dažymo į citoplazmą, o tai rodo, kad normalus degradacija laisvo beta-kateninai į citoplazmą yra slopinamas. Be to, mes nustatėme ryšį tarp nenormalaus raiškos E-cad ir difuzinio histotype asociaciją, nurodant, kad E-cad pakitimai gali vaidinti svarbų vaidmenį blogai diferencijuoti skrandžio navikų. Įdomu tai, kad netipinė išraiška E-cad ir /arba catenins buvo įrodyta, kad būti nepriklausoma prognostinę žymeklį trumpam išgyventi skrandžio vėžiu sergančių pacientų [8]. Ypač įdomūs yra išvada, kad El-cad yra nepriklausoma prognozuoti okultinės limfmazgiuose ir micrometastasis mazguose priskiriama ne pagal įprastus histopatologinių metodų [8].
Išvados
mūsų rezultatai remia, kad pakeitimai E-cad ir β-kateninai vaidinti svarbų vaidmenį inicijuojant tyrimą ir progresavimo skrandžio vėžio. Išraiška abiejų genų sumažėja skrandžio vėžio, tačiau downregulation mechanizmas nėra aiškus. LOH, mutacijos ir keisti RNR sandūrų galėtų paaiškinti apie E-cad skrandžio vėžio downregulation dalį.
Deklaracijos
Padėka
šis darbas parėmė Islandijos mokslinių tyrimų taryba, Islandijos mokslo universitetas fondo ir Islandijos vėžio draugija.
konkuruojančių interesų
Nėra deklaruotus

• Atvejo ir kontrolės tyrimas dėl apolipoproteino E poveikio genotipai skrandžio vėžio rizikos ir progresavimo
• Pagalba vektorius mašina modelis diagnozuoti limfmazgių metastazių skrandžio vėžio su multidetector kompiuterinės tomografijos: preliminarus tyrimas