PLoS ONE: Overexpressie van CD151 voorspelt Prognose in Patiënten met weggesneden maagkanker

De abstracte

Doel

De tetraspanine CD151 werkt als een promotor van metastase en invasie in verschillende tumoren. De rol van CD151 in menselijke maagkanker (HGC) blijft onduidelijk.

Methods

Twintig HGC specimens en afgestemd nontumor monsters, menselijke maagepitheelcellen (HGEC) en vier maagkanker cel lijnen werden gebruikt om CD151 expressie te analyseren. Korte haarspeld RNA-gemedieerde downregulatie van CD151 expressie in HGC cellen werd uitgevoerd om de rol van CD151 in de proliferatie en metastase te onderzoeken /invasie van cellen HGC In vivo Kopen en in vitro
. De relatie van CD151 met integrine α3 in HGC cellen werd onderzocht door silencing integrine α3 gevolgd door co-immunoprecipitaties en immunofluorescentie kleuring. Tenslotte de prognostische waarde van CD151 en integrine α3 werd beoordeeld door immunohistochemie in weefsel microarrays van 76 HGC patiënten.

Resultaten

CD151 expressie werd gebracht op hogere niveaus in HGC HGC weefsels en cellen dan in nontumor HGEC weefsels en cellen. Down-regulering van de CD151 door vshRNA-CD151 verminderde metastase en invasie van HGC-27 cellen, maar had geen invloed op de proliferatie cel. CD151 vormde een complex met integrine α3 in HGC cellen. CD151-cDNA transfectie redde de metastatische potentieel en de invasiviteit van HGC-27-vshCD151 cellen, maar niet die van de HGC-27-vshintegrin α3 cellen In vitro
. Klinisch werd CD151 overexpressie significant gecorreleerd met hoge TNM, invasiediepte en positieve lymfeklier aantasting ( p
< 0,05) en hoge integrine α3 werden bij grote tumorgrootte hoge TNM, diepte van de invasie en de betrokkenheid van de lymfeklieren ( p Restaurant < 0,05). Belangrijk is dat de postoperatieve 5-jaars overleving van patiënten met CD151 ^{laag is en /of integrine α3 laag was hoger dan die van patiënten met een CD151 hoog en /of integrine α3 hoog.}

Conclusie

CD151 is positief geassocieerd met het invasieve karakter van HGC, en CD151 of de combinatie van CD151 en integrine α3 is een nieuwe marker voor het voorspellen van de prognose van HGC patiënten en kunnen potentiële therapeutische doelen.

Visum: Yang YM, Zhang ZW, Liu QM, Zon YF, Yu JR, Xu WX (2013) Overexpressie van CD151 voorspelt Prognose in Patiënten met weggesneden maagkanker. PLoS ONE 8 (3): e58990. doi: 10.1371 /journal.pone.0058990

Editor: Yves St-Pierre, INRS, Canada

Ontvangen: 7 oktober 2012; Aanvaard: 8 februari 2013; Gepubliceerd: 22 maart 2013

Copyright: © 2013 Yang et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Dit werk werd gesteund door de academicus Workstation Fonds van Shaoxing Tweede People's Hospital. De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Human maagkanker (HGC) is de meest voorkomende oorzaak van kanker-gerelateerde dood [1]. De incidentie van HGC werd geschat op 934.000 gevallen per jaar met 56% van de nieuwe gevallen die zich in Oost-Azië, met inbegrip van 41% in China en 11% in Japan [2] zijn. Hoewel de wereldwijde incidentie van GC neemt de laatste jaren, de sterfte in China is de hoogste van alle tumoren en vertegenwoordigt 25% van GC mortaliteitwereldwijd [3]. Ondanks de recente vooruitgang in de chemotherapie en chirurgische technieken, de 5-jaars totale overleving (OS) tarief in China is laag, namelijk 40%. De meeste HGCs worden gediagnosticeerd in stadium III of IV, en de snelheid van de lymfeklier metastase van GC is hoog (50-75%) [4]. De pathogenese van HGC is multifactoriële, waaronder genetische aanleg en omgevingsfactoren. Verschillende genetische veranderingen zijn geassocieerd met de aanleg voor HGC, inclusief de ingrepen tumorsuppressorgenen, oncogenen, celadhesiemoleculen, groeifactoren en genetische instabiliteit [5]. Derhalve een beter begrip van de moleculaire mechanismen HGC en identificeren waardevolle diagnostische merkers en nieuwe therapeutische strategieën is van groot klinisch belang.

Tetraspanins celoppervlak eiwitten die het membraan vier keer overspannen, en zijn gevonden in verschillende celtypes in veel organismen. Ze vertonen talrijke eigenschappen indicatief voor hun fysiologisch belang bij celadhesie, beweeglijkheid, activatie en proliferatie, en hun bijdrage aan pathologische aandoeningen zoals metastase en pathologische angiogenese [6], [7], [8]. CD151 is een celoppervlak glycoproteïne die tot tetraspanine superfamilie die voor het eerst werd aangetoond dat metastase bevorderen in een studie waarin een onbekende antilichaam specifiek remde metastase vorming in humane epidermoïde carcinoom In vivo
[ 9
]. Het antilichaam herkende CD151 en remde celmigratie zonder dat de hechting of proliferatie. Klein interfererend RNA (siRNA) gemedieerde downregulatie van CD151 expressie in primaire melanocyten resulteerde in het verlies van motiliteit, terwijl het weinig effect op de steady-state niveaus van integrinen had. Voorts kunnen deze wijzigingen worden omgekeerd wanneer CD151 werd opnieuw tot expressie gebracht [10]. Overexpressie van CD151 bleek integrine en groeifactorreceptor afhankelijke signaleringsroutes, waardoor de toegenomen beweeglijkheid en invasiviteit van kankercellen [11] te activeren. Deze werkwijze werd voorgesteld bij te dragen aan de activering trajecten gemedieerd door kleine GTPases, die GTP binding aan Cdc42 en Rac organisatoren van de cel cytoskelet verhoogt. De adhesie-afhankelijke activering van Ras, ERK /MAPK1 /2 en proteïne kinase B (PKB) /Akt is aangetoond dat gemoduleerd door CD151 [7], [12]. Het brede scala van functies van CD151, en in het bijzonder de betrokkenheid bij het invasieve karakter en de uitzaaiing van kankercellen, suggereren dat een beter begrip van de expressie en rol in HGC van belang kunnen zijn.

In de huidige studie, we onderzochten de expressie van CD151 in humane maagepitheelcellen (HGEC), HGC cellijnen HGC monsters en aangrenzende nontumorous weefsels. Bovendien onderzochten we het effect van siRNA silencing van CD151 op de proliferatie, invasiviteit en metastatische vermogen van HGC-27 cellen en het verband onderzocht tussen CD151 en integrine α3. Tenslotte de expressie van CD151 en integrine α3 werd onderzocht door immunohistochemie in een tissue microarray bestaat uit 76 gevallen van HGC en de prognostische rol van CD151 en /of integrine α3 in HGC onderzocht.

Materialen en Werkwijzen

cellijnen

HGEC en HGC cellijnen, waaronder HGC-27, AGS, MKN28 en MGC803, werden verkregen van de American Type Culture Collection en gehouden in ons laboratorium. Alle cellijnen werden in Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM, Invitrogen) aangevuld met 10% foetaal runderserum (Hyclone) en 37 ° C gehouden in een bevochtigde incubator onder 5% CO _2.

Patiënten en Follow-up

Twintig verse tumor monsters uit gebieden dicht bij de tumor marge en aangepaste niet-tumorweefsels (meer dan 3 cm afstand van de tumor) werden blindelings verkregen van opeenvolgende patiënten met HGC die curatieve resectie ondergingen tussen februari 2009 en november 2010 op Shaoxing Tweede People's Hospital (Shaoxing, China). Een andere 76 patiënten met maagkanker die R0 resectie ondergingen met uitgebreide lymfeklierdissectie (D2) tussen september 2005 en september 2008 op Shaoxing Tweede People's Hospital werden geïncludeerd in deze studie. De evaluatie van resectiepreparaten werd uitgevoerd volgens de richtlijnen van de Japanse maagkanker Association (1998). Elke standaard resectie betrokken de verwijdering van groep 1 en 2 lymfeklieren (range 36-60, gemiddelde 47,6). Etappeklassement werd uitgevoerd volgens de TNM classificatie voor HGC (UICC). Monsters werden geselecteerd op basis van de beschikbaarheid van geschikte formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde weefsels en volledige clinicopathologic en follow-up gegevens van de patiënten. De kenmerken van de proefpersonen werden samengevat in Tabel 1. Deze studie werd goedgekeurd door de Shaoxing Tweede People's Hospital Research Ethics Committee en schriftelijke toestemming werd verkregen van alle personen. Geen van de patiënten chemotherapie of radiotherapie voor of na chirurgie als deel van een adjuvans programma. Follow-up verzameling van gegevens werd beëindigd op september 2012. De mediane follow-up was 43,0 maanden (range 6-78 maanden). Follow-up procedures bestond uit interim-anamnese, lichamelijk onderzoek, de beoordeling van tumormarkers (CEA, CA-199), abdominale echografie en röntgenfoto van de borst om de 2-3 maanden of CT om de 6 maanden. Overall overleving (OS) werd gedefinieerd als het interval tussen chirurgie en dood of tussen chirurgie en de laatste observatie overlevende patiënten. De gegevens werden geschrapt ten laatste follow-up voor levende patiënten.

RNA extractie en reverse transcriptie-polymerase kettingreactie (RT-PCR)

Totaal RNA werd geëxtraheerd met behulp van de TRI reagens (Sigma ) volgens het protocol van de fabrikant. RNA werd vervolgens behandeld met DNaseI (Roche Diagnostics), gezuiverd via een RNeasy kolom (Qiagen) en geëlektroforeerd om de integriteit van het RNA te bepalen voor gebruik in 5'-RACE experimenten. Complementair DNA (cDNA) werd gesynthetiseerd van 2 ug totaal RNA met behulp van willekeurige hexameren (Proligo) en SuperScript III reverse transcriptase (Invitrogen). RT-PCR werd uitgevoerd op een panel van cellijnen en tumor monsters. Primers gebruikt voor PCR waren als volgt: CD151, 5'-ACTTCATCCTGCTCCTCATCAT-3 'en 5'-TCCGTGTTCAGCTGCTGGTA-3'; integrine α3, 5'-CGAGAGGAAAGAGGAAGTAGGGGGT-3 'en 5'-ATGAAGAAGGAGTGAGGGGTGAGCA-3'; Glyceraldehyde 3-fosfaat dehydrogenase (GAPDH), 5'-GGCATCCTGGGCTACACTGA-3 'en 5'-GTGGTCGTTGAGGGCAATG-3'. De RT-PCR waren als volgt: 10 min bij 94 ° C, denaturatie bij 94 ° C gedurende 20 s, hybridisatie bij 59 ° C gedurende 30 s en verlenging bij 72 ° C gedurende 60 s. De expressie van CD151 en integrine α3 ten opzichte van de housekeeping gen GAPDH werd geanalyseerd door de dichtheid analyse met behulp van Band Scan v5.0 software. Alle experimenten werden in drievoud uitgevoerd.

immunoblotting en immunofluorescentietest

Totaal celextract eiwit (30 ug) werden gescheiden met SDS-polyacrylamide gelelektroforese, overgebracht op polyvinylideen difluoride membranen en geïncubeerd met de overeenkomstige antilichamen. De membranen werden ontwikkeld met versterkte chemiluminescentie methode (Pierce, Rockford, IL, USA). Muis-anti-humaan CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, UK) en anti-integrine monoklonale antilichamen α3 (P1B5, 1:300, Chemicon International, Temecula, CA) werden gebruikt om de expressie van CD151 en integrine α3 detecteren respectievelijk . GAPDH (1:5,000; Chemicon, USA) werd gebruikt als een interne controle. Alle experimenten werden in drievoud uitgevoerd.

HGC-27 cellen werden gebruikt om de locatie van CD151 en integrine α3 detecteren zoals eerder beschreven [13]. Muis-anti-humaan CD151 monoklonaal antilichaam (11G5a, 1:200; Serotec, UK) en muis-anti-humaan integrine α3 antilichaam (P1B5, 1:300, Chemicon International, Temecula, CA) werden gebruikt. De schijfjes werden geanalyseerd met fluorescentiemicroscopie (Leica Microsystems Imaging Solutions).

Transfectie van lentivirale vectoren met kleine haarspeld RNA Tegen CD151 en integrine α3

De pGMLV /Neo-shRNA-CD151 vector werd geconstrueerd volgens de instructies van de fabrikant (pGMLV, een kleine hairpin RNA (shRNA) i Vector, Shanghai Genomeditch Co. Ltd). Drie shRNA-CD151 lentivirale vectoren (pGMLV-GFP-shRNA -CD151) werden gegenereerd om de expressie van CD151 zwijgen in HGC-27-cellen (shRNA-CD151-HGC-27). De shRNA targeting sequenties voor CD151 waren als volgt:
, 5'-CATGTGGCACCGTTTGCCT-3 ';, 5'-TACCTGCTGTTTACCTACA-3 ';, 5'-CATACAGGTGCTCAA TAAA-3 '. De shRNA targeting sequentie voor integrine α3 was als volgt: 5'CCTCTATATTGGGTACACGAT-3 '(Shanghai Genomeditech, Shanghai, China). Stabiel getransfecteerde klonen werden gekarakteriseerd door RT-PCR en geanalyseerd door immunoblotting van de expressieniveaus van de CD151 en α3 integrine eiwitten.

MTT assay, celmigratie en Matrigel invasie assays

Cellen werden gezaaid in 96-well platen (200 ui per 2000-well) en geïncubeerd gedurende 24, 48 en 72 h. Een 20 ui volume MTT oplossing werd bij de aangegeven tijdstippen en gedurende 4 uur. Het medium (200 pl DMEM dat 10% foetaal runderserum) werd vervolgens vervangen door 150 ul DMSO, werden de platen gedurende 10 minuten geschud en de absorptie bij 490 nm werd gemeten om het aantal levensvatbare cellen in elk putje te bepalen. Alle experimenten werden driemaal uitgevoerd.

Celmigratie werd beoordeeld onder toepassing van een wondgenezing assay. Cellen werden gekweekt tot 80-90% confluentie in 24-well platen. Een wond werd gemaakt door over het celoppervlak te slepen een plastic pipet tip. De overblijvende cellen werden driemaal verwijderen van celresten gespoeld en geïncubeerd bij 37 ° C met serumvrij medium. Op de aangegeven tijdstippen, migrerende cellen in de wond voorzijde werden gefotografeerd en vergeleken. Drie afzonderlijke experimenten werden uitgevoerd

Mobiele invasie assays werden uitgevoerd met behulp van 24-well transwells (8 urn poriegrootte, Millipore). Vooraf bekleed met Matrigel (Falcon 354.480; BD Biosciences). Een totaal van 1 x 10 ^{5 cellen werd vervolgens gesuspendeerd in 500 ul DMEM met 1% FBS en toegevoegd aan de bovenste kamer, terwijl 750 ul DMEM met 10% FBS werd in de onderste kamer. Na 48 uur incubatie Matrigel en cellen die overblijven in de bovenste kamer werden verwijderd door wattenstaafjes. Cellen op het onderoppervlak van het membraan werden gefixeerd in 4% paraformaldehyde en gekleurd met Giemsa. Cellen in 5 microscopische velden (vergroting, × 200) werden geteld en gefotografeerd. Alle experimenten werden in drievoud uitgevoerd.}

In vivo assays Metastase

Voor in vivo assays metastase, MGC-803-Mock, MGC-803-vshRNACD151 en MGC-803-vshRNA CD151-cDNA- CD151 cellen werden getransplanteerd in naakt muizen (5 weken oude BALB /c-nu /nu, 5 per groep, 1 x 10 ^{6 cellen per muis) via de laterale staartader [14]. Na 7 weken werden de muizen opgeofferd. Hun longen werden verwijderd en onderworpen aan hematoxyline en eosine (H &E) kleuring. Alle onderzoek met dieren werd uitgevoerd in overeenstemming met protocollen die de Shaoxing Tweede People's Hospital Animal Care Commissie goedgekeurd.}

Co-immunoprecipitatie (Co-IP) Testen

De cellen werden gelyseerd met RIPA lysis buffer aangevuld met 40 mM NaF, 100 uM Na _{3VO 4, en complete Protease Inhibitor (Roche). Nadat het onoplosbare materiaal door centrifugatie bij 12.000 x g werden de voorgeklaard lysaten geïncubeerd met primair mAb pre-geabsorbeerd proteïne A- en G-Sepharose korrels (Pierce Biotechnology) overnacht bij 4 ° C. De precipitaten werden drie maal met lysisbuffer, gekookt in 2 x SDS monsterbuffer gedurende 5 minuten gewassen en eiwitten werden gescheiden door SDS-PAGE op 10% gradiëntgelen. Daaropvolgende immunoblots werden onderzocht met de juiste antilichaam en gedetecteerd door ECL.}

De bouw van Tissue Microarrays en Immunohistochemie

Weefsel microarrays werden geconstrueerd zoals eerder [15] beschreven. In het kort werden alle monsters van patiënten HGC histologisch beoordeeld hematoxyline & eosine kleuring en representatieve gebieden werden voorgemarkeerde in paraffineblokken, weg van necrotische en hemorragische materialen. Duplicaten van 1 mm diameter cylinders uit twee verschillende gebieden, het tumor centrum en het dichtstbijzijnde noncancerous marge (aangeduid als intratumor en peritumor, respectievelijk totaal vier stempels) opgenomen telkens samen met verschillende controles, om reproduceerbaarheid te waarborgen en homogene kleuring van de dia's (Shanghai Biochip Co Ltd, Shanghai). Zo werden vier verschillende tissue microarray blokken geconstrueerd, elk 140 cilinders. Afdelingen 4 um dik werden op glaasjes gecoat met 3-aminopropyltriethoxysilaan. Monoklonaal muis-anti-humaan CD151 (11G5a, 1:200; Serotec, UK) en muis anti-humaan integrine α3 (P1B5, 1:300, Chemicon International, Temecula, CA) antilichamen werden gebruikt om de expressie van CD151 en integrine α3 detecteren . Beelden werden gevangen genomen door de Leica QWIN Plus v3 software. De intensiteit van positieve kleuring werd gemeten zoals beschreven. De intensiteit van CD151 en integrine α3 werd ingedeeld in twee expressieniveaus volgens het gemiddelde oppervlak van positieve kleuring als de grenswaarde als volgt: CD151 ^{hoog > 50% van de tumor gedeelte; en integrine α3 hoog, > 25% van de tumor sectie; CD151 laag, < 50%, en integrine α3 laag, < 25% [15]}

Statistische analyse

De statistische analyse werd uitgevoerd met SPSS 16.0 software (. SPSS). Waarden werden uitgedrukt als het gemiddelde ± standaardafwijking. Voor immunohistochemische markers, de cutoff voor het definiëren van subgroepen was mediaan intensiteit waarde. De χ ^{2-test- en t-test van Student werd gebruikt voor vergelijkingen tussen groepen. OS is gedefinieerd zoals eerder [15] beschreven. Prognostische significantie werd beoordeeld met behulp van Kaplan-Meier survival schattingen en log-rank test. Cox proportional hazards regressiemodel werd gebruikt voor de onafhankelijke prognostische factoren analyseren. Alle testen waren tweezijdig en p Restaurant < 0,05 werd beschouwd als statistisch significant}

Resultaten

CD151 is overexpressie in HGC

CD151 expressie werd geanalyseerd. door RT-PCR en immunoblotting in HGC tumor en gematched nontumor weefsels. CD151 werd uitgedrukt op een laag niveau in nontumor weefsels in vergelijking met HGC weefsels. Zoals getoond in Fig. 1A, B en C, de relatieve expressie van CD151 eiwit in HGC monsters was 2,95 ± 0,21 (bereik 1,13-3,59) vergeleken met 1,30 ± 0,09 (bereik 1,00-1,81) in nontumor monsters, en het verschil was statistisch significant ( p Restaurant < 0,01). Bovendien CD151 expressieniveaus waren HGEC beduidend lager dan in HGC-27, AGS, MKN28 en MGC803 cellen (p < 0,05). Geen verschillen in CD151 expressie niveaus werden gedetecteerd onder HGC cellen (Fig. 1D, E en F). Immunohistochemstry (IHC) analyses bevestigd dat de CD151 eiwit op hogere niveaus in HGC weefsels werd uitgedrukt dan in gelijke nontumor weefsels (afb. 1G).

CD151 Bevorderd de Invasie en uitzaaiing van HGC Cells In vitro en in vivo

de rol van CD151 in HGC cellen onderzoeken we gewijzigde expressie van CD151 in HGC-27 cellen door RNA interferentie en cDNA-CD151 transfectie (fig. 2A). De resultaten van de wondgenezing assay toonden een vertraging in de wond naderingssnelheid van shRNA-CD151-HGC-27 cellen op 48 uur tegen HGC-27-Mock cellen, die werd gewonnen door cDNA-CD151 transfectie (fig. 2B). Down-regulatie van CD151 had geen significant effect op de proliferatie ( p Restaurant > 0,05, figuur 2C.). De neerwaartse regulatie van CD151 expressie verminderde de invasiviteit van HGC-27 cellen (fig. 2D, E).

De rol van CD151 in tumormetastase in vivo nader te onderzoeken, MGC-803-Mock, MGC- 803-vshRNACD151 en MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151 cellen werden getransplanteerd in naakt muizen via de laterale staartader. Histologische analyse van de longen van muizen bevestigde dat de neerwaartse regulatie van CD151 onderdrukt longmetastasen formatie. Het aantal en de grootte van de long metastase knobbeltjes waren significant afgenomen in de MGC-803-vshRNACD151 groep in vergelijking met de MGC-803-Mock en MGC-803-vshRNACD151-cDNA-CD151-cellen (fig. 2 F, G). Bij elkaar genomen, onze resultaten suggereren dat CD151 is een positieve regulator van maagkanker metastase.

CD151 een complex vormt met integrine α3 en Silencing van integrine α3 Schadelijk voor HGC Cell Invasion geïnduceerd door CD151 overexpressie

De betrokkenheid van tetraspanins in de integrine-gemedieerde regulering van kanker metastase is aangetoond en α3β1 integrine is aangetoond dat GC invasie en metastase [16] bevorderen. Daarom onderzochten we het verband tussen integrine α3 en CD151 in HGC cellen. Zoals getoond in Fig. 3A, integrine α3 werd expressie op hogere niveaus in HGC cellen dan in HGEC cellen. Co-immunoprecipitatie experimenten toonden aan dat CD151 vormde een complex met integrine α3 in HGC-27 cellen (fig. 3B, C). Bovendien, CD151 en integrine α3 co-gelokaliseerd op het plasmamembraan van HGC-27 cellen zoals aangetoond met immunofluorescentie (Fig. 3D).

Om de betrokkenheid van CD151 in α3 integrine functie verder te onderzoeken, werden de cellen onderworpen aan RNA interferentie of cDNA transfectie en Transwell experimenten na vervanging van de matrix gel met laminine-332 [17] geanalyseerd. De resultaten toonden aan dat silencing integrine α3 aanzienlijk remde de invasie van HGC-27 cellen en CD151 cDNA transfectie redde het invasieve vermogen van HGC-27-vshRNACD151, maar niet dat van HGC-27-integrine vshRNA α3 cellen. Bovendien α3 integrine antilichamen remde de invasie van HGC-27-vshRNACD151-cDNA-CD151 cellen (fig. 3E, F). Deze resultaten suggereerden de gecoördineerde werking van de CD151-integrine α3 complex, en gaf aan dat hoge niveaus van CD151 en integrine α3 geassocieerd met verhoogde metastatische potentie van GC cellen.

Expressie van CD151 of integrine α3 is positief gecorreleerd met maligne fenotypen van HGC door immunohistochemie

De expressie van CD151 en integrine α3 eiwit werd onderzocht in 76 primaire HGC patiënten met behulp van tissue microarrays (TMA). CD151 eiwit immuunreactiviteit gelokaliseerd in het celmembraan (fig. 4A). In tumorweefsels, CD151 expressie vertoonden aanzienlijke heterogeniteit in de verschillende monsters (fig. 4a1, b1, c1 en d1). CD151 ^{hoog goed voor 50% (38/76) van de gehele cohort. Zoals getoond in Tabel 1, CD151 hoog was significant gecorreleerd met tumorgrootte ( p = 0,021
), invasiediepte ( p = 0,004
), lymfeklieraantasting ( p =
0,028) en hoge tumor stadium ( p =
0,002). Echter, andere klinische kenmerken, zoals leeftijd, geslacht en tumordifferentiatie, waren niet significant gerelateerd aan de expressie van CD151.}

De membranen gekleurde tumorcellen positief voor integrine α3 (fig. 4A2, b2, c2 en d2). In alle geanalyseerde weefsels, werden hoge niveaus van integrine α3 expressie gedetecteerd in 27 HGC weefselmonsters (35,52%). Consistent met de resultaten van eerdere studies [16], [18], patiënten met hoge α3 integrine expressie zouden eerder agressieve kenmerken vertonen. Integrine α3 ^{hoog patiënten vertoonden grotere tumoren ( p =
3.46E-4), grotere diepte van de invasie ( p = 0,001
), hogere tumor stadium ( p =
0,005), en meer betrokkenheid van de lymfeklieren ( p =
0,040) dan patiënten met lage integrine α3 expressie (tabel 1).}

Overexpressie van CD151 en /of integrine α3 zijn Independent factoren voorspellen van de prognose van HGC Patiënten

tot de laatste follow-up, de 3- en 5-jaars OS tarieven in de gehele bevolking waren 53,0 en 40,78%, de 5-jaars OS in de CD151 ^{lage groep was significant hoger dan die in de CD151 hoog groep (68,42% vs.
23,68%, respectievelijk, p
= 0,007, Fig. 4B), en de postoperatieve 5-jaars OS van HGC patiënten was hoger in de integrine α3 laag dan in de integrine α3 hoog groep (66,67% vs.
13,51%, p
= 6,67 E-6). Evaluatie van het gecombineerde effect van CD151 en integrine α3 op de prognose van HGC toonde aan dat de 5-jaars OS van CD151 hoog /integrine α3 hoog patiënten (groep III, n = 23) was 17,40%, dat was beduidend lager dan die van de CD151 laag /integrine α3 laag patiënten (77,78% groep I, n = 27) en ofwel lage patiënten (patiënten met een lage CD151 of lage integrine α3 alleen) (23.08%, groep II , n = 26, fig. 4C en D).}

univariate analyse bleek dat tumorgrootte, invasiediepte, lymfeklieraantasting, hoge tumor stadium hoge CD151 expressie, hoge integrine α3 en co-expressie van CD151 en integrine α3 waren voorspellers voor OS. Andere kenmerken zoals leeftijd, geslacht en differentiatie had geen prognostische betekenis voor OS (Tabel 2). Multivariate Cox proportional hazards model bleek dat invasiediepte een onafhankelijke prognostische indicator voor OS (Tabel. 2).

Discussie

De resultaten van de onderhavige studie toonde aan dat CD151 expressie werd gebracht op hogere niveaus GC cellen en tumorweefsels dan HGEC cellen en nontumor weefsels, hetgeen consistent is met eerdere verslagen over CD151 expressie in een verscheidenheid van tumoren, waaronder intrahepatische cholangiocarcinoom, HCC, borst-, long-, colon- en prostaatkanker [15], [19] , [20], [21]. Verder is onze studie toonde aan dat CD151 vormt een functioneel complex met integrine α3 en downregulatie van CD151 of integrine α3 expressie aanzienlijk remde de invasie en metastase van HGC cellen in vitro. Klinisch, onze resultaten bleek dat hoge niveau van CD151 expressie of de co-overexpressie van CD151 en integrine α3 ongunstig prognostische gevolgen voor patiënten met GC kan hebben.

De eerste bewijs dat CD151 bevordert metastase kwam uit een studie waaruit blijkt dat een antilichaam met onbekende specificiteit remde metastase vorming door een menselijke epidermoïd carcinoom regel in vivo
. Het antilichaam herkende CD151 en remde celmigratie zonder dat de hechting of proliferatie [22]. Overexpressie van CD151 is aangetroffen in vele tumortypen en verhoogde CD151 expressie is geassocieerd met een slechte prognose in borst-, pancreas-, niet-kleine-cel longkankers en HCC. Bovendien is CD151 blijkt een betere voorspeller van de prognose bij patiënten met prostaatkanker dan histologische grading [23]. In de huidige studie, twee lijnen van bewijs gaf aan dat overexpressie van CD151 is van klinisch belang HGC. Eerst werd CD151 overexpressie vaker gezien bij HGC patiënten met een slechte prognose. Ten tweede, verhoogde expressie van CD151 verbeterde de invasie en metastase van HGC cellen. Bovendien, klinische gegevens duiden dat verhoogde CD151 expressie overtrof andere veelgebruikte klinische parameters zoals verhoogde tumor grootte en slechte differentiatie te voorspellen HGC prognose. Samengevat, deze bevindingen aan dat CD151 speelt een belangrijke rol bij de progressie van HGC. In de huidige studie, laten we zien dat CD151 interageert met integrine α3 in HGC cellen. Modulatie van de expressie van integrine α3 in HGC-27-vshCD151-cDNA-CD151 cellen toonde de vorming van een functioneel CD151-integrine α3 complex en toonde aan dat co-overexpressie van CD151 en integrine α3 was geassocieerd met verhoogde metastatische potentie van HGC cellen . Gezien de gevestigde rol van integrine α3 in HGC [16], is het redelijk om te veronderstellen dat CD151 overexpressie metastase /inval in GC kunnen bevorderen.

Vanwege hun hydrofobe aard, tetraspanins associëren met elkaar en met andere membraan eiwitten [24]. Het is inderdaad bekend dat tetraspanins te signalering platform in de plasmamembraan door de vorming van tetraspanine verrijkte microdomeinen (TEM) [6], [7]. Tot nu toe zijn verschillende soorten membraaneiwitten, zoals groeifactorreceptoren, integrinen, immunoglobuline domeinen en EWI-F (een subfamilie van Ig eiwitten) gevonden in TEM [25]. Bovendien zijn de functies van deze membraaneiwitten gemeld innig geassocieerd met TEM. Zo werden verschillende combinaties van tetraspanins vormen TEM gevonden voor de functie van groeifactorreceptoren en integrine beïnvloeden. Belangrijker is het expressieniveau van individuele tetraspanins in TEM ook een significant effect op de bijbehorende eiwitten [26], [27]. In recente studies neerhalen van CD151 werd aangetoond dat de vorming van TEM verstoren en CD151 deletie remde de functie van verschillende membraanproteïnen, wat aangeeft dat CD151 speelt een cruciale rol in TEM vorming en functie [7], [26]. Bovendien blokkeren van CD151 sterk verminderde het invasieve en metastatische vermogen van tumorcellen, en gericht op de CD151 eiwit of TEM is een veelbelovende therapeutische strategie [23] worden. In deze studie, de expressie van CD151 werd aangetoond dat het een onafhankelijke voorspeller van OS. De gecombineerde expressie van CD151 en integrine α3 was een betrouwbare voorspeller van OS dan CD151 of integrine α3 expressie alleen de opvatting ondersteunt dat zowel CD151 en integrine α3 een belangrijke rol spelen in HGC. Daarom onze resultaten significant en suggereren dat CD151 of CD151-integrine α3 complex kunnen belangrijke doelen in de behandeling van patiënten met GC.

Concluderend CD151 overexpressie is een voorspeller van een slechte uitkomst bij patiënten met HGC en CD151 of CD151-integrine α3 complex kan zijn potentiële doelwitten voor de behandeling van HGC.

• PLoS ONE: PKG II remt EGF /EGFR-Induced Migration van maagkanker Cells
• PLoS ONE: Restauratie van miR-1228 * Expression Onderdrukt-mesenchymale transitie in Gastric Cancer