Cientistas do NIH desenvolvem novo método de preparação de amostra para detectar SARS-CoV-2

Cientistas do National Institutes of Health (NIH) desenvolveram um novo método de preparação de amostra para detectar SARS-CoV-2, o vírus que causa COVID-19. O método ignora a extração do material de RNA genético do vírus, simplificando a purificação da amostra e potencialmente reduzindo o tempo e o custo do teste. O método é resultado de uma colaboração entre pesquisadores do National Eye Institute (NEI), o NIH Clinical Center (CC), e o Instituto Nacional de Pesquisa Odontológica e Craniofacial (NIDCR).

Os testes de diagnóstico continuam a ser uma ferramenta crucial na luta contra a pandemia COVID-19. Os testes padrão para a detecção de SARS-CoV-2 envolvem a amplificação do RNA viral para níveis detectáveis ​​usando uma técnica chamada PCR de transcrição reversa quantitativa (RT-qPCR). Mas primeiro, o RNA deve ser extraído da amostra. Os fabricantes de kits de extração de RNA tiveram dificuldade em acompanhar a demanda durante a pandemia de COVID-19, dificultando a capacidade de teste em todo o mundo. Com o surgimento de novas variantes de vírus, a necessidade de melhor, testes mais rápidos são melhores do que nunca.

Uma equipe liderada por Robert B. Hufnagel, M.D., Ph.D., chefe da Unidade de Genética Médica e Genômica Oftálmica da NEI, e Bin Guan, Ph.D., um colega do Laboratório de Genômica Oftálmica do NEI, usou um agente quelante feito pela empresa de suprimentos de laboratório Bio-Rad, chamado de resina Chelex 100, para preservar o RNA SARS-CoV-2 em amostras para detecção por RT-qPCR.

"Usamos amostras de nasofaringe e saliva com várias concentrações de vírions para avaliar se elas poderiam ser usadas para detecção direta de RNA, "disse Guan, o autor principal de um relatório sobre a técnica, que foi publicado esta semana na iScience. "A resposta foi sim, com sensibilidade marcadamente alta. Também, esta preparação inativou o vírus, tornando mais seguro para o pessoal do laboratório lidar com amostras positivas. "

A equipe de Hufnagel fez sua descoberta testando uma variedade de produtos químicos usando amostras sintéticas e humanas para identificar aqueles que poderiam preservar o RNA em amostras com degradação mínima, permitindo a detecção direta do vírus por RT-qPCR.

Para validar o teste, Blake M. Warner, do NIDCR, D.D.S., Ph.D., M.P.H., e sua equipe coletou amostras de pacientes (no Protocolo de Pesquisa NIH IRB 20-D-0094) e as armazenou em qualquer meio de transporte viral, ou o recém-desenvolvido tampão de resina quelante no NIH Symptomatic Testing Facility.

As amostras em meios de transporte viral foram testadas pela equipe de testes COVID-19 no Centro Clínico do NIH, liderado por Karen M. Frank, M.D., Ph.D., usando extração de RNA convencional e teste RT-qPCR. As amostras no tampão de resina quelante foram aquecidas e o RNA viral foi, então, testado por RT-qPCR. A nova preparação aumentou significativamente o rendimento de RNA disponível para teste, em comparação com o método padrão.

Achamos que esta nova metodologia tem benefícios claros de aumentar a sensibilidade, economia de custos e tempo para testes. O método estabiliza o RNA à temperatura ambiente para facilitar o transporte, armazenar, e manuseio em ambientes clínicos. "

Robert B. Hufnagel, M.D., Ph.D., Chefe da Unidade de Genética Médica e Genômica Oftálmica da NEI

NEI protegeu a propriedade intelectual em torno desta tecnologia e está procurando parceiros para co-desenvolvimento / licenciamento. Entre em contato com [email protected] para mais informações ..

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