PLoS ONE: пробиотик Смесь VSLУскоряет язве желудка Исцеление от Стимулирующий фактор роста эндотелия сосудов

Абстрактный
<р> Исследования, оценивающие эффект и механизм пробиотиков на заболеваниях верхних отделов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), в том числе язвы желудка ограничены, несмотря на большую работу и многообещающие результаты этого метода терапии других заболеваний ЖКТ. В данном исследовании мы исследовали механизмы, с помощью которых пробиотик смесь VSL(смесь из восьми пробиотических бактерий, включая лактобациллы
, бифидобактерии
и Streptococcus
видов) заживает уксусная кислота индуцированных язва желудка у крыс. VSLвводили перорально при низкой (6 × 10 9 бактерий) или высокий (1,2 × 10 10 бактерий) дозировках от 3-й день после индукции язвы в течение 14 дней подряд. VSLпроцедуры значительно повышается желудка заживление язв в зависимости от дозы. Для оценки механизма (ов), в котором VSL, оказываемого свои защитные эффекты, мы количественно экспрессию генов нескольких провоспалительных цитокинов, белков и экспрессию желудка муцин-Muc5ac, регулирующий цитокин IL-10, COX-2 и различные роста факторы. Из всех компонентов исследованных только экспрессия и белка производство VEGF была увеличена 332 раз на 7-й день в изъязвленной тканях животных, обработанных VSL. Как и следовало ожидать, у животных, обработанных VEGF нейтрализующих антител со значительной задержкой желудка заживление язв в VSLобработанных животных. Это первый отчет, чтобы продемонстрировать высокую эффективность пробиотика смеси VSLв расширении желудка заживление язв. Пробиотик эффективность была эффективна при более высоких концентрациях VSL, в частности, увеличение экспрессии и продукции стимулирующим ангиогенез, факторы роста, в первую очередь СЭФР
<р> Цитирование:. Dharmani P, Де Симоне С, Chadee К (2013) Пробиотические Смесь VSLУскоряет язве желудка исцеление от Стимулирующий фактор роста эндотелия сосудов. PLoS ONE 8 (3): e58671. DOI: 10.1371 /journal.pone.0058671
<р> Редактор: Джон Уоллес, Университет МакМастер, Канада
<р> Поступило: 29 октября 2012 года; Принято: Февраль 7, 2013 года; Опубликовано: 6 марта 2013
<р> Copyright: © 2013 Dharmani и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа была поддержана грантом канадского института исследований в области здравоохранения (CIHR, КЦ). PD финансировалась Канадской ассоциации гастроэнтерологии-Axcan Pharma-CIHR исследований и премии стипендий. Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи

Конкурирующие интересы:. Авторы имеют следующий интерес. PD финансировалась Канадской ассоциации гастроэнтерологии-Axcan Pharma-CIHR исследований и премии стипендий. Это не меняет приверженность авторов на всех политик PLoS ONE на данных и материалов общего доступа.

Введение
<р> Язва желудка заживление происходит спонтанное, сложный массив различных механизмов, которые работают в тандеме устранить дисбаланс между агрессивными (например, кислота, пепсин, провоспалительных цитокинов и хеликобактерной
) и защитные факторы (например, слизь, бикарбонат, кровоток и факторы роста) в желудке [1]. Процесс включает в себя смягчение агрессивных просветными факторов, заполнение дефекта слизистой оболочки с пролиферирующих и мигрирующих клеток эпителия и соединительной компонент таким образом, чтобы воссоздать архитектуру слизистый [2]. Мы и другие [3], [4], [5] показали эффективность и предполагаемый механизм различных препаратов и трав в активизации процесса спонтанного заживления язвы в различных в естественных условиях
желудочных моделях язвы. Тем не менее, исследования, оценивающие влияние пробиотиков на заболеваниях верхних отделов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) и особенно на язвенной болезни желудка ограничены, несмотря на большую работу и многообещающие результаты этого метода терапии других заболеваний ЖКТ, включая воспалительное заболевание кишечника [6], [ ,,,0],7], [8], [9].
<р> Пробиотики живые микроорганизмы, которые в дополнение к питательной ценности дарует ряд преимуществ для здоровья при условии, в достаточное количество. VSLпредставляет собой пробиотический препарат, содержащий смесь из восьми видов бактерий, четыре вида лактобациллы
( ацидофилин
, Bulgaricus
, Casei
, Plantarum
), три вида бифидобактерии
( бревисом
, infantis
, лонгум
) и один элемент Streptococcus
видов, которые были показаны клинически эффективными в предотвращении вспышки огнеупорного поухита [8] и приводят к ремиссии язвенного колита [9]. Ранее мы показали, что VSLили его секретируемые продукты являются мощными ободочной муцин стимуляторы секреции в пробирке на ободочной
эпителиальных клеток человека и в исследованиях ободочной петля в моделях на животных [10]. Тем не менее, влияние лечения пробиотиками на остром желудочном повреждений, связанных с язвенной болезни желудка не очень хорошо изучены. Основная причина заключается в том, что кишечник обеспечивает множество неблагоприятных физиологических условиях, таких как кислый рН, пищеварительные ферменты, желчные кислоты и механическим нагрузкам, затухающего выживание и рост пробиотических микроорганизмов. Тем не менее, лечение с достаточным количеством нескольких пробиотических микроорганизмов может преодолеть это ограничение. Есть несколько сообщений о отдельных пробиотических бактерий, включая лактобактерии рамнозус
[11], L. gasseri
[12], L. ацидофилин
[13] и Bifidobacterium
[14] присвоении защиты от язвы желудка в развитии заживления язвы в различных в естественных условиях
моделей язвенной болезни. Тем не менее, исследования о влиянии пробиотических бактерий на усиление H. Pylori
ликвидация были непоследовательны в своих выводах [14], [15]. Недавнее исследование показало, что адекватное добавок с смеси 8 пробиотиков штаммов может уничтожить H. пилори
[16]. В настоящее время, она до сих пор не известно, является ли смешанные пробиотические бактерии являются более эффективными, чем отдельные штаммы в продвижении заживления язвы. В настоящем исследовании мы исследовали клеточные механизмы, посредством которых VSLпробиотик смесь дополненной желудка заживление язв у крыс.

Материалы и методы

Животные
<р> Шесть-недельных Использовали самцов крыс Sprague-Dawley весом от 150 до 200 г (Charles River, Сент-Constant, Quebec) были размещены в клетках 2 в каждой группе при постоянной комнатной температуре, с 12-х светлых и темных циклов, и кормили стандартным Chow и грызунами воды вволю
. После периода акклиматизации 7-дневной крысы были рандомизированы в экспериментальной и контрольной группах для индукции язвы желудка. Животное Эксперимент Комитет по этике Университета Калгари одобрил это исследование.

Экспериментальный дизайн
<р> Для изучения влияния VSLпробиотических смеси на желудочную заживления язв и смягчения наступательных просветными факторов (про -inflammatory цитокины) и продвижение цитопротекторных защитных факторов (регуляторных цитокинов, муцина и факторы роста), крысы были разделены на три экспериментальные группы. Органы управления животных обрабатывали носителем после индукции язв и двух других групп, которые получали либо с низким (6 × 109 бактерий /животное /день) или высоким (1,2 × 1010 бактерий /животное /день) доза VSL 3 #. Животные были умерщвлены на 3-й день, 7 и 14 транспортных средств или VSLлечения (для обоснования, смотри раздел желудка индукции язв и VSLпроцедуры). В общей сложности 18 животных были использованы для каждой точки времени ( N
= 6 для каждой пробной /момент времени) и исследование было сделано в трех экземплярах. Для того, чтобы исследовать влияние анти-сосудистого фактора роста эндотелия (VEGF) на язвы желудка исцеление, нейтрализующие антитела против VEGF были использованы. В данном эксперименте использовали четыре группы. После индукции язвы, контрольную группу обрабатывали только транспортным средством. Исследуемые группы включали крыс, получавших нейтрализующего антитела к VEGF в одиночку, крысы, получившие высокие дозы VSL(1,2 × 1010 бактерий /животное /день) вместе с контрольным IgG антитела и крыс, получавших высокие дозы VSL(1,2 × 1010 бактерии /животное /день) вместе с нейтрализующими антителами VEGF. Группы антител (IgG обрабатывают и нейтрализующие антитела VEGF) были даны антитела в дозе 10 мг /кг веса тела (для обоснования, смотрите раздел по лечению антитела VEGF нейтрализации). Животные были умерщвлены шейным смещением на 3-й день, 7 и 14 после обработки анти-VEGF. В общей сложности 24 животных были использованы для каждой временной точки (п = 6 для каждой пробной /момент времени).

Язва желудка Индукционные и VSLлечение
<р> хронические язвы желудка экспериментально индуцированных в крыс, как описано ранее [17]. Под анестезией с пентобарбитона (35 мг /кг массы тела, внутрибрюшинно), живот открыл срединный разрез. Пластиковая трубка 6 мм, открыта на обоих концах была плотно наносится на серозную поверхность передней стенки желудка только проксимального к антральных желез область. На поверхности желудка, 60 мкл 40% уксусной кислоты, выливают через трубку в течение 90 секунд. Это вызвало немедленное некроз всей слизистой оболочки и к югу от слизистой оболочки в пределах области, где применялась уксусная кислота. Уксусная кислота, оставшиеся на поверхности затем протирают стерильной фильтровальной бумагой и открытые живот был закрыт. Ранее мы показали, что эта процедура вызывает гистологически хорошо охарактеризованных язвы в течение 3-х дней после воздействия уксусной кислоты и заживает полностью в течение 3-х недель без перфорации или проникновения в окружающие органы [3] - [4].
<Р> Технологии очистки VSLпри низких (6 × 10 9 бактерий) и высокие дозы (1,2 × 10 10 бактерий) было основано на результатах предварительных исследований с использованием пяти различных доз VSL(1,5 × 10 9, 3 × 10 9, 6 × 10 9, 1,2 × 10 10 и 2,4 × 10 10 бактерий /животное /день, соответственно). VSLдозы 1,5 × 10 9 и 3 × 10 9 бактерий /животное /день не были найдены эффективными в продвижении язвенной болезни желудка исцеление в то время как эффект дозы 2,4 × 10 10, бактерии /животное /день на желудочную заживление язвы существенно не отличается от 1,2 × 10 10 бактерий /животное /день (рис S1). Лечение с VSLбыло начато, когда язвы были полностью разработаны на 3-й день после введения уксусной кислоты; это рассматривалось как 1-й день лечения в течение следующих 14 дней. Значение рН различных концентраций VSLбыло 7,0. Животные были умерщвлены на 3-й день, 7 и 14 следующая VSLлечения. Язвенные и не язвенные площадь от каждого животного ополаскивают собирали ледяным фосфатно-солевой буферный раствор помещают на лед и три поперечных сечений. Два сечения были быстро замораживали в жидком азоте и хранили при -70 ° С для выделения РНК и белкового препарата. Третье сечение сразу же фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине для гистологического анализа.

Оценка размера язвы, процентное исцеление и гистологическое исследование
<р> Общая площадь язвы и процент заживления язвы в разное время опубликовать лечения были оценены в крыс желудка путем разрезания вдоль большой кривизны и язвы (мм 2) площадь измерена. Два разных человека измеряли площадь язвы слепым способом. Процент заживления рассчитывали как:
<р> гистологического исследования проводили в соответствии с описанным ранее способом [18]. В кратком изложении, язва воронка каждого желудка была разрезана, и фиксировали в течение ночи в 10% нейтральном забуференном формалине, затем обезвожены постепенно в этаноле и заливали в парафин, с использованием в качестве промежуточного neoclear растворителя. Секции 6 мкм были получены в автоматизированном микротома. Изъязвлённая срезы окрашивали гематоксилином и эозином (H &Amp; E) для гистологической оценки в процессе заживления. Микроскопически, Н &Amp; ткани E были представлены как показано: нормальный внешний вид, мягкий инфильтрат воспалительных клеток в собственной пластинке слизистой оболочки слизистой оболочки, либо не оказывают или мелкой эрозии или глубокой эрозии и изъязвления

Количественные в режиме реального времени. ПЦР-анализ
<р> Количественный анализ в реальном масштабе времени ПЦР проводили для оценки изменений в экспрессии генов, кодирующих секреторной муцина (Muc5ac), циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2), провоспалительных (ФНО-альфа и IL- 1β) и регулирующий (IL-10 и TGF-β), цитокины и фактор роста сосудистого эндотелия (VEGF), трансформирующий фактор роста-бета (TGF-бета) и эпидермальный фактор роста (EGF). Суммарную РНК экстрагировали из язвенные и не язвенные ткани с реагентом TRIzol (Invitrogen). Выход и чистота РНК определяли с помощью спектроскопического анализа. 2 мкг РНК подвергали обратной транскрипции с помощью M-MLV обратной транскриптазы (Invitrogen) в соответствии с инструкциями изготовителя. Один мкл кДНК использовали для ПЦР в реальном времени (Corbett Research). В режиме реального времени праймеры, используемые при определенной температуре отжига показаны в таблице 1. амплификацию проводили с QuantiTect SYBR Green PCR набора QIAGEN путем с использованием следующих условий езды на велосипеде: 94 ° С проводить в течение 15 мин, затем 40 циклов денатурации при 94 ° С в течение 20 с, отжиг при соответствующих температур в течение 30 с и удлинение при 72 ° С в течение 30 сек. Специфичность амплификации проверяли с помощью расплава анализа кривой. Экспрессии мРНК гена различного нормализовали против GAPDH, и сгиб изменение по сравнению с контролем определяли в соответствии с методом DDCT [19].

Белковые уровни VEGF, TGF-beta и EGF в гомогенате ткани желудка
<р> Желудочные ткани гомогенизировали в холодном забуференного физраствора (PBS, рН 7,4) с помощью гомогенизатора Polytron. Гомогенат ткани центрифугировали при 20000 х г в течение 20 мин при 4 ° С, чтобы получить четкие концентрации супернатант и белка измеряли с использованием BCA (бицинхониновой кислоты) комплект. Уровни протеина VEGF, TGF-бета и EGF в гомогенизированных желудка тканей из обоих изъязвление и не изъязвляется слизистой оболочки были измерены с использованием наборов ELISA в соответствии с протоколом производителя (крысы VEGF ELISA Kit, Ray Biotech; крысы TGF-бета набор, ebioscience и крысы EGF ELISA набор, Uscn Life Science Inc.). Было высказано VEGF, TGF-β и EGF уровень в пг /мг ткани.

Эффект нейтрализации анти-VEGF антитела на желудочную заживления язв, вызванных VSL
<р> Для того, чтобы оценить эффект нейтрализующих анти-VEGF-антитела на желудочную заживлении язвы, продвигаемой VSL, четыре группы животных были использованы, а именно, контроль, нейтрализующие VEGF антитела (R &Amp; D Systems), VSLс высокой дозировкой + IgG (изоформы антитела, R &Amp; D системы), и VSLвысокая доза + нейтрализующих антител VEGF (R &Amp; D Systems). В предварительных экспериментах, три дозы нейтрализующие VEGF антитела (5, 10 и 20 мкг /животное /день; IP) испытывались на животных, получавших высокую дозу VSLв течение 14 последовательных дней и дозировку 10 мкг /животное /день было обнаружено, что значительно снижает заживлению и был выбран для использования для всех последующих экспериментов. Животные были умерщвлены на 3-й день, 7 и 14 дней после VSL+ антитела лечения. Желудочный области язвы измеряли и гистологическое исследование, количественный анализ в режиме реального времени ПЦР и анализ белка на основе ELISA, проводили, как описано выше.

Статистический анализ

Результаты выражены в виде среднего ± SEM. Значимость различия между контролем и VSLобработанных групп определяли с помощью теста Крускала-Уоллиса с Данс послетестовом для сравнения конкретных групп. Выбор непараметрического теста (тест Крускала-Уоллиса) вместо параметрического теста (дисперсионного анализа ANOVA) был основан на том, что по крайней мере одна из групп, во всех, кроме трех из сравнений негауссо-. Для того, чтобы обеспечить согласованность, критерий Крускала-Уоллиса был использован для всех сравнений. Все статистические анализы проводились с использованием программного обеспечения Graph Pad INSTAT. A P
значение > 0,05 считалось значимым

Результаты

VSLпробиотик смесь ускоряет заживление язвы желудка
<р> После серозной применения уксусной. кислота 100% от животных развилась язвы желудка после 3-х дней. После этого язвы желудка постепенно зажила до 14-й день (рис. 1а). Для того, чтобы определить, является ли пробиотик смесь VSLможет ускорить заживление язвенной болезни желудка, животных обрабатывали либо низких или высоких доз VSL, начиная с 3-й день, когда язвы были полностью разработаны в течение следующих 14 дней подряд. Как показано на рисунке 1 а /б, заживление язв на 3-й день лечения не было статистически значимым в контрольную или VSLобработанных групп. После этого было прогрессивное увеличение заживления язвы отражается уменьшением площади язвы на 7-й день у животных, обработанных или с низкой (р = 0,07) или высокой (р = 0,003) Дозировки VSL, по сравнению с необработанными контрольными образцами ( рис. 1а). В частности, VSLпри высоких дозах в течение 14 дней привело к полному заживлению язв в ~50% животных (рис. 1 а), без признаков язвенного слизистой оболочки. В остальных животных было отмечено значительное восстановление поверхностного эпителия и обширной регенерации ткани (рис. 1, б). В то время как VSLприсвоил значительное увеличение заживления язв, лечение высокой дозы (% исцеления составила 57% и 84% на 7-й день и 14, соответственно) значительно превзошла низкие лечения доза (% исцеления составила 30% и 57% на 7-й день и 14 соответственно; рис. 1а). Так, 3-й день лечения не показали существенных различий в заживлении язвы для контроля и VSLобработанных групп, все результаты в последующих разделах представлены в течение нескольких дней 7 и 14 лечения.

VSLлечение способствует восстановление тканей в изъязвленной слизистой оболочки желудка
<р> H &Amp; E окрашивание выявили различные гистологические признаки исцеления среди различных групп. На 14-й день, похожий на нашего валового нахождения в измерении язву области, контрольных крыс показали минимальный ремонт. Там были уменьшены воспалительные экссудаты, минимальная степень регенерации слизистых оболочек с уменьшенным размером язвенного кратера. Мы не наблюдали много железистой организации у контрольных крыс (рис. 2а). Тем не менее, у животных, получавших высокие дозы VSL, которые показали максимальное заживление в уменьшении на размер области язвы, была восстановление эпителия слизистой оболочки (реэпитализация) и несколько воспалительных клеток. Как показано на фиг.2с, секреторных желез также были организованы. Оценка изъязвленной тканей в VSLнизкой дозой обработанной группы показали некоторое поверхностное ремоделирования со скромными воспалительных экссудатов и в-полной повторной эпителизации слизистой оболочки. Правильная организация желез была также замечена в некоторых местах (рис. 2, б).

Влияние VSLобработки на Muc5ac, экспрессия ЦОГ-1/2 и провоспалительных и регуляторного гена цитокина
<р> слизистая слой является первым слоем оборонительный слизистой оболочки желудка [20], что играет важную защитную роль против кислоты и пепсина в желудке. Так как Muc5ac наиболее обильно выражены муцин в нормальной слизистой оболочке желудка, мы определяем, если VSLпроцедуры влияют на экспрессию генов Muc5ac в изъязвление и /или не-сгнила тканей. Как показано в таблице 2, несмотря на то, выражение Muc5ac скромно увеличилось в VSLобработанных животных, она существенно не отличалась между группами испытуемых. Простагландины являются другим не менее важным фактором, оборонительный решающее значение для поддержания целостности слизистой оболочки желудка, синтез которого регулируется ограничение скорости фермента-циклооксигеназы (ЦОГ), которая существует в двух изоформ-ЦОГ-1 и ЦОГ-2 [21]. Конститутивно экспрессируется ЦОГ-1 было также установлено, что без изменений в изъязвленной и не-сгнила тканей тогда как экспрессия ЦОГ-2 был значительно выше в VSLвысокая доза группы, обработанной на 7-й день, но не на 14-й день (таблица 2) .
<р> провоспалительных цитокинов TNF-α и IL-1β было показано, играют важную роль в патогенезе язвенной болезни желудка путем инициирования раннего воспалительного процесса [22], в то время как регулирующего цитокина IL-10 известно, что затухают производство ФНО- [23]. было обнаружено экспрессию как TNF-a и IL-1 β генов быть повышен в изъязвленной тканей в трех группах животных. Тем не менее, лечение VSLне влияет на экспрессию IL-1 и IL-10 и незначительно снижало экспрессию TNF-alpha в язвенные ткани по сравнению с обработкой транспортных средств (таблица 2).

VSLлечение стимулирует выработку факторов роста
<р> роль факторов роста VEGF, TGF-бета и EGF в ангиогенеза и миграции эпителиальных клеток и пролиферации при язвенной болезни желудка исцеления хорошо документирована [24], [25]. Как показано на рисунке 3, наблюдалось значительное увеличение VEGF (P &ЛТ; 0,001) экспрессии гена в изъязвленной тканей на 7-й день у животных, обработанных низкими или высокими дозами VSL, по сравнению с животными, обработанными только с носителем (97 и 332-кратное увеличение экспрессии гена в ПЖКнизких и высоких доз, обработанных крыс, соответственно). Увеличение экспрессии гена VEGF было также очевидно на 14-й день, и было наиболее заметно в условиях низкой дозы VSLобработанных крыс (рис. 3, вверху). экспрессия VEGF не была изменена в не-сгнила тканях всех исследованных группах. Содержание белка VEGF в гомогенате ткани желудка подтверждают выводы данных экспрессии генов VEGF (рис. 4, вверху). Точно так же, TGF-β и ЭФР (рис. 3 среднего и нижние панели) уровней генов и белков (рис. 4 средних и нижние панели) были значительно увеличены в VSLлеченных животных, хотя изменение было менее выраженным, наблюдаемому для СЭФР .

VEGF нейтрализующего антитела затухает VSL-опосредованного язвенной болезни желудка заживление
<р> на основании данных на рисунке 3, где VEGF значительно увеличивался в ответ на VSLлечения, усиленных желудка заживление язв ( рис. 1), мы предположили, что VSLзащитный эффект и механизм действия зависел от СЭФР. Для исследования этого животным вводили высокие дозы VSL+ VEGF нейтрализующих антител. Как показано на рисунке 5, у животных, обработанных VEGF-нейтрализующих антител уменьшилось заживление язв на 34% и 41% соответственно, в дни 7 и 14, по сравнению с животными, обработанными с высокой дозой VSL+ IgG или управления транспортным средством (фиг. 5а). Брутто патология (рис. 5, б) показал, что архитектура слизистых оболочек была менее нетронутыми в VSL+ СЭФР нейтрализацию антител обработанных крыс, чем VSL+ IgG крыс, получавших в дни 7 и 14 лечения. Животные, обработанные VEGF нейтрализующих антител, не показали снижение заживления язв по сравнению с контрольными животными, однако, результаты не были статистически значимыми (рис 5а).

Обсуждение
<р> Это первое комплексное исследование чтобы продемонстрировать, что пробиотик смесь VSLможет увеличить заживление уксусной кислоты индуцированных язв желудка. Наши результаты показали, что VSLдействовала в зависимости от дозы увеличение в экспрессии и продукции VEGF, фактор роста, способствующие наращиванию ангиогенез и заживление. СЭФР критически важным при язвенной болезни желудка заживление, как лечение с помощью VEGF-нейтрализующих антител значительно задерживает процесс заживления в VSLподопытных животных.
<Р> Профилактическая и терапевтическая роль пробиотиков хорошо сообщается не только в случае неспецифического язвенного колита и болезнь Крона [8] - [9], но и в условиях же разнообразны, как сожженные ран и огнестрельных ран [26] - [27]. Тем не менее, существует ограниченное количество исследований по оценке влияния лечения пробиотиками на язвы желудка в основном из-за неблагоприятных физиологических условиях желудка, что снижает выживание и рост микроорганизмов. Любопытно, что в одном исследовании [28] показано, что бактериальная колонизация происходит быстро после индукции язв и, в частности, заселение определенных бактерий, включая Lactobacillus
может значительно улучшает заживление язвенной болезни желудка. Другие исследования показали, что пробиотические бактерии Lactobacillus
видов, сахаромицеты буларди
, кишечной палочки штамма
Nissle 1917 эффективны для профилактики и лечения острого повреждения желудка, связанное с уксусной кислотой [ ,,,0],12], стресс [13], аспирин [29], этанол [30], ибупрофен [31] и индометацин [32], индуцированные язвы желудка. В организме человека, косвенные данные свидетельствуют о том, что регулярное проглатывания <ЕМ> Lactobacillus
-содержащие продукт защищает целостность слизистой оболочки желудка барьера против индометацин [32], в то время как другие [15] сообщили о том, что эффект от использования пробиотические бактерии вдоль с тройной терапии не лучше, чем при использовании тройной терапии только для лечения язвы желудка. В недавнем докладе [13] предлагает новый подход к симбиотической для лечения, где пробиотик ( L. Ацидофилин
) и экстракт имбиря одновременно и по отдельности инкапсулирована /иммобилизации в альгинатных плавающих шариков значительно повлияли желудка заживление язв у крыс. Альтернативный подход заключается в использовании различное количество мультисервисных пробиотиков штамма для содействия заживлению язвы, как исследования IBD показали, что пробиотики мульти штамма являются более эффективными, чем monostrain пробиотиков [33]. Наши результаты подтверждают эти выводы с помощью VSL, смесь из восьми видов бактерий, которые были чрезвычайно эффективными в повышении эпителиальную клеточную миграцию и пролиферацию, ангиогенез и производство грануляционной ткани приводит к более быстрому заживлению язв желудка.
<Р> Для рассмотреть механизмы, посредством которых VSLускоренные желудка заживление язв мы наступательную количественной оценки люминал и /или содействие защитных факторов. Предыдущие исследования показали, что пробиотики оказывают различные механизмы, в том числе стабилизации слизистых оболочек дегрануляции тучных клеток [29], индукция производства SIGA [29], снижение клеточного апоптоза отношение пролиферации клеток в желудке [11], увеличение трансэпителиальный сопротивление [34 ] и стимуляции ангиогенеза [11] посредничать желудка заживление язв. Здесь мы покажем, что VSLспособствует язвенной болезни желудка исцеление путем усиления экспрессии факторов роста, в основном VEGF несколькими складками. VEGF является фундаментальным ангиогенный фактор, который стимулирует образование грануляционной ткани и новых микрососудов через ангиогенеза [24], что в свою очередь ускоряет язвы желудка и двенадцатиперстной кишки заживление [35]. На сегодняшний день существует только один доклад [11], которые показывают L. rhamnosus GG
может регулировать вверх-белок VEGF во время заживления язвы. В наших исследований мы обнаружили, что на 7-й день лечения с высокой дозой VSL, экспрессия VEGF была увеличена 332 раз по сравнению с контрольными животными. Это увеличение не было видно, как заметно на 14-й день лечения, в первую очередь потому, что большинство язв уже зажила к тому времени в VSL-обработанных крыс. По сравнению с низкой дозой VSLобработанных животных продолжали демонстрировать высокий уровень экспрессии VEGF на оба дня 7 и 14, как язвы были еще исцелены. Нагрузочный VSL-индуцированной язвенной болезни желудка заживление путем обработки животных с анти-VEGF-нейтрализующих антител подтвердил, что VSLдополненной желудка заживление язв через механизм VEGF-опосредованной. Наблюдение восстановленного заживления язвы у животных, обработанных VEGF нейтрализующих антител в одиночку, по сравнению с контрольной группой, также подтверждают роль VEGF в спонтанном желудка заживление язвы [35]. Важно отметить, что несмотря на то, СЭФР, как известно, до регулируется СОХ-2 производным ПГЕ <суб> 2 [36], мы обнаружили, незначительные изменения в экспрессии СОХ-2 в VSLобработанных крыс, предполагающих, что индуцированную экспрессию VEGF VSLне ЦОГ-2 опосредованного.
<р> Мы также обнаружили, что факторы роста EGF и TGF-β были значительно выше регулируются в изъязвленной тканях VSLобработанных крыс. TGF-β, как известно, влияют на внеклеточный матрикс, который превращает процесс восстановления эпителиального клеточного включения и выключения, в то время как EGF способствует как эпителиального реституцию и пролиферации в желудочно-кишечного тракта [25]. Интересно, что было обнаружено VSL, чтобы быть эффективными только в продвижении факторов роста, а не оборонительные факторы Muc5A и СОХ2. Это все еще возможно, что VSLможет повлиять на другие защитные факторы, не проанализированные в настоящем исследовании. Ранее мы показали, что лечение VSLусиливает ободочной Muc2 /MUC2 муцина секреции в толстой кишке крысы и в ободочной эпителиальных клеток человека. VSLлечение у животных также не заметно снижают экспрессию провоспалительных цитокинов, IL-1 и в меньшей степени TNF-alpha. Оба эти цитокины играют важную роль в формировании язвы желудка путем инициирования раннего острого воспалительного ответа [22]. Эти данные подтверждают недавний отчет, который оценивал 13 пробиотических штаммов на аспирин-индуцированной язвы желудка исцеления [29]. В настоящее время, мы не знаем, какой бактериальный звонкой (ы) или комбинации в пробиотических смеси VSLответственны за язвы желудка исцеления. Предыдущие исследования показали, что мульти штамм пробиотиков (более конкретно, мульти род штаммы), являются более эффективными, чем моно-штамма пробиотиков [33]. Также возможно, что смесь VSLявляется нейтральный раствор (различные концентрации VSLимеют рН 7,0), может оказывать неблагоприятное воздействие на заживление желудочной кислоты путем разбавления кислотность желудочного сока. Тем не менее, данные, представленные в данном исследовании, не может вывести этот факт, так как кислотность желудочного сока не измеряли. Тем не менее, VSLбудет только имеющий кислотное размывающее и не нейтрализующего кислоту эффекта на желудочного сока, если таковые имеются. По всей вероятности, эффект разбавления кислоты VSL, будет способствовать лишь второстепенную роль в его сильной цитопротекторного функции, продемонстрированной экстенсивного до регуляции VEGF. Как VSLвводили в виде суспензии живых клеток, эта формулировка могла бы оказать свои защитные эффекты, как живых микробов, их метаболитов, компонентов клеточной стенки и /или содержание ДНК или все вышеперечисленное. Мы не проводили эксперимент, чтобы сравнить эффект живых микробов и инактивированной нагреванием пробиотических смеси для оценки на этот вопрос, хотя предыдущие исследования показали, что тепло убитой или радиационные инактивированные пробиотические бактерии (в дозе, аналогичной живых микробов) не удалось способствуют заживлению язвы-[11], [12]. Кроме того, так как мы не оценивали ангиогенез, вывод, что VSLпродвигает желудка заживление язв через ангиогенеза только размышляли на основе VSLспособность вызывать устойчивую до регулирования VEGF, которая является критически важным в ангиогенеза [35].
<р> в заключение, наши исследования показывают, что VSLпробиотик смесь является весьма эффективным в увеличении язвенной болезни желудка заживление. Эффект доминирует при высокой концентрации смеси VSLи достигается механистически путем стимуляции экспрессии и секреции стимулирующим ангиогенез, факторы роста, в первую очередь СЭФР. Это исследование устанавливает перспектива использования VSLПробиотик смесь терапевтически для увеличения язвенной болезни желудка заживление.

Поддержка информации Рисунок S1 изображения.
Влияние лечения различных концентраций VSLна уксусной кислоте индуцированной язвенной болезни желудка заживление у крыс. [А] Область язвы (мм 2), построенные для животных с уксусной кислотой, индуцированной язвенной болезни желудка на 3-й день, 7 и 14 обработки транспортного средства (темно-синий), VSL1,5 × 10 9 бактерий /животное /день (светло-желтый), VSL3,0 × 10 9 бактерий /животное /день (темно-желтый), VSL6,0 × 10 9 бактерий /животное /день (светло-зеленый), VSL1.2 × 10 10 бактерий /животное /день (темно-зеленый), VSL2,4 × 10 10 бактерий /животное /день (светло-голубой). Данные представлены в виде средних значений ± SEM из 6 животных в день.

• PLoS ONE: В Vivo антиоксидантом и противоязвенное активность паркия красивая этанольного экстракта листьев против…
• PLoS ONE: двунаправленная наводок между стресс-индуцированной язвенной болезни желудка и депрессии при хроничес…