Plos ONE: Analiza TGO mRNA izražanja v gastrični rak Uporaba RNA in situ hibridizacija Vsebnost: njegov kliničnih posledic ter primerjava z imunohistokemija in srebro in situ Hybridization

Povzetek

Raziskovali smo Met
mRNA stanje izraz uporablja RNA v situ hibridizacija (ISH) tehniko v osnovnih in metastatskih lezij 535 kirurško odstranjenimi karcinomom želodca (PK) primerih. Primerjali smo rezultate s tistimi imunohistokemiji in srebra v situ hibridizacija, in preučila povezave z clinicopathologic značilnosti in prognozo. Med 535 primarnem GK, 391 (73,1%) so bili dosegel 0, 87 (16,3%) je bilo doseženih 1, 38 (7,1%) je dosegel 2, 12 (2,2%) je dosegel 3 in 7 (1,3%) je dosegel 4, ki ga RNA ISH. Visoka Met
mRNA izraz (ocena ≥3) je bila povezana z bezgavkah metastaze ( P
= 0,014), oddaljenih metastaz ( P
= 0,001), in višja stopnja TNM ( P
< 0,001). Met
mRNA izraz se je povezala s beljakovin izražanja (r = 0,398; P
< 0,001) in število kopij gena (r = 0,345; P
<. 001). Bolniki, ki kažejo visoko Met
mRNA v primarnih ali metastatskih lezij imeli krajšo skupno preživetje kot tisti, ki kaže nizko Met
mRNA (primarnih tumorjev, P
= 0,002; metastatskih bezgavk, P
< 0,001). Bolniki, ki kažejo pozitivno preobrazbo Met
statusa mRNA metastatskega bezgavke imela krajšo skupno preživetje kot tisti brez pretvorbe ( P
= 0,011). Multivariatna analiza je pokazala, da je visoka je bil izpolnjen
mRNA izraz metastaze bezgavke neodvisen napovedni dejavnik za celokupno preživetje ( P
= .007). Zato je ta študija kaže, da je Met
mRNA izraz, ki ga RNK ISH oceniti bi bilo koristno, kot potencialni marker prepoznati Met
-onkogena zasvojen GC

Navedba sklicevanja. Choi J Lee HE, Kim MA, Jang BG, Lee HS, Kim WH (2014) Analiza Met
mRNA Izražanje v gastrični rak Uporaba RNA in situ hibridizacija Vsebnost: Njegova kliničnih posledic in primerjava z imunohistokemija in Silver in situ hibridizacija. PLoS ONE 9 (11): e111658. doi: 10,1371 /journal.pone.0111658

Urednik: Svetlana Pack, CCR, National Cancer Institute, NIH, Združene države Amerike

Prejeto: 11. marec, 2014; Sprejeto: 6. oktober 2014; Objavljeno: 3. november 2014

Copyright: © 2014 Choi et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je bil podprt s strani National Research Foundation programa Koreja (NRF) A3 predvidevanja (http://www.nrf.re.kr). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

v zadnjem desetletju, receptor tirozin kinaze (RTK) poti, so se izkazali za privlačne tarče drog za terapijo proti raku [1], in pot MET je ena od teh obetavnih ciljev. MET
je proto-onkogena nahaja na 7q31 locus in kodira RTK za rast hepatocitov faktor (HGF) [2], [3]. Tesen ureditev poti HGF /MET, da je opaziti v razvoj in regeneracijo je izgubil v raka, in takšna deregulacija pojavlja skozi več mehanizmov [1]. Aberrant aktiviranje MET igra pomembno vlogo pri rakavih celic preživetje, rast, angiogenezo in metastaze v različnih vrst raka, vključno pljuč, dojke, ledvic in malignih bolezni prebavil [4]. Kljub temu, da je razslojevanje pacient po izražanja MET ali dejavnost pomembna za uspehe, ki niso bili vzpostavljeni postopki za oceno ravni izražanja MET ali dejavnosti [4].

Za karcinom želodca (GC), zmotna MET aktivacija je mislil, da so povezani z učinkom gen odmerka [5], in Met
pomnožitev gena (GA) ali protein prekomerno je bilo povezano z agresivnimi značilnostmi tumorjev in /ali slabše klinični izid [6] - [14]. Poleg tega, Met
-amplified ali -overexpressed GC so pokazali odziv na zdravljenje z več zaviralci signalnih poti HGF /MET v predkliničnih raziskavah [15] in v fazi I kliničnih preskušanjih [12], [16]. Zato inhibicija MET ima potencial kot druga uspešne terapevtske strategije za naslednje rastnega humani epidermalni rastni faktor receptorja 2 (HER2) -targeted terapiji pri naprednem GC. Vendar pa so prejšnje študije uporabljajo različne metode za določitev MET-pozitiven GC in so pokazali razliko v razširjenosti čezmerni MET ali ojačanje: MET prekomerno gibala od 18% do 73,7% v študijah, ki uporabljajo imunohistokemično (IHC) [7] - [9], [13] [14] [17], Met
gen kopija številka (GCN) dobiček v študijah gibala od 10% do 21,2% s kvantitativno realnem času verižne reakcije s polimerazo (qPCR) [10], [ ,,,0],11], in Met
GA giblje od 2% do 3,9% v študijah z uporabo fluorescenčne hibridizacije in situ (FISH) [12], [18] ali srebro in situ hibridizacija (SISH) [13]. Od teh metod se IHK pogosto uporablja v klinični praksi in načini najverjetneje presejalne teste za odkrivanje MET pozitivni GC. Vendar pa je še vedno potrebna nadaljnja preučitev najti predvidevanje biomarker ali metodologijo ocenjevanja za terapijo inhibicije MET.

V tej študiji smo izvedli RNA v situ hibridizacija (ISH) testu, ki uporablja seznanjenih DNA oligonukleotidnih sond in predojačevalnik-ojačevalnik -label sonde za vizualizacijo [19]. Ta metoda uporablja formalinu določen,-parafinske vgrajeni (FFPE) tkiva in omogoča eno samo molekulo vizualizacije pod svetla polja mikroskopom. V naši prejšnji študiji smo dokazali, da je HER2
mRNA izraz, ki ga RNK ISH ocenili je dobro povezana s beljakovin prekomerno in GA z imunohistokemijo ovrednotene in FISH v 211 primerih GC [20]. Prav tako smo pokazali povezavo med MET
GCN in izražanja proteinov v prejšnji raziskavi [13]. Tukaj smo ocenili Met
mRNA izraz pomočjo RNA ISH metode in rezultate primerjali s tistimi IHC in SISH v veliki seriji GC. Poleg tega clinicopathologic parametri in klinični rezultati bolnikov GC po Met
mRNA stanje izraz bili ovrednoteni.

Materiali in metode

Bolniki in vzorci tkiva

zbrali smo arhivskih vzorcev tkiv bolnikov, GC, ki zaporedoma doživel želodca na nacionalni bolnišnici v Seulu University, Seoul, Koreja, od januarja 2004 do decembra 2005. Nazadnje, 535 vzorci primarne GC in 199 vzorcev sinhronega regionalni metastatskega bezgavke (LN) iz 535 bolnikov je bilo na voljo za te študije. V clinicopathologic značilnosti bolnikov so bile pregledane s pregledom medicinske karte in patološke evidence (tabela 1). TNM oder je bil razvrščen v skladu s sistemom skupnega odbora Ameriškega za raka izvajalno Manual, 7 ^{th izdaja. Klinični rezultati so spremljali od dneva operacijo do smrti ali 60 mesecev.}

Vse vzorce tkiva so bile določene v 10% zastalega formalina za 24-48 ur in nato vgradi v parafin. Core tkiva (2 mm v premeru) so bili z uporabo aparata trephine (Superbiochips Laboratories, Seoul, Koreja). Za primarne GK, je bil izbran invazija Sprednja primarnega tumorja. Metastatskim LNS bili podvrženi matrike tkiva, vendar so bili izključeni primeri z micrometastasis. Skupaj 22 tkivo mikromrež bloki, ki vsebujejo do 60 jeder so bili zgrajeni.

Etični kodeks

Vsi ljudje so bili osebki pridobljeni med terapevtskimi operacijo. Udeleženci niso zagotovili pisno soglasje za sodelovanje v tej študiji. Študija naknadnim smo izvedli z uporabo vzorcev po policah po patološke diagnoze, in vsi vzorci so bili anonimizirani pred študijo. Naša IRB (Seoul National University Hospital) odobri to retrospektivno študijo pod pogojem anonimnosti (Reference: H-1006-035-320).

RNA ISH

Pri pri odkrivanju in situ Met
mRNA je RNAscope FFPE 2.0 test kit (Advanced Cell Diagnostics, Hayward, CA, ZDA) je bila uporabljena v skladu z navodili proizvajalca. Na kratko smo deparaffinized 2- do 3-Lun sekcije debela FFPE tkiva, ogrevana, obdelamo z proteaze in hibridiziramo s sondo pri 40 ° C 2 uri (referenčna zaporedju, NM_001127500; sonda regije, 1236-2257). Po izpiranju in pomnoževanju, 3, dodamo 3'-diaminobenzidine za detekcijo ciljne RNA. Jedra smo jih nasprotno s hematoksilinom. Pozitivna obarvanje je označena z rjavimi pikčasto pike v jedru in /ali citoplazmo. Met
ravni mRNA izraz so bile razdeljene v 5 razredov po točkovanja smernico proizvajalca: rezultat 0, ne pušča madežev ali < 1 pika na celico; rezultat 1, 1-3 pik na celico (vidne na 20-40 ×); dosegel 2, 4-10 pik na celico in ne ali zelo malo pika grozde (vidne na 20-40 ×); rezultat 3, > 10 pik na celico in < 10% pozitivne celice imajo dot grozde (vidne na 20 ×); rezultat 4, > 10 pik na celico in > 10% pozitivne celice imajo dot grozde (vidne pri 20-kratni povečavi) (slika 1). Sonde za UBC
(ubikvitin C) in dapB
(bakterijskega gena) smo uporabili kot pozitivno in negativno kontrolo, oz. Vzorci so bili ustrezno, kadar so bili UBC
mRNA signali dobro vidne pod 10x objektiv in dapB
signal ni bil viden.

IHC in SISH

Imunohistokemijsko za TGO je bila izvedena z anti-skupaj MET (SP44) zajcev monoklonskih primarnih protiteles (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, ZDA). Samodejna immunostainer (primerjalno XT, Ventana Medical Systems) je bila uporabljena v skladu z navodili proizvajalca. MET imunskim barvanjem je dosegel s smernicami HercepTest točkovanja za GC (Dako, Glostrup, Danska): rezultat 0, ne membrane obarvanje ali obarvanje membrane v < 10% tumorskih celic; rezultat 1, šibek /komaj zaznaven delno obarvanje membrane v > 10% tumorskih celic; rezultat 2, šibko do zmerno barvanjem celotne membrane pri > 10% tumorskih celic; rezultat 3, močno obarvanje celotne membrane v >. 10% tumorskih celic (slika 2)

Dual-color SISH test je bil izveden z obvestim MET sonde DNA in obvestim kromosom 7 sondo (Ventana Medical Systems) na Ventana Benchmark XT po protokole proizvajalca. Signali so našteti v 40 tumorskih jeder na jedro, in Met
gen stanje je bil razvrščen v 6 skupin na podlagi meril, Univerza v Colorado Cancer Center za epidermalni rastni dejavnik receptorja gena [21] (slika 2).

Statistična analiza

2 Test χ ^{ali Fisherjev natančni test smo uporabili za testiranje povezavo med statusom TGO in clinicopathologic dejavnikov. Student je t
-test smo uporabili za primerjavo sredstva zveznih spremenljivk. Test korelacije Spearman je bila uporabljena za oceno razmerja med RNA rezultati študij v in IHC ali rezultatov SISH. Metoda Kaplan-Meier smo ocenili celokupno preživetje (OS), in razlike v OS med skupinami z različnim statusom TGO smo primerjali z uporabo testa log-rang. Multivariatna analiza preživetja je bila izvedena z uporabo Cox sorazmernih tveganj razmerje modela. Analiza podatkov je bila opravljena s pomočjo SPSS verzija 20.0 (SPSS, Chicago, IL, ZDA), in rezultati so šteli za pomembne, če P
. < 0,05}

Rezultati

1. Met
mRNA stanje ocenil RNA ISH

Od 535 primarnih tumorjev, 391 (73,1%), 87 (16,3%), 38 (7,1%), 12 (2,2%) in 7 ( 1,3%) je pokazala RNA ISH rezultat 0, 1, 2, 3 in 4 oz. Ko smo primerjali rezultate RNA ISH z clinicopathologic podatkov, vključno s preživetjem in analizirali rezultate RNA ISH z IHC in SISH podatkov, skupine točk 3 in 4, je pokazala različne funkcije. Zato velja za rezultat 3 in 4, ko je visoko Met
mRNA skupina, in skupni 19 primerov (3,5%) je pripadal med visoko Met
mRNA.

Visoka - Met
mRNA je bila povezana s starostjo ( P
= .002), večje velikosti tumorja ( P
= 0,006), LN metastaze ( P
= 0,014), limfna invazija ( P
< 0,001), povečano število metastatskih bezgavk ( P
< 0,001), oddaljenih metastaz ( P
= 0,001), in višja stopnja TNM ( P
< 0,001) v primerjavi z nizkimi Met
mRNA (tabela 2). Vendar pa visoko Met
mRNA ni pokazal nobene povezave s spolom, lokacija tumorja, klasifikacija Lauren, in globina invazije (tabela 2).

Od 199 sinhronih metastatskih LNS, 119 (59,8% ), 45 (22,6%), 22 (11,1%), 4 (2,0%) in 9 (4,5%) je pokazala RNA ISH rezultat 0, 1, 2, 3 in 4, v tem zaporedju. Zato je bilo 13 primerov (6,5%), visoko Met
mRNA. Med 199 parov primarnih in metastatskih lezij, 186 (93,5%) je pokazala, skladnih Met
mRNA status in 13 (6,5%) pa ne. Od teh 13 neharmoničnega primerih, je bil negativen pretvorba našli v 50% (7/14) z visokim Met
mRNA primarnih tumorjev, in pozitivno pretvorba je bilo 3,2% (6/185) z nizko Met
mRNA primarni tumorji (tabela 3).

2. protein MET in status GCN z imunohistokemijo in SISH

ocenil Uporaba IHC, 236 (44,1%), 171 (32%), 113 (21,1%) in 15 (2,8%) je bilo zadetka primarni tumorji 0, 1, 2 in 3, v tem zaporedju. IHC rezultat 3 pokazala različne clinicopathologic funkcij, in to MET prekomerno skupina je bila značilno povezana s starostjo ( P
= .005), večje velikosti tumorja ( P
= 0,009), invazija globino ( P
= 0,05), LN metastaze ( P
= 0,018), limfna invazija ( P
= 0,026), povečano število metastatskih bezgavk ( P
< 0,001), oddaljenih metastaz ( P
= .007) in višja stopnja TNM ( P
= 0,001). Vendar MET čezmernim ni pokazal nobene povezave s spolom, lokacije tumorja in razvrstitve Lauren (tabela S1).

Od 199 sinhroni metastaznih LNS, 46 (23,1%), 92 (46,2%), 46 (23,1 %) in 15 (7,5%) je pokazala, IHC rezultat 0, 1, 2 in 3, v tem zaporedju. Med 199 parov primarnih in metastatskih lezij, 187 (94,0%) je pokazala, je usklajen stanje beljakovin MET in 12 (6,0%) pa ne. Od teh 12 neharmoničnega primerih, je bil negativen pretvorba našli v 36,4% (4/11) primarnih tumorjev s prekomerno MET, in pozitivno pretvorba je bilo v 4,3% (8/188) primarnih tumorjev brez čezmernega MET.

Uporaba SISH, Met
GA so opazili pri 2,6% (14/535) primarnih tumorjev. Met
GA pokazali pomembno povezavo z večjo velikost tumorja ( P
= 0,038), limfna invazije ( P
= 0,009), povečano število metastatskih bezgavk ( P
< 0,001), oddaljenih metastaz ( P
= .005) in višja stopnja TNM ( P
= 0,002). Vendar pa je Met
GA niso pokazali nobene povezave s spolom, lokacija tumorja, klasifikacija Lauren, globina invazije in LN metastaz (tabela S2).

3. Korelacija statusa TGO, ki RNK ISH, IHC in SISH
ocenili

​​Korelacija med Met
mRNA in status beljakovin, ki jih RNK ​​ISH in IHC ocenjena je predstavljen v tabeli 4. V 535 primarnih tumorjev, tam je bila pozitivna korelacija med Met
mRNA in proteina izraz (r = 0,398, P
< 0,001). Vseh 7 primeri z RNA ISH ocena 4 je pokazala MET beljakovin čezmerno. Med 12 primeri z RNA ISH rezultat 3, 5 primerov (41,7%) je pokazala rezultat IHC 3. The primerih z RNA ISH rezultat 2 razstavljena spremenljive IHC rezultate. Primeri z RNA ISH rezultat 0 ali 1, ni pokazala MET protein prekomerno, razen za 1 primer. Med 10 primeri, ki kažejo razliko (tj, pozitiven v RNA ISH in negativno v IHC ali obratno), 8 je pokazala IHC rezultat 2 ali RNA rezultat ISH 2. V 199 metastatskih LNS, je bila dobra pozitivna korelacija med MET
mRNA in beljakovin izraz (r = 0,462, P
< 0,001). (tabela S3)

Poleg tega je bila pozitivna korelacija med Met
mRNA izražanja in MET
GCN (r = 0.345; P
< 0,001) (tabela 4). Med 7 primerih z RNA ISH rezultat 4, 6 (85,7%) je pokazala, MET
GA in le v enem primeru pokazala, HP (14,3%). 12 primerov z RNA ISH ocena 3 je pokazala, da se GA (50%) ali polysomy (50%), ki ga SISH. Primeri z RNA ISH ocena 2 kažejo na različne SISH vzorcev, vključno GA (5,3%). Nobena od primerov z RNA ISH rezultat 0 ali 1 pokazali, GA.

Tabela 5 povzema rezultate RNA ISH, IHC in SISH primarnega GC. Med 535 primerih je bilo 513 primerov (95,9%), negativni tako RNK ISH in IHC, in le 22 primerov (4,1%), so pokazali pozitivne rezultate, ki jih bodisi RNK ISH ali IHC. Ti 22 primerov razstavljena Met
GA (54,5%) ali polysomy (45,5%), ki ga SISH in disomija ali trisomijo nikoli opazili. V smislu SISH, med 14 primerov, ki kažejo, da se GA, 11 primerov (78,6%) razstavljal visoko izražanje tako mRNA in beljakovin. Med 58 primeri kažejo, HP pa le 7 primerov (12,1%) razstavljal visoko izražanje bodisi mRNA ali beljakovin. Med 111 primeri, ki kažejo LP, le 3 primerih (2,7%) razstavljena visoko mRNA izraz. Vse 352 primerov, ki kažejo disomija ali trisomijo razstavljen negativne rezultate tako RNK ISH in IHC.

4. Prognostične posledice statusa TGO v primarnih in metastatskih lezij

visoki Met
mRNA v primarnih tumorjev ali metastatskih LNS je značilno povezana s slabim OS (primarnih tumorjev, P
= 0,002 Slika 3A metastatskega LNS, P
< 0,001, slika 3D). V primarnih tumorjev z nizkimi Met
mRNA, bolniki s pozitivnim pretvorbo pokazala slabše OS, kot tisti brez pretvorbe ( P
= 0,011, slika 3F). V primarni tumorji z visoko- Met
mRNA, bolniki z negativnim pretvorbo pokazala boljši OS, kot tiste, ki nimajo konverzijo, vendar ni bilo statistično značilnih razlik ( P
= 0,137, Slika 3F )

prekomerno MET v primarnih tumorjev ali metastatskih LNS je značilno povezana s slabim OS (primarnih tumorjev, P
= 0,001, slika 3b;. metastatskih LNS, P
= 0,024 Slika 3E). V primarnih tumorjih brez prekomerno MET, pozitiven pretvorba trendno proti napovedi slabega OS, vendar ni bilo statistično značilnih razlik ( P
= 0,393). V primarnih tumorjev s prekomerno MET, negativna pretvorba pokazala trend boljših OS kot brez konverzije, vendar to ni dosegla statistične značilnosti ( P
= .132). Poleg tega, Met
GA v primarnih tumorjih je tudi značilno povezana s slabim OS ( P
= 0,005, 3C).

V multivariatne analize, visoke Met
mRNA v metastatskih LNS bil neodvisen negativni napovedni dejavnik za OS, po prilagoditvi za starost (< 60 y vs. ≥60 y), klasifikacija Lauren (črevesne tip vs razpršenih ali mešanega tipa), in TNM oder (I-II proti III-IV). Razmerje tveganja 2,27 ( P
= 0,007) (tabela 6). Vendar čezmernim MET v metastatskih LNS ni bil statistično pomemben prognostični dejavnik, ki ga multivariatne analize, čeprav je bilo razmerje ogroženosti 1,76 ( P
= 0,067). Poleg tega, Met
GA, visoko Met
mRNA ali protein prekomerno primarnega tumorja ni bil statistično pomemben prognostični dejavnik, ki ga multivariatne analize (podatki niso prikazani).

razprava

v tej študiji smo pokazali, da je visoka Met
mRNA izraz je značilno povezana z neželenimi clinicopathologic funkcij in slabo prognozo na velike serije bolnikov GC z metodo RNA iSH. Poleg tega so bili rezultati RNA ISH dobro povezana s tistimi SISH in IHC. Prejšnje študije vrednotenja Met
ravni mRNA GC uporabili Northern blot test [8], [22] ali obratno verižne reakcije transkripcijski-polimerazo (RT-PCR) [8], [14] [23] - [25]. Vendar pa je večina študij je majhne velikosti vzorca, in le nekaj od njih raziskovali njene klinične posledice [22], [24] ali opravljena primerjava z DNK ali status beljakovin [14], [25]: Kuniyasu et al. Najprej je študiral MET mRNA izraza z analizo Northern-blot, in so poročali, da je bil izraz 6,0-kb prepis tesno povezana s stopnjo tumorja in LN metastaz [22]. Amemiya sod. poročali, da bolniki Stage IV GC z metastaz jeter so pokazale višje izražanje MET tako na mRNA in beljakovin na ravni, kot bolnikov, stopnja IV GC brez metastaz jeter s pomočjo RT-PCR in IHC [24].

Pred kratkim smo poročali, da je visoka stopnja za HER2
mRNA je dobro povezana s beljakovin prekomerno in gA s primerjavo rezultatov 4 različne v metodologijah, ki temelji na kraju samem (RNA iSH, IHC, ribe in SISH) v 211 primerih GC [20]. Prav tako v tej raziskavi za statusa TGO, so rezultati RNA ISH so pokazali dokaj dobro ujemanje s tistimi IHC in SISH. Ti rezultati potrjujejo, da lahko RNA ISH biti zanesljiv test za vzorce FFPE tkiv, čeprav so potrebne nadaljnje študije validacije.

smo dokazali, da je Met
GA, visoka Met
mRNA in beljakovin overexpression s SISH, RNK ISH in IHC ocenili bili zelo skladnih in visok status MET na DNK, mRNA in beljakovin so statistično pomembno povezane s slabo prognozo. Te ugotovitve potrjujejo, da je MET prekomerno predvsem posledica povečana MET
GCN in ta mehanizem prispeva k agresivnemu vedenju Met
-onkogena zasvojen GC. Kljub temu pa je bilo nekaj primerov, ki kažejo neskladnost med MET PODJETJA
GCN, mRNA in vsebnosti beljakovin. Predvidevamo, da so lahko tehnične težave (na primer, občutljivost in specifičnost sonde ali protitelesa in slaba kakovost mRNA FFPE tkiv) in intratumorska heterogenost statusa TGO glavni vzroki za te razlike. Vendar pa nekateri biološki mehanizmi se nanašajo tudi na to neskladje. Na primer, MET čezmerno brez GA lahko pride do transkripcijske aktivacije preko HGF odvisna od avtokrin /parakrin zank ali drugih signalnih poti [23], [26]. Nasprotno, MET
GA ne sme povečati genski produkt. Asaoka sod. poročali, da nekaj GC celične linije zatočišča Met
GA izražene beljakovine kot enaki ravni kot druge celične linije, brez GA, vendar je njihova tirozin ostanki na kinaze področju so bili bolj fosforilirata [27]. Mehanizmi aktivacije MET in vloga HGF v PK še vedno ni pojasnjen.

Znano je, da je MET
igra pomembno vlogo pri metastatsko napredovanje raka. Številne študije so pokazale, da je MET
GA ali prekomerno je bila povezana z LN metastaz [7], [13], [22] ali daljni metastaz [13], pri bolnikih GC. Poleg tega se je izkazalo, da inhibitor uprava MET zmanjša peritonealno razširjanje GC v modelu ksenotransplantskih [23]. Poleg tega Di Renzo sod. ugotovljeno, da rakave celice, ki opravljajo MET
so med metastaze v glavi in ​​vratu ploščatocelični karcinom celic izbrali sprožitev mutacije s primerjavo gensko zaporedje med primarnega tumorja in metastatskega bezgavke [28]. Vendar pa je neposredna primerjava statusa TGO med primarnega tumorja in metastaz ni bila izvedena v veliki seriji GC. Ko smo primerjali stanje MET izraz med 199 izravnanih primarnih tumorjev in metastatskih LNS in splošno skladnost je bila 93,5% in 94%, ki jih RNK ​​ISH in IHC oz. Ti rezultati kažejo, da je stanje izraz MET GC med metastaz v regionalnih LNS relativno konstantna. Vendar pa je pozitiven pretvorba Met
stanje mRNA je bistveno povezan s slabo prognozo, ki ga univariantne in multivariatne analize. Zato ti rezultati kažejo, da se lahko ocena statusa TGO v metastatskih lezij pomembno napovedati prognozo in opredeliti dodatne kandidate za MET-ciljano terapijo.

, ki temelji na situ analizi RNA ima več prednosti pred "zmleti in vežejo "analize, kot so RT-PCR [19] in se uporablja tako za klinično prakso in retrospektivne raziskave. Poleg tega RNA ISH ugodnejši kot imunohistokemijo ko ni primeren protitelo ali če je ciljna molekula izločen protein. V zvezi s MET
, lahko ta prednost lahko koristno, saj se celice HGF, ki proizvajajo si lahko predstavljamo v poglavju tkiva s pomočjo sonde HGF. Vendar pa je ranljiva stabilnost mRNA med predelavo tkiv in višje stroške, kot je IHC so slabosti metode RNA ISH. Upamo, da bo še naprej tehnično izboljšavo odpraviti te omejitve.

V retrospektivni študiji, Met
stanje mRNA s RNK ISH ocenili je dobro povezana z beljakovinami in GCN oceni IHC in SISH, oziroma, in Met
GA je zelo skladnih z visoko ekspresijo bodisi mRNA ali beljakovin. Pri analizi preživetja, visoko izražanje Met
mRNA v primarnih ali metastatskih lezij ter pozitivno pretvorbo Met
stanje mRNA so močno povezana s slabo prognozo. Poleg tega, Met
stanje mRNA v metastatskih LNS je neodvisen napovedni dejavnik, ki ga multivariatne analize. Naše ugotovitve kažejo, da je Met
mRNA lahko alternativa dvojno podajo ugotoviti Met
-onkogena zasvojen GC.

dodatne informacije
Tabela S1.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s001
(DOCX)
tabeli S2.
doi: 10,1371 /journal.pone.0111658.s002
(DOCX)
Tabela S3.
doi:. 10,1371 /journal.pone.0111658.s003
(DOCX)

Priznanja

Zelo smo hvaležni Ms Hyun Ju Park za njeno tehnično podporo

• Plos ONE: Vpliv izkoreninjenje Helicobacter pylori na ekspresivnih nivojev FHIT, IL-8 in P73 v želodčne sluznice prvostopenjske Sorodniki Rak želodca bolnikov
• Plos ONE: A 346 Case Analiza za Laparoskopska Spleen-Ohranjanje No.10 limfnih vozlov raztelesbo Proksimalno želodca raku: eni sami študiji Center