Plos ONE: The probiotične Mešanica VSLpospešuje celjenje želodčne razjede, ki jih Spodbujanje žilnih endotelijskih rastnih Factor

Povzetek

Študije ocenjevanje učinka in mehanizem probiotikov na bolezni zgornjega dela prebavil (GI), vključno želodčnih razjed so omejeni, kljub obsežnim delom in obetavne rezultate te terapevtske možnosti za druge GO bolezni. V tej študiji smo raziskovali mehanizme, s katerimi probiotična mešanica VSL(mešanica osmih probiotičnih bakterij, vključno s Laktobacili
, Bifidobacteria
in Streptococcus
vrst) zaceli ocetna kislina povzroča razjede želodca pri podganah. VSLje peroralno v nizko (6 x 10 ^{9 bakterije) ali visoka (1,2 x 10 10 bakterije) odmerki od 3. dan po razjede indukcijo za 14 zaporednih dni. VSLtretmaji znatno povečala želodčne razjede na način, ki je odvisen od odmerka. Za oceno mehanizma (e), pri čemer VSL, ki se prenaša svoje zaščitne učinke, smo količinsko gensko izražanje več pro-vnetnih citokinov, beljakovin in izražanja želodčne mucin-Muc5ac, regulativni citokinov IL-10, COX-2 in različne rasti dejavniki. Od vseh komponent pregledanih, je le izraz in beljakovin proizvodnja VEGF povečala 332-krat na dan, 7 v razjedami tkiv živali, ki so se zdravili z VSL. Predvidljivo, živali, ki se zdravijo z VEGF nevtralizirajočih protiteles znatno zamudo želodčne razjede v VSLzdravljenih živali. To je prvo poročilo za dokazovanje visoke učinkovitosti probiotični mešanica VSLpri povečanju želodčne razjede zdravljenje. Probiotik učinkovitosti je bilo učinkovito pri višjih koncentracijah VSL, ki jih posebej poveča izražanje in proizvodnjo angiogenezo spodbujanje rastnih faktorjev, zlasti VEGF}

Navedba. Dharmani P, De Simone C, Chadee K (2013) probiotični Mešano VSLpospešuje celjenje želodčne razjede, ki jih Spodbujanje žilnih endotelijskih rastnih faktorjev. PLoS ONE 8 (3): e58671. doi: 10,1371 /journal.pone.0058671

Urednik: John Wallace, McMaster University, Kanada

Prejeto: 29. oktober 2012; Sprejeto: 7. februar, 2013; Objavljeno: 6. marec, 2013

Copyright: © 2013 Dharmani et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprla z nepovratnimi sredstvi iz kanadskega inštituta za zdravstvene raziskave (CIHR, KC). PD je bil financiran s strani kanadskega združenja za gastroenterologijo-Axcan Pharma-CIHR raziskave in Fellowship Award. Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi. Avtorji imajo naslednji interes. PD je bil financiran s strani kanadskega združenja za gastroenterologijo-Axcan Pharma-CIHR raziskave in Fellowship Award. To ne spremeni pripadnost avtorjev vseh PLoS ONE politike o izmenjavi podatkov in materialov.

Uvod

želodca razjede je spontan, zapletena paleto različnih mehanizmov, ki delajo v tandemu popravi neravnovesje med agresivno (npr kislina, pepsin, vnetnih citokinov in Helicobacter pylori
) in obrambni dejavniki (na primer, sluz, bikarbonata, pretok krvi in ​​rastni faktorji) v želodcu [1]. Proces vključuje blaženje agresivnih luminalne dejavnikov, polnjenje sluznice napake z vse bolj razširjeni in se seli epitelne celice in vezivno komponento, tako da rekonstruirati arhitekturo sluznice [2]. Mi in drugi [3] [4] [5], so pokazale učinkovitost in domnevnega mehanizem različnih zdravil in zelišč pri izboljšanju procesa spontanega celjenje razjed v različnih vivo
želodca modelov razjede. Vendar pa so študije, ki ocenjujejo vpliv probiotikov na bolezni zgornjega dela prebavil (GI) in zlasti na ulkusne bolezni želodca omejen, kljub obsežnim delom in obetavne rezultate te terapevtske možnosti za druge bolezni prebavil, vključno z vnetno črevesno boleznijo [6], [ ,,,0],7], [8], [9].

Probiotiki so živi mikroorganizmi, ki poleg hranilne vrednosti podelila več koristi za zdravje, ko je določeno v dovolj količini. VSLje probiotični pripravek, ki vsebuje mešanico osmih bakterijskih vrst, štiri vrstami Laktobacili
( acidophilus
, bulgaricus
, casei
, plantarum
), tri vrste Bifidobacteria
( breve
, infantis
, longum
) in en Streptococcus
vrste, katerega se je pokazalo, da je klinično učinkovite pri preprečevanju flare-ups ognjevzdržnih pouchitis [8], in vodi do odpusta ulceroznim kolitisom [9]. Prej smo pokazali, da VSLali njeni izločajo izdelki so močni debelega mucin sekretagogi in vitro
na črevesne epitelijskih celic človeških in študij kolona zanko v živalskih modelih [10]. Vendar pa je vpliv probiotičnih zdravljenje akutne želodčne škode, povezane z želodčnih razjed ni dobro raziskan. Glavni razlog je, da je črevo ponuja številne škodljivih fizioloških pogojih, kot kislim pH, prebavnih encimov, žolčne kisline in mehanskim obremenitvam, ki ublaži preživetje in rast probiotičnih mikroorganizmov. Vendar pa lahko zdravljenje z veliko količino različnih probiotičnih mikroorganizmov odpravo te omejitve. Obstaja nekaj poročil o posameznih probiotičnih bakterij, vključno s Lactobacillus rhamnosus
[11], L. gasseri
[12], L. acidophilus
[13] in Bifidobacterium
[14] daje zaščito pred želodčnih razjed pri spodbujanju razjede v različnih vivo
razjede modelov. Vendar študije o vplivu probiotičnih bakterij o krepitvi H. pylori
izkoreninjenje bila dosledna v svojih ugotovitvah [14], [15]. Nedavna študija je pokazala, da bi lahko ustrezno dopolnilo z mešanico 8 probiotikov sevov izkoreninjenje H. pylori
[16]. Trenutno še vedno ni znano, ali so mešani probiotične bakterije učinkovitejši od posameznih sevov pri spodbujanju celjenje razjed. V tej študiji smo raziskovali celične mehanizme, s katerimi VSLprobiotični mešanica obogatena želodčne razjede pri podganah.

Materiali in metode

Živali

Šest tednov star moški Sprague-Dawley, ki tehtajo med 150 in 200 g (Charles River, St Constant, Quebec) smo v kletkah 2 na skupino pri konstantni sobni temperaturi, z 12-h svetlimi in temnimi ciklov, in obroku standardni glodalcev chow in vode ad libitum
. Po 7-dnevnem obdobju aklimatizacije smo podgane naključno razdelili v poskusnih in kontrolnih skupinah za indukcijo želodca. Etika odbor živali Poskus Univerze v Calgaryju odobril te študije.

Eksperimentalni model

Za študij vpliva VSLprobiotični mešanici za celjenje želodčne razjede in ublažitev žaljivo luminalno dejavnikov (pro -inflammatory citokini) in spodbujanje zaščito celice obrambnih dejavnikov (regulatornih citokinov, mucin in rastnih faktorjev), so bile podgane razdeljene v tri eksperimentalne skupine. Nadzor živali so bili zdravljeni z vozilom po indukcijo razjede in dveh drugih skupin, ki so prejeli bodisi nizko (6 x 109 bakterij /žival /dan) ali visoka (1,2 × 1010 bakterije /žival /dan) odmerek VSL 3 #. Živali so se žrtvovali na dan 3, 7 in 14 vozil ali VSLzdravljenja (za utemeljitev glej poglavje o želodčne razjede indukcijo in VSLtretmaji). Skupaj 18 živali je bilo uporabljenih za vsako časovno točko ( N
= 6 za vsako poskusno /časovni točki) in raziskava je bila opravljena v treh izvodih. Da bi raziskali učinek anti-žilnega rast endotelijskih faktor (VEGF) na celjenje želodčne razjede, nevtralizirajočih protiteles proti VEGF so bili uporabljeni. V tem poskusu smo uporabili štiri skupine. Po indukciji razjedo je bila kontrolna skupina obdelamo samo z vozilom. Skupine zdravljenja vključeni podgan, obsevanih z nevtralizacijo VEGF protitelesa sam, podgan, ki so prejemale visoke odmerke VSL(1,2 × 1010 bakterije /žival /dan) skupaj s kontrolnim protitelesom IgG in podganah, ki so prejemali visoke odmerke VSL(1,2 × 1010 bakterije /žival /dan), skupaj z nevtraliziranje VEGF protitelesa. skupine za protiteles obdelan (IgG in nevtralizacijo VEGF protiteles) so imele protiteles v odmerku 10 mg /kg telesne mase (za utemeljitev glej poglavje o VEGF nevtraliziranje zdravljenje protiteles). Smo živali žrtvovali s cervikalno dislokacijo na dan 3, 7 in 14 po zdravljenju anti-VEGF. Skupno je 24 živali je bilo uporabljenih za vsako časovno točko (n = 6 za vsako preskušanje /časovni točki).

želodca Indukcija in VSLzdravljenje

kroničnih želodčnih razjed bile povzročene eksperimentalno podgane kot je opisano predhodno [17]. Pod anestezijo z pentobarbitonom (35 mg /kg telesne teže i.p.), je trebuh odprl središčne incizije. Plastična cev 6 mm, odprt na obeh koncih bila uporabljena tesno na serozne površini sprednjo steno želodca tik proksimalnega do antralnih območje lojnic. Na površini želodcu, je bil 60 ul z 40% ocetno kislino zlijemo skozi cev 90 sekund. To proizvaja takojšnjo nekroza celotnega sluznice in sub-sluznice v območju, kjer je bil uporabljen ocetne kisline. ostanejo na površini ocetne kisline smo nato obrisati s sterilno filtrirnim papirjem in odprti trebuha je bila zaprta. Prej smo pokazali, da je ta postopek proizvaja histološko tudi značilno, razjede v roku 3 dni po izpostavljenosti ocetne kisline in zaceli popolnoma v 3 tednih brez perforacije ali penetracije na okoliške organe [3] - [4].

Zdravljenje VSLna nizko (6 x 10 ^{9 bakterije) in veliki odmerki (1,2 x 10 10 bakterije) je temeljila na rezultatih predhodnih študij, ki uporabljajo pet različnih odmerkov VSL(1,5 x 10 9, 3 x 10 9, 6 x 10 9, 1,2 x 10 10 in 2,4 x 10 10 bakterije /žival /dan, v tem zaporedju). VSLodmerke 1,5 × 10 9 in 3 x 10 9 bakterije /žival /dan ni bilo mogoče najti učinkovite pri spodbujanju želodčne razjede, medtem ko je učinek odmerka 2,4 x 10 10, bakterije /žival /dan na celjenje želodčne razjede ni bila bistveno drugačna od 1,2 × 10 10 bakterije /žival /dan (Slika S1). Zdravljenje z VSLje začelo, ko so razjede v celoti razvita na 3. dan po aplikaciji ocetne kisline; To se je štelo kot 1. dan zdravljenja za naslednjih 14 dni. PH različnih koncentracijah VSLje bila 7,0. Živali smo usmrtili na dan 3, 7 in 14 po VSLzdravljenja. Ulkusa in ne področje ulkusa vsake živali speremo z ledeno hladno s fosfatom zapufrana slanica damo na led in tri prerezov zberemo. Dva prerezi sta zaskočno zamrznemo v tekočem dušiku in shranili pri -70 ° C RNA izolacijo in pripravo proteinov. Tretji presek je bil takoj določi v 10% nevtralnem zastalega formalina za histološko analizo.}

Ocena velikosti želodca, odstotek zdravljenje in histološko preiskavo

Skupna razjeda površino in odstotek celjenje razjed ob različnem času objavili zdravljenja so ocenjevali na podganah želodcu z rezanjem vzdolž večje ukrivljenosti in razjede (mm ^{2) območje merjenja. Dve različni posamezniki izmerili razjede območje v slepi način. Odstotek zdravljenje je bila izračunana kot:}

histološke študije so bile izvedene v skladu s prej opisanem postopku [18]. Na kratko smo ulkus krater vsakega želodca v prerezu, in fiksno preko noči pri 10% nevtralnega zastalega formalinu, nato pa postopoma sušenega v etanolu in vdelali v parafin z uporabo neoclear kot vmesno topila. Področja 6 mikrometrov so bili pridobljeni v avtomatizirani Mikrotom. Gnojne sekcije smo obarvali s hematoksilinom in eozinom (H & E) za histološko oceni med zdravljenja. Mikroskopsko, H & so E tkiva poročali kot kaže: normalen videz, blage infiltrati iz vnetnih celic v lamine proprie sluznico je, bodisi brez ali le plitvo erozijo, ali globoko erozije in ulceracije

Kvantitativna v realnem času. PCR analiza

Kvantitativna realnem času PCR analiza je bila opravljena za oceno sprememb v izražanju genov, ki kodirajo za sekretorni mucin (Muc5ac), ciklooksigenaze-2 (COX-2), pro-vnetne (TNF-a in IL- 1β) in regulativno (IL-10 in TGF-β), citokini in vaskularni endotelijski rastni faktor (VEGF), preoblikovanje rastni faktor-P (TGF-beta) in za epidermalni rastni faktor (EGF). Celotno RNA je bila vzeta iz ulkusa in brez ulkusa tkiva z TRIzola reagenta (Invitrogen). Donos in čistost RNA smo določili z spektroskopsko analizo. 2 ug RNA smo reverzno prepisana z M-MLV reverzno transkriptazo (Invitrogen) po navodilih proizvajalca. Eden xl cDNK je bil uporabljen za PCR v realnem času (Corbett Research). Realnem času primerji, ki se uporabljajo pri specifični temperaturi kaljenja so prikazani v tabeli 1. ojačitve so bile izvedene z uporabo kompleta Qiagen je Quantitect SYBR Green PCR z uporabo naslednjih kolesarske pogoje: 94 ° C, ima 15 minut, čemur sledi 40 ciklov denaturacijo pri 94 ° C za 20 sekund, žarjenje na ustrezne temperature za 30 sekund in podaljšanje na 72 ° C za 30 sekund. Specifičnost pomnoževanja smo preverili s taline analizo krivulje. MRNA izražanje različnih genov je normaliziral proti GAPDH, in krat sprememb preko bil nadzor določi po metodi ddCt [19].

Beljakovinski Ravni VEGF, TGFβ in ESPG v homogenatu želodca tkiva

želodcu tkiva smo homogenizirali v hladni fosfatnem pufru s soljo (PBS, pH 7,4) s pomočjo politron homogenizatorja. Homogenat tkiva smo nato centrifugirali pri 20000 x g 20 minut pri 4 ° C, da dobimo bistro in proteinske koncentracije, izmerjene s pomočjo BCA (Bicinchoninic kisline) kit. Ravni proteinske VEGF, TGF-ß in ESPG v homogeniziranih želodčnega tkiva tako gnojne in non-ulceriranega sluznice so bile izmerjene z uporabo ELISA kompletov po protokolu proizvajalca (rat VEGF ELISA Kit, Ray Biotech; rat TGF-beta komplet, ebioscience in rat ESPG ELISA kit, Uscn Life Science Inc.). VEGF, TGF-β in ESPG stopnja je bila izražena kot pg /mg tkiva.

Učinek nevtralizirajočih anti-VEGF protitelesa na celjenje želodčne razjede, ki VSL # inducirane 3

Da bi ocenili vpliv nevtralizirajo anti-VEGF protitelesa na celjenje želodčne razjede, ki VSLnapredoval, so štiri skupine živali uporabljajo sicer, nadzor, nevtralizacijo VEGF protitelesa (R & sistemi D), VSLvisoke odmerke + IgG (izoobliko protitelesa, R & D sistemi) in VSLvisoka doza + nevtraliziranje VEGF protiteles (R &D systems). V predhodnih poskusih, treh odmerkov nevtralizacijo VEGF protitelesa (5, 10 in 20 g /žival /dan; ip) so bili preizkušeni na živalih, ki prejemajo visoke odmerke VSLza 14 zaporednih dni in odmerek 10 ug /živali /dan Ugotovili smo, da znatno zmanjša ran in za uporabo pri vseh nadaljnjih poskusih smo izbrali. Živali so se žrtvovali na dan 3, 7 in 14 dni po VSL+ zdravljenju protiteles. Želodčni ulkus površina je bila izmerjena in histološki pregled, kvantitativna analiza realnem času PCR in analiza protein ELISA na osnovi smo izvedli kot je opisano zgoraj.

Statistična analiza

Rezultati so izraženi kot sredstvo ± SEM. Pomen razlike med kontrolo in VSLtretiranih skupinah so bile določene z uporabo Kruskal-Wallis test z Dunns post-testa za primerjavo posebne skupine. Izbira testa neparametrične (Kruskal-Wallis test) namesto testa parametrov (analizo variance, ANOVA), temelji na dejstvu, da je vsaj ena od skupin v skoraj vseh treh od primerjave niso Gaussova. Da bi ohranili doslednost, je Kruskal-Wallis preizkus se uporablja za vse primerjave. Vse statistične analize smo izvedli s pomočjo grafov Pad Instatovo programske opreme. A P
vrednost > 0.05 je zdelo pomembno

Rezultati

VSLprobiotični mešanica pospešuje celjenje želodčne razjede

Po serozne uporabo ocetne kisline. kislina 100% živali razvile želodčnih razjed po 3 dneh. Nato so želodčne razjede postopoma zacelile do 14. dan (sl. 1a). Da bi ugotovili, ali bi probiotična mešanica VSLpospeši celjenje želodčne razjede, so bile živali zdravili bodisi z nizkimi ali visokimi odmerki VSL, ki se začnejo na 3. dan, ko so razjede v celoti razvita za naslednjih 14 dni. Kot je prikazano na sliki 1 a /b, razjede na 3. dan zdravljenja ni bila značilna v obeh zdravljenih skupinah nadzor ali VSL. Nato se je napredoval povečanje celjenje razjed z zmanjšanjem območju razjed na dan, 7 odraža pri živalih, zdravljenih bodisi nizko (p = 0,07) ali visoko (p = 0,003) odmerki VSLso v primerjavi z neobdelanimi kontrolami ( sl. 1a). Še posebej, VSLpri visokih odmerkih za 14 dni, ki so privedli do popolnega celjenje razjed v ~50% živali (sl. 1 a), brez znakov gnojnega sluznice. V preostalih živalih prišlo do pomembnih obnova epitela površine in obsežne regeneracijo tkiva (sl. 1b). Medtem ko VSLprenese znatno povečanje pri celjenju razjed, zdravljenje z velikimi odmerki (% ran je bil 57% in 84% na dan, 7 in 14, v tem zaporedju) znatno prekosila nizke zdravljenja odmerke (% ran je bil 30% in 57% na dan, 7 in 14 v tem zaporedju. slika 1a). Ker, 3. dan zdravljenja ni pokazala pomembnih razlik v celjenju razjed za nadzor in VSLtretiranih skupinah, so vsi rezultati v naslednjih poglavjih prikazano dni 7 in 14 zdravljenja.

VSLobravnava spodbuja popravilo tkiva v ulkusa želodčne sluznice

H & E obarvanje pokazale različne histološke znake zdravljenja med različnimi skupinami. Na 14. dan, podobna naši bruto ugotovitve v merjenju razjeda površino, kontrolne podgane pokazala minimalno popravila. Tam so se zmanjšale vnetnih izločke, minimalen obseg regeneracijo sluznice z zmanjšano velikostjo razjed kraterja. Nismo upoštevali veliko žleznega organizacijo v kontrolnih podganah (sl. 2a). Vendar pri živalih, zdravljenih z visokim odmerkom VSL, ki so pokazali največjo zdravljenje pri zmanjševanju o velikosti območja ulkusa, je bilo obnova sluznice epitela (re-epithelization) in nekaj vnetnih celic. Kot je prikazano na sliki 2c, so bili razporejeni tako sekrecijska žleze. Ocena razjedami tkiva v VSLmajhnih odmerkih zdravljeni skupini je pokazala nekaj površinsko preoblikovanje s skromnimi vnetnih izcedkov in popolna ponovno epithelization sluznice. Pravilna organizacija žleze so opazili tudi na nekaterih mestih (sl. 2b).

Vpliv VSLobravnavanje Muc5ac, COX-1/2 in pro-vnetnih in regulatorni gen citokinov izraz

sluz sloj je prvi obrambni plast želodčne sluznice [20], ki ima pomembno zaščitno vlogo proti kisline in pepsina v želodcu. Ker Muc5ac je najbolj obilno izrazil mucin v normalnem želodčne sluznice, smo ugotovili, ali VSLtretmaji prizadeti Muc5ac izražanje genov v gnojne in /ali niso gnojne tkiva. Kot je prikazano v tabeli 2, čeprav Muc5ac izraz je skromno v VSLzdravljenih živali povečalo, pa ni pomembno razlikovala med testiranimi skupinami. Prostaglandini so drugi pomemben obrambni dejavnik ključnega pomena za ohranitev integritete želodčne sluznice, katerega sinteza je urejeno s hitrostjo, ki omejuje encim-ciklooksigenaze (COX), ki obstaja v dveh izooblik-COX-1 in COX-2 [21]. Konstitutivno izražen COX-1 je bilo tudi ugotovljeno, da je v razjedami in brez gnojne tkiv, medtem izražanje COX-2 nespremenjena je bil občutno višji v VSLvisoka doza obdelamo skupini na dan 7, vendar ne na dan 14 (tabela 2) .

pro-vnetnih citokinov TNF-α in IL-1β je bilo dokazano, da igrajo pomembno vlogo v patogenezi želodca začetek zgodnje vnetni proces [22], medtem ko regulativnim citokinov IL-10 znano je, da zmanjšajo proizvodnjo TNF-alfa [23]. Ugotovljeno je bilo izražanje tako TNF-a in IL-1β genov za povišano v razjedami tkivih v treh skupin živali. Vendar VSLobdelava ni vplivala na ekspresijo IL-1β in IL-10 in nekoliko zmanjšano ekspresijo TNF-a v ulkusa tkivu v primerjavi z zdravljenjem vozila (tabela 2).

VSLzdravljenje stimulira proizvodnjo rastnih faktorjev

vloga rastnih faktorjev VEGF, TGF-ß in ESPG v angiogenezo in migracije epitelijskega in orožja na celjenje želodčne razjede je dobro dokumentiran [24], [25]. Kot je prikazano na sliki 3, se je znatno povečal VEGF (P < 0,001) genske ekspresije v razjedami tkivih na dan 7. pri živalih, zdravljenih z nizkimi ali visokih odmerkih VSL, v primerjavi z živalmi, zdravljenih z le vozila (97 in 332-kratno povečanje genske ekspresije v VLSnizkih in visokih odmerkov podgan, v tem zaporedju). Povečanje VEGF genske ekspresije se je pokazalo tudi na 14. dan in je bilo najbolj vidno v nizkem odmerku VSLpodgan (sl. 3, top). VEGF izraz ni spremenil v non-gnojne tkivih vseh skupin pregledanih. VEGF vsebnost beljakovin v želodčni homogenizatu tkiva potrjujejo ugotovitve podatkov VEGF izražanja genov (sl. 4, top). Podobno, TGF-β in ESPG (sl. 3 srednji in spodnji plošče) genske in proteinske vrednosti (sl. 4 srednji in spodnji plošče) so bile v VSL # znatno povečala 3 zdravljenih živali, čeprav je bila sprememba manj izrazita tistim, ki jih za VEGF .

VEGF nevtralizacijo protiteles zaduši VSLposredovanega želodčne razjede

na podlagi podatkov v sliki 3, kjer je VEGF odziv bistveno povečalo za VSLzdravljenja, ki izboljšane celjenje želodčne razjede ( sl. 1), smo predvidevali, da je VSLzaščitni učinek in mehanizem delovanja odvisna od VEGF. Da bi to raziskali, so bile živali zdravili z visokimi odmerki VSL+ VEGF nevtralizirajočih protiteles. Kot je prikazano na sliki 5, živali, obdelane s VEGF nevtralizirajočih protiteles zmanjšala razjede zdravljenje s 34% in 41%, oziroma v dnevih 7 in 14 v primerjavi z živalmi, zdravljenih z visokim odmerkom VSL+ IgG ali nadzor nad vozilom (sl. 5a). Bruto patologija (sl. 5b) je pokazala, da je sluznični arhitektura manj nedotaknjena v VSL+ VEGF nevtraliziranje protiteles obdelane podgane kot VSL+ IgG obdelamo podgane na dni 7 in 14 zdravljenja. Živali, ki se zdravijo z VEGF nevtralizirajočih protiteles, je pokazala zmanjšanje pri celjenju razjed v primerjavi s kontrolo živali, vendar pa rezultati niso bile statistično značilne (slika 5a).

Pogovor

To je prva celovita študija dokazati, da lahko probiotična mešanica VSLbogatenje celjenje ocetne kisline induciranih želodčnih razjed. Naši rezultati so pokazali, da VSLdelovala na način, odvisen od odmerka za povečanje izražanja in proizvodnjo VEGF, rastnega faktorja znano, da pospešuje angiogenezo in celjenje. VEGF je ključnega pomena pri celjenje želodčne razjede, kot je zdravljenje z VEGF nevtralizirajočih protiteles znatno upočasnilo proces zdravljenja v VSLzdravljenih živali.

preventivno in terapevtsko vlogo probiotikov je tudi poročala, ne samo v primeru ulcerozni kolitis in Crohnova bolezen [8] - [9], ampak tudi v razmerah, kot so prilagojene tako sežganih ran in strelnih ran [26] - [27]. Vendar pa obstaja omejeno število študij, ki ocenjujejo vpliv zdravljenja probiotikov na želodčnih razjed predvsem na škodljive fizioloških pogojih želodca, ki zmanjša preživetje in rast mikroorganizmov. Zanimivo je, da ena študija [28] je pokazala, da se hitro pojavi bakterijska kolonizacija po indukciji razjede in zlasti, kolonizacija določenih bakterij, vključno z Lactobacillus
lahko bistveno izboljša celjenje želodčne razjede. Druge študije so pokazale, da probiotične bakterije Lactobacillus
vrste, Saccharomyces boulardii
, Escherichia coli
seva Nissle 1917 so učinkoviti pri preprečevanju in zdravljenju akutne želodčne škodo, povezano z ocetno kislino [ ,,,0],12], stres [13], aspirin [29], etanol [30], ibuprofen [31] in indometacin [32] inducirane želodčnih razjed. Pri ljudeh, posredni dokazi kažejo, da redno uživanje a Lactobacillus
vsebujoč izdelek ščiti integriteto želodčne sluznice pregrado proti indometacin [32], medtem ko drugi [15] so poročali, da je učinek uporabe probiotične bakterije skupaj tritirna ni nič boljša kot zdravljenje s tremi zdravili samo za zdravljenje želodčnih razjed. V nedavnem poročilu [13] predlaga nov simbiotično pristop k zdravljenju, kjer probiotična ( L. Acidophilus
) in ingver ekstrakt so hkrati in posamično vdelane /imobilizirana v alginata plavajoče kroglice bistveno vplivali želodčne razjede pri podganah. Namestnika, pristop je treba uporabiti različne količine večstanovanjskih sevov probiotikov za spodbujanje celjenje razjed kot so KVČB študije pokazale, da so po več lističi probiotiki bolj učinkovito kot monostrain probiotikov [33]. Naši rezultati potrjujejo te ugotovitve uporabo VSL, zmes osem bakterijskih vrst, ki je bila zelo učinkovita pri povečanju migracijo epitelijskih celic in proliferacijo, angiogenezo, in produkcijo granulacije tkiv vodi k hitrejšemu celjenju želodčnih razjed.

obravnavajo mehanizme, s katerimi VSLpospešeno celjenje želodčne razjede smo količinsko žaljivo luminalnega in /ali spodbujanje obrambnih dejavnikov. Predhodne študije so pokazale, da probiotiki izvajajo različne mehanizme, vključno stabilizacijo sluznični degranulacijo mastocitov [29] indukcijo produkcije Siga [29] znižanje apoptozo celic v razmerju celične proliferacije v želodcu [11], poveča transepitelialno odpornost [34 ] in spodbujanje angiogenezo [11] posredovati želodčne razjede zdravljenje. Tukaj bomo pokazali, da VSLspodbuja želodčne razjede zdravljenje s povečanjem izražanje rastnih faktorjev, zlasti VEGF več gub. VEGF je temeljna angiogenski faktor, ki spodbuja nastajanje granulacije tkiva in novih mikro plovil prek angiogenezo [24], ki pa pospešuje želodca in dvanajstnika celjenje [35]. Do danes obstaja le eno poročilo [11], ki kažejo L. rhamnosus
GG lahko up-urejanje VEGF protein med celjenju razjed. V naših raziskavah smo ugotovili, da je na dan 7. zdravljenja z visokim odmerkom VSL, je VEGF ekspresijo poveča 332-krat, v primerjavi s kontrolnimi živalmi. To povečanje ni bilo videti kot vidno na 14. dan zdravljenja, predvsem zato, ker je večina razjed že zacelila, ki jih ta čas v VSL-podgan. Za primerjavo, v majhnih odmerkih VSLzdravljene živali še naprej kažejo na visoko ekspresijo VEGF na obeh dni 7 in 14, kot so razjede še vedno zacelila. Zaključni VSL-inducirane želodčne razjede z obdelavo živali, z anti-VEGF nevtralizacijskih protiteles potrdila, da VSLpovečan želodčne razjede zdravljenje preko mehanizma VEGF posredovano. Opazovanje zmanjšane celjenje razjed pri živalih, zdravljenih z VEGF nevtralizacijskih protiteles sam v primerjavi s kontrolami podpira tudi vlogo za VEGF v spontanem celjenje želodčne razjede [35]. Pomembneje, čeprav je VEGF znano, da se regulira s COX-2 dobljeni PGE _{2 [36], smo ugotovili obrobne spremembe pri izražanju COX-2 v VSLpodgan, ki kažejo, da je VSLinducira VEGF ekspresijo niso COX-2 posreduje.}

prav tako smo ugotovili, da je rast dejavniki ESPG in TGF-β so občutno navzgor urejena v razjedami tkivih VSLpodgan. TGF-β je znano, da vplivajo na zunajcelični matriks, ki obrne proces epitelijskega pripravi celic vklopi in izklopi, medtem ko ESPG spodbuja tako epitelne vračanje in širjenje v prebavilih [25]. Zanimivo je, da je VSLje pokazala, da so učinkoviti le pri spodbujanju rasti dejavnike in ne na obrambni dejavniki Muc5A in COX2. Še vedno je možno, da bi VSLvpliva na druge obrambne dejavnike niso analizirane v tej študiji. Prej smo pokazali, da zdravljenje VSLpovečuje debelega Muc2 /MUC2 mucin izločanje v podganji debelem črevesu in pri kolona epitelijskih celic. VSLravnanje z živalmi, pa tudi ni bistveno zmanjšala izražanje vnetnih citokinov, IL-1β in v manjši meri TNF-a. Oba citokinov igrajo ključno vlogo pri nastanku želodčnih razjed z uvajanjem zgodnjo akutno vnetni odziv [22]. Te ugotovitve potrjujejo tudi nedavno poročilo, ki oceni 13 probiotične seve na aspirin povzroča želodčne razjede zdravljenje [29]. Trenutno ne vemo, kateri bakterijskega specie (-e) ali kombinacije v probiotični mešanici VSLso odgovorni za celjenje želodčne razjede. Prejšnje študije so pokazale, da so po več lističi probiotiki (natančneje, multi sevi rodu) bolj učinkovito kot mono sevov probiotikov [33]. Možno je tudi, da VSLZmes čemer raztopino nevtralnega (različne koncentracije VSLima pH 7,0) lahko vpliva na celjenje želodčne kisline z redčenjem kislost želodčnega soka. Vendar pa podatki, predstavljeni v tej študiji ni mogoče sklepati na to dejstvo, kot je kislost v želodcu sok ni bila izmerjena. Kljub temu, VSLbodo ob le razredčevanje kisline in ne nevtralizirajo učinek kisline na želodčni sok, če obstajajo. Po vsej verjetnosti bi kislina redčenjem učinek VSL, prispevajo le sekundarno vlogo svoje močne citoprotektivno funkcije z obsežno up-regulacije VEGF dokazano. Kot je VSLjemljemo kot suspenzijo žive celice, bi ta formulacija bi izvajal svoje zaščitne učinke kot živih mikroorganizmov, njihovih metabolitov, celične stene komponent in /ali vsebine DNK ali vse zgoraj. Nismo izvedli poskus za primerjavo učinka živih mikroorganizmov in toplote inaktiviran probiotik zmesi oceni to vprašanje, čeprav so prejšnje študije pokazale, da toplotno ubitih ali radiacijske inaktivirane probiotične bakterije (v dozi podoben tistemu živih mikroorganizmov) ni spodbujanje razjede-ran [11], [12]. Nadalje, ker nismo ocenili angiogenezo, sklepati, da VSL, ki spodbuja celjenje želodčne razjede z angiogenezo je razmišljal temelji le na VSLsposobnost, da izzove močan up ureditev VEGF, ki je bistvenega pomena pri angiogenezo [35].

na koncu naše študije kažejo, da je VSLprobiotični mešanica zelo učinkoviti pri povečevanju želodčne razjede zdravljenje. Učinek je dominantna pri visokih koncentracijah VSLzmesi in se doseže mehanično s stimulacijo izražanja in izločanje angiogenezo spodbujanje rastnih faktorjev, zlasti VEGF. Ta študija uvaja možnost uporabe VSLprobiotični zmes terapevtsko za bogatenje želodca celjenje.

Podpora Informacije
Slika S1.
Učinek zdravljenja različnih koncentracijah VSLna ocetno kislino povzroča želodčne razjede zdravljenje pri podganah. [A] Območje razjeda (mm 2) izračuna za živali z ocetno kislino inducirane želodcu na dan 3, 7 in 14 zdravljenje z nosilcem (temno modra), VSL1,5 × 10 9 bakterije /žival /dan (svetlo rumena), VSL3,0 x 10 9 bakterije /živali /dan (temno rumeno), VSL6.0 x 10 9 bakterije /žival /dan (svetlo zelena), VSL1.2 x 10 10 bakterije /živali /dan (temno zelena), VSL2,4 x 10 10 bakterije /žival /dan (svetlo modra). Podatki so prikazani kot sredstva ± SEM od 6 živali na dan.

• Plos ONE: vivo antioksidant in zdravljenje peptične razjede Dejavnost Parkia Speciosa etanolne ekstrakt listov proti-etanol povzročena želodca pri podganah
• Plos ONE: Dvosmerno Prepisovanje med stres povzroča razjede želodca in depresije pod kroničnega stresa