Ocena cestnine, kot je receptor 4 Asp299Gly, Thr399Ile in interlevkin-8 -251 polimorfizmi v tveganju za razvoj distalnega raka želodca

Ocena cestnine, kot je receptor 4 Asp299Gly, Thr399Ile in interlevkin-8 -251 polimorfizmi v tveganju za razvoj distalnega raka želodca
Abstract
Ozadje
intenzivnosti vnetja, ki ga Helicobacter pylori kolonizacija je povezana z razvojem distalnega raka želodca (GC). Odziv gostitelj H
. pylori
je bila povezana z genetskimi polimorfizmi, ki vplivajo tako prirojene in adaptivni imunski odgovor.
Naš cilj je bil ugotoviti, ali je prisotnost TLR4 Asp299Gly
, TLR4 Thr399Ile
in IL-8-251
a /T polimorfizma imel nobenega vpliva na razvoj distalnega GC v mehiškem prebivalstva
metode
smo študirali 337 bolnikov, ki so bili razdeljeni v dve skupini:. 78 bolnikov s histološko potrjeni distalni GC in 259 nerakave kontrole. Prisotnost H. pylori
v kontrolni populaciji je bila opredeljena s pozitivnimi rezultati vsaj dveh od štirih diagnostičnih testov: serologijo, histologijo, hitri test ureaze in kulture. Human DNA očistimo in genotipizacijo za TLR4 Asp299Gly
polimorfizma s pyrosequencing, za TLR4 Thr399Ile
s PCR-RFLP in IL8-251
ga sistema ojačanje neodzivnih mutacije (orožje) -PCR.
Rezultati
kontrolna skupina brez raka je bilo ugotovljeno, da je v Hardy-Weinberg ravnovesje v polimorfni lokusov študiral (hi-kvadrat HW = 0.58 za IL8-251
, 0,42 za TLR4 Asp299Gly
in 0,17 za TLR4 Thr399Ile
). Frekvence mutiranih alelov (homozigotno plus heterozigotnih) smo primerjali med primeri in kontrolami. Ugotovili smo, da ni značilnih razlik za TLR4- Asp299Gly
je [7,7% distalnih bolnikov GC in 7,7% kontrol nerakave (p = 0,82)] in za TLR4 Thr399Ile
[1,3% bolnikov, GC in po 5 % kontrolne populacije (p = 0,2)]. V nasprotju s tem, za IL-8-251
A /T, je bilo 80,77% bolnikov GC in 66,4% v starosti kontrolne skupine in spol se ujema vsaj eno kopijo mutiranega alela (OR = 2,12, 95% CI = 1,1-4,2) (p = 0,023).
Zaključek
ta študija je pokazala, da IL8-251 * bi se
alel povezan z razvojem distalnega raka želodca v tej mehiški populaciji.
Ozadje
Helicobacter pylori PODJETJA
skoraj izključno kolonizirajo mukozno plast človeškega želodca in prebivanja na ozemlju gostiteljice za let, desetletij ali morda vseživljenjskega. V približno 10% primerov, je organizem, povezane z različnimi kliničnimi rezultati, vključno z ne-razjede dispepsijo, peptični ulkus, in distalni rakom želodca [1].
Oba gostitelja in okoljski dejavniki so bili povezani s to klinično raznolikosti. Gostiteljice dejavniki so predvsem povezane s prepoznavanjem bakterij imunski sistem in variacije v stopnji odziva citokinske [2, 3].
Prepoznavanja patogenov je posredovana z nizom-reproduktivnih blokada receptorjev, ki so označene kot receptorji vzorec razpoznavanje (PRRS). Ti receptorji prepoznati ohranja molekularne vzorce, ki so skupne velike skupine mikroorganizmov. Pomemben PRR je Cestninski podobnega receptorja 4 (TLR4), transmembranski receptor, ki prepozna vrsto ligandov, vključno lipopolisaharid (LPS), ki se nahaja v celični steni Gram-negativne bakterije, kot so H. pylori
[3 ]. Dve ločeni nukleotidnih polimorfizmov (SNP) in v TLR4
gena, ASP-299 → Gly in CX-399 → Ile prehodov, se je izkazalo, da bo privedla do odzivnost na LPS, zmanjšano gostoto epitelija TLR4 in zmanjša vnetni odziv citokinov na LPS [ ,,,0],4]. Poleg genetske variante citokinov so tudi ključnega pomena za vnetni odziv, in več genov iz različnih poti so bile povezane z rakom želodca, vključno interlevkin (IL) -1b
, TNF
, IL-10
in IL-8
[5-7].
IL-8 citokinov deluje kot močan chemoattractant za nevtrofilcev in limfocitov. Ugotovljeno je bilo, da ravni IL-8 povečal 10-krat v želodcu osebkov raka v primerjavi z običajnimi želodčnih tkiva. Dobro označena-SNP T /A na -251 locus je bil opisan in povezan z višjo IL-8, proizvodnje in številnih bolezni [8-11].
Naš cilj je bil ugotoviti, ali je TLR4 Asp299Gly
, TLR4 Thr399Ile
in v IL8-251 a /T
polimorfizmov so povezani z oddaljenim raka želodca v dobro opredeljene mehiškega prebivalstva.
metod
populaciji bolnikov
smo preučevali 78 nepovezanih bolnikov s histološko potrjeni distalni GC (povprečna starost = 58.6y, Srednja starost = 60, starost: 22-84, F: M = 0,56). Preučili smo tudi 259 bolnikov brez histološke dokaze o GC (povprečna starost = 57.1y, srednja starost = 54, starost = 18-92, F: M = 1,17). Ta populacija je bila že prej opisana [7]. Vsi bolniki so bili vključeni v bolnišnici Universitario "dr José Eleuterio González«, Universidad Autónoma de Nuevo León. Lokalna etična komisija odobrila študijo in pisno privolitev je bila pridobljena iz vseh predmetov.
Histopatoloških preiskav
v državi vseh bolnikov v kontrolni skupini je bilo osem biopsije osebki pridobljeni za histološko vrednotenje, dva iz manjšega ukrivljenosti, dva iz večje ukrivljenosti dva od incisura angularis, in dva iz prepyloric regije. Pri bolnikih z distalno GC, so bile vsaj 8 biopsije, pridobljeno iz tumorja za histološko vrednotenje. Biopsije iz primerov in kontrol so bile določene, parafin vgrajeni in obarvajo z hematoxilin-eozinom. Izkušeni patolog preučila vse histološke vodili.
H. pylori
stanja
H. pylori
stanje prebivalstva kontrole je bil določen s histologijo, test hitre ureaze (RUT), serološke in kulturo . Za Rut, je bil antralnih biopsija analizirali z validirano nekomercialne testa [12]. Biopsija damo v viali test, inkubiramo pri 37 ° C in berejo v 24 urah. Sprememba barve od oranžne do vijolične kaže na pozitiven rezultat. Za serologijo, je bila encimski imunski testom (ELISA) za dokazovanje prisotnosti protiteles IgG kot je opisano predhodno [13].
Kultura je bila izvedena na dveh korpusa in dva antruma biopsije s standardnimi metodami. Biopsije damo v 10% krvnem agarju (Becton Dickinson, Cockeysville, MD) in inkubirali pri 37 ° C vsaj en teden pod pogoji microaerobic. Sevi so označene z barvanje po gramu, so v obravnavanem oksidaze, katalaze in ureaze testi.
Bolniki Control H. pylori PODJETJA
okuženih ko sta bila vsaj dva od diagnostičnih testov pozitiven.
Razširjenost H. pylori
infekcija pri bolnikih z rakom želodca je bila določena z rezultatom histologijo.
Genotipizacija
Genomsko DNA smo ekstrahirali le iz periferne krvi, ki jih fenol-kloroform-isoamilic alkohola in obarjanjem z metodo etanola. Ojačitve neodzivna sistem mutacija (ROK) -PCR metoda je bila uporabljena za genotipa IL8-251
polimorfizem, kot je opisano prej [14].
TLR4 Thr399Ile
polimorfizem je bila določena s PCR-RFLP [15] in na TLR4 Asp299Gly
polimorfizem smo določili po metodi pyrosequencing namenjen za to študijo. Sprva je bil PCR izvedli s primerji F-GAT TAG CAT ACT TAG ACT ACT ACC TCC ATG in R-CCC TTT CAA TAG TCA CAC TCA CCA GG z obratnem temeljni premaz biotiniliranega. Pogoji PCR so bili: 94 ° C 5 min in 40 ciklov 94 ° C, 59 ° C in 72 ° C po 30 sekund, in končno podaljšanje pri 72 ° C 5 min. Za pyrosequencing so Biotinilirane PCR predloge imobiliziran na streptavidinom obloženo paramagnetnih Sepahrose kroglic v vezavnem pufru. Biser-predlogo kompleksi so bili sprani s potapljanjem v 70% alkohola in 0,5 M NaOH in nato dodamo 45 ul iz kaljenja pufru, ki vsebuje 15 pmol od nukleotidov grundirnim 5'-CAT ACT TAG ACT ACT ACC TC 3 '. Žarjenje je potekala pri 80 ° C za 2 min. Realnem času pyrosequencing je bil izveden v avtomatizirani 96-dobro pyrosequencer PSQ SNP 96 (Pyrosequencing AB, Uppsala, Švedska) z uporabo encimov in substratov, ki jih priporoča proizvajalec.
Statistična analiza
Hardy-Weinberg ravnovesje alelov na posameznem loci je bila ocenjena s statistiko hi-kvadrat. Statistično značilne razlike določi s testom Študentske t
, hi-kvadratni ali Fisher točno testa, dve tailed. Verjetnost (p) vrednost < 0.05 se je štelo kot statistično značilne. razmerja obetov (OR) s 95% intervali zaupanja (CIS) smo izračunali s pomočjo programa Epi-info 2000 (Center za nadzor in preprečevanje bolezni, Atlanta, Ga.). Tri analize so bile opravljene, v katerem so bili vključeni vsi primeri in kontrole, drugi, v katerem so bili primeri, samo v primerjavi s H. pylori
+ kontrol in tretjo analizo, s katero so kontrole, ki temeljijo na prebivalstvu ujema s 5 let starosti skupinah in spolu pri rakavih obolenj.
Rezultati
študijskih skupin značilnosti in H. pylori
stanje
razporeditev genotipov po histoloških ugotovitev je prikazana na tabeli 1.Table 1 genotipom in alelov frekvence IL-8 251
A /T in TLR-299
in -399
loci v ne-rak in rak skupine po histoloških ugotovitvah

IL8-251 A /T

TLR4 Asp299Gly
TLR4Thr399Ile
Group (n)
genotipa
alel
genotip
alel
genotip
alel
AA
AT
TT
*
* T
1,1
1,2
* 1
* 2
1 1
1,2
* 1
* 2
gastritis (207)
42
97
68
0.44
0.56
190
17
0.96
0.04
196
11
0.97
0.03
PUD (29)
4
14
11
0,38
0,62
29
0
1
0
27
2
0.97
0,03
AG + IM (23)
5
10
8
0,43
0,57
20
3
0,93
0,07
23
0
1
0
raka želodca (78)
16
47
15
0.51
0.49
72
6
0.96
0.04
77
1
0.99
0.01
diffuse type
8
26
8
0.5
0.5
38
4
0.95
0.05
41
1
0.99
0.01
intestinal tip
8
21
7
0,51
0,49
34
2
0,97
0,03
36
0
1
0
H. pylori
+ (191)
37
90
64
0.43
0.57
175
16
0.96
0.04
181
10
0.97
0.03
Age in spol ujema (n = 189)
33
87
69
0,4 ​​
0,6
175
14
0,96
0,04
179
10
0,97
0,03
PUD: peptičnega ulkusa; AG, atrofični gastritis; IM: intestinalno metaplazijo
genotipa frekvenc v posameznih lokusov študiral bile v Hardy-Weinberg ravnovesju, z neznačilnimi chi-kvadrat vrednosti (0,58 za IL8-251
, 0,42 za TLR4 Asp299Gly
in 0,17 za TLR4 Thr399Ile
). Med kontrolni skupini je 80% imelo kronični gastritis (tabela 1), je bilo 11,2% bolnikov PUD in 8,8% bolnikov je imelo atrofični gastritis in /ali intestinalno metaplazijo. Delež razpršenega in črevesnega raka želodca je bila 1,2. 1
razširjenosti H. pylori
v kontrolni skupini je bila 73,7%. To je podobno vrednosti že poročali za to populacijo v raziskavi [16]. Razširjenost H. pylori
med bolniki želodca z rakom je bila 53,8%.
Ocena tveganja za IL8-251
A /T, TLR4 Asp299Gly
in TLR4 Thr399Ile
genotipi
primerjali smo vse posamezne genotipe za IL8-251
(AA, AT in TP), za TLR4 Asp299Gly
(1,1, 1,2 in 2,2) in TLR4 Thr399Ile
(1,1, 1,2 in 2,2) (tabela 1). Pogostost IL8-251
AT genotip je bila višja v primerih želodčnih raka kot v vseh kontrol, samo H. pylori
pozitivne kontrole in starost in spol ujemajo kontrol (tabela 2) .table 2 razmerja obetov in 95 intervali% zaupanja za analizo so genotipov distalnih primerov raka želodca vs
vse kontrole, ki niso rakave.

IL8-251 *
IL8-251 AT
TLR-299 * 2
TLR-399 * 2
vseh primerih vs
OR (95% CI)
str
OR (95% CI)
str
ALI 95% CI
p
ALI 95% CI
p
Vse komande (n = 259)
2.12 (1,1-4,2)
0,023
1,73 (1-3)
0,049
1 (0,3-2,8)
0,82
0,25 (0,01-1,8)
0,2
H. pylori
+ nadzor (n = 191)
2.12 (1,1-4,2)
0,029
1,7 (0.96-3)
0.068
0.91 (0.3-2.6)
0,95
0,24 (0-1,8)
0,19
Starost in spol se ujema kontrole (n = 189)
2.42 (1,2-4,8)
0,009
1,78 (1-3,2
0,035
1,04 (0,3-3,1)
0,86
0.23 (0-1,8)
0,1
Ocena tveganja za IL8-251
* A, TLR4 Asp299Gly * 2
in TLR4 Thr399Ile * 2
alelov
smo zraven v primerjavi s prevozom IL8-251 *
alel (homozigotna plus heterozigotnimi) za primere, GC in vse gastritis plus običajnih kontrol. Našli smo pridružitvi IL8 -251 *
alel in razvoj GC (OR = 2,12, 95% CI = 1.1-4.2, p = 0,023) (tabela 2). Ko smo primerjali vse gastritis plus običajnih kontrol vs
histološke vrste raka so tveganja za difuzni in črevesne želodca vrstah raka podobne, vendar niso pomembne (OR = 2,15, p = 0,08 in ali = 2,1, p = 0,13 oz).
Ko smo primerjali želodčne primerov raka s H. pylori
+ kontrole smo ugotovili podobno vrednost (OR = 2,12, 95% CI = 1,1-4,2, p = 0,029).
Naprej, smo primerjali frekvenco v želodcu skupini raka withage in spolu ujemajo kontrole in mi našel močnejša zveza (OR: 2,42, 95% CI = 1,2-4,8, p = 0.0.009).
nismo našli nobene združenje za TLR4 Asp299Gly * 2
in TLR4 Thr399Ile * 2
hyporeactive alelov.
Razprave in sklepi
raznolikost v odziv na okužbe s H. pylori
so pripisali več dejavnikov. Gensko urejeno imunski odziv se zdi, da igrajo ključno vlogo pri določanju intenzivnosti poškodbe gostitelja [1-3].
Številni avtorji opisujejo povečano proizvodnjo IL-8 v H. pylori
okužbe. A /T polimorfizem v položaju -251 gena je bila povezana z višjo aktivnostjo tega interlevkina in v zadnjem času je bil ta alel povezan v dveh študij za razvoj raka želodca v japonski populaciji [10, 11]. V eni od teh študij, v IL8-251 AA
genotip potekala večje tveganje atrofični gastritis (OR = 2,35; 95% CI = 1,12-4,94) in raka na želodcu (OR = 2.22; 95% CI = 1.08- 4,56) v primerjavi z genotipom TT. So preučevali 252 zdravih kontrol, 215 osebe z atrofični gastritis in 396 bolnikov z rakom želodca. AA in AT genotipov so statistično pomembno povezane z višjimi stopnjami IL8 beljakovin, več hudo nevtrofilcev infiltracijo v primerjavi z genotipom TT. V drugi študiji, je bil IL-8 -251
* alela povezana z večjim tveganjem za raka želodca (OR = 2,1, 95% IZ = 1.38-2.92). Naši rezultati so pokazali nobene povezave med višjimi stopnjami GC in genotip AA, ampak pozitivna povezava je bilo za genotip AT in prevoz najmanj eno kopijo * A alel (homozigotna plus heterozigotnem). Zanimivo je, da najbolj oddaljene regije vrednost vzorca v naši raziskavi (2,12) je bil precej podoben kot v japonski populaciji (2.1).
IL-1B-31 C /T
polimorfizem je povezana z razvojem raka želodca in geografsko-etnične razlike je opisano za ta lokus, z močnejšo pridružitvi polimorfizma v Zahodni kot v orientalskem prebivalstva. Rezultati za IL-8-251
A /T polimorfizma v korelaciji s prejšnjimi predstavljenih podatkov za japonskega prebivalstva, ki ne kaže trend v geografskem ali etnične razlike.
Je trenutno nerešen ali signalne poti je a hiporesponzivna LPS koristno ali škodljiva za gostitelja. Posameznikov pri hyporeactive TLR4
polimorfizmov so pokazale nižjih ravni obtoku vnetnih citokinov, povečano tveganje za akutno bakterijskih okužb in trend k večji smrtnosti. Druge nedavne študije podpirajo hipotezo, da lahko TLR4
polimorfizmi nizko deluje povzroči zmanjšano vnetne reakcije, povezane z nizko poškodovali okužbe, ki bo spodbujal persistentno okužbo [17-20]. V tej študiji nismo našli nobene povezave med GC in TLR4 polimorfizmov, kar kaže, da ne prispevajo k razvoju distalnem rakom želodca. Oba TLR4 Asp299Gly
in Thr399Ile
polimorfizmi so poročali o genetsko neravnostežje (LD) [21, 22], vendar smo se odločili, da genotip tako, ker nismo vedeli, če bi bili v LD v naši populaciji.
Skratka, naši predhodni rezultati kažejo, da je IL8-251
biološko verjetna polimorfizma, ki spreminjajo bolezen. Če je potrjeno v različnih populacijah, kot je bila v japonščini, in zdaj mehiških skupin, to polimorfna mesto, v povezavi z drugimi, se lahko uporabljajo za identifikacijo bolnikov v večji nevarnosti za GC, ki morda potrebujejo natančnejše spremljanje.
Izjave
Konkurenčni interesi
avtor (i) ugotovi, da nimajo konkurenčnih interesov.

• Želodca Helicobacter pylori okužbe povezuje z večjim tveganjem za kolorektalnih polipov v Afriške Americans
• Fosforilirata Smad2 v končni fazi želodca Carcinoma