PLOS ONE: elektroakupunktur på ST36 lindrar magtömning och räddar Nätverk av interstitiella celler i Cajal i magen av diabetiska råttor

Abstrakt

Utarmning av interstitiella celler i Cajal (ICC) är certifierad i magen av diabetespatienter. Även elektroakupunktur (EA) i ST36 är en effektiv behandling för att reglera gastrisk motilitet, mekanismerna EA på ST36 på magsäckstömning och nätverk av ICC återstår att belysas. Syftet med denna studie var att undersöka effekterna av EA på gastrisk tömning och på förändringar i ICC nätverk. Råttor randomiserades in i kontrollenheten, diabetiska råttor (DM), diabetiska råttor med sham EA (DM + SEA), diabetiska råttor med låg frekvens EA (DM + LEA) och diabetiska råttor med högfrekventa EA grupper (DM + HEA). Expressionen av c-kit i varje skikt av magväggen bedömdes genom western blotting. Spridningen av ICC identifierades genom immunmärkningen av c-kit och Ki67 som apoptos av ICC undersöktes av TUNEL-färgning. Resultaten var enligt följande: (1) Gastrisk tömning försenades kraftigt i DM gruppen, men accelereras i LEA och HEA grupp, särskilt i LEA gruppen. (2) Uttrycket av c-kit i varje skikt reducerades uppenbarligen i DM gruppen, men också uppreglerat i LEA och HEA grupp. (3) Riklig prolifererade ICC (c-kit + /Ki67 +) bildande buskiga nätverk med c-kit + celler observerades i LEA och HEA gruppen, medan de apoptotiska celler (c-kit + /TUNEL +) fram knappast fångas i LEA och HEA grupp . Tillsammans låg och hög frekvens EA på ST36 rädda de skadade nätverk av ICC genom att hämma apoptos och öka spridningen i magen av diabetiska råttor, vilket resulterade i en förbättrad magtömning

Citation. Chen Y, Xu JJ , Liu S, Hou XH (2013) elektroakupunktur vid ST36 ameliorates magtömning och rädd Networks av interstitiell Celler av Cajal i magen hos diabetiska råttor. PLoS ONE 8 (12): e83904. doi: 10.1371 /journal.pone.0083904

Redaktör: Yvette Tache, University of California, Los Angeles, USA

emottagen: 9 augusti 2013; Accepteras: 8 november 2013, Publicerad: 31 December, 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

Finansiering:. Arbetet delvis finansierats med bidrag från National Natural Science Foundation i Kina (nr 30.670.775, nr 81.270.458). Inga ytterligare extern finansiering som erhållits för denna studie. Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet

Konkurrerande intressen:.. Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Introduktion

Typer av gastrointestinala motilitetsstörningar alltifrån funktionell dyspepsi till gastro allvarligt påverka livskvaliteten för patienter med årtionden av diabetes mellitus [1]. Gastropares, som kännetecknas av fördröjd magtömning sker upp till 30% av personer med typ 1-diabetes [2]. Även om olika terapeutiska interventioner, däribland läkemedelsbehandling och vissa icke-läkemedelsbehandlingar har prövats, läkande effekter för gastro förblir otillfredsställande.

Akupunktur har empiriskt används för att behandla gastrointestinala besvär i orientaliska länder i tusentals år. Elektroakupunktur (EA), som är en modifiering av traditionell akupunktur, är mer lämpade för klinisk forskning och grundforskning inställningar för dess reproducerbarhet. Zusanli
(ST36) är en vanlig acupoint ofta används för behandling av gastrointestinala sjukdomar. Under de senaste åren har effekterna av EA vid ST36 på gastrisk motilitet utvärderats i ett flertal studier. För djur, EA på ST36 signifikant ökad gastrisk motilitet i vakna råttor och förbättrad fördröjd magtömning i STZ-inducerade diabetiska råttor [3], [4]. Dessutom hos människor, EA på ST36 accelererad gastrisk tömning och lättad dyspeptiska symptom i funktionell dyspepsi patienter och diabetiker med gastropares [5], [6]. Även i dessa studier endast lågfrekvent EA antogs var hög frekvens EA också rapporterats att främja matstrupen och distal kolon motilitet hos djur [7], [8]. Således, effekterna av olika frekvens EA på gastrisk motilitet och de bakomliggande mekanismerna drar folks uppmärksamhet.

interstitiella celler i Cajal (ICC), väletablerade som pacemakers genererar och förökningslångsamma vågor, har fått betydelse i regleringen av gastrointestinal rörlighet under flera årtionden [9]. Tre subtyper av ICC inklusive intramuskulär ICC (ICC-IM), myenteric ICC (ICC-MY) och submukosala ICC (ICC-SM) formen intakta nätverk i magväggen [10]. Nätverk av ICC är inte statiska även i fysiologiska förhållanden; apoptos och transdifferentiering leder till ICC förlust, medan ICC också kan återställas genom spridning, påfyllning från stamceller och öka överlevnad [11], [12]. Omfattande studier har dokumenterat att förlust och skada av ICC orsakade oordnad gastrointestinal motilitet i djurmodeller och patienter med diabetes [13] - [15]. Nyligen rapporterade ytterligare studier att EA underlättade ökningen av kolon ICC i långsam transit förstoppning råttor och råttor efter enteroenterostomy [16], [17]. Vår senaste studie visade också att EA på ST36 kan återställa nedsatt ICC i tjocktarmen av diabetiska råttor [18]. Samtidigt är det gällde att EA främjade spridning och hämmade apoptos av hjärncell i hippocampus [19], [20]. Men det finns ett tomt om effekterna av EA på ST36 på ICC i diabetesrelaterad gastro och mekanismen om spridning och apoptos av ICC är inblandade

Därför målen för denna studie var att:. 1) utvärdera effekterna av olika frekvens EA på magsäckstömning; 2) undersöka effekterna av EA vid ST36 på ICC nätverk i diabetiska råttor; 3) bestyrka om apoptos och spridning av ICC var inblandade.

Material och metoder

Etik uttalande

Råttorna fick mänsklig omsorg och denna studie genomfördes helt i enlighet med rekommendationerna i handledningen för vård och användning av försöksdjur i National Institutes of Health, med all verksamhet som godkänts av de etiska riktlinjerna från Animal Care och användning kommittén av Tongji Medical College, Huazhong universitet för vetenskap och teknik.

Djur

Sprague-Dawley vägde 250-300 g valdes i den aktuella studien. Råttor erhölls från experimentet Animal Center of Tongji Medical College (Huazhong universitet för vetenskap och teknik, Wuhan, Kina) och hölls under normala laboratorieförhållanden (22 ° C, ljus-mörker 12/12 h cykel) med fri tillgång till mat och sterilt vatten. Efter en vecka av adaptiv utfodring, djuren officiellt antogs i våra experiment.

Diabetic modell

Efter fasta över natten men fri tillgång till vatten, har modellerna upprättas med en enda intraperitoneal injektion av streptozotocin i råttor (STZ, 60 mg /kg, det vill säga en ml /100 g kroppsvikt, Alexis Biochemicals, San Diego, Kalifornien, USA), nyligen upplöst i 20 mM citratbuffert (pH 4,5, Sigma, St Louis, MO, USA) . Kontrollgruppen injicerades med en lika stor volym citratbuffert. Alla råttor inhystes i samma skick, med vattenbrist under 4 timmar men ad lib
utfodring. En vecka efter injektionen togs diabetes bekräftades i olika tid genom att mäta glukos i en droppe helblod som erhållits genom att punktera svansspets kärlet. En blodglukosnivån hos ≥16.7 mmol /L togs som en standard för framgångsrik modell. Blodglukos screenades punktligt före injektionen och 1., 4: e och 8: e vecka efter injektionen. Dessutom, viktminskning, polydipsi och polyuri var ytterligare indikatorer som bevis framgångsrik uppmuntran av diabetisk råtta.

Experimentellt protokoll

Råttor randomiserades till fem grupper (10 råttor varje grupp), inklusive kontroll , diabetiska gruppen (DM), diabetiska råttor med sham EA-gruppen (SEA, endast akupunktur utan elektrisk ström, 30 min /d), diabetiska råttor med låg frekvens EA-gruppen (LEA, 10 Hz, 1-3 mA, 30 min /d ) och diabetiska råttor med hög frekvens EA-gruppen (HEA, 100 Hz, 1-3 mA, 30 min /d). EA genomfördes vid acupoint ST36 med en elektrisk stimulator (G6805-2A, Shanghai Huayi Medical Instrument Factory, Shanghai, Kina) varje dag i 8 veckor. Den elektriska strömmen upprättades i enlighet med något darrande i de nedre extremiteterna. För att uppnå syftet att eliminera påverkan av stress, fick djuren tillåtes röra sig fritt i sin egen hölje under EA förfarandet.

Efter successiv intervention för 8 veckor råttorna i varje grupp testades med avseende på gastrisk tömning. Sedan var de offrade, och exemplar av antrum noggrant erhållas. Varje prov delades upp i flera stycken, var en relativt liten lagrades vid -80 ° C för western blotting analys efter skikt nyligen lossnat och en bit placerades i 2,5% glutaraldehyd för elektronmikroskopi, och resten fixerades i Zamboni fixativ (2 % paraformaldehyd och 1,5% mättad pikrinsyra-lösning i 0,1 M fosfatbuffertlösning (PBS, pH 7,4) för immunofluorescensinfärgning.

Mätning av gastrisk tömning

magtömning utfördes genom en modifiering såsom beskrivits tidigare [21]. Den testmåltid som innehåller fenolrött (0,5 mg /ml) som indikator och karboximetylcellulosa (15 mg /ml) var ständigt rörs och hölls sedan vid 37 ° C. Efter livsmedels berövas natten råttor fick 2 ml fenol röd måltid administreras via en sondmatning nål. Trettio minuter senare djuren snabbt avlivades genom cervikal dislokation. hela magen avlägsnades noggrant efter ligering vid den övre magmunnen och pyloric och sedan magen var öppen och hälldes i ett provrör dess innehåll och tvättas med 40 ml destillerat vatten. Vid slutet av experimentet, var NaOH-lösning (20 ml, 1 M) sattes till varje rör för att utveckla den maximala intensiteten av färg. Absorbansen för provet avlästes vid 560 nm med en spektrofotometer (HITACHI U-2900) var att återspegla den mängd fenolrött kvarvarande i magen. Hastigheten av magtömning beräknades enligt följande formel: Magtömning (%) = 100 x (1 - X /Y), X representerar absorbansen för fenolrött som samlats in från magen hos djuren avlivades 30 min efter testmåltiden. Y representerar absorbansen för fenolrött återhämtat sig från magen av kontrolldjur avlivas omedelbart efter administreringen av testmåltiden.

Western blotting

Färska prov av gastrisk antrum var uppsatt på en Sylgard skålen och varje skiktet friliggande noggrant av skarp dissektion efter avlägsnande av slemhinnan. Med hjälp av fina spetsiga pincett och mikro sax under ett dissektionsmikroskop, var lager av ICC-SM, ICC-IM och ICC-MY erhålls. Alla manipulationer gjordes på isen för att undvika förlust proteinet. Och sedan prover av ICC-SM, ICC-IM och ICC-MY lagrades vid -80 ° C.

Färsk frysta prover krossas till cellsuspensionen och homogeniserades i RIPA-buffert (Upstate, Temecula, CA , USA) med proteas-inhibitor (Sigma Chemical Co., St Louis, MO, USA). Blandningen centrifugerades vid 12000 g under 10 min vid 4 ° C, och supernatanterna uppsamlades som det totala proteinet. Proteinkoncentrationen bestämdes genom Bradford-metoden. Därefter ekvivalenter av 50 mg av extraherade proteiner gradvis separeras genom 10% natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores (SDS-PAGE) och överfördes till PVDF-membran (Millipore, Bedford, MA, USA). Följt blockera icke-specifika bindningsställen med 5% fettfri torrmjölk i Tris-buffrad saltlösning innehållande 0,1% Tween 20 (TBST) vid rumstemperatur under 1 h, fick dessa membran inkuberades med primär antikropp till anti-c-kit (1:200, Santa Cruz Biotechnology, Inc) över natten vid 4 ° C tillsammans med kanin-anti-mus-Actin (1:400, Santa Cruz Biotechnology, Inc) tjänade som den interna kontrollen. Efter tre tvättningar med TBST, membranen inkuberades med HRP-kopplad sekundär antikropp (HRP-länkad kanin-anti-get och HRP-bunden get-anti-mus, 1:5000) under 1 h vid rumstemperatur. Följt med tre tvättar av TBST, var banden visualiserades genom kemisk reaktion med förstärkt kemiluminescens medel (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) och blotten utsattes för autoradiografi. Densitometri analys utfördes av Antal One (Bio-Rad tekniska serviceavdelning, version 4.6.2).

Immunofluorescens studier

För hela montering färgningspreparat, magen öppnades och sköljas flera gånger med PBS. Gastric antrum var fäst till en Sylgard skålen och sträcks till 150% av sin ursprungliga storlek, och sedan fixeras med Zamboni fixativ under 24 timmar vid rumstemperatur. De fixerade vävnaderna tvättades med PBS och sedan slemhinnan avlägsnades genom skarp dissektion. ICC-SM lokalisera vid submukosala ytan av den cirkulära muskelskiktet, ICC-IM sammanblandningen mellan glatta muskelceller och ICC-MY tillsammans med myenteric nerv plexus var noggrant förberedda med fin-spetsiga pincett och mikro sax under ett dissektionsmikroskop.

De immunfärgning förfaranden för detektering av ICC-nät och proliferation har tidigare beskrivits [22]. Ki67, ett nukleärt protein som uttrycks under alla aktiva faser av cellen och försvann i det vilande cellen, har tillämpats för att detektera det proliferativa ICC [23]. Efter tvättning sex gånger med PBS under 1 h, fick vävnaderna inkuberades med 5% normalt bovint serum i PBS innehållande 0,3% Triton X-100 (PBST) under 1 h vid rumstemperatur och inkuberades sedan med primär antikropp c-kit (1:100 , Santa Cruz, CA, USA) och Ki67 (1:100, Abcam, Cambridge, UK) över natten vid 4 ° C. Efter sköljning i PBST under 30 minuter, tillsattes den immunreaktivitet detekteras med användning av Alexa Fluor 594-konjugerad sekundär antikropp (åsne-anti-get-IgG, 1:100) och Alexa Fluor 488-konjugerad sekundär antikropp (åsne-anti-rabit IgG, 1:100) vid 37 ° C under 1 h, följt av sköljning i PBS tre gånger under 30 min och inkuberades med DAPI (0,1 mg /ml; Sigma, St Louis, MO, USA) under 30 min som en nukleär räknare fläck. Sköljdes i PBS två gånger, vävnader var ovikt på en bild. En konfokala laserskanning mikroskop (Nikon, Japan) användes för att undersöka de immunolabeled vävnader. För att inkludera alla nivåer av positivt färgade celler och processer, var den optimala Z stapling av konfokala bilder inställd på 5 pm intervaller.

Apoptos av ICC upptäcktes med TUNEL märkning, en apoptos detekterings Kit (Roche, Tyskland). Hela montering beredningarna inkuberades med primär antikropp c-kit (1:100; Santa Cruz, CA, USA) över natten vid 4 ° C och sekundär antikropp (Alexa Fluor 594 åsna anti-get-IgG, 1:100) vid 37 ° C under 30 min. Enligt en fuktad och mörk omständighet ades vävnaderna inkuberades med TUNEL-reaktionsbuffert (märkning lösning: enzymlösning = 09:01) vid 37 ° C under 1 h. Efter tvättades tre gånger i 30 min för att avlägsna oansluten fluorescein-dUTP och inkuberades med DAPI som en nukleär räknare fläck, proverna observerades under ett konfokalt laserskanningsmikroskop.

Elektronmikroskopi

Efter slemhinna avlägsnades, exemplar av antrum nedsänkt i ett fixativ lösning av 2,5% glutaraldehyd vid 4 ° C under 2 h. Därefter blev de sköljdes med 0,1 M PBS två gånger under 20 min, efterfixerade i 1% OSO _{4 (pH 7,4) under 1 h, dehydrerades med graderad alkohol, klargörs i propylenoxid och inbäddades i Epon använda platta formar. Ultratunna sektioner erhölls med en ultramikrotom (Leica ULTRACUTU, Tyskland), och färgades med blycitrat under 10 min innan visning med ett transmissionselektronmikroskop (Tecnai G ^{212, FEI, Nederländerna).}}

Statistisk analys

för immunofluorescensinfärgning analys, gastrisk antrum från varje försöksdjur provtogs på samma plats i magen. ICC kändes igen av c-kit immunreaktivitet och närvaron av riklig cellulära processer. Prolifererande och apoptotiska ICC identifierades genom c-kit immunreaktivitet och Ki67 /TUNEL färgas kärnan omsluter med c-kit positiv membranstrukturer. Tio slump fält (× 200 förstoring, 0,2607 mm ^{2) per hel-mount förberedelse togs för fotografier av c-kit-positiva celler, c-kit + /Ki67 + och c-kit + /Tunel + märkta celler. Dessa fotografier användes också för att utvärdera tjockleken hos skikten i varje stapel med hjälp av DAPI märkta kärnor som en markör för de övre och nedre gränserna för skikten. Antalet C-kit positiva celler, c-kit /Ki67 och c-kit /TUNEL dubbelt märkta celler räknades med bild ProPlus 5,0 (Media Cybernetics). Alla data uttrycktes som medelvärde ± SEM. Minst tio visioner togs i varje djur. Analys av varians (ANOVA) och Students t-test användes för att jämföra skillnaderna mellan olika grupper. P-värde mindre än 0,05 togs som statistiskt signifikant skillnad.}

Resultat

kroppsvikt och blodglukosnivån

Efter 8 veckor, inträffade dödsolycka i DM-gruppen (två råttor) och i den socioekonomiska grupp (en råtta). Råttorna screenades för samma baslinje kroppsvikt mellan grupperna (tabell 1). I slutet av 1, 4 och 8 veckor, var kroppsvikten hos DM-gruppen betydligt minskat jämfört med kontrollen ( P
= 0,009, 0,000 och 0,000). Det fanns ingen signifikant skillnad mellan den socioekonomiska och DM grupp ( P Hotel > 0,05). Men i motsats till DM gruppen, var kroppsvikten förhöjda i LEA-gruppen vid 8 veckor ( P
< 0,001) och HEA gruppen vid 4 och 8 veckor ( P
= 0,003, P Hotel <. 0,001 separat) katalog

Som framgår av tabell 2, noterades ingen skillnad i baslinjen blodsockernivån mellan grupperna. Diabetiker modeller etablerades framgångsrikt med höga blodglukosnivån i DM gruppen jämfört med kontrollen i slutet av 1, 4 och 8 veckor (alla P Hotel < 0,001). Samtidigt blodsockernivåerna i den socioekonomiska, Lea och HEA grupper inte förändrats nämnvärt jämfört med DM-gruppen (alla P Hotel > 0,05).

Effekter av EA på gastrisk tömning

Fig.1 visade effekterna av EA vid ST36 på magtömning i olika grupper. Den gastriska tömning av DM gruppen var dramatiskt försenas i motsats till kontrollen ( P
= 0,012). Jämfört med DM-gruppen, SEA hade ingen signifikant effekt på magsäckens tömning ( P
= 0,338), men LEA och HEA markant påskyndat fördröjd magtömning från 43,96 ± 5,02% till 69,72 ± 3,02% och 59,06 ± 3,70% ( P Hotel < 0,001 och P
= 0,013, respektive). Jämförelse mellan LEA och HEA grupp, var statistisk signifikans uppnåddes ( P
= 0,04), vilket motsvarar att effekten av LEA uppenbarligen översteg HEA.

Effekter av EA på uttrycket av c fläktar

från fig 2, expressionen av c-kit i varje skikt av magväggen bedömdes. I ICC-IM, c-kit i DM-gruppen var uppenbarligen minskat jämfört med kontrollen (0,47 ± 0,04 mot 0,69 ± 0,05, P
= 0,001). Omvänt, LEA och HEA förbättras dramatiskt uttryck av c-kit jämfört med DM-gruppen (0,65 ± 0,04 mot 0,47 ± 0,04, P
= 0,004; 0,66 ± 0,03 mot 0,47 ± 0,04, P
= 0,002, respektive). I ICC-MY, var expressionen av c-kit avsevärt reducerad i DM gruppen i motsats till kontrollen (0,57 ± 0,04 vs 0,83 ± 0,05, P
< 0,001). Men signifikant skillnad både uppnåtts i LEA och HEA gruppen jämfört med DM-gruppen (0,78 ± 0,05 mot 0,57 ± 0,04, P
= 0,002; 0,76 ± 0,04 & 0,57 ± 0,04, P
= 0,004, respektive). I ICC-SM, var c-kit av DM gruppen uppenbar minskat på grundval av normal nivå (0,56 ± 0,03 vs 0,77 ± 0,04, P
= 0,001). Genomgående, LEA och HEA ökade uppenbarligen ett uttryck av c-kit jämfört med DM-gruppen ( P
= 0,003 och P
= 0,007). Dock ingen signifikant skillnad mellan den socioekonomiska och DM grupp i ICC-IM, ICC-MIN och ICC-SM ( P
= 0,597, P
= 0,853 och P
= 0,172).

Effekter av EA på ICC nätverk

växlingar av ICC nätverk speciellt ICC morfologi och densitet visades i Fig.3. Det fanns ingen signifikant skillnad mellan skikt tjocklek mellan grupperna. Associerad med glatta muskelceller, c-kit immunreaktivitet för ICC-IM observerades i muskelskikten, som visar att ICC-IM hade två polära processer som bildar ett cellulärt nätverk i kontrollgruppen. I DM-gruppen, var de långa processerna för ICC-IM försämras uppenbarligen och tätheten av c-kit positiv cell minskades till ca 50% av normal kontroll ( P Hotel < 0,001). Jämfört med DM-gruppen, var ingen signifikant förändring noteras i den socioekonomiska gruppen. Dock en nästan intakt cellulärt nät visualiseras i LEA och HEA grupp och tätheten av c-kit positiv ICC-IM nästan återställas till den normala nivån (både P Hotel < 0,001, jämfört med DM-gruppen ).

ICC-MY slingrar sig runt de myenteric plexus var belägna mellan längsgående och cirkulära glatta muskelceller skikt. Multipolär ICC-MY med många grenar som bildar en intakt mobilnät tydligt visade i kontrollgruppen. I DM-gruppen, c-kit + celler dök med slanka cellkroppar och brutna processer, och tätheten av ICC-MY var uppenbarligen minskat ( P Hotel < 0,001). I Sea Group, tätheten av ICC-MY förändrades inte signifikant jämfört med DM-gruppen ( P
= 0,762). Men fanns en nästan intakt mobilnät runt myenteric plexus och ICC-MY densitet delvis återhämtat sig i LEA och HEA grupp (båda P Hotel < 0,001, jämfört med DM-gruppen) katalog <. h3> Effekter av EA på apoptos av ICC

apoptos av ICC upptäcktes av TUNEL märkning för att bestämma huruvida apoptos var inblandad i brist på ICC i diabetes (fig 4). Från hela monterade beredningar av kontrollen, var några kärnor av ICC färgas av TUNEL-metoden i muskellagret, myenteric lager och submucosa skiktet. Massor av c-kit + /TUNEL + ICC-IM, ICC-MIN och ICC-SM observerades i DM-gruppen (18,48 ± 1,88 mm ^{-2, 26.51 ± 1,87 mm -2 och 12.03 ± 1,27 mm -2, respektive). C-kit + mobilnät var ofullständiga och apoptotiska ICC presenteras som förkortade processer med färre grenar. Ett stort antal c-kit + /Tunel + celler också strömma in alla skikt av den socioekonomiska gruppen. Under genomförandet av LEA och HEA, var apoptotiska kit + celler knappast finns i ICC-IM (1,79 ± 0,33 mm -2 och 2,05 ± 0,30 mm -2), ICC-MIN (2,24 ± 0,40 mm -2 och 2,48 ± 0,40 mm -2) och ICC-SM (1,09 ± 0,25 mm -2 och 1,39 ± 0,20 mm -2). Mobilnät avslöjas av c-kit immunofärgning visade hög densitet och tjocklek av cellulära processer i LEA och HEA grupp.}

Effekter av EA om spridning av ICC

Med tanke på det ökade antalet ICC i LEA och HEA grupp, var Ki67-positiva ICC upptäckt att avslöja spridningen av ICC i de tre skikten (fig 5). I kontrollgruppen, ett antal c-kit /Ki67 dubbelt märkta celler observerades i ICC-IM (8,82 ± 1,02 mm ^{-2), ICC-MIN (10,64 ± 0,92 mm -2) och ICC -SM (4,67 ± 0,96 mm -2). Antalet ICC med brutna grenar var anmärkningsvärt minskad och nätverken var mycket gles med få celler som förökar sig både i DM och SEA grupp. Emellertid var i LEA och HEA grupp, c-kit /Ki67 dubbel märkta celler i ICC-IM som kännetecknas av tätt intill cellkroppar och relativt bipolära processer och medeldensiteten nådde till 18,37 ± 1,60 mm -2 och 15,27 ± 1.81 mm -2 (båda P Hotel < 0,001). På samma sätt, riklig c-kit + /Ki67 + ICC-MY i LEA och HEA grupp (båda P Hotel < 0,001) bildar intakta nätverk med c-kit + celler utförde en rund cellkroppen och långa slanka processer. I ICC-SM, åtföljd av en intakt nätverk av ICC, tätheten av prolifererande celler i LEA och HEA grupp var relativt högre i motsats till DM grupp ( P
= 0,016 och P
= 0,003).}

Effekter av EA på ultra förändringar av ICC

Typiska ultra egenskaper ICC avslöjades av transmissionselektronmikroskop (figur 6). I kontrollgruppen, ICC-IM och ICC-Min rik väl utvecklade cellorgan förlängas långa processer som innehåller mitokondrier och grov och smidig endoplasmatiska retikulum. Polymorfa ICC-SM ligger vid submukosala ytan av cirkulära muskelskiktet uppvisade högre elektron tät cytoplasma, många mitokondrier och endoplasmatiskt retikulum. I DM-gruppen, var en dramatisk minskning av antalet ICC med skadade ultra funktioner granskas av elektronmikroskopi. Dessa celler med svullen mitokondrier, störde cristaed och kondenserad kromatin visade ofullständig membran och förkorta processer. Dessa förändringar sågs också i den socioekonomiska gruppen. I LEA och HEA grupp, var antalet ICC signifikant ökad och de anslutna tätt med nervfibrer och glatta muskelceller bildar synaptiska struktur och kanalförbindelser. Klar mitokondrier vapen, ordnat fördelade grov endoplasmatiska retiklet och ribosomala partiklar ansågs vara klassiska drag av ICC-IM, IM-MIN och ICC-SM.

Diskussion

I den aktuella studien, vi fann att både låg och hög frekvens EA vid ST36 tryckte apoptos hos ICC och aktiveras proliferationen av ICC i magen hos STZ-inducerade diabetiska råttor. Som ett resultat, var rädda ICC nätverk i samband med ett förhindrande effekt på fördröjd magtömning.

Som ett effektivt förfarande med färre biverkningar, EA kombination med akupunktur och elektrisk ström stimulering i stället för manuella manipulationer gradvis accepteras av Västländer. ST36 är en av de mest använda punkter för att behandla gastrointestinala besvär, med indikationer inklusive: epigastrisk smärta, illamående, kräkningar, dålig aptit och Bukspänning. Samtidigt har vår tidigare studie visade EA på ST36 kan öka kolon drivande rörelse men inte observerats i grupp med EA på icke-akupunkter. Fördröjd magtömning är en vanlig karaktär diabetespatienter med gastro och även en av viktiga faktorer som bidrar till symptom på gastropares. Under de senaste decennierna, experiment i medvetna råttor visade att lågfrekvent EA (10 Hz) betydligt snabbare magtömning [3], [24], [25]. Dessutom, 100 Hz EA var effektivt för att orsaka frigivning av dinorphin och serotonin att inducera analgesi [26]. Även högfrekvent EA (100 Hz) rapporterades också att främja matstrupen och distal kolon motilitet hos djur [7], [8], effekterna av 100 Hz EA på gastrisk motilitet har knappast undersökts. Således parametrar (10 och 100 Hz) EA valdes enligt preliminära experiment som indikerade stimulerande effekt på gastrointestinal motilitet. Våra resultat visade att både lågfrekvent EA (10 Hz) och hög frekvens EA (100 Hz) vid ST36 signifikant förbättrad fördröjd gastrisk tömning i råttor med diabetes, och resultatet visade också att effekten av låg frekvens EA var mer dramatisk än den för hög frekvens EA.

ett flertal studier har visat att ICC spelar en viktig roll i regleringen av gastrisk peristaltiken, en avgörande faktor för magtömning [27], [28]. Som ICC förekommer i olika skikt av gastric antrum i form av nätverk In vivo
, förändringar av ICC nätverk värdefullt att övervägas. Reduktion i antal och morfologiska förändringar av ICC-MY och ICC-IM i magen hos diabetiska möss visades i en tidigare studie [14]. På samma sätt var en markant förlust av ICC-IM och ICC-SM i antrum av STZ-inducerade diabetiska råttor observer men ICC-MY påverkades inte nämnvärt med undantag för en förlust av förbindelser med nervstrukturer [15]. Dessa skillnader i resultaten i dessa två studier troligen i samband med djurarter. Från en studie av 28 patienter med gastropares, var ett reducerat antal ICC finns i den myenteriska plexus av full tjocklek antrala biopsier [29]. Våra resultat visade att ICC-IM, ICC-MIN och ICC-SM i antrum av STZ-inducerade diabetiska råttor dramatiskt minskade baserat på tekniken med western blotting och immunofluorescensfärgning, och vidare den skadade strukturen av ICC visades genom transmissionselektronmikroskop . Lyckligtvis har det rapporterats att lågfrekventa EA förbättrar uttrycket av ICC i kolon av långsam transit förstoppning råttor [17]. Dessutom har vår tidigare studie tydde på att både låg och hög frekvens EA återställer expression av ICC i tjocktarmen hos diabetiska råttor [18]. Men i dessa studier de undersöka förändring av ICC som helhet och effekterna av olika frekvens EA på ICC i magen har inte klarlagts. Således, effekterna av olika frekvens EA på tre subtyper av ICC i magen inklusive ICC-IM, ICC-MIN och ICC-SM stod i fokus för denna studie. Våra resultat visade att uttrycket av ICC i de tre skikten iögonfallande räddades av låg och hög frekvens EA, vilket tyder på att låg och hög frekvens EA renoverade nätverk av ICC-IM, ICC-MIN och ICC-SM och ytterligare kan bidra till en återvunnen magtömning.

det är anmärkningsvärt att balansen i ICC nätverk bestäms huvudsakligen av apoptos och spridning av ICC [11], [12]. Därför var det möjlig mekanism på gastrisk motilitet och effekterna på ICC nätverk av EA på ST36 utforskas genom att detektera förändringar av proliferation och apoptos av ICC. Nyligen har apoptotisk celldöd rapporterats vara en pågående ICC nätverk och nivån av apoptos i frisk kolon indikerar att dessa celler måste kontinuerligt regenereras för att bibehålla intakta nätverk [12]. Dessutom resultat från vuxna marsvin indikerade att intestinal ischemi och reperfusionsskada ledde till minskning av antalet ICC genom apoptos som kan bidra till gastrointestinala motilitetsstörningar [30]. Dessutom en färsk rapport visade att EA terapi reducerade apoptotiska procent av substantia nigra celler i Parkinsons råttor [31]. Den aktuella studien har klart uttalat att apoptotiska ICC detekteras genom Tunel metoder var översvämning i ICC nätverk av diabetisk råtta mage och spekulerade att utarmning av ICC nätverk också kan leda till mag motilitetsstörningar. Men genom ingripande av låg- och högfrekventa EA stimulering Tunel + kärna var knappast att hitta, vilket tyder på apoptos av ICC reducerades till en låg nivå som vanligt.

spridning är också en annan huvudregulator för att upprätthålla nätverk av ICC. Tidigare resultat har visat att spridningen var inblandad i återvinning av ICC när den försvann i vuxna djur [32], [33].

• PLOS ONE: Själv Rapporterade magbesvär i Travellers om Cruise-baserade och landbaserade paket Holidays
• PLOS ONE: Nikotin Dämpar Aktivering av Tissue residenta makrofager i musen magen genom β2 nikotin-acetylkolinreceptorn