PLoS ONE: Ultra Deep sekvenciranje otkriva mikrornk ekspresije ljudskom želucu

Sažetak pregled

Pozadina pregled

Dok mikroRNA (miRNAs) igraju važnu ulogu u diferencijaciji tkiva i održavanje bazalnog fiziologiju, malo se zna o razinama Mirna ekspresije u tkivu želuca. Promjene u Mirne profila može dovesti do stanične deregulacije, koji mogu izazvati neoplazija. Pregled

Metodologija /glavne nalaze

Mali RNK Knjižnica tkivu želuca se slijed, koristeći velike propusnosti čvrstih tehnologije sekvenciranja. Mi smo dobili 261.274 kvaliteta čita sa savršenim utakmice u ljudskom miRnome, a identificirani su 42% poznatih miRNAs. Digitalni Gene Expression profiliranje (DGE) provedena je na temelju brojnosti čitanje i pokazala da je petnaest miRNAs su vrlo izražene u želučanog tkiva. Nakon toga, ekspresija ovih miRNAs potvrđen u 10 zdravih osoba pomoću RT-PCR je pokazao značajan korelaciju 83.97% (p 0,05). Šest miRNAs pokazali su nisku promjenjivi uzorak ekspresije (Mir-29b, Mir-29C, Mir-19b, Mir-31, Mir-148a, Mir-451), te se može smatrati dijelom ekspresije zdrave želučanog tkiva.

Zaključci /Značaj pregled

u radu se željelo provjeriti normalne Mirna profile ljudskog želuca tkiva utvrditi referentnu profil za zdrave pojedince. Određivanje regulatorne procese koji djeluju u želucu će biti važno u borbi protiv raka želuca, koji je drugi vodeći uzrok smrtnosti od raka u svijetu pregled

Izvor:. Ribeiro-dos-Santos, Khayat AS, Silva , Alencar DO, Lobato J, Luz L, et al. (2010) ultra-duboko sekvenciranje otkriva mikrornk ekspresije ljudskom želucu. PLoS ONE 5 (10): e13205. doi: 10,1371 /journal.pone.0013205 pregled

Urednik: Patrick Tan, Duke-National University Singapur Graduate Medical School, Singapur pregled

Primljeno: 30. ožujka 2010. godine; Prihvaćeno: 8. rujna 2010; Objavljeno: 8. listopada 2010 pregled

Copyright: © 2010 Ribeiro-dos-Santos i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Rad je podržan od strane Genoma Paraense de Genomica e Proteomika Project (Governo učiniti Para /SEDECT /FAPESPA), PROPESP /UFPA, FADESP i rtovima (Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de Nivel Superior). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

Nedavno Friedman et al. pregled 2009 je pokazao da je većina ljudskih gena pod kontrolom miRNAs. Pojam gt; 45.000 Mirna ciljna mjesta unutar ljudskih 3'UTR konzerviraju i do 60% od gena ljudskih kodiranje proteina su pod selektivnim pritiskom da zadrži uparivanja do miRNAs [1]. miRNAs su male, nekodirajućih sljedova od 17-25 bp koji reguliraju ekspresiju gena vezanjem na 3 'kraju mRNA ciljnih, što rezultira u inhibiciji translaciju mRNA [2], [3]. Oko 14.000 miRNAs su identificirani u životinja, biljaka i gljiva [4], [5], [6] pregled

mehanizme koji uključuju miRNAs kao negativni regulatori ekspresije gena su slične kod životinja i biljaka. oni reguliraju temeljna stanične procese [6]. Kod ljudi, oko 3% svih gena predviđa se da će se kodirati Mirna prekursora, i preko > 60% gena za kodiranje proteina može se regulirati miRNAs [1]. MiRNAs imaju važne funkcije u mnogim staničnim procesima kao što su rast i razvoj, staničnu proliferaciju, diferencijaciju i apoptozu. Prema tome, promjene u ekspresiji Mirni doprinose ljudskih bolesti kao što je rak [7], [8]. Pregled

Promjene Mirni ekspresijskih obrazaca je primijećeno u velikom broju tipova humanog raka, kao što su rak dojke, debelog crijeva, pluća, prostate, leukemija i želuca. Mirna izraz promjene dovesti do dobitka ili gubitka funkcije, a povezani su s razvojem ljudskog novotvorina putem različitih mehanizama. [5] pregled

Ovdje ćemo predstaviti genetsku studiju Mirne ljudskog želuca, jer bez obzira važnost organa, malo genetski podaci su dostupni na njihovoj prisutnosti i regulacije u ljudi. Ovaj rad je prvi full miRnome sekvencioniranje normalnom tkivu želuca pomoću sljedeće generacije tehnologije sekvenciranja. Pregled

Rezultati

U ovom istraživanju, profili dobiveni su ultra-dubokom sekvenciranje pomoću solidnu platformu ( Život Technologies, CA, SAD). Ovo je prvo istraživanje koje koriste ovaj postupak za opisivanje miRnome normalne želučanog tkiva. miRNAs izolirani su iz normalnih želučane sluznice cardia jednog zdravog pacijenta. Profili su potvrđene pomoću Real Time PCR za određivanje ekspresije 15 najviše visoko izraženim miRNAs u još 10 zdravih pacijenata. Pregled

ULTRA-DEEP sekvencioniranje pregled

Ultra-duboka sekvenciranje dala ukupno 104 milijuna sirove čita i 5 milijuna čita za želučane cardia Mirna knjižnici. Za daljnju analizu, 3,2 milijuna čita odabrani su prema kvaliteti slijed (barem QV≥10 u 10 prvih baza) [8]. Nakon mapiranja ih s ljudskim genomom (oslobađanje 19), ukupna mapirati pročitati broj je 2.534.490 milijuna čita (75% ukupne kvalitete čita). Oko 38% od 2,5 milijuna čita (963.460 čita) su ponavljajuće DNA sljedove, tRNA, rRNA ili druge male molekule; 10% (261.274) su prihvaćeni čita, savršeno usklađen s poznatim zrelim miRNAs (MirBase verzija 15, otpustite 04/2010) [9]; a ostatak od čita (52%) su prilagođeni genoma sekvence (slika 1). pregled

Za analizu ekspresije od miRNAs, samo čita sa šibicama do zrele miRNAs sekvence (261.274 čita) su uključene. U želuca kardija, identificirali smo 404 od 970 poznatih zrele Mirna sekvenci (42%). Za analizu ekspresije miRNAs, definirali smo pet područja: 1 do 10 očitati otkucaje; 11 do 100; 101 do 1000; 1001 do 5000; i pročitao broj od preko 5000 (slika 2) (dodatni detalji su prikazani u tablici S1). Prvi raspon (1-10) čine 40% miRNAs promatranih; drugi raspon (11 do 100) koji se sastoji 26%; treći raspon (101 do 1000) koji se sastoji od 20%; a četvrti i peti rasponi (> 1000 čitanja Brojač) čine 14% pregled

Uz ove klasifikacije, 347 zrele miRNAs su izražene između prvog i trećeg razdoblja i 57 između četvrtog i petog rasponima.. Za karakterizaciju miRnome, odabrali smo skupa 15 miRNAs koja su izraženi na najvišim razinama (≥1,000 čita). Pregled

Tablica 1 i Slika 3 lista u 15 zreli miRNAs u ovim ljudskim želuca kardija , Toplinska karta mjesta slici 4 sažeto izražavanje tih 15 miRNAs u želučanom kardija i preko normalnih ljudskih tkiva, DGE podataka, dostupan u microRNA.org baza podataka [10], [11]. Zreli Mirna izraz može se podijeliti u dvije skupine: a) kardija-tkiva: miRNAs rijetko izraženi u drugim tkivima, ali izražava u želučanoj kardija, uključujući i Mir-148a, Mir-192, Mir-200a i Mir-200b; ii) kvazi-sveprisutni: miRNAs izražena u mnogim tkivima i stanja, uključujući Mir-29c, Mir-21, Mir-24, Mir-29b, Mir-29a, Mir-451, Mir-31, Mir-145, Mir-26a , mir-19b i neka-7b. pregled

PCR u realnom vremenu pregled

ultra-dubokih rezultati sekvenciranja su potvrđene pomoću singleplex PCR u realnom vremenu (RT-PCR) metodom na 15 miRNAs odabranih za odrediti svoj izraz u cardia regiji želuca od 10 zdravih pojedinaca. Od ispitanika, 60% su bili muškarci, prosječna dob bila je 39,1 (± 12,8) godina i 50% ispitivanih predmeta pozitivno na H. pylori pregled, u skladu s međunarodnim kriterijima utvrđenim za njihovu identifikaciju [12], [13] (Tablica 2) (dodatni detalji su prikazani u tablici S2). pregled

COMPARARISON SA DGE i RT-PCR Netlogu

Oba singleplex (RT-PCR) i multipleks (solidnu platformu) tehnologije pokazali visoku ekspresiju (izraz više od 1.000 čita u DGE i 7 puta iznad endogenog kontrole u RT-PCR) od 15 miRNAs (slike 4 i 5) pregled

isti uzorci RNA su analizirani pomoću dvije različite platforme: DGE i RT-PCR - Life Technologies.. Eksperimenti rezultati uspoređeni su i zabilježene su linearne regresije između 2 ^{-ΔCt i kvadratni korijen pročitati broj grofa. Pearson korelacija je visoka 83,9% do statistički značajnog testa (P < 0,05). I potvrđena solidne rezultate pregled}

Osim toga, rezultati DGE su u odnosu na kvantifikaciju rasponu izraz miRNAs u 10 zdravih ispitanika, u realnom vremenu, PCR. Regresijski za prosječno RT-PCR testovima u odnosu na pregled, kvadratni korijen od pročitao broj count. Pearson korelacija je visoka 68,4% do statistički značajnog testa (P < 0,05). Pregled

Može promatrati miRNAs s visokim interindividualne varijacije, za egzempla Mir-21, a drugi s niskim interindividualne varijacije, npr ekspresije malo varijabla (Mir-29b, Mir-29c, Mir-19b, Mir-31, Mir-148a, Mir-451). pregled

Rasprava

miRNAs reguliraju većinu ljudskih gena; Međutim, samo nekoliko miRNAs su imali svoje ciljeve i specifične funkcije identificirati [14]. U našoj studiji, uzorak želuca dobiven iz jednog pojedinca, bez želučane neoplazija ili drugih pre-neoplastičnih stanja kao što su atrofije, metaplazije ili displazije. Prekancerozne lezije, kao što su gastritis, dovesti do genomske hipo-metilacije u želucu koji bi mogao mijenjati izraz uzorak od miRNAs [15]. Je uzorak dobiven iz normalnog tkiva iz pacijenta bez ikakvih patoloških stanja, što je pomoglo da se izbjegne opasnost od prikupljanja normalan uzorak tkiva s mikro invazija ranoj fazi stanica tumora kao što se može dogoditi u bolesnika s bilo kojim od gore navedenih patologija. pregled

Ova studija je prva ultra-visoke propusnosti sekvencioniranje miRNAs u fiziološki normalan ljudski želudac. Samo 5,06% od miRNAs utvrđenih u želučanom tkivu već otkrivena u drugim tkivima i katalogizirana u Bioinformatika bankama podataka, kao što su microRNA.org [10]. Očekujemo da će ova grupa miRNAs biti regulatori domaćih gena, koji su u izobilju u ljudskim tkivima. Još 7.84% od miRNAs imali utakmice u Mirne izraz baze podataka i može predstavljati miRNAs koje su specifične za probavni sustav ili na trbuh. Pregled

Slične studije su provedena s drugim normalnim tkivima, kao što su usta, ždrijela, jednjak, anus i crijeva. Usporedili smo ove podatke s našim Mirna ekspresije podataka definirati izraz uzorak u tkivu želuca. Pronašli smo visoku razinu ekspresije u 15 miRNAs, od kojih je 13 već su prepoznati kao vrlo izraženo u drugim tkivima. pregled

izraz Mir-148a i Mir-192 je identificiran u drugim normalnim i kancerogenih ljudskih tkiva, ali nije bio pretjerano izražen. Mir-192 je već otkriven u gastrointestinalnim tkivima kao što je kolona, ​​ileum, duodenum, tanko crijevo, želudac, gušteraču i jetre [16]. Bazalna izraz Mir-148a uočen u vezivno tkivo i endokrinog tkiva [17]. Nedavno, Mir-148a je utvrđeno da se potisnuti u krvi pupkovine stanica [18] i ušutkao Hipermetilacija u tumora debelog crijeva [19]. Uočili smo visoku ekspresiju Mir-200 klastera (A i B) u želučanom kardija je uočen u Langerhansovih otočića [11]. U mikropolja eksperimentu, Mir-200a i 200b Mir-nađene su na niskim razinama gastrointestinalnih tkivu nego na visokoj razini u debelom crijevu, želuca i pankreasa [16]. Nedavno objavljeno mikrornk izraz Atlas je pokazala da je ova Mirna je karakteristično da endokrinog tkiva [17]. Najnovija istraživanja pokazuju da je nizak izraz Mir-200 clustera je u korelaciji s rakom jajnika [19], [20]. Dakle, Mir-200 klaster može biti važna u održavanju integriteta probavnog tkiva, kao što su želučani cardia jer tako visoka ekspresija regulira prema gore ekspresiju e-kadherina, proteina odgovornog za organizaciju arhitekturi epitelnog tkiva. Osim toga, rezultati snažno sugerirao važnu ulogu obitelji Mir-200 u represiju epitela-mezenhimalne prijelaz (EMT) i progresiju raka [21]. Pregled

Tablica 1 i 2 prikazuju broj mogući ciljevi za svaku visoko izraženom zrelim Mirne. Tablica 2 pokazuje neke ciljeve miRNAs predviđenim TargetScan protiv obitelji zatvorenih miRNAs. S izuzetkom Mir-451, sve dijeli još najmanje dvije mete gena. Geni ANKD52 pregled i UBN2 pregled, su mete deset od četrnaest miRNAs analizirani, dok je gen TNRC6B pregled je od devet miRNAs, i geni EPS15 pregled, NFAT5 pregled, BACH2 pregled, BRWD1 pregled, NUFIP2 pregled, PTEN pregled, CDK6
i PTPRD DD6 pregled, su mete osam Mirne. Ovaj rezultat sugerira da su ti miRNAs su jaki kandidati treba ušutkati u cardia regiji. Eksperimentalna provjera valjanosti tih gena, nakon čega slijedi analiza funkcije svakog od njih može otkriti fiziološku ulogu ovih miRNAs u normalnom želučanog tkiva. Pregled

Mnogi miRNAs može regulirati prijevod proteina koji djeluju u proliferacije tkiva i strukturiranja tkiva kao što su Mir-200A (koji mogu ciljati integrin) i Mir-145 (koji može komunicirati s erbB4 pregled mRNA). Mnogi predviđeni ciljevi mRNA Utvrđeno je da su zajednički za više visoko izraženim miRNAs. Na primjer, HTR4 pregled (5-hidroksitriptamin [serotonina] receptora) i AFF2 pregled mRNA ( AF4 /FMR2 pregled, obitelj, član 2) su predviđeni da budu meta 13 od 15 najviše visoko izraženim miRNAs. Još pet mRNA, uključujući i IGF-1 pregled (inzulinu sličan faktor rasta 1 [somatomedin C]), bili su česti predviđeni ciljevi 12 miRNAs. Osam miRNAs imala 222 predviđene ciljeve u zajedničko; na primjer, Mir-29b je predvidio ciljati 196 od njih. Pet miRNAs (19b, 29a, 29b, 29c i 148a) dijeli 70 predvidio ciljeve, od kojih je ( CDK6 pregled, PTEN pregled, IGF1 pregled, FRS2 neke pregled, PDGFRA pregled, PIK3R1 pregled i MXD1 pregled) reguliraju staničnu proliferaciju i suzbijanje tumora. pregled

Nekoliko zapažanja povezati miRNAs do raka. Prvo, mnoge miRNAs su uključeni u staničnu proliferaciju i apoptozu. Drugo, mnogi Mirna loci se nalazi u krhkim mjesta ljudskog genoma, regije koje se često pojačavaju ili izbrisane u ljudskim neoplazija i uzrokuju velike razlike u Mirni izražavanja u usporedbi s normalnim tkivima [21], [22], [23], [24 ]. pregled

real Time PCR tehnika (koji koristi relativnu kvantifikaciju) potvrdilo 15 miRNAs identificirani kao pokazuje najveću ekspresiju koju solidnu platformu (koja se temelji na apsolutnim brojkama) (slike 4 i 5). Stoga, ovi miRNAs može smatrati overekspresija [25], [26], [27], [28]. Korelacija između DGE i RT-PCR analizi bila je jasna i statistički značajna. A DGE eksperiment može se smatrati reprezentativnim uzorcima tkiva želučani uzoraka izoliranih iz 10 zdravstvenih subjekata te definirati dio ekspresije zdrave želučanog tkiva. Pregled

Rezultati iz obiju metodologija pokazuju da Mirna-21 je najviše visoko izražen u želučanom cardia tkiva. Ovaj Mirna također se distribuira iu drugim ljudskim tkivima (npr, dendritičke stanice, T-stanice, pankreas), a može biti uključen u regulaciju ekspresije domaćih gena ( ATPAF1 pregled, KIF3A pregled, CYBRD1 pregled). pregled

solidnu platformu pokazali da mir-192 i 148a su specifični za želučane tkiva. Osim toga, u stvarnom vremenu PCR potvrdila da su ti miRNAs se pretjerano izražena. Tako, ukupna, ovi miRNAs vjerojatno da regulira ekspresiju gena koji se odnose na homeostazu želuca tkiva. Stoga, niske razine ekspresije ovih miRNAs može biti povezan s razvojem želuca neoplazija. Potencijal korištenje Mirne-192 i Mirna-148a kao markeri rizika u rak želuca može se najbolje istraživan kroz analizu miRnomes različitih histoloških tipova karcinoma želuca. Pregled

Razumijevanje regulatorne procese koji djeluju na čovjeka želudac će biti važno u borbi protiv raka želuca, koji je drugi vodeći uzrok smrtnosti od raka u svijetu. pregled

Materijali i metode

biološkog materijala pregled

želuca kardija je mikroskopski zona koja se normalno nalazi u većini proksimalni dio želuca, u neposrednoj blizini jednjaka otvora (srčani otvora ili cardia) i sadrži srčane žlijezde. Naš uzorak svježeg tkiva za ultra dubokom sekvenciranje je dobiven od gastroscopic biopsije (~ 4 mm ^{3). Pacijent je bio 33 godina, bez ikakvog dokaza raka i normalne gastroezofagealnog spoja. Makroskopski promatranje tkiva pokazala je da nema dokaza o lezije, a histološki pregled potvrdio normalne i zdrave uvjete. Pregled}

Kako bi potvrdili rezultate ultra-dubokom sekvenciranje, uzoraka kardija blizu srčanog otvora, od 10. Osim toga, zdravi pojedinci i dobiveni endoskopske biopsije (~ 4 mm ^{3), te nakon histološki pregled osim abnormalnosti su analizirane pomoću 'real time PCR. H. pylori pregled infekcija dijagnosticira na osnovu tipičnim izgled bakterije uz sluzi sloj pokriva želučanu sluznicu antralne biopsije su uzeti za procjenu histologiju zbog veće gustoće bakterija u želučanom antrumu i izvrsnu osjetljivosti ovog dijagnostičkom postupku prema međunarodnim kriterijima utvrđenim za njihovu identifikaciju [12], [13] (dodatni detalji su prikazani u tablici S2). pregled}

ETIKA IZJAVA pregled

Pismeni informirani pristanak koji je dobiven od svih bolesnika, a studija je odobren od strane Europskog odbora de Ética em Pesquisa (CEP) iz bolnice Universitario João Barros Barreto (HUJBB.) - Federal University Pará (UFPA) (broj protokola 14.052.004 /HUJBB) pregled

Mirna KNJIŽNICA pregled

ukupna RNA mala je dobivena iz uzorka tkiva pomoću mirVana izolacijski kit (Ambion Inc., SAD). Koncentracija i kvaliteta određene su korištenjem Nanodrop 1000 spektrofotometar i pročišćavanje i izbor veličina su izvedena primjenom 6% elektroforezom na poliakrilamidnom gelu. Korištenje čvrstih malih RNA Expression Kit (Ambion Inc., SAD), 200 ng male RNA 150-200 bp korišteni su kao predložak za dobivanje Mirna knjižnicu. Svi miRNAs u knjižnici označene su s jedinstvenim i specifičnim primer amplifikacije, poznat kao barkod sustav (Life Technologies, CA, SAD). Zatim, 50 pg knjižnice je spojeno sa sedam Mirni knjižnica u istoj koncentraciji. Tek kao dio knjižnice bazen (0,1 pg) je pojačan i fiksni na magnetske kuglice koriste emulziju PCR. EPCR proizvod je pohranjena na jednom slajdu i podvrgnuti multipleks Solid sekvenciranja reakcije. Pregled

Solid ULTRA-DEEP sekvenciranje i analiza podataka pregled

Solid (verzija 2.0) sekvenciranje sustav (Life Technologies) se koristi za generiranje navodi da su 35 bp dugo. Drugi korak je da dekodira barkod, podudaranje svaki perla slijed s identitetu uzorka. Svi mali RNA sekvence želuca kardija su dostupni na NCBI sljedova Pročitajte arhiva (SRA012099). Sekvenca analiza izvedena je pomoću Krutina sustava malih RNA analiza alata (Life Technologies) i MiRanalyzer [8]. Prvo, filtrira smo sve sekvence koje se podudaraju s RNK zagađivala kao što tRNA, rRNA, DNK se ponavlja i molekula adapter. Nakon isključivanja contaminant čita, usklađeni smo sve sekvence protiv Mirne prekursora sekvenci (MirBase ver. 12) i onda samo uključivao čita koji se podudaraju zrela Mirna sekvence [9]. Za usporedbu tih izraz podatke s onima iz drugih ljudskih tkiva, Mirna izraz podaci su uvezeni iz microRNA.org baze podataka, a izraz svake zrele Mirna se normalizira ukupnog broja čitanje [10]. Grafička analiza je provedena pomoću Genepattern ^{10. Procesni odnosi Mirna-biološko su predvidjeti pomoću miRNApath (http://lgmb.fmrp.usp.br/mirnapath/tools.php~~HEAD=dobj).}

Mirna PCR u realnom vremenu (validacija)

biopsija uzorci želuca kardija tkiva su prikupljeni od 10 zdravih pacijenata. Nakon prikupljanja, uzorci su odmah obraditi i pohranjeni na -80 ° C do ekstrakciju RNK. Ukupna RNA je ekstrahirana homogeniziranje 40 miligrama smrznutog tkiva, zatim izolaciju RNA Trizol reagens (Life Technologies) u skladu s uputama proizvođača. Koncentracija i kvaliteta miRNAs određene su korištenjem Nanodrop 1000 spektrofotometra (ND-1000, Nanodrop Technologies, Wilmington, DE). Ukupna RNA je reverzno transkribira uz pomoć TaqMan @ mikrornk reverzne transkripcije kompletu (Life Technologies). Pregled

Analiza razine miRNAs je provedeno na 7500 Real-Time PCR System (Life Technologies) s TaqMan Mirna testovi u skladu s uputama proizvođača (Life Technologies) uz korištenje primara koji Primer Express (Life Technologies). Razina znači izraz triju ljudskih endogenih kontrole (Z30, RNU19 i RNU6B - kalibratora). Korištena je kao interna kontrola u svim Mirna pokusa kako bi se omogućilo za usporedbu rezultata ekspresije pregled

Visoke razine ekspresije miRNAs identificirati iznimno dubokog sekvenciranje (u silaznom redoslijedu: Mir-29C, Mir-21, Mir-148a, Mir-29a, Mir-24, Mir-29b, Mir-192, Mir-451, Mir-145, Mir-31, mir-200a, mir-19b, mir-200b, neka-7b i mir-26a) su potvrđene s TaqMan Mirna testovima (Life Technologies). Te analize su korišteni za mjerenje razine ekspresije zrelih miRNAs i inter-individualne varijacije u 10 uzoraka zdrave cardia tkiva. Ekspresijski podaci svake zrelih Mirni su normalizirane prema srednjoj vrijednosti ekspresije razini tri ljudske endogeni kontrole (Z30, RNU19 i RNU6B). Relativna razina ekspresije Mirna Zatim su izračunate su metodom komparativne prag ciklusa (Ct) (2 ^{-ΔCt). Korelacija je ispitivanje primjene Pearson metodu (SPSS v.12). Pregled}

popratne podatke pregled Tablica S1. pregled Identitet i obiljem podataka za sve poznate miRNAs u krutom slijed naziv u ljudskom želucu i miRamda bazi pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0013205.s001 pregled (0.44 MB PDF) pregled Tablica S2. pregled Opis i rezultati RT-PCR od 10 uzoraka od zdravih osoba dobivenih endoskopske biopsije. Uzorci veličina je oko ~ 4 mm3. Za sve uzorke su izveli histološki pregled i H. pylori otkrivanje pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0013205.s002 pregled (0.03 MB XLS) pregled

Izvori pregled

Autori hvala D. Calcagno i S. Demaschki za svoje komentare, ideje i pomaže. pregled

• PLoS ONE: Put do Mans srca je kroz njegov želudac: Što o konjima
• PLoS ONE: Utjecaj energetsko piće o strukturi želuca i gušterače albino štakora: Može li Omega-3 Dati zaštite