Metallothionein 2A bremst NF-κB Passerelle Aktivéierung an enger renomméierter däitscher Zeitung Medeziner Resultat mat TNM Bühn gefall an gastric Kriibs Patienten folgenden radikal resection

Metallothionein 2A bremst NF-κB Passerelle Aktivéierung an enger renomméierter däitscher Zeitung Medeziner Resultat mat TNM Bühn gefall an gastric Kriibs Patienten folgenden radikal resection VerfÜgung méiglech VerfÜgung Background VerfÜgung Metallothionein 2A (MT2A) als Stress FAQ, spillt eng Schutz- Roll an gastric mucosal Barrière. Hir Roll an der Entwécklung vun gastric Kriibs (GC) ass kloer. De Mechanismus vun MT2A wäert zu gastric tumorigenesis propagéieren ginn. VerfÜgung Method VerfÜgung MT2A Ausdrock war zu 973 gastric uplanzen fonnt. Der biologescher Funktioun gouf duerch ectopic ausdrécken MT2A sech kënschtlech VerfÜgung an VIVO VerfÜgung. Déi méiglech afgerappt effectors vun MT2A sech zu NF-κB sécher ze propagéieren. D'FAQ Niveau vun MT2A, IκB-α an p-IκB-α (ser32 /36) Ausdrock sech zu engem Ziel vun 258 Patienten vun IHC staining analyséiert. D'prognostic Auswierkunge vun MT2A, Status vun IκB-α an TNM Bühn waren mat der Kaplan-Meier Method évaluéiert an Verglach der Läschlëscht-Platz Test mat. VerfÜgung Resultater VerfÜgung MT2A Ausdrock Ofgeholl war zu Zell Linnen an alleréischter erhéijen Réckstänn vu GC. An Medeziner Donnéeën, Verloscht vun MT2A (MT2A + zu Normal (n = 171, 76,0%); Intestinal metaplasia (n = 118, 50,8%); GC (n = 684. 22,4%, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001)) verbonne war mat aarmséileg hätt (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), fortgeschratt TNM Etapp (P VerfÜgung = 0,05), an Ugrëff-Regulatioun vun IκB-α Ausdrock (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Doriwwer eraus, war MT2A der onofhängeg prognostic Ënnerschrëft gefall vun de Status vun IκB-α an agebousst Fonctiounen. Zousätzlech, inhibited MT2A Zell Wuesstem duerch apoptosis an G2 /M verhaften, deen an-Regulatioun vun IκB-α an Ugrëff-Regulatioun vun Ausdrock p-IκB-α an cyclin D1 negatif duerch NF-κB Passerelle reegelen. VerfÜgung Konklusiounen
MT2A vläicht e entholl suppressive Aktivitéit duerch inhibiting NF-κB sécher spillen a vläicht e prognostic uweist a Potential Zil fir eenzel Therapie vun GC Patienten. VerfÜgung Schlësselwieder VerfÜgung Metallothionein 2A NF-κB Gastric Kriibs hätt TNM Etapp Background sécher VerfÜgung Wat vun Metallothionein 2A (MT2A) geet op den gastric mucosal Barrière nei VerfÜgung Iwwerfloss huet, mä seng Roll an de Werdegang vun gastric Kriibs (GC) ass nach onkloer. An dëser Analyse vun 171 normal gastric Stoffer, 118 intestinal metaplasia, an 684 Primärschoul gastric Cancers, ofgeholl MT2A vill mat aarmséileg hätt soll war. Et inhibited d'Prolifératioun vu GC Zellen duerch NF-κB sécher inactivation. Dës Resultater weisen, datt MT2A kann eng wichteg prognostic Bewaacher geflitzt an therapeutesch Zil fir GC gin. VerfÜgung Gastric Kriibs (GC) ass déi allgemeng festgestallte malignancy a bleift e wichtege Belaaschtung vun Kriibs an Asien, virun allem an China [1, 2]. Déi meescht GC Patienten Agrëff amgaang si schonn um Diplôme Etapp an de 5-Joer Survival ass variéiert. Rei hunn histological Faktoren gemellt ginn prognostic Faktoren vun GC gin, dorënner entholl Gréisst, DÉI Klassifikatioun, entholl-Node-Metastasen (TNM) Etapp System, an dat mannerwäerteg [3, 4]. Allerdéngs hätt vun GC Patienten op der selwechter Etapp nach onkompatibel ass [5]. Dofir, Identifikatioun vun spezifesch diagnostic lues an therapeutesch Zil wier verléisslech Cepheid, effektiv Extensioun vun Thes Iwwerliewe an Liewensqualitéit vun Patienten [6] erlaben. VerfÜgung bewosst Stress eng Roll an der molekulare Regulatioun vun carcinogenesis zu Leeschtung gewisen gouf [7, 8]. Metallothioneins (MTs) wéi de Stress Proteinen mat niddereg molekulare Gewiicht a räich-cysteine ​​hunn d'Fähegkeet vun engem héije Affinitéit fir Metal Protonen an Ros scavengers. MT2A den Haaptgrond isoform vun MTs spillt eng wichteg Roll an gastric mucosal Barrière zu Patiente mat gastritis an Knabberdéieren Modeller [9, 10]. Pre-Administratioun vun exogenous MT2A oder Pre-Aféierungs- vun endogenous MT2A kann Mo a Liewer géint Stress-entschlof Schued schützen an der Opstellung vu Stress-entschlof Lipid Hem inhibit, eng Schutz- Effet vun MT2A op Stress-entschlof pathogenesis an e Potential therapeutesch Zil- zousätzlech fir fréi Préventioun applizéiert [11] - [13]. Kuerzem, spillt MT2A eng wichteg Roll an tumorigenesis an Werdegang vun Multiple carcinomas dorënner GC [14]. De Mais Verloscht vun MT2A Gentherapie zu festneele wellen diethylnitrosamine-entschlof hepatocarcinogenesis vun NF-κB Zil- Genen activating, wat beweist, datt MT2A Mais aus hepatocarcinogen-entschlof Liewer Schued a carcinogenesis schützt, potenziellen therapeutesch Applikatioun géint hepatocellular Kriibs underscoring [15]. Verschidde Studie do op d'Roll vun MT2A an de Schutz géint H.pylori VerfÜgung -induced gastric blesséiert benotzt MT-automatesch Mais. Himeno, S. entdeckt datt Aktivatioun vun NF-κB an Ausdrock vun NF-κB-mediated chemokines zu gastric Zellen sech Ofstand héich zu MT2A-automatesch Mais wéi an breet-Typ Mais [9]. Dës Donnéeë musse MT2A negativ Kontroll vun der Transkriptiouns Faktor NF-κB Aktivitéit wéisst, mee seng Roll an gastric carcinogenesis ass nach net eendäideg [16] -. [18] zu Aberrant Aktivatioun vun NF-κB ass mat Zell inflammation assoziéiert, malignancy , an entholl Werdegang [7, 19]. Déi funktionell Aktivitéit vun NF-κB ass inhibited fir seng inhibitor duerch bindend, IκB-α. Aktivatioun vun NF-κB ass Schoss aus proteasome-mediated ofgeschnidden vun IκB-α vun phosphorylation vun der inhibitor (p-IκB-α), wat drop hindeit, datt NF-κB Passerelle e Potential Zil fir eenzel Therapie ass [20] - [23] . Verschidde Reproche uginn VerfÜgung datt MT2A Ausdrock fräi ass wichteg fir Kriibs Werdegang, an MT2A ass am Ufank als proto-oncogene an Broscht, esophageal, Aarbecht, an spillt Cancers, verbonne mat malignancy an aarme hätt [24] proposéiert - [27 ]. Am Géigesaz, ass et verwandelt-reglementéiert gastrointestinal erhéijen an hepatocellular carcinomas, wou MT2A entweder ass inversely zu veruerteelt soll oder stinn [28, 29]. Allerdéngs, d'Variant vun MT2A a seng Krankheete Evaluatioun bleift widderspréchlech zu GC [28, 30, 31]. Dës Resultater hindeit, datt dysregulation vun MT2A ass zu entholl pathogenesis Équipe, obwuel de exakt Roll nach onkloer am GC ass. VerfÜgung schaafe mir do d'Co-Ausdrock vun MT2A an IκB-α Gentherapie mat Medeziner agebousst Fonctiounen a Resultater soll opgedeckt zu engem groussen Skala vun gastric erhéijen mat langfristeg Suivi Daten. Ausserdeem, analyséiert mir systematesch d'Roll vun MT2A als Stress FAQ an negativ regulator zu NF-κB Aktivéierung seng biologesch Roll an molekulare Mechanismus kënschtlech VerfÜgung an VIVO VerfÜgung zu Markenzeeche. VerfÜgung Method VerfÜgung Patienten- Beméien VerfÜgung Gastric entholl Echantillon vun 684 GC Patienten op Peking Cancer Spidol a vun 1997 bis 2007 behandelt goufen évaluéieren. D'Patienten abegraff 513 Männer (75.0%) an 171 Fraen (25.0%) mat enger Moyenne Alter bei Diagnos vun 54 Joer (Rei, 19 bis 81 Joer). De Suivi Period gounge vun 1 bis 127,2 Méint (Steiren, 34,2 Méint). All Patienten mécht radikal resection mat curative beduecht. Keen vun de Patienten hu neoadjuvant Chimiotherapie oder Bestrahlung virewech ze gesin kritt. Der Inclusioun Critèrë vun all de Patiente ass: (e) eng ënnerschiddlech GC Diagnos baséiert op de sechsten Editioun vun der entholl-Node-Metastasen (TNM) Klassifikatioun vun der International Union géint GC, (b) eng radikal resection, (c) gëeegent formalin fix, paraffin Ënnerbewosstsinn Stoffer. Den Total vun 684 GCs haten d'clinicopathological Donnéeën (Limburg als "Kohort '). Desweideren, eng Formatioun vun 258 beliwwert Echantillon waren aus der Kohort mat 10-Joer Suivi Donnéeën (Limburg als "Ziel") gesammelt. D'Medeziner Resultat vun de Patienten war aus dem Datum vun Agrëff an den Datum vum Doud opgeholl. Zousätzlech, 118 intestinal metaplasia (IM) an 171 normal gastric Stoffer goufen aus dëse GC Patienten gesammelt. Histological Evaluatioun war vun dräi Profiséquipe pathologists gesuergt. D'demopraphischen Zesummenbroch vun der Kohort an Ziel ass 1. Nieft zu Zousätzlecht Table opgezielt, 36. vläit gastric erhéijen mat bascht normal Stoffer zu engem Pudder ënner flëssegem Stéckstoff fir RT-Hinnen alleguer an Real-Time Hinnen alleguer vun MT isoforms (Zousätzleche file1) Terrain war. Table 1 Logistic Réckgang Analyse vun clinicopathological Fonctiounen an hätt am GC VerfÜgung Variates
Nr vun de Fäll (n = 258)
traureg Zäit (Mount)
P VerfÜgung -value
Sex VerfÜgung Männlech VerfÜgung 186
66,4 ± 4.6 VerfÜgung Weiblech VerfÜgung 72 VerfÜgung 54,1 ± 4,8 VerfÜgung 0,604 VerfÜgung Alter bei Diagnos VerfÜgung &Si besteet; 60 VerfÜgung 173 VerfÜgung 65,0 ± 4,9 VerfÜgung ≥60
85 VerfÜgung 59,2 ± 5,6 VerfÜgung 0,867 VerfÜgung TNM Etapp VerfÜgung ech VerfÜgung 34 VerfÜgung 105,5 ± 7,7 VerfÜgung ech vs. IV VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung II VerfÜgung 57 VerfÜgung 74,0 ± 5.9 VerfÜgung II vs. IV VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung III VerfÜgung 115 VerfÜgung 49,1 ± 3,4 VerfÜgung III vs. IV 0,010 VerfÜgung IV VerfÜgung 35,8 ± 4,1 VerfÜgung entholl Déift VerfÜgung pT1 13 VerfÜgung 87,2 ± 9,9 VerfÜgung pT1 vs. pT4 VerfÜgung 0,005 VerfÜgung pT2 VerfÜgung 50 VerfÜgung 89,1 ± 9,1 VerfÜgung pT2 vs. pT4 VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung pT3 VerfÜgung 157 VerfÜgung 49,1 ± 2,9 VerfÜgung pT3 vs. pT4 VerfÜgung 0,159 VerfÜgung 38 VerfÜgung 40,1 ± 5.3 VerfÜgung Lymph Node Status VerfÜgung pN0 VerfÜgung pT4 VerfÜgung 78 VerfÜgung 89,8 ± 6.2 VerfÜgung pN0 vs. pN3 VerfÜgung 0,001 VerfÜgung pN1 VerfÜgung 115 VerfÜgung 50,5 ± 3,4 VerfÜgung pN1 vs. pN3 VerfÜgung 0,212 VerfÜgung pN2 VerfÜgung 49 VerfÜgung 46,6 ± 6.0 VerfÜgung pN2 vs. pN3 VerfÜgung 0,326 VerfÜgung pN3 VerfÜgung 16 VerfÜgung 47,5 ± 12,6 VerfÜgung wäit Metastasen VerfÜgung pM0 VerfÜgung 232
67,5 ± 4,3 VerfÜgung pM1 VerfÜgung 26 VerfÜgung 27,6 ± 5.8 VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung studéiert dat VerfÜgung D1 VerfÜgung 54 VerfÜgung 76,0 ± 6.0 VerfÜgung D0 VerfÜgung 204 VerfÜgung 59,8 ± 4,4 VerfÜgung 0,011 VerfÜgung MT2A Ausdrock VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung niddereg VerfÜgung 202 VerfÜgung 53,9 ± 3,4 VerfÜgung héich VerfÜgung 56 VerfÜgung 86,9 ± 9,2 VerfÜgung IκB-α Ausdrock VerfÜgung niddereg VerfÜgung 164 VerfÜgung 61,6 ± 4,9 VerfÜgung héich VerfÜgung 94 VerfÜgung 64,9 ± 5.1 VerfÜgung 0,248 VerfÜgung p-IκB-α Ausdrock VerfÜgung niddereg VerfÜgung 126 VerfÜgung 74,1 ± 5.3 VerfÜgung héich VerfÜgung 132
47,7 ± 3,4 VerfÜgung 0,005 VerfÜgung M0: kee wäit Metastasen; M1: fernen Metastasen; VerfÜgung D1: gutt /mëttelméisseg-ënnerscheet GCs; D0: Pro-ënnerscheet GCs VerfÜgung Immunohistochemical Analyse VerfÜgung IHC staining an Otemschwieregkeeten Partie war mat MT2A antibody gesuergt. (1: 100 dilution; 18-0133, Invitrogen, CA, US), p-IκB-α antibody (1 : 200 dilution; ab47752, Abcam, Cambridge, UK), IκB-α antibody (1: 300 dilution; sc-371, Santa Cruz Déi, CA). Fir all uweist, ware Biller visuell vun dräi pathologists Faarwen, déi an de Medeziner Resultat blinded goufen. Vigel sech duerch Konsens geléist. Dotëschend sech als Prozentsaz vun positive staining bannent all losen zougewisen. Déi heeschen Prozentsaz Wäert vun zwou Placken war berechent ee entholl (Zousätzleche file1) ze vertrieden. VerfÜgung Zell Linnen Gastric Kriibs Zell Linnen BGC823, MGC803 VerfÜgung, SGC7901 an PAMC82 waren an China gegrënnt a vum Otemschwieregkeeten Bank vun Shanghai kaaft (Shanghai, China). Besonnesch, Schatzkummer BGC823 Zellen héich tumorigenecity. MKN45, AGS, N87, wäerte souwisou-1, wäerte souwisou-48, SNU-1, SNU-5 an SNU-16 Zell Strecken aus ATCC (American Type Kultur Collection, Manassas, US) kaaft. GES-1, en och mënschlech gastric epithelial Zell Linn, war vun SV40 Haren transfection op Peking Cancer Hospital generéiert an cultured zu DMEM mëttelfristeg mat 10% An et Bovine serum nà (Gibco, Life Technologien, Grand Island, NY, USA) op 37 ° C an engem humidified Atmosphär mat 5% CO 2 [32]. VerfÜgung MTT a mëll Agar assay VerfÜgung déi Zellen an 96-gutt Kultur Placke rakommen waren, an MTT war fir d'Zellen am 1-5 dobäi Deeg. MTT (5 μg /ml) war no 4 h incubation geläscht, an dann war Police sulfoxide (DMSO) ugebaut der formazan Produit ze solubilize. D'saugfäheg bei 490 nm /570 nm huet vun engem microplate Lieser (Bio-rad680 Elisa) assayed. Zellen sech dann fir 4 Wochen incubated, Kierchefënster mat kruzial tetrazolium Hoerfaarw INT (piodonitrotetrazolium, Invitrogen) d'Presenz oder Feele vun liewensfäeg Zell Kolonien ze Dokument. Déi mëll Agar war mat 100 μl methanol-acetic Seier fest. (3: 1 vol /vol) an Kolonien huet gezielt VerfÜgung Tumorigenicity assay VerfÜgung BGC823 Zellen (5 × 10 5 an 0.1 ml PBS suspendéiert Zellen) subcutaneously an den däischtere Säit vun fënnef heijen 4-Woch-al weiblech Balb /C Sauna Mais (MT2A-Ausdrock clones op der rietser a Vecteure Kontroll clones transfected mat MT2A iwwer-ausgedréckt Vecteure oder eidel Vecteure sech op der rietser. entholl Duerchmiesser gemooss an all 5 Deeg dokumentéiert entholl Volumen berechent gouf no der Formel ab 2/2 (e > b)... um Enn vu 25 Deeg, all Mais sech geaffert an der entholl Volumen war gemooss Dräi onofhängeg Experiment standing an huet de ähnleche Resultater. d'Déiere waren an Ariichtungen, déi vun der Associatioun fir Foussgänger a Kierper vun schafft Déieren Care am Aklang mat der aktueller Reglementer an international Standarden. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung χ VerfÜgung guttgeheescht haten 2 Test Statistiken an Student d't VerfÜgung Azeton sech benotzt pretreatment Charakteristiken vun Patient Fäll ze vergläichen. De Kriibs-Zesummenhang Iwwerliewe war mat der Kaplan-Meier Method analyséiert a Verglach Log-Platz Tester mat. D'Spearman Geleeënheet Test an genau Test d'Fisher sech clinicopathological kennenzeléieren vermëttelt applizéiert. A Cox proportional iwwerschloen Réckgang Modell war mat verbonne 95% Vertraue Intervalle (Direktiven ugeet) an P VerfÜgung Wäerter benotzt. All Statistik Tester goufen zwee-eesäitegen, an P VerfÜgung Wäerter vu manner wéi 0,05 waren statistesch relevant considéréiert. Statistesch Analyse gouf mat der Statistik Pak SPSS (Version 16,0; SPSS INC, Chicago, IL) gesuergt. Averstaane VerfÜgung Sécuritéit VerfÜgung All Déier Studie vun der Ethik Comité vun Korea University Cancer Hospital guttgeheescht huet. D'Benotze vu mënschlechen Stoffer a Krankheete Donnéeën war den Aménagement vun der Klinik no a vun der lokaler ethneschen Comité ofgeseent. VerfÜgung Resultater VerfÜgung MT2A Ausdrock Ofgeholl ass eng molekulare Event zu Zell Linnen an alleréischter erhéijen vun GC VerfÜgung Expression vun MT2A war vun RT-Hinnen alleguer a Western blot an engem Rot vu GC Zell Linnen an GES1, deen fiert als "normal Kontroll" bewäert. Als zu Dorënner 1A gewisen, variéiert MT2A mRNA méi mat den héchsten Niveau vun GES1. Keng oder erofgoen vun MT2A Ausdrock war zu BGC823, MGC803, SGC7901, AGS, SNU-1, SNU-5, SNU-16, wäerte souwisou-1, wäerte souwisou-48 an N87 Zellen observéiert. D'FAQ Niveau vun MT2A Ausdrock gouf weider vun der gemeinsamer-benotzt sechs fonnt GC Zell Linnen (BGC823, MGC803, SGC7901, AGS, N87, an MKN45) am Verglach mat GES1. Western blot Analyse gewisen, datt, an de sechs Toast benotzt GC Zell Linnen, d'Niveaue vun MT2A Ausdrock sech feelen oder niddereg am Verglach mat GES1, konsequent mat mRNA Ausdrock fonnt uewen (Dorënner 1B). Besonnesch, BGC823, MGC803 an SGC7901 Zellen mat opgepasst MT2A Ausdrock Collectioun héich tumorigenecity an Sauna Mais. Figur 1 feelen oder ofgeholl Ausdrock vun MT2A ass zu Zell Linnen an alleréischter erhéijen vun GC fonnt. A, war MT2A mRNA Niveau vun RT-Hinnen alleguer am GC Zell Linnen an déi normal onstierwlechen Zell Linn-GES1 gemooss. An semi-quantification analyséiert goufen mat Imagetool 3.0 gro Skala Scannen Software gesuergt (normalized zu β-actin Niveau). D'Experiment war zu triplicate gemaach. B, MT2A FAQ Niveau war vun Western blot Analyse vun GC Zell Linnen an déi normal onstierwlechen Zell Linn-GES1 alles. D'MT2A FAQ Bands si gescannt (normalized zu β-actin Niveau). C, D Ënnerscheed Ausdrock vun MT2A mRNA ët zu 36 vläit GC Stoffer an bascht normal Stoffer. D'MT2A mRNA Bands si gescannt (normalized zu β-actin Niveau). D, MT2A FAQ Niveau waren an der 36. vläit GC Stoffer déi Western blotting fonnt. D'MT2A FAQ Bands si gescannt (normalized zu β-actin Niveau). E, Ofgeholl MT2A war während gastric malignant Transformatioun observéiert. (En) enorm staining vun MT2A zu normal Stoffer, (b) moderéiert staining vun MT2A zu IM Stoffer, (c) schwaach staining vun MT2A zu mëttelméisseg ënnerscheet Primärschoul gastric Cancers an (d) negativ Ausdrock vun MT2A zu kaum ënnerscheet GCs (Original Vergréisserung × 400). (D) am Verglach mat den normalen an precancerous lesions-IM Echantillonen, reduzéiert MT2A war eng gemeinsam molekulare Event zu gastric carcinogenesis (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) F: Ënnerscheed Ausdrock vun MT2A am GC, IM an normal Stoffer vun IHC staining. Negativ: 0; Schwaach: stoung 1-4; Staark: stoung et 5-12. Fir Detailer, déi Weider file1 gesinn. VerfÜgung 36 Primärschoul erhéijen vun GC mat bascht normal Stoffer goufen och zu kengem 1c a D iwwerpréift, d'Resultater vum GC Zell Linnen ofgeleet ze confirméieren, ofgeholl MT2A mRNA zu GCs ugewisen ass am Verglach mat deem vun iwwereneestëmmen normal Kontrollen (27/36, 75,0%, P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 1c). Low Ausdrock vun MT2A FAQ war zu 29 aus 36 GC Fäll (80.6%) am Verglach mat de reagéiert normal Stoffer fonnt (P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, well 1D). D'mRNA Niveau vun MT2A war fir d'FAQ Niveau vun Western blot (R = 0,510, P VerfÜgung = 0.009) festgestallt soll. An Mënschen, sinn d'MTs vun enger Famill vu Genen aus 10 funktionell MT isoforms an der encoded Proteinen Han ënnerdeelt véier Gruppen, MT1, MT2, MT3, an MT4 Proteinen encoded. Zënter der coding Regioune vun MT isoforms héich an ët an FAQ Niveauen conserved sinn, ass MT2A héich homologous mat MT1G, MT1E an MT1F (Zousätzleche Fichier 1: Dorënner S1B). Dofir, Experimenter op all eenzelne isoform virsiichteg gehaal ginn fir ze garantéieren datt genau isoform analyséiert gëtt. An dëser Etude, Ënnerscheed Ausdrock vun MT1 gët war am GC Zell Linnen an alleréischter erhéijen vun GC mat bascht normal Kontrollen (n = 36) (Zousätzleche Fichier 1: Sauerdall S1A an S2) observéiert. Mir versoen tatsächlech MT2A Gentherapie verwandelt-Regulatioun am GC vill Verglach mat bascht normal Stoffer (27/36, 75%, Dorënner 1c). Et war keen Ënnerscheed vun MT1E an MT1F an MT1G mRNA ungen zu normal an entholl Echantillon souwéi MT1B mRNA ët war net Magnéitfeld an all Zellen an Stoffer (Zousätzleche Fichier 1: Sauerdall S1A an S2). VerfÜgung d'Kandidatur vum Fir ermëttelen MT2A zu gastric tumorigenesis, mir charakteriséiert Ufank de Status vun MT2A Ausdrock vun 171 normal Stoffer, 118 IM an 684 GC Echantillon vun IHC staining. D'antibody fir MT2A (E9 18-0133, Invitrogen) ass just net spezifesch fir MT-2A, an Kräiz-reagéiert mat MT-1 zu engem gewësse Mooss, och wann et déi voll Längt vun MT2A gekloonten ass. Well et keng spezifesch antibody ass MT2A ze entdecken, sou benotzen mir déi gemeinsam kommerziell antibody fir IHC staining déi am meeschte wëssenschaftlech Studie publizéiert gouf, ass MT2A Ausdrock wéi héich an héich Ausdrock zu normal krut Stoffer, IM, an alleréischter GCs klassifizéiert. Haut Niveau vun MT2A Ausdrock war zu 153 vun 684 (22.4%) GC Fäll, an 60 vun 118 (50.8%) IM Fäll, souwéi 130 vun 171 (76.0%) normal krut Fäll, bzw. (Zousätzleche file1 fonnt: Table S3 , P VerfÜgung &si besteet; 0.001), war et mat MT2A mRNA gët an FAQ Ausdrock vun Western blot ofgeschloss. Den Ausdrock vun MT2A war klassifizéiert als negativ, schwaach a staark Fäll zu 13 (7.6%), 28 (16.4%) an 130 (76.0%) aus 171 normal Stoffer, bzw.; An IM Stoffer, 27 (22.9%), 31 (26.3%) an 60 (50.8%) aus 118 IM Fäll goufen respektiv fonnt; An GC Echantillonen, 494 (72.2%), 37 (5.4%) an 153 (22.4%) aus 684 GC Fäll goufen erwëscht bzw. (Dorënner 1F, Zousätzleche file1). Et war eng graduell erofgaangen Ausdrock vun MT2A FAQ zu IM an GC (P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 1E an F). Et ass kloer, datt MT2A mRNA war zu GES1 Zellen an normal Stoffer héich ausgedréckt, mä war an stäerkste GC Zellen an Stoffer reduzéiert oder verluer. Dës Resultater hindeit, datt ofgeholl MT2A ass eng molekulare Event zu tumorigenesis an Werdegang. VerfÜgung MT2A Ausdrock ass soll mat aarmséileg hätt am GC VerfÜgung MT2A war dacks verwandelt-reglementéiert GC. Fir ze wëssen, ob MT2A Ausdrock engem prognostic Faktor Mënsch GC war, war MT2A FAQ Ausdrock an d'Ziel vun IHC staining iwwerpréift. Déi eenzel Echantillon waren als niddereg (MT2A-) oder héich Ausdrock (MT2A +) kategoriséiert. MT2A- war mat aarmséileg globale Iwwerliewe (Dorënner 2A, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) assoziéiert. Univariate Analyse uginn datt e puer Faktore dorënner ofgeholl MT2A Ausdrock (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001), TNM Etapp (P VerfÜgung &Si besteet; 0.01), entholl Déift (P VerfÜgung &Si besteet; 0,05), lymph Node Status (P
&si besteet; 0,05), wäit Metastasen (P VerfÜgung &si besteet; 0.001) an Diplome dat (P VerfÜgung = 0.011) sech mat aarmséileg Iwwerliewe (Table 1) soll. Cox multivariate Analyse gewisen, datt de globale Iwwerliewe mat MT2A Ausdrock verbonne war (MT2A + versus MT2A- [HR] iwwerschloen Verhältnis, 0,429; 95% Direktiven ugeet, 0.187-0.683; P VerfÜgung = 0,002, Table 2). Mir geschate d'Potential Medeziner Bedeitung vun MT2A vun hiren Ausdrock Muster mat de Medeziner Parameteren (Zousätzleche file1: Table S4) correlating. MT2A Schatzkummer eng extensiv positive Korrelatioun mat entholl dat (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001) an ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun mat TNM Etapp (P VerfÜgung = 0,05). Dës Resultater weisen, datt MT2A mat Medeziner agebousst Fonctiounen an Iwwerliewe vun GC Patienten soll ass. Figur 2 Analys vun kombinéiert MT2A mat TNM Etapp am GC Medeziner Resultat ze virauszesoen. Kaplan-Meier Analyse vun globale-Iwwerliewe fir MT2A Ausdrock war no TNM Etapp benotzt. A, Prognostic Wäert vun MT2A Ausdrock am GC Patienten war Virdeel fir d'Resultat vun Patienten en, niddereg Ausdrock vun MT2A war mat aarmséileg globale Iwwerliewe verbonne (P &Si besteet; VerfÜgung 0.01); B, gouf TNM Etapp Virdeel fir d'prognostic Cepheid am GC Patienten. C D, Prognostic Wäert vun MT2A zu TNM Etapp ech-II an III Etapp-IV (P VerfÜgung = 0,048, P &Si besteet; VerfÜgung 0,001 bzw.); E F, Prognostic Wäert vun MT2A Ausdrock vun lymph Node Metastasen oder net (P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, P VerfÜgung = 0,052, bzw.); G. Prognostic Wäert vun MT2A Ausdrock vun kee wäit Metastasen Ënnergrupp (n = 232, P VerfÜgung &Si besteet; 0.001); H. Prognostic Wäert vun MT2A zu pT3-pT4 Ënnergrupp (P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). All Donnéeën préziséiert dass MT2A kéint eng effikass prognostic Ënnerschrëft ginn. VerfÜgung Table 2 Cox Réckgang Analyse vun clinicopathological Fonctiounen an molekulare Ënnerschrëfte zu GC VerfÜgung Multivariate Analyse
Covariate vun Enn Punkt VerfÜgung
Hazard Verhältnis zu 95% CI
P- VerfÜgung Wäert
Alter ≥ 60 Joer VerfÜgung 1,300 VerfÜgung 0,840 bis 1,934 VerfÜgung 0,254
Sex VerfÜgung 0,823 VerfÜgung 0,499 bis 1,233 VerfÜgung 0,292 VerfÜgung dat VerfÜgung 0,753 VerfÜgung 0,509 bis 1,778 VerfÜgung 0,875 VerfÜgung entholl invasiv Déift VerfÜgung 1,914 VerfÜgung 1,389 ze 2,638 VerfÜgung &Si besteet; 0,001 VerfÜgung Lymph Node Status VerfÜgung 1,291 VerfÜgung 1,034 bis 1,612 VerfÜgung 0,024 VerfÜgung wäit Metastasen VerfÜgung 2,595 VerfÜgung 1,332 bis 5,056 VerfÜgung 0,005 VerfÜgung MT2A VerfÜgung 0,429
0,187 bis 0,683 VerfÜgung 0,002 VerfÜgung IκB-α VerfÜgung 0,779 VerfÜgung 0,524 bis 1,311 VerfÜgung 0,423 VerfÜgung p-IκB-α VerfÜgung 1,857 VerfÜgung 1,256 bis 2,912 VerfÜgung 0,003 VerfÜgung prognostic Bedeitung vun MT2A mat TNM Etapp kombinéiert an GC Patienten VerfÜgung weider fir MT2A Ausdrock vun prognostic Bedeitung entschlësselen, kombinéiert mir MT2A Ausdrock mat der clinicopathological Fonctiounen am GC. D'Zil war Iwwregens hätt vun GC Patienten mat agebousst Klassifikatioun ze zéien, an ze ermëttelen, ob agebousst Klassifikatioun weider fir méi genee Cepheid vum Resultat sub-séiert ginn. Als zu Weider file1 gewisen: Table S4, MT2A Ausdrock am GC war mat TNM Etapp an entholl dat verbonnen, dass déi zousätzlech MT2A e Potential molekulare uweist kann agebousst Klassifikatioun vun GC zu virauszesoen. Als dichotomous covariates, souwuel MT2A an TNM Bühn waren onofhängeg dacks fir Iwwerliewe (Table 2, Dorënner 2A an B). Prognostic Bedeitung vun MT2A Ausdrock ass weider am GC Patienten analyséiert no der pTNM Systematik. Et war e wesentlechen Ënnerscheed an Punkto Iwwerliewe tëscht Patienten mat MT2A Ausdrock vun zwou fréi (ech an II) an fortgeschratt (III a IV) Etapp Gruppen (P VerfÜgung = 0,048 an P VerfÜgung &Si besteet; 0,001 bzw.; Dorënner 2C an d). Ausserdeem, war MT2A Ausdrock Status och effektiv fir d'Iwwregens hätt an der selwechter Etappen (P VerfÜgung = 0,052, Dorënner 2E; P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 2F; P VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner 2G a P
&Si besteet; 0,001, Dorënner 2H). Dës Donnéeë bedeiten dass MT2A engem molekulare Ënnerschrëft ass Medeziner Resultat ze soe baséiert op TNM Etapp. VerfÜgung Restauratioun vun MT2A Ausdrock Resultater am Wuesstem Ennerdréckung vun GC Zellen kënschtlech VerfÜgung an VIVO
Fir de Mechanismus definitiven vun MT2A am GC, mir MT2A iwwer-ausgedréckt plasmid an eidel Vecteure an dräi GC Zell Linnen (BGC823, SGC7901 an AGS) stably transfected. Mir iwwerpréift de Wuesstem, apoptosis Tariffer an Zell Zyklus vun dësen Zell Linnen mat MT2A plasmid transfected. Zell Nuetsvolen war am GC Zellen reduzéiert du-ausdrécken MT2A benotzt MTT assay (BGC823, P VerfÜgung = 0,0038, Dorënner 3B; AGS, P VerfÜgung = 0,0007, Zousätzleche file1: Dorënner S3A; SGC7901, P VerfÜgung = 0,0004 , Zousätzleche file1: Dorënner S3C). Fir weider d'Funktioun vun MT2A am GC Zell Linnen ermëttelen, analyséiert mir d'Effete vun MT2A Ausdrock op Zell Prolifératioun an Zell Zyklus Regulatioun vun Annexin-V /PI staining an Flux cytometry Analyse. Méi apoptosis war an deene GC Zellen du-ausdrécken MT2A (: Dorënner S3A an C;; 0,01, respektiv, Dorënner 3F Weider file1 P VerfÜgung &Si besteet) fonnt. Ausserdeem, G2 /M verhaft gouf am GC Zellen mat ectopic Ausdrock vun MT2A observéiert. D'nennen vun G2 /M Phase vun MT2A Gruppe waren zweemol méi héich wéi déi vun der Vecteure Gruppe gemaach (P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, respektiv, well 3 an Weider file1: Dorënner S3B an D). Figur 3 Ectopic Ausdrock vun MT2A bremst GC Zellen Wuesstem an eng kënschtlech an VIVO. MT2A inhibited Zell Prolifératioun a Kolonie Équipe an mënschlechen GC Zellen. A, Western blot vum MT2A war zu BGC823 Zellen transfected mat ectopic Ausdrock vun MT2A plasmid an eidel Vecteure fonnt. D'MT2A FAQ Bands si gescannt (normalized zu β-actin fir Luede ze kontrolléieren). B, Zell Prolifératioun war vun der MTT assay zu bass-ausdrécken MT2A vun BGC823 Zellen oder net analyséiert. Donnéeën war wéi déi heeschen ± .SD vun dräi onofhängeg Experimenter gewisen. C, Wuesstem vun BGC823 Zellen war an engem semisolid mëll Agar mëttelfristeg analyséiert. Déi eidel Vecteure Kolonien gegrënnt statistesch vill méi Kolonien (mengen = 426 grousse Kolonien pro Plack 95% Direktiven ugeet:. 387-472 Kolonien) wéi MT2A clones (mengen = 136 Kolonien 95% Direktiven ugeet:.. 100-164 Kolonien d'Zuelen vertrieden mengen Zuel vun Kolonie vun dräi onofhängeg Experimenter ± Fils Déi relativ Zuel vun Kontroll an BGC823-MT2A Zellen berechent hat, an analyséiert benotzt Student d't VerfÜgung Azeton (P VerfÜgung = 0.0038). D, MT2A-inhibited tumorigenicity vun BGC823 Zellen . an Sauna Mais Den mengen entholl Volumen fir BGC823-MT2A bei 3 Wochen no Sprëtz war 112 mm3 (95% Direktiven ugeet: 93-147 mm3), am Verglach mat 352 mm3 (95% Direktiven ugeet: 298-423 mm3) fir BGC823-Vecteure. Donnéeën vertrieden mengen ± Fils vum entholl Volume vun all Grupp ofgeleet. an all Grupp, entholl Gréisste gemooss goufen eng caliper um uginn Zäit Punkten benotzt. Date goufen dës als mengen ± Fils (heeschen Chinchilla VerfÜgung Test erkennen, P
= 0.0027) E, zougedréckt FACS Analyse datt MT2A iwwer-Ausdrock ze G2 /M verhaft ugefouert, an d'Verhältnis vun G2 /M Phase war méi héich wéi zu eidel Kontroll an Elteren Zellen (P &Si besteet; VerfÜgung 0.01). F, Antitumor Effet vun MT2A war vun annexin V /FITC-PI staining assay fonnt. Prozentsaz vun apoptotic Zellen war 52,9% ± 5,4% am MT2A Grupp am Verglach mat deem vun den Elterevertrieder Zellen (8.3% ± 2,4% a mat den eidelen Vecteure transfected Zellen (8.2% ± 3,7%, P VerfÜgung &Si besteet;. 0.001)
Weider, mir BGC823 Zellen plated MT2A oder net an mëll Agar, ectopic Ausdrock vun MT2A repressing war déi westlech blot Analys confirméiert éischt (Dorënner 3A). No 3 Wochen vu Kultur MT2A Ausdrock ëmmer eng statistesch däitleche Minus vun Amphipolis Opstellung (P
= 0,0053, Dorënner 3C). Ausserdeem, war et eng dramatesch Wuesstem inhibition vun MT2A-du-ausdrécken Zellen am Verglach mat den negativen Kontroll (P VerfÜgung = 0,0027, Dorënner 3D) an der xenograft Modeller. Dës Donnéeë weisen datt MT2A kéint eng Roll spillen Prolifératioun vu GC Zellen zu suppressing kënschtlech VerfÜgung an VIVO VerfÜgung. VerfÜgung MT2A represses NF-κB Aktivitéit duerch IκB-α up-Regulatioun VerfÜgung Et gemellt gouf, datt de Verloscht vun MT2A entschlof NF-κB Signal Aktivatioun vun transgenetic Mais Modell (MT2A-Fuesstëmmung eraus) [15]. Mä d'Roll vun MT2A als Frënd oder unzestrécken an NF-κB Signal Passerelle war nach kontrovers [18, 33]. Fir de Mechanismus vun MT2A mediated GC Zell Wuesstem Ennerdréckung vun VIVO VerfÜgung an kënschtlech VerfÜgung zu virzegoen, probéiert mir d'Potential Relatioun tëscht MT2A an NF-κB sécher Passerelle, an dat bannenzegt Mechanismus ass nach net kloer am GC Loescht . MT2A an der Haaptrei Genen vun NF-κB sécher, wéi p65, IκB-α, p-IκB-α an der afgerappt effector vun NF-κB sécher, cyclin D1 sech an dëser Etude (Zousätzleche file1) fonnt. Ectopic Ausdrock vun MT2A entschlof souwuel mRNA an FAQ Ausdrock vun IκB-α an all GC propagéieren Zell Linnen (BGC823, SGC7901 an AGS), IκB-α mRNA roueger-Staat Niveauen 5.5-fantastesch an BGC823 Zellen fräi waren du-ausdrécken MT2A fir 48 h. An AGS an SGC7901 Zellen, observéiert mir eng 7,2-fantastesch an 4,3-fantastesch Aféierungs- vun IκB-α mRNA (Dorënner 4A), waren d'famill FAQ Niveau konsequent mat mRNA gët, an d'p-IκB-α FAQ war an deene GC rofgaang Zellen MT2A Vecteure (Dorënner 4B) transfected. Wéi am Sauerdall 4C a D gewisen, knockdown vun endogenous MT2A zu GES1 Zellen Nerve verwandelt-Regulatioun vun IκB-α Ausdrock souwéi weider-Regulatioun vun p-IκB-α an cyclin D1 Ausdrock, eng Verbindung tëscht MT2A Aktivitéit suggeréiert an IκB -α Ausdrock. Dës Experimenter weisen, datt MT2A IκB-α Ausdrock vun mRNA an FAQ Niveauen induces. An MT2A-mediated up-Regulatioun vun IκB-α Ausdrock gouf weider vun immunofluorescence (Dorënner 5A, Zousätzleche file1) confirméiert. All Auteuren liesen an guttgeheescht der Finale mëttelalterlech Handschrëft. VerfÜgung

• Ausdrock vun COX-2 an VEGF-C zu gastric Kriibs: kennenzeléieren mat lymphangiogenesis an prognostic Implikatioune
• Downregulation vun SPARC Ausdrock Verloschter gastric Kriibs bewosst Invasioun an Iwwerliewe