O impacto prognóstico do receptor do fator de crescimento epidérmico em pacientes com cancro gástrico metastático

O impacto prognóstico do receptor do fator de crescimento epidérmico em pacientes com cancro gástrico metastático da arte abstracta
Fundo
o receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR) é um alvo potencial da terapia anticancro no câncer gástrico. No entanto, o seu papel prognóstico na junção gástrica ou gastroesofágico (GE) cancro metastático ainda não foi estabelecida.
Métodos
status de EGFR foi analisada por imuno-histoquímica (IHQ) em amostras embebidos em parafina de 357 pacientes que receberam quimioterapia em 4 ensaios de primeira linha. extracção de ARN automatizado de parafina e RT-PCR quantitativo foram, adicionalmente, usado para avaliar a expressão de ARNm de EGFR em 130 pacientes. Resultados

expressão da proteína EGFR (qualquer grau) e a sobre-expressão (3+) foram observadas em 43% e 11% dos pacientes, respectivamente. EGFR positividade correlacionada com tipo histológico intestinal (p
= 0,05), mas não com outras características clínico-patológicas. Acompanhamento médio foi de 18,2 meses. sobrevida global mediana (OS) foi semelhante em pacientes com EGFR positivo versus aqueles com tumores EGFR negativos, independentemente de positividade foi definida como ≥ 1 + (10,6 vs 10,9 meses, p
= 0,463) ou como 3+ (8,6 vs 10,8 meses, p
= 0,377). A análise multivariada indicou que o estatuto de EGFR não é um fator prognóstico independente (taxa de risco 0,85, 0,56-1,12, p
= 0,247). Também não houve diferenças significativas na sobrevida global quando os pacientes foram categorizados de acordo com a mediana (p
= 0,116) ou quartil de distribuição (p
= 0,767) da expressão do gene EGFR mRNA. Foram observadas as distribuições semelhantes de sobrevida livre de progressão de acordo com o status de EGFR.
Conclusões
Ao contrário de diferentes tipos de câncer onde a doença de EGFR-positivo está associado com um valor de prognóstico adverso, EGFR positividade não é prognóstico do paciente resultado em gástrico metastático ou GE câncer.
Palavras-chave
EGFR imuno-histoquímica gástrica câncer Survival prognóstico fundo
Apesar da melhora razoável na abordagem terapêutica do cancro gástrico avançado com novos regimes de ativos [1-3], o prognóstico é ainda muito limitada, com um sobrevida global mediana de cerca de 9 a 11 meses. Com o surgimento de novas opções terapêuticas, grande esforço é feito na pesquisa de biomarcadores, que podem ajudar a identificar subgrupos de pacientes, que podem beneficiar de tratamentos especiais. Até à data, o receptor do factor de crescimento epidérmico humano 2 (HER2) superexpressão (observada em até 22% dos doentes), é o único factor preditivo, o que prediz uma beneficiar de um tratamento com o trastuzumab anticorpo anti-HER2 [4].
sinalização aberrante do receptor do factor de crescimento epidérmico (EGFR) desempenha um papel importante no desenvolvimento e progressão de vários tumores humanos. EGFR tem sido demonstrada para fosforilar e regular numerosas proteínas celulares e para iniciar várias cascatas de transdução de sinal, que conduzem à proliferação celular, migração, invasão, metástase, angiogénese e inibição de apoptose. Embora os inibidores de EGFR para o câncer gástrico metastático estão atualmente sob investigação, o papel prognóstico do EGFR no cancro gástrico permanece controverso.
Enquanto muitos relatórios iniciais indicaram resultado desfavorável para a expressão da proteína EGFR ou a sobre-expressão em pacientes com câncer gástrico resectable [5-11] alguns relatórios recentes não podia observar uma correlação entre a expressão de EGFR e sobrevivência [12], ou mesmo encontraram uma correlação significativa de expressão alta EGFR com evolução favorável em pacientes com câncer gástrico curativa ressecado [13].
em relação a estes resultados controversos particulares, que são, em parte, com base em diferentes populações de pacientes e métodos de análise diferentes, há uma necessidade de clarificar o papel da expressão do EGFR em um ambiente distinto e bem população de pacientes definido.
para esclarecer a relevância clínica do estado EGFR, este estudo examina o características e resultados clínico-patológicas em uma população uniforme de pacientes ocidentais com gástrica adenocarcinoma de junção /GE matriculados em primeira linha ensaios de quimioterapia metastático.
Métodos
pacientes
Fase IV pacientes com câncer gástrico com tecido disponível para testes EGFR foram identificados a partir de um banco de dados prospectivo de quatro ensaios de primeira linha de quimioterapia [14-17].
pacientes deram consentimento informado por escrito sobre a participação no ensaio clínico e na coleta de amostras e análise, que foi aprovado pela comissão (comissão de ética ética responsável do Landesärztekammer Hessen, Alemanha). Normas da Conferência Internacional sobre Harmonização /Organização Mundial da Saúde (OMS) Boas Práticas Clínicas foram seguidos. Revisão
Patologia
amostras de tumores fixadas em formalina e embebidos em parafina (FFPE) foram avaliados quanto à expressão da proteína EGFR por imuno-histoquímica (IHQ) . Para cada caso, a hematoxilina-eosina correspondente (H & E) seção foi revisada para avaliar a adequabilidade da amostra. Todos os tumores foram re-examinado por um patologista gastrointestinal (HA) para confirmar o subtipo histológico (difusa vs. intestinal vs. misto)
Imunohistoquímica
secções de tecido (5 mm de espessura) foram coradas com H &. E ou histoquímica pelo método de imunoperoxidase indirecta (DAKO, Glostrup, Dinamarca) como recomendado pelo fabricante. Para a detecção de EGFR foi utilizado o Kit de EGFR pharmDx TM para o Dako Autostainer. coloração de tecido foi visualizado com uma solução DAB substrato cromogénio. As lâminas foram contrastadas com hematoxilina, desidratadas e montadas
Membrana coloração foi avaliada nas células neoplásicas e quantificados e classificados como recomendado no kit de detecção (sistema de pontuação primário): 0, nenhuma coloração ou reactividade membranosa em < 10% de. células tumorais; 1+, fraco, reactividade membranoso quase imperceptível em > 10% das células tumorais; 2+, completa ou basolateral reactividade membranosa quer não uniforme ou fraco em pelo menos 10% das células; 3+, reactividade membranoso completa ou basolateral de forte intensidade em ≥10% das células. Além disso, os seguintes dois sistemas de pontuação também foram avaliados: 1.
) H-Pontuação: A pontuação foi obtida pela fórmula: 3 x percentagem de núcleos que coram fortemente + 2 x percentagem de coloração de núcleos moderadamente + percentagem de núcleos que coram fracamente, dando um intervalo de 0 a 300. as amostras com pontuação > 200 foram classificados como positivos (superexpressão) [18]
2.) Modificado semiquantitativo H-score: intensidade de coloração 0-3 multiplicado pela percentagem de positivo. células tumorais, que foram categorizados como 0,1 para 1-9%, 0,5 para 10-49% e 1,0 para > células tumorais positivas de 50%. A pontuação > 1,0 foi classificada como positiva [19]
extração de RNA e análise de expressão gênica
amostras de tumores fixadas em formalina e embebidos em parafina (FFPE) foram avaliados quanto à expressão de mRNA.. A partir de cada bloco de tumor, uma secção de 5 um foi corado com hematoxilina-eosina e revisto por um patologista e duas secções 10 mícrons consecutivos foram cortadas num micrótomo padrão, o tumor foi macro-dissecados e colocados em tubos individuais, e armazenadas a 4 0 ° C durante ~ 1 mês até a extração de RNA. Totalmente automatizado de extracção de ARN de alto rendimento tem sido levada a cabo de acordo com métodos anteriormente publicados [20].
Expressão do EGFR e do RPL37A normalização (housekeeping) de genes foi avaliada por meio de um passo de RT-PCR quantitativa (qPCR). SuperScript III ® ® Platinum One-Step qRT-PCR Sistema com ROX (Invitrogen, Karlsruhe, Alemanha) foi utilizada de acordo com as instruções do fabricante. As experiências foram realizadas num ABI Prism ®7900HT (Applied Biosystems, Darmstadt, Alemanha) com 30 min a 50 ° C, 2 min a 95 ° C seguido de 40 ciclos de 15 s a 95 ° C e 30 s a 60 ° C . números de cópias relativos correlacionando-se positivamente com a expressão dos genes de interesse foram calculados usando o -method 2 (40-DDCT). Cada expressão de ARNm foi ajustado com o gene de manutenção. Para avaliação da contaminação de ADN em preparações de RNA, um qPCR específico para o gene Paep sem precedente de transcrição reversa foi realizada utilizando os reagentes do SuperScript III ® ® Platinum One-Step Sistema qRTPCR com ROX e Taq DNA polimerase. Em amostras com um valor Cq < 35, os tratamentos de ADNase I foram repetidos para evitar efeitos sobre os ensaios de PCR biespecíficos. Stratagene humano QPCR Referência de ARN total (Stratagene, Waldbronn, Alemanha) foi utilizada como controlo positivo para RTqPCR e o ADN genómico humano (Roche Diagnostics, Basileia, Suíça) como controlo positivo para qPCR. Todos os ensaios de PCR foram realizados em triplicado, e a média de triplicados foi relatada. Kinetic RT-PCR foi aplicado para a avaliação da expressão de mRNA usando o seguinte TaqMan ™ baseado primer /sonda definir ™ cartilha baseada /set sonda (Eurogentec, Seraing, Bélgica):.
Sonda EGFR CCTTGCCGCAAAGTGTGTAACGGAAT
Iniciador directo CGCAAGTGTAAGAAGTGCGAA.
reversa CGTAGCATTTATGGAGAGTGAGTCT primer.
análise estatística
sobrevivência livre de progressão (PFS) e sobrevida global (oS) foram calculados pelo método de Kaplan-Meier, ea significância estatística foi analisada pelo teste de log-rank . Para avaliar a relação univariada entre as variáveis ​​clínico-patológicas e-status EGFR (positivo ou negativo), foi aplicado o teste exato dos Fishers. Além disso, modelo proporcional de Cox foram utilizados para as análises multivariadas referentes aos tempos de sobrevivência. Todos os valores p
eram dois lados, com p
valores < 0,05. Considerado para indicar significância estatística

Resultados As características dos pacientes
O grupo é composto por 357 pacientes com adenocarcinoma estágio IV da média para estômago distal (65%) ou junção GE (30%), com um número semelhante de difuso de Lauren /mista (48%) e tumores intestinais (39%). Fígado era o local mais comum de doença metastática (44%). A maioria das amostras eram de tumor primário (83%) e eram espécimes de biopsia (67%). Os pacientes predominantemente apresentados com doença metastática (83%), e passou a receber três drogas quimioterapia de combinação (54%). A tabela 1 resume characteristics.Table paciente 1 características dos pacientes (N = 357)
Característica
Pacientes
N (%)
Idade, mediana (intervalo)
Sex
Masculino
214 (60)
Feminino
143 (40)
performance status ECOG 0-1
326 (91)
localização do tumor primário
gastroesofágico junção do estômago /proximal
107 (30)
Mid para o estômago distal
231 (65)
classificável /Unknown
19 (5)
estado da doença
Stage IV no momento do diagnóstico
298 (83)
doença recorrente z
59 (17)
quimioterapia de primeira linha
combinação 3-drogas (FLOT)
192 (54) Página 2 de drogas combinação (FLO ou FLP)
165 (46)
locais doença metastática
fígado
157 (44)
linfonodos
219 (61)
Peritoneum
93 (26)
Lung
60 (17)
Lauren classificação
difusa /Tablet mista 170 (48)
intestinal
139 (39)
Outro /Desconhecido
48 (13)
Amostragem espécime
biópsia
238 (67)
Peça cirúrgica
116 (33)
Desconhecido Sims 3 (1)
tumor primário
298 (83)
metastático lesão
50 (14)
Unknown
9 (3)
Abreviaturas: FLOT, 5-FU, leucovorina, oxaliplatina e docetaxel; FLO, 5-FU, leucovorina, oxaliplatina; FLP, 5-FU, o ácido fólico, a cisplatina.
5-FU, leucovorina e oxaliplatina (FLO), 5-FU, ácido fólico e Cisplatina (FLP).
A proporção de pacientes aleatorizados em quatro primeiro- diferente ensaios com amostras de tumores de linha disponíveis foi de 67,7% [14], 58,3% [15], 28,7% [16], e de 52,4% [17], respectivamente. Não houve diferença significativa nas características dos pacientes, em relação aos pacientes com amostras de tumores disponíveis e toda a coorte do estudo.
Cento e noventa e dois pacientes (54%) receberam um regime de três drogas de oxaliplatina 85 mg /m 2, leucovorina 200 mg /m 2 e fluorouracil 2600 mg /m 2 como uma infusão de 24 horas, em combinação com docetaxel 50 mg /m 2 (FLOT) no dia 1 a cada 2 semanas [ ,,,0],15-17]. Cento e sessenta e cinco pacientes (46%) receberam um regime de fluorouracil 2.600 mg /m 2 através de infusão de 24 horas, leucovorina 200 mg /m 2, e oxaliplatina 85 mg /m 2 ( FLO) a cada 2 semanas, ou fluorouracil 2.000 mg /m 2 através de infusão de 24 horas, leucovorina 200 mg /m 2 semanalmente, e cisplatina 50 mg /m 2 a cada 2 semanas (FLP) [ ,,,0],14].
expressão da proteína EGFR e correlação com as características clínico-patológicas
na IHC e de acordo com o sistema de pontuação primário, 152 de 357 (43%) pacientes testados EGFR-positivo. EGFR foi negativo, 1+, 2+, 3+ e em 205 (57%), 50 (14%), 62 (17%), e 40 (11%) pacientes, respectivamente. Com o H-escore semiquantitativo modificado, 116 (33%) pacientes foram classificados como EGFR positivo (> pontuação 1,0) e 30 (8%) pacientes tiveram um H-score de >. 200 (EGFR superexpressão)
Tabela 2 resume taxa de positividade EGFR de acordo com as características iniciais. A taxa de positividade EGFR (qualquer grau) foi semelhante entre biópsias e peças cirúrgicas (41% vs 47% p
= 0,538), tumor primário e as metástases (42% vs 52% p
= 0,418), subtipos histológicos (tipo intestinal de Lauren 48% vs 37% no tipo difuso, p
= 0,211), na região proximal abrangendo gástrica cárdia /GE localização cruzamento e no corpo gástrico e antro (44% vs. 43%, p
= 0,916) e, finalmente, de acordo com o local metastático (por exemplo metástase hepática ou não, 46% vs. 40%, p = 0,559
) .table 2 positividade EGFR pelo subgrupo estudo
Característica, n
= 357
EGFR neg
EGFR pos
P
(pontuação 0)
(pontuação 1-3 +)
Valor
n (%)
n (%)
Feminino, 143
79 (55 )
64 (45)
Masculino, 214
126 (59)
88 (41)
0,69
Idade, Art > 65, 173
96 (55)
77 (45)
≤65, 181
107 (59)
74 (41)
0,698
ECOG performance status,
0-1, 326
186 (57)
140 (43) Página 2, 22
11 (50)
11 (50)
0,697
Não especificado, 9
8 (89)
1 (11)
localização do tumor primário
junção gastroesofágico, 107
60 (56)
47 (44)
Mid para o estômago distal, 231
132 (57)
99 (43)
0,916
Não especificado, 19
13 (68)
6 (32)
estado da doença
Stage IV no momento do diagnóstico, 298
171 (57)
127 (43)
doença recorrente, 59
34 (58)
25 (42)
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