Цель
<р> Чтобы исследовать ингибирующее действие pseudolaric кислоты В на подкожные ксенотрансплантаты аденокарциномы желудка человека и основных молекулярных механизмов, участвующих в его множественной лекарственной устойчивости.
Вывод изображения <р> Pseudolaric кислота в оказывает значительное ингибирующее действие и аддитивный ингибирующий эффект в сочетании с адриамицина на рост рака желудка в естественных условиях, меняющий множественную лекарственную устойчивость желудка новообразование к химиотерапии путем downregulating СОХ-2 /ПКС-α /Р- зм /MDR1 сигнального пути
<р> Образец цитирования:. Sun Q, Y Li (2014) тормозящее воздействие Pseudolaric кислоты B на рака желудка и множественная лекарственная устойчивость через Cox-2 /PKC-α /P-Г.П. Pathway. PLoS ONE 9 (9): e107830. DOI: 10.1371 /journal.pone.0107830
<р> Редактор: Soumitro Пал, Детская больница Boston &Amp; Harvard Medical School, Соединенные Штаты Америки
<р> Поступило: 15 мая 2014 года; Принято: 20 августа 2014 года; Опубликовано: 24 сентября 2014
<р> Copyright: © 2014 Sun, Li. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник приписывают наличие
<р> Data:. авторы подтверждают, что все данные, лежащие в основе выводы полностью доступны без ограничений. Все соответствующие данные находятся в работе
<р> Финансирование:. Работа выполнена при поддержке научной программы Фонда Шэньян муниципального науке и технике Бюро (1091136-9-02). Финансирующей не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение материалы и методы материалы Экспериментальные группы и лекарства Ингибирующий эффект PAB на рост человеческого желудка иммуногистохимическое окрашивание на экспрессию СОХ-2, ПКС-α и Р-Г.П. Обсуждение В заключение ПАБ оказывает значительное тормозящее действие на рак желудка в естественных условиях и может повернуть вспять MDR рака желудка к химиотерапии. Механизм против МЛУ опосредуется, по меньшей мере, частично через ЦОГ-2 /ПКС-а /Р-Г.П. пути. Наше исследование дает широкие перспективы для будущих исследований PAB в терапии рака желудка.
<р> рак желудка является одним из наиболее распространенных видов рака в мире [1], и химиотерапия является важной стратегией против рака желудка [2]. Так как несколько химиотерапевтических препаратов различных классов используются для лечения рака желудка, чувствительность к противоопухолевым препаратам рака желудка постепенно уменьшается, и устойчивость ко многим различных препаратов с различными химическими структурами и различными механизмами действия может произойти. Этот тип устойчивости называется множественная лекарственная устойчивость (МЛУ) и значительно снижает эффективность терапии на рак желудка. MDR становится серьезной проблемой для успешного лечения рака [3]. Было установлено, что основной причиной МЛУ в рак является избыточная экспрессия Р-гликопротеина (Р-ВОП), продукт гена MDR1 человека. P-зм является АТФ-зависимым Отток насос, который может уменьшить накопление наркотиков в раковых клетках. Предполагается, что P-зм, общепринятый биомаркер МЛУ, также следует рассматривать в качестве молекулярной мишени в множественной лекарственной устойчивостью рака [4]. Недавние исследования показали, что в раковых клетках с МЛУ, уровни экспрессии циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2) и изоформы белка kinaseC (PKC-a) оба повышающей регуляции, и их ингибирование может реверсировать неопластических МДР [5] - [10].
<р> кислота B Pseudolaric (PAB, рис 1), дитерпен кислоты изолированы от корня и ствола коры дерева лжелиственница kaempferi
Гордон (Pinaceae), используется в традиционной китайской медицины для широкого спектра биологических функций, таких как противогрибковые эффекты и анти-рождаемостью эффектов. Кроме того, его антиангиогенные эффекты также постепенно признаются в последние годы [11], [12]. Недавние исследования показали, что ПАБ вызывает ингибирование роста, клеточного цикла и апоптоза. Кроме того, ПАБ меняет множественной лекарственной устойчивости раковых клеток [13], [14]. ПАБ подавляет рост желудка опухолевого AGS линии клеток и индуцирует апоптоз ее [15]. Наши предыдущие исследования показали, что ПАБ также оказывает значительное тормозящее действие на желудочные SGC7901 раковых клеток человека в пробирке [16]. Однако исследования в пробирке противоопухолевого эффекта PAB редки, и ни эффективность в естественных условиях этого нового травяного соединения против опухолей, ни его точного молекулярного механизма против МЛУ была полностью исследована.
<Р> Цель настоящего исследование для оценки противоопухолевого эффекта PAB в естественных условиях, в том числе и реверсирования МЛУ, с использованием модели ксенотрансплантата у голых мышей и исследовать, является ли основной молекулярный механизм ПАБ, связанной с ингибированием MDR через ЦОГ-2 /PKC-альфа /P-зм путь.
<р> RPMI-1640 культуральной среды и эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) для культивирования клеток были закуплены у Gibco BRL, Gaithersburg , штат Мэриленд, США. Кролик анти-Сох-2 моноклональное антитело мыши против РКС-альфа и мышиное анти-P-Г.П. моноклональные антитела были приобретены у Santa Cruz Corporation, штат Калифорния, США. Вторичные антитела против кролика и мыши антитела, стрептавидин-пероксидазы (SP), комплекты и 3,3'-диаминобензидино (DAB) были получены из Пекин Чжуншань биотехнологии, Китай. BCA наборы для анализа белков и наборы приготовления геля SDS-PAGE были получены из Beyotime Института биотехнологии, Шанхай, Китай. ПАБ был приобретен у Ляонин института по контролю над наркотиками, Китай N: 201003 (чистота: &GТ; 98%). Адриамицин (ADR) была получена из Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd., Китай No. 120906. Tween80 и полиэтиленгликоль были приобретены у Sigma Chemical, Сент-Луис, Миссури, США.
Культура клеток
<р> желудка человека аденокарциномы SGC7901 клетки культивировали в центральной лаборатории Shengjing больницы аффилированными Китайского медицинского университета [16], а также клетки адриамицин-устойчивые SGC7901 /ADR были подарены из Института болезней пищеварительного тракта в Xijing больнице аффилированными Четвертого военного медицинского университета [17]. Человека аденокарциномы желудка SGC7901 клетки и клетки, адриамицин-устойчивые SGC7901 /ADR культивировали в среде RPMI-1640, дополненной 10% FBS и антибиотиками (100 ед /мл пенициллина и стрептомицина) с 5% CO <суб> 2 в увлажненном инкубаторе при температуре 37 ° С. АДР (1 мкг /мл) добавляли к SGC7901 /ADR клеточной культуральной среды, чтобы помочь сохранить их MDR. Клетки в логарифмической фазе роста центрифугировали и разводили средой RPMI-1640, для подготовки одноклеточных суспензий с концентрацией 2,5 × 10 6 /мл для высева.
Создание модели ксенотрансплантата голых мышей
<р> в естественных условиях противоопухолевый эффект PAB исследовали в мышиной модели ксенотрансплантата. Для модели, 4-6-недельного возраста мужского и женского пола иммунодефицитом BALB /с (ню /ню) мышей, весом от 18 до 22 г, были приобретены у Пекина HFK Bioscience Co., Ltd. (Китай) и хранятся в аккредитованных объектах в стандартных условиях для грызунов (SPF класс) в Департаменте лабораторных животных науки. Пятьдесят мышей были отобраны и случайным образом распределены в две группы (25 в каждой группе). В общей сложности 25 мышей подкожно вводили 2,5 × 10 6 /мл SGC7901 клеток в 0,2 мл среды RPMI-1640, в левую подмышек, а остальные 25 мышей вводили клетки SGC7901 /ADR в правую подмышечную область при неинфицированных условиях.
<р> через семь дней после имплантации клеток, опухоли стали ощутимыми (приблизительно 3 мм × 3 мм в диаметре), а затем, эти две группы вводили с двумя различными типами клеток были случайным образом разделены на пять подгрупп (5 мышей на группу): нормальный физиологический раствор (NS) контрольная группа, контрольная группа ТВИН, группы ADR, группы РАВ, и PAB + ADR группы. Для PAB групп, ПАБ (25 мг /кг /сут в количестве 0,1 мл), растворенный в водном растворе 6% полиэтиленгликоля, 3% этанола и 1% Tween80 вводили внутрибрюшинно (внутрибрюшинно) ежедневно в течение 20 дней [13]. Одинаковый объем водного раствора или NS вводили в контрольной группе ТВИН или контрольной NS группы, соответственно. Для группы ADR, АДР (1,25 мг /кг в 0,1 мл), разведенного в NS вводили внутрибрюшинно в день в течение 20 дней [18]. Опухоли мышей вводили как ПАБ (25 мг /кг /сут) и АДР (1,25 мг /кг /день) внутрибрюшинно за тот же период в группе PAB + ADR. После обработки мышей из каждой группы забивали, и опухолевые образцы двусторонних областей подмышечных взвешивали и иссекают для иммуногистохимического и Вестерн-блот-анализа. Это исследование было выполнено строго в соответствии с рекомендациями, приведенными в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных Национальных институтов здравоохранения. Протокол был одобрен Комитетом по этике экспериментов на животных в Shengjing больницы аффилированными Китайского медицинского университета (номер разрешения: 2013PS144K) путем. Мыши были умерщвлены под 10% хлоралгидрата анестезии, и все усилия были сделаны, чтобы свести к минимуму страдания.
Измерение и вычисление объема опухоли и вес
<р> Вес тела контролировали каждый день, и два перпендикулярных диаметров (длина и ширина в миллиметрах) опухоли измеряли каждые два дня с суппортами на протяжении всего периода лечения. Объемы опухолей были оценены с использованием двухмерных измерений и рассчитывается следующим образом: объем опухоли (мм 3) = длина (мм) х ширина 2 (мм) /2. Объем относительной опухоли (RTV) была рассчитана следующим образом: РТВ = (средний объем опухоли во время терапии) /(средний объем опухоли в начале терапии). Противоопухолевые эффекты PAB и /или АДР были оценены с средняя скорость ингибирования (ИК) роста опухоли с использованием следующего уравнения: IR (%) = [(1-среднее РТВ из группы, получающей препарат /среднее РТВ из контрольной группы NS ) × 100] [19]. Относительная масса тела мышей была рассчитана с использованием W <суб> т /W <югу> 0 индекс, где W <югу> т была масса тела в день измерения, и W <югу> 0 была масса тела при в первый день лечения. Изменение веса тела в дни 1 и 20, представляющих начало и конец эксперимента, соответственно, был использован для оценки и анализа влияния препаратов на массу тела [20].
Иммуногистохимическое окрашивание для экспрессии СОХ-2, ПКС-альфа и P-Г.П.
<р> образцы Опухолевые фиксировали параформальдегидом, обрабатываются обычно путем встраивания в парафин, а затем разрезают на 4 мкм секций. После окрашивания гематоксилином и эозином (HE), наблюдались клетки желудка ксенотрансплантаты рака под световым микроскопом. Уровни экспрессии СОХ-2, ПКС-α и Р-Г.П. в заготовленных опухолевых клеток определяли с использованием метода SP. Если коротко, то после того, как депарафинизации и повторной гидратации, предметные стекла инкубировали в 0,3% <к югу> 2 раствора H <суб> 2O и сушат в микроволновой печи в буфере лимонной кислоты в течение 15 мин для получения антигенов. Срезы блокировали нормальной козьей сывороткой в течение 30 мин при 37 ° С и зондировали кроличьей моноклональными антителами к СОХ-2, и мышиных моноклональных антител к PKC-альфа и P-ЗТ при 4 ° С в течение ночи (все антитела были разбавлены в 1 :300). Добавляли биотинилированные анти-кроличий IgG и анти-крысиного IgG, и инкубировали при 37 ° С в течение 30 мин, затем добавляли фермент, конъюгированный с пероксидазой хрена-стрептавидин. Кроме того, 3, 3'-диаминобензидин (ДАБ) использовали в качестве хромогена. Срезы контрастному окрашиванию гематоксилином, обезвоживали в спирте, и смонтированный на нейтральном бальзама. Был поставлен контроль с использованием только вторичных антител. были выбраны пять полей каждой секции от каждой мыши в каждой группе для коллекции изображений. Результаты были проанализированы и сравнены статистически с использованием NIS-Elements Br программного обеспечения 3.0, а средняя оптическая плотность была получена для количественной оценки уровней экспрессии СОХ-2, ПКС-α и Р-Г.П..
Вестерн-блот-Кокса -2, ПКС-α и P-зм у голых мышей ксенографтов
<р> в общей сложности 100 мг свежезамороженных опухолевых тканей из по меньшей мере трех мышей в каждой группе были взвешены и дополнены радио иммунопреципитации анализа (РПСО) буфера для лизиса [содержащий 100 мкг /мл фенилметансульфонилфторид (ФМСФ)]. После того, как измельчали с помощью ножниц, экстракты гомогенизируют с помощью ультразвука. После центрифугирования при 14000 оборотах в минуту при температуре 4 ° С в течение 30 мин, образец супернатант замораживали при -80 ° С для вестерн-блоттинга. Концентрацию белка в экстрактах определяли с использованием бицинхониновой кислоты (ВСА) набора для анализа белка. В общей сложности 100 мкг белка на мышь в денатурирующих условиях (100 ° С, 5 мин) подвергали электрофорезу с использованием додецилсульфата натрия-электрофорез в полиакриламидном геле (SDS-PAGE) на геле разделения 8% и electrotransferred на ПВДФ-мембраны с помощью жидкостной системы передачи на 100 в (ЦОГ-2, ПКС-α, β-актина в течение 100 мин, а Р-Г.П. в течение 3 ч). После блокирования с помощью 5% обезжиренного сухого молока в 1 × TBST (трис-солевой буферный раствор, содержащий 0,1% Tween 20) в течение 90 мин, мембраны инкубировали с первичным антителом [кроличьего моноклонального антитела к COX-2 (1:400) или мыши моноклональные антитела к PKC-альфа (1:200) и Р-ЗТ (1:200), с бета-актина в качестве внутреннего контроля для белка загрузки] в течение ночи при 4 ° с. Связывание антитела визуализировали с использованием пероксидазы связью вторичного козьего анти-кроличьего антитела (1:2000) и козьего антитела против мыши (1:2000) в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Затем мембраны были визуализированы с помощью усиленной хемилюминесценции (ECL реагента). Результаты анализировали с помощью изображения J программного обеспечения.
Статистический анализ
<р> Все данные представлены в виде средних значений ± стандартное отклонение, а также множественных сравнений между любыми двумя из обработанных групп оценивали по одно- дисперсионный анализ, используя SNK и методы LSD с SPSS 17,0 программного обеспечения. Взаимосвязь между изменением массы тела и объема опухоли анализировали с помощью корреляционного анализа Пирсона. величины р менее 0,05 считались статистически значимыми.
Результаты
рака <р> Опухоли во всех обработанных группах формируется после того, как легко имплантация одноклеточных суспензий, и скорость образования составила 100%. Когда ксенотрансплантаты стало очевидным, что не было никаких существенных различий в среднем объеме ксенотрансплантаты среди различных групп (таблица 1), а объем опухоли контролировали в разные моменты времени во всех группах. Кривые роста опухолей из двух клеточных линий были рентгенографического (рис 2А, 2В). Как показано в таблице 1, для клеточных группах, обработанных SGC7901, никаких существенных различий не наблюдалось между PAB группой и группой ADR в среднем относительных объемов ксенотрансплантаты (р > 0,05), а ИК была 56,4% и 59,0%, соответственно. Добавление АДР к PAB привело к более высокой противоопухолевой активностью, чем в одиночку PAB или АДР в одиночку (р &ЛТ; 0,05) с ИК 88,1%. Ингибирующий эффект группы PAB был сильнее по сравнению с тем из группы ADR на ксенотрансплантаты клеток SGC7901 /ADR, а значения ИК-спектры были 64,1% и 21,9% соответственно (р ≪ 0,05). Ингибирование роста опухоли более очевидным, у мышей, получавших РАВ в сочетании с ADR, с ИК 85,8%. Результаты веса опухоли в различных группах дополнительно поддерживает наши результаты относительно объема мышей ксенотрансплантатов. Рисунок 2C и 2D показаны изменения относительного веса тела мышей в десяти группах. Вес тела был схожим с контрольными группами, ПАБ обработанных групп. Тем не менее, масса тела уменьшилась в комбинированных обработанных групп и групп ADR, а также уменьшение групп ADR было более очевидным (р ≪ 0,05). Кроме того, на рисунке 3 обеспечивает прямое сравнение опухолевых размеров SGC7901 клеток и клеток SGC7901 /ADR в разных группах. Взаимосвязь между изменением массы тела и объема опухоли не были значимыми (р > 0,05). наблюдалась Дозировки испытанные хорошо переносились мышами, и ни одно животное летальность в течение эксперимента.
<р> Все опухоли в каждой группе, с помощью иммуногистохимического окрашивания, отображается положительное экспрессию ЦОГ-2, PKC-альфа и P-Г.П. белков. COX-2 и РКС-α выражение определялось как положительным, если окрашивали область опухолевых клеток была в цитоплазме, а Р-Г.П. окрашивание считается положительным, если окрашивание наблюдалось в мембране и цитоплазме. Белки окрашивали желтого или коричневого цвета под оптическим микроскопом наблюдения (рисунок 4). Для клеточной линии /ADR SGC7901, окрашивание этих белков в контрольных группах была сильнее, чем в других группах (р ≪ 0,05). Лечение ПАБ снижается внутриклеточное окрашивание ЦОГ-2, ПКС-альфа и P-ЗТ по сравнению с СОА-обработанной группе (р &л; 0,05). После того, как PAB и лечения ADR, внутриклеточное окрашивание этих белков была редкой и слабее по сравнению с тем из других групп. Для ксенотрансплантаты двух контрольных групп NS, окрашивание P-ЗТ в SGC7901 клеток была значительно ниже, чем у SGC7901 /сот ADR (р ≪ 0,05). Анализ интенсивности окрашивания ЦОГ-2, ПКС-α и Р-Г.П. выражение показали те же результаты (таблица 2).
Влияние PAB на СОХ-2, PKC-альфа и P-Г.П. выражение у мышей ксенографтов
<р> Чтобы выяснить молекулярный механизм, участвующий в разворотных эффектов PAB на SGC7901 /ксенографты ADR в естественных условиях, экспрессия ЦОГ-2, ПКС-альфа и P-гп в опухолях от разных группы реагентов, обработанных определяли с помощью Вестерн-блот-анализа. Как показано на рисунке 5, для контрольной группы NS, уровни экспрессии СОХ-2, PKC-альфа и P-ЗТ в SGC7901 клеточных ксенотрансплантатов были ниже по сравнению с чем в SGC7901 /опухолей ADR клеток (р ≪ 0,05) , Для опухолей SGC7901 /клетки ADR, уровни экспрессии трех белков, представляющих интерес в контрольной группе и контрольной ТВИН группы NS были значительно выше по сравнению с другими группами (р &л; 0,05), и не было никаких существенных различий между две группы (р > 0,05). Уровни экспрессии СОХ-2, PKC-альфа и P-ЗТ в ПАБ-обработанной группе было достоверно ниже по сравнению с таковыми из ADR-обработанной группе (р &л; 0,05). Выражение бета-актина использовали в качестве внутреннего контроля, а уровни экспрессии СОХ-2, PKC-альфа и P-ЗТ последовательно уменьшились среди контрольных групп, группа АДР, группа ПАБ и ПАБ + ADR группа (р ≪ 0,05)
<р> PAB является одним из основных биологически активных компонентов коры корней лекарственного растения лжелиственница kaempferi
и отображает значительную цитотоксичность в сторону нескольких раковых клеток. линии. В пробирке исследования также показали, что она меняет MDR карциномы путем ингибирования сверхэкспрессии P-гп без очевидных побочных эффектов [13], [15], [20], [21]. Кроме того, было показано, что РАВ имеет противоопухолевый эффект у мышей, которые были зарегистрированы ксенотрансплантатов модели рака толстой кишки человека и гепатоцеллюлярной карциномы [13], [20], и без каких-либо известных побочных эффектов PAB на животных. Наше предыдущее исследование показало, что ПАБ оказывает сильное ингибирующее действие на линии SGC7901 клеток в пробирке и индуцирует апоптоз клеток рака желудка с помощью каспаз пути [16]. Наш присутствует в естественных условиях исследования свидетельствуют о том, что ПАТ является защитным против желудочных опухолей в мышиных моделях ксенотрансплантата с использованием SGC7901 клетки и клетки SGC7901 /ADR. Наши предварительные эксперименты показали, что PAB в дозе 25 мг /кг, не только ингибирует рост рака желудка, но также хорошо переносится мышами. Кроме того, мы включили в контрольную группу ТВИН, чтобы исключить влияние водного раствора, который был использован для растворения PAB на опухолях [13]. Для чувствительных клеток, что противоопухолевые эффекты PAB не дало никаких существенных различий по сравнению с ADR, традиционный препарат химиотерапии. Кроме того, ПАБ представляет собой биологически активное соединение, которое оказывали его реверсивный эффект против SGC7901 /ADR опухолей линии клеток путем воздействия на сигнальный путь активируется P-зм оверэкспрессии в естественных условиях.
<Р> Р-зм является мембрана 170-кД белок, который действует как эффлюксного препарат насоса, в результате чего непрерывный дефект во внутриклеточном накоплении препаратов [22]. Фенотип множественная лекарственная устойчивость является основной причиной неудач химиотерапии опухолей и является главным продуктом гиперэкспрессией P-ГФ в большинстве видов рака, в том числе желудочных новообразований [23]. Кроме того, ингибирование этого пути может быть способом, чтобы обратить MDR из клеток рака желудка [3], [24].
<Р> ЦОГ-2, индуцируемый фермент, который катализирует превращение арахидоновой кислоты в простаноидов ( PG) и участвует в многочисленных физиологических и патологических событий, индуцируется различными воспалительными и митогенных стимулов [25]. Тесная связь между МЛУ и избыточной экспрессии СОХ-2 сообщалось во многих различных типах опухолей. Эти предыдущие результаты свидетельствуют о том, что ЦОГ-2 модулирует экспрессию и активность Р-ЗТ и участвует в развитии фенотипа MDR [26] - [28]. Кроме того, накопленный доказательства показали, что ингибиторы СОХ-2 могут повышать чувствительность раковых клеток к антипролиферативным воздействию химиотерапевтических лекарственных средств путем изменения активности АТФ-связывающего белка кассеты. ингибиторы ЦОГ-2 может даже обратить вспять MDR путем блокирования ЦОГ-2-опосредованное увеличение экспрессии и активности MDR1 при раке, как в пробирке и в естественных условиях [6], [7], [29]. Таким образом, мы предполагаем, что ЦОГ-2 может регулировать экспрессию Р-гп в опухолевых тканях и что ингибирование этого пути имеет большое значение, чтобы обратить вспять сопротивление рака к химиотерапевтическим препаратам.
<Р> Мы обнаружили, что для SGC7901 /ADR клеток опухоли, уровни экспрессии ЦОГ-2 и Р-ЗТ в контрольной группе NS были явно выше, чем для ксенотрансплантаты SGC7901 клеток. После инъекции ПАБ, наблюдалось заметное снижение этих уровней экспрессии. Тем не менее, ADR была менее эффективна для подавления уровней ЦОГ-2 и Р-зм экспрессии SGC7901 /ксенотрансплантатов ADR клеток, и в сочетании с РАВ, наблюдался более низкий уровень белков. Таким образом, мы предположили, что модуляция экспрессии ЦОГ-2 с помощью ПАБ может привести к снижению экспрессии и активности Р-ЗТ, ингибируют рост и индуцируют апоптоз, в дополнение к действующим совместно с ADR в подавлении опухолей с лекарственной устойчивостью и даже разворота МЛУ фенотипа рака желудка.
<р> ПКС представляет собой серин /треонин киназа участвует в трансдукции сигнала, требуемого для клеточной пролиферации и дифференцировки [30]. Из PKC изоформ, избыточная экспрессия и повышенная активность PKC-альфа наиболее тесно связаны с регулированием фенотипа MDR рака желудка человека [31]. Результаты, представленные здесь, поддерживают идею о том, что PKC-α фосфорилирует P-зм, модулирует P-зм функцию оттоку, и в конечном итоге приводит к лекарственной устойчивости [32]. Ингибирование PKC-альфа специфического ингибитора или сбивание PKC-альфа с миРНК приводит к снижению экспрессии MDR1, повышенной токсичности противоопухолевых препаратов, и обращенно MDR [8] - [10]. Таким образом, мы предполагаем, что система передачи сигнала ПКС-α может играть определенную роль в модуляции экспрессии MDR1 в раке желудка.
<Р> В нормальных условиях, ПКС неактивен в клетках, и его активация связана с выше по течению активации PGE. Кокс-2 соединен с мембраной, связанный простагландина Е2-синтазы (MPGES-1), и синтез PGE, опосредованных этими белками увеличивается и активизирует вниз по течению ПКС-альфа пути [33]. Было показано, что избирательное ингибирование Сох-2 специфическими ингибиторами или миРНК оказывает терапевтическое действие на ингибирование экспрессии PKC-альфа и P-ЗТ, в то же время, в то же время, обратимости МЛУ [26], [34]. Исследование показало, что PGE2 опосредует индукцию экспрессии MDR1 через пути ПКС [35]. Результаты наших экспериментов показали, что ПАБ может ингибировать PKC-α экспрессию ксенографтов в клеточной линии /ADR SGC7901, эффект которого был сильнее, чем у ДОПОГ. Кроме того, когда ПАБ сочеталась с ADR, ПКС-α ингибирование экспрессии эффективности было еще более сильным. Изменение тенденции экспрессии PKC-альфа согласуется с СОХ-2 и Р-ЗТ в различных группах реагентов лечение опухолей с лекарственной устойчивостью SGC7901 /ADR. Было показано, что ПАБ вызывает остановку роста и апоптоз за счет ингибирования пути COX-2 в раковых клетках [20], [21]. Мы предполагаем, что ПАБ ингибирует экспрессию ЦОГ-2 в SGC7901 /ксенотрансплантатов ADR клеток и что соединение между ЦОГ-2 и MPGES-1 снижает синтез ПГЕ, что снижает активацию вниз по течению PKC-альфа. Поскольку фосфорилирование P-ЗТ ингибируется, больше препаратов накапливаются в раковых клетках, токсичность ADR усиливается и МЛУ восстанавливается. Эти результаты дают представление о новой стратегии, предусматривающей использование PAB для ингибирования МЛУ раковых заболеваний желудка человека.
<Р> Одним из основных направлений нашего эксперимента является тормозящий эффект pseudolaric кислоты В на подкожные ксенотрансплантаты аденокарциномы желудка человека и сравнения противоопухолевых эффектов лекарств среди различных групп лечения. Кроме того, характеристика SGC7901 клеток и клеток SGC7901 /ADR различны. Через наши два предварительного эксперимента и формального эксперимента, все мы нашли объем опухоли клеток SGC7901 /ADR не было больше, чем у SGC7901 клеток. Мы предполагаем, объем опухоли может быть связано с количеством клеток, время роста, характеристика клеток и других видов факторов. Таким образом, мы не сравнивали объем опухоли между SGC7901 клеточных ксенотрансплантатов и ксенотрансплантатов SGC7901 /ADR клеток. Кроме того, мы предполагаем, что изменение массы тела мышей может быть в основном относятся к токсичности препаратов, и не имеют существенного отношения к объему опухоли в нашем эксперименте
. <Р> Другой фокус нашего эксперимента является основной молекулярные механизмы, участвующие в множественной лекарственной устойчивостью. Таким образом, мы только разработаны NS контрольная группа ксенографтов SGC7901 клеток контраста и подтвердить выражения трех видов белка из ксенотрансплантатов SGC7901 /ADR клеток действительно значительно выше, чем от ксенотрансплантатов SGC7901 клеток. К тому же, так как реакция SGC7901 клеток к противоопухолевым препаратам является гораздо более чувствительны, чем клетки SGC7901 /ADR в обоих основных и клинических экспериментов, как улучшить чувствительность клеток множественной лекарственной устойчивости к противоопухолевым препаратам является наше исследование фокус. Таким образом, мы не сравнивали выражения ЦОГ-2, ПКС-альфа и P-ЗТ для опухолей из SGC7901 и различных обработок этой группы для контрольной группы NS с помощью Вестерн-блоттинга и иммуногистохимического окрашивания за исключением.
<Р> Наше исследование обнаружили, что травяные дитерпеноид PAB не только значительно подавлена желудка SGC7901 раковых клеток в естественных условиях, но также присутствовали очевидные ингибирующие эффекты в сторону опухоли клеток с лекарственной устойчивостью SGC7901 /ADR. Кроме того, сочетание PAB с АРС может ингибировать рост рака желудка и развитие ксенотрансплантатов у голых мышей. Стоит отметить, что в качестве типа традиционной китайской медицины, эффект PAB на массу тела голых мышей была намного ниже, чем у ДОПОГ в нашем эксперименте, который является очевидным преимуществом, что делает PAB более безопасным и терпимым наркотиков для терапия рака. ПАБ может не только быть новый эффективный препарат для ингибирования роста клеток рака желудка и заднего хода его MDR, но он также может быть использован в качестве отличного адъюванта с традиционными химиотерапевтическими средствами и хирургической терапии после дальнейшего развития и исследования.
<Р> в настоящем исследовании мы рассмотрели, впервые, тормозящее действие PAB против рака желудка человека и его влияние на обращение с МЛУ в естественных условиях через ксенотрансплантата обнаженной модели мышей. Мы определили, что его ингибирование MDR опосредовано через Cox-2 /PKC-альфа /P-Г.П. пути, который обеспечивает важнейшую теоретическую базу относительно молекулярных механизмов желудочной терапии рака. Тем не менее, мы не изучили механизм MDR в отношении экспрессии генов и регуляции. По мере того как молекулярные механизмы обратимости МЛУ являются чрезвычайно сложными и несколько типов белков, генов и факторы могут быть вовлечены, цикл, который мы предложили, могут быть лишь частью механизма обратимости МЛУ. Более глубокий и конкретные механизмы регулирования должны быть освещены в будущих исследованиях.
Поддержка Информация
Контрольный список S1.
ARRIVE Guidelines Контрольный список
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0107830.s001
(DOC)
Пластик, который сейчас обычно встречается в стуле человека
Генетика может влиять на состав микробиома больше, чем факторы окружающей среды.
Вакцинация против ротавируса не связана с риском сахарного диабета 1 типа
Слизь в лейке для душа может содержать опасные легочные бактерии - исследование
Язвенный колит и отсутствие микробов в кишечнике
Устойчивость к антибиотикам удвоится всего за два десятилетия
Тип кишечных бактерий может увеличить риск рака кишечника
Новое исследование, представленное на конференции NCRI Cancer Conference 2019, показало, что люди с определенным типом бактерий в кишечнике могут иметь больше шансов заболеть раком кишечника.
Perfectus Biomed примет участие в конференции IPS в Ливерпуле
Команда Perfectus Biomed примет участие в конференции Общества профилактики инфекций (IPS) в Ливерпуле в этом месяце. Конференция состоится в арене и конференц-центре Ливерпуля с 22 по 24 сентября 201
Бактерии кишечника укрепляют мышцы у пожилых людей
Новое смелое исследование предполагает, что мышечная сила у пожилых людей может быть выше из-за:частично, механизмы с участием кишечных бактерий. Бактерии кишечника связаны с мышечной массой и физич