PLoS ONE: inhibitorni učinak Pseudolaric kiseline B na rak želuca i višestruke rezistencije na lijekove putem Cox-2 /PKC-α /P-gp Pathway

Sažetak

Cilj pregled

Kako bi istražili inhibicija učinak pseudolaric kiseline B na potkožne ksenografta humanog želučanog adenokarcinoma i osnovnih molekularnih mehanizama uključenih u rezistencije na lijekove. pregled

Metode

ljudskog želuca adenokarcinom SGC7901 stanice i otporne na lijekove SGC7901 /ADR stanice ubrizgava u gole miševe uspostaviti subkutane model. Učinci pseudolaric kiseline B, sa ili bez adriamicin liječenja uspoređeni su određivanjem veličine tumora i težine. Cyclo-oxygenase-2, protein kinaseC-α i P-glikoproteina razinama su određena imunohistokemijski i Western blot. Pregled

Rezultati pregled

Pseudolaric kiselina B značajno je smanjen rast tumora izazvano SGC7901 stanica i SGC7901 /ADR stanica. Kombinacija pseudolaric kiseline B i tradicionalne kemoterapija lijeka adriamicin izložena jače inhibitorni učinak na rast raka želuca in vivo od liječenja ili pseudolaric kiseline B i adriamicinom sami. Razine proteina ekspresije ciklo-oksigenaza-2, protein kinaseC-α i P-glikoprotein se inhibira pseudolaric samog ili u kombinaciji s adriamicinom u SGC7901 /ADR stanica ksenografta kiseline B, pregled

Zaključak

Pseudolaric kiselina B ima značajan inhibicijski učinak i dodatni inhibitorski učinak u kombinaciji s adriamicinom na rast karcinoma želuca in vivo, koji okreće MDR želučanog neoplazme na kemoterapiju lijekova snižavanje Coxova-2 /PKC-α /P- gp /MDR1 signalizacije pregled

Izvor. Sun Q, Li Y (2014) Inhibitorski učinak Pseudolaric kiseline B na rak želuca i multidrug preko COX-2 /PKC-α /p-gp puta. PLoS ONE 9 (9): e107830. doi: 10,1371 /journal.pone.0107830 pregled

Urednik: Soumitro Pal, Dječja bolnica Boston & Harvard Medical School, Sjedinjene Američke Države

Primljeno: 15. svibnja 2014; Prihvaćeno: 20. kolovoz 2014; Objavljeno: 24. rujna 2014 pregled

Copyright: © 2014 Sun, Li. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

Data Dostupnost:. The autori potvrđuju da su svi podaci na kojima se temelji nalaze u potpunosti na raspolaganju bez ograničenja. Svi relevantni podaci u radu pregled

Financiranje:. Ovaj rad je podržan od strane znanstveni program Zaklade Shenyang Općinskog znanosti i tehnologije ured (1091136-9-02). Davatelj financijskih sredstava nije imao ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je jedan od najčešćih svjetskih raka [1], a kemoterapija je važna strategija za borbu protiv raka želuca [2]. Jer se više kemoterapeutika različitih klasa u liječenju raka želuca, osjetljivost antitumorskih lijekova za karcinom želuca se postupno smanjuje, a rezistencija na različite lijekove s različite kemijske strukture i različitih mehanizama djelovanja mogu pojaviti. Ova vrsta otpornosti naziva multidrug (MDR), te značajno smanjuje učinkovitost terapije na raka želuca. MDR postaje veliki problem za uspješno liječenje raka [3]. Otkriveno je da je glavni razlog za MDR u karcinomu je prekomjerna ekspresija P-glikoprotein (P-gp), produktom MDR1 genom humanog. P-gp je ovisna o ATP pumpom istjecanja koji može smanjiti nakupljanje lijeka u stanicama raka. Predlaže se da se P-gp, dobro je prihvaćen biomarkera MDR, također treba uzeti u obzir kao molekularni cilj za multirezistentnog raka. [4] Nedavna istraživanja su pokazala da se u stanicama raka s MDR, razina ekspresije ciklo-oksigenaze-2 (COX-2) i njihove izoforme proteina kinaseC (PKC-a) su oba upregulated i njihova inhibicija može preokrenuti neoplastična MDR [5] - [10]. pregled

Pseudolaric kiselina B (PAB, slika 1), a diterpenski kiselina izolirana iz korijena i debla kore drveta Pseudolarix kaempferi pregled Gordon (Pinaceae), koristi se u tradicionalne kineske medicine za široki spektar bioloških značajki, kao što su anti-gljivične efektima i protiv plodnosti učinaka. Osim toga, njegova antiangiogene efekti su također postupno priznaju se u posljednjih nekoliko godina [11], [12]. Novija istraživanja pokazala su da PAB inducira inhibiciju rasta, staničnog ciklusa i apoptozu. Štoviše, PAB obrće MDR stanica raka [13], [14]. PAB potiskuje rast želučanog neoplastičnih AGS stanične linije, te potiče apoptozu njegovu [15]. Naša dosadašnja istraživanja pokazala da PAB također ima dramatičan inhibitorni učinak na ljudski rak želuca SGC7901 stanica in vitro [16]. Međutim, in vitro studije antikancerogeni učinak PAB su rijetki, a ni in vivo učinkovitost ovog novog biljnog spoja protiv tumora, niti po preciznom molekularni mehanizam protiv MDR je u potpunosti istražen. Pregled

Cilj sadašnjosti studija je ocijeniti antineoplastičnog učinka PAB in vivo, uključujući preokret MDR, pomoću modela ksenografta u golih miševa i istražiti da li Pab je temeljni molekularni mehanizam se odnosi na inhibiciju MDR preko COX-2 /PKC-a /p-gp put. pregled

Materijali i metode pregled

Materijali pregled

RPMI-1640 medija kulture, te fetalnog goveđeg seruma (FBS) za kulturu stanica dobavljeni su od Gibco BRL, Gaithersburg , MD, USA. Zečji anti-COX-2 monoklonsko protutijelo, mišje anti-PKC-a i mišja anti-P-gp monoklonska antitijela su kupljena od Santa Cruz Corporation, CA, USA. Sekundarna antitijela zeca i mišja protutijela, streptavidin-peroksidaze (SP) kompletima i 3,3'-diaminobenzidinu (DAB) dobiveni su od Beijing Zhongshan Biotechnology, Kina. BCA proteinski test kits i SDS-gel za pripremu setove su dobiveni iz Beyotime Instituta za biotehnologiju, Šangaju, Kina. PAB je kupljen od Liaoning zavoda za kontrolu lijekova, Kina br 201003 (čistoća: > 98%). Adriamicin (ADR) dobiven je iz Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd., Kina, broj 120906. Tween 80 i polietilen glikol su nabavljeni od Sigma Chemical, St. Louis, MO, USA. Pregled

Kultura stanica pregled

ljudskog želuca adenokarcinom SGC7901 uzgajane su u središnjem laboratoriju Shengjing bolnice povezane u Kini medicinskog sveučilišta [16], a adriamicin otporan SGC7901 /ADR stanice su obdareni od Instituta za bolesti probavnog sustava u Xijing bolnice povezane s Četvrte Vojnomedicinsku Sveučilišta [17]. Humanog želučanog adenokarcinom SGC7901 stanice i adriamicin-rezistentan SGC7901 /ADR stanice su kultivirane u RPMI-1640 mediju nadomještenom s 10% FBS i antibioticima (100 U /ml penicilina i streptomicina) sa 5% CO _{2 u vlažnom inkubatoru pri 37 ° C ° C. ADR (1 ug /ml) se doda u SGC7901 /ADR medija kulture stanica za pomoć u održavanju MDR. Stanice u logaritamskoj fazi rasta se centrifugiraju, te razrijedi s RPMI-1640 mediju za pripremu jedne stanične suspenzije s koncentracijom od 2,5 × 10 ^{6 /ml za sijanje. Pregled}}

Uspostavljanje modelu ksenografta bezdlakim miševima pregled

in vivo antitumorsko djelovanje PAB ispitana je na mišjem modelu ksenografta. Za model, 4-6 tjedana stari, muško i žensko imunodeficijentni BALB /c (nu /nu) miševa, težine 18 do 22 g, nabavljene su od Pekinga HFK Bioscience Co, Ltd (Kina) i čuvaju u akreditiranih objekata pod standardnim uvjetima za glodavce (SPF razreda) u Zavodu za laboratorijsku stočarstvo. Pedeset miševi su odabrani i nasumce podijeljeni u dvije skupine (25 po skupini). Ukupno 25 miševa subkutano injektirano 2.5 × 10 ^{6 /ml SGC7901 stanica u 0,2 ml RPMI-1640 mediju u lijevi pazuha, a ostalih 25 miševa koji su injicirani s SGC7901 /ADR stanica na pravi aksilarnu regiju pod klica uvjetima. pregled}

Eksperimentalna skupina i lijekove pregled

Sedam dana nakon implantacije stanica, tumori postali opipljivi (oko 3 mm × 3 mm u promjeru), a zatim u dvije grupe ubrizgava s dvije različite vrste stanica su bili podijeljeni u pet podskupina (5 miševa po skupini): normalna fiziološka otopina (NS) kontrolne skupine, kontrolna skupina Tween, ADR grupe, PAB grupe, a PAB + ADR grupe. Za Pab grupe PAB (25 mg /kg /d u 0,1 mL) otopi se u vodenoj otopini 6% polietilen glikola, 3% etanola i 1% Tween 80 intraperitonealno (i.p.) na dan tijekom 20 dana, [13]. Jednaki volumen vodene otopine ili NS se ubrizga u kontrolnom TWEEN skupinu ili NS kontrolnoj grupi. Za ADR skupinu ADR (1,25 mg /kg u 0,1 mL), razrijeđena u NS je primijenjen i.p. dan tijekom 20 dana [18]. Tumorom koji je miševima primjenjena kako PAB (25 mg /kg /d) i ADR (1,25 mg /kg /dan) i.p. za isto razdoblje u PAB + ADR skupinu. Nakon tretmana miševa iz svake skupine žrtvovano i uzorci tumora bilateralnih aksilarnih regije su izmjereni i reseciran za imunohistokemijske analize i Western blot. Ovo istraživanje je provedeno isključivo u skladu s preporukama u Vodiču za njegu i korištenje laboratorijskih životinja iz National Institutes of Health. Protokol je odobren od strane Odbora za etiku u životinjama iz Shengjing bolnice povezane u Kini Medical University (broj dozvole: 2013PS144K). Miševi su žrtvovani pod 10% kloralhidratnom anesteziji, a učinjeni su svi napori kako bi se smanjili patnju. Pregled

Mjerenje i izračun volumena tumora i težine pregled

Tjelesna masa prati svaki dan, a dva okomita promjera (dužina i širina u milimetrima) tumora mjeren je svaka dva dana s čeljustima tijekom cijelog perioda liječenja. Volumen tumora je procijenjena korištenjem dvodimenzionalne mjerenja i izračunava se kako slijedi: volumen tumora (mm ^{3) = duljina (mm) x širina 2 (mm) /2. Volumen tumora u odnosu (RTV) izračunan je na sljedeći način: RTV = (srednja vrijednost volumena tumora za vrijeme liječenja) /(srednja vrijednost volumena tumora na početku terapije). Antitumorska učinci PAB i /ili ADR procijenjeni sa stopom srednja inhibicije (IC) rasta tumora korištenjem sljedeće jednadžbe: IR (%) = [(1 srednja RTV grupa tretiranih lijekom /znači RTV NS kontrolnoj skupini ) × 100] [19]. Relativna tjelesna masa miševa je izračunata pomoću W _{t /W 0 index, gdje je W t bio tjelesne težine na dan mjerenja, a W 0 je tjelesne težine kod prvi dan liječenja. Promjena tjelesne težine na dane 1 i 20, što predstavlja početak i kraj eksperimenta, odnosno, je bio korišten za procjenu i analizu učinaka lijekova na tjelesnu težinu [20]. Pregled}}

Imunohistokemijska bojanja za izražavanje COX-2, PKC-a i p-gp pregled

uzorci tumora su fiksirane sa paraformaldehidom, obrađeni rutinski ugrađivanje u parafin, te izreže na 4-p.m sekcija. Sljedeći hematoksilinom i eozinom (HE) bojanja stanica želučane ksenografta raka su promatrane pod svjetlosnim mikroskopom. Razina ekspresije COX-2, PKC-α i P-gp u sakupljenih stanica tumora je određena korištenjem metode SP. Ukratko, nakon odvoštiti i rehidrirane, inkubira se u 0,3% 'H-sub> 2O _{2 otopinom i osušeni u mikrovalnoj pećnici u puferu limunske kiseline tijekom 15 minuta za pronalaženje antigena. Prerezi su blokirane s normalnim kozjim serumom tijekom 30 minuta na 37 ° C i obilježeni zečjim monoklonskim protutijelom protiv COX-2 i mišjim monoklonskim protutijelima na PKC-a i P-gp pri 4 ° C preko noći (sve Antitijela su razrijeđena u 1 :300). Biotiniliranog anti-zečjeg IgG i anti-štakor IgG se doda i inkubira na 37 ° C tijekom 30 minuta prije nego što je dodan HRP konjugiran s enzimom-streptavidin. Osim toga, 3, 3'-diaminobenzidinu (DAB) korišten je kao kromogen. Stakalca su prebrojane s hematoksilinom, dehidrirana u alkoholu, a montirana na neutralnom balzama. Kontrole su pripremljeni koristeći samo sekundarnih antitijela. Pet područja svake sekcije iz svakog miša u svakoj grupi su izabrani za prikupljanje slika. Rezultati su analizirani i usporedi statistički NIS-Elementi Br 3.0 softvera, te je dobiven prosjek optička gustoća za kvantifikaciju razina ekspresije COX-2, PKC-α i P-gp. Pregled}

blot Cox -2, PKC-α i p-gp u miševima ksenografta pregled

ukupno 100 mg svježe smrznute tumorskih tkiva iz najmanje tri miša iz svake grupe su izvagani i uz dodatak radio eseja imunoprecipitacije (RIPA) lize pufera [koja sadrži 100 ug /ml fenilmetansulfonil-fluorid (PMSF)]. Nakon pulverizira škare, ekstrakti su homogenizirani pomoću ultrazvuka. Nakon centrifugiranja na 14.000 okretaja u minuti na 4 ° C tijekom 30 minuta, uzorak supernatanta je zamrznuta na -80 ° C za Western blota. Koncentracija proteina ekstraktima određena je upotrebom bicinkroniničnoj kiselini (BCA) komplet za određivanje proteina. Potom je 100 ug proteina po mišu u denaturacijskim uvjetima (100 ° C, 5 min) se elektroforezi sa natrij dodecil sulfat-poliakrilamid gel elektroforeze (SDS-PAGE) u 8% -tnom gelu razdvajanje i electrotransferred na PVDF membrane korištenjem mokrog sustava prijenosa na 100 V (COX-2, PKC-α, β-aktin za 100 min, a P-gp 3h). Nakon blokiranja s 5% -tnim nemasnim suhim mlijekom u 1 × TBST (Tris-puferirana slana otopina koja sadrži 0,1% Tween20) tijekom 90 minuta, membrane su zatim inkubirane s primarnim antitijelom kunića [monoklonska protutijelo za COX-2 (1:400) ili miša monoklonska protutijela na PKC-a (1:200) i P-gp (1:200), s P-aktin kao unutarnju kontrolu kod proteina utovar] noći na 4 ° C. Da antitijelo vezanje vizualizira pomoću peroksidazu vezano sekundarni kozjeg anti-zečjeg antitijela (1:2000) i kozjeg anti-mišjeg protutijela (1:2000) kroz 1.5 h na sobnoj temperaturi. Zatim, membrane su vizualizirani pomoću pojačane kemiluminiscencije (ECL) reagensom. Rezultati su analizirani pomoću slika J softvera. Pregled

Statistička analiza pregled

su svi podaci prikazani kao srednja vrijednost ± standardna devijacija i višestruke usporedbe između bilo koje dvije od tretiranim skupinama su ocijenjeni od strane jedno- ANOVA, pomoću SNK i metode LSD s SPSS 17,0 softvera. Odnos između promjene tjelesne težine i volumena tumora su analizirani Pearson analizu korelacije. p vrijednosti manje od 0,05 smatrane su statistički značajnima. pregled

Rezultati

Inhibicijski učinak PAB na rast ljudskog karcinoma Netlogu želučane

Tumori u svim tretiranim skupinama formirana odmah nakon implantaciji suspenzije pojedinačnih stanica i brzina formiranja bila je 100%. Kada ksenografta postalo je očito, nije bilo nikakvih značajnih razlika u prosječnoj volumena ksenografta među različitim skupinama (Tablica 1), a volumeni tumora su praćene u različitim vremenskim točkama u svim skupinama. Krivulje rasta tumora u dvije stanične linije su prikazani u grafu (Slika 2A, 2B). Kao što je prikazano u tablici 1, za skupine SGC7901 stanica tretiranih, nema značajne razlike između skupina PAB grupe i ADR skupine u prosječnim relativnim količinama u ksenografta (p > 0,05) i IR je bio 56,4% i 59,0%, odnosno. Dodavanje ADR-PAB rezultiralo visokom antitumorskog djelovanja nego što je sama PAB ili ADR samog (p < 0.05) sa IR od 88,1%. Inhibicijski učinak PAB skupine bio veći u usporedbi s onom ADR skupine na -tnora SGC7901 /ADR stanica, te IR vrijednosti su 64,1%, odnosno 21,9%, respektivno (p 0,05). Inhibicija rasta tumora je očitije kod miševa tretiranih s PAB kombinaciji s ADR, uz IR od 85,8%. Nalazi mase tumora u različitim skupinama i dalje podupirati naše rezultate u pogledu obujma miševa ksenografta. Slika 2C i 2D prikazuje promjene relativnog tjelesne težine miševa u deset skupina. Tjelesna težina je bila slična između kontrolne skupine i skupine Pab-liječi. Međutim, tjelesna težina smanjila u skupinama kombiniranoj tretiranih i ADR skupine i smanjenje od nuspojava skupina je očitije (p 0,05). Osim toga, slika 3 prikazuje izravnu usporedbu veličina tumora SGC7901 stanica i SGC7901 /ADR stanica u različitim skupinama. Odnos promjene tjelesne težine i volumen tumora nisu bile statistički značajne (p > 0,05). Doze se testirani dobro podnosi kod miševa, i nijedna životinja letalitet je primijećen tijekom eksperimenta. Pregled

Imunohistokemijsko bojenje na ekspresiju COX-2, PKC-α i P-gp pregled

Sve tumori u svakoj skupini, kroz imunokemijska ispitivanja, prikazani pozitivno ekspresije COX-2, PKC-a i P-gp proteina. COX-2 i PKC-α Ekspresija je definirano kao pozitivan ako je obojeni područje stanica tumora bila je u citoplazmi, i P-gp obojenje se smatra pozitivnim ako obojenje uočeno je u membranu i citoplazmi. Proteini su obojeni žuto ili smeđe pod optičkog promatranja mikroskopom (slika 4). Za SGC7901 /ADR stanične linije, na bojenje tih proteina u kontrolnim skupinama bio veći nego u drugim skupinama (p < 0.05). PAB tretman smanjio intracelularnu bojenje Cox-2, PKC-a i P-gp u usporedbi s tretirana ADR-skupine (p < 0.05). Nakon PAB i ADR liječenja, unutarstanični bojenje tih proteina je rjeđi i slabiji u usporedbi s onim drugim skupinama. Za -tnora dvije kontrolne skupine NS, obojenje P-gp u SGC7901 stanicama bila je značajno manja od one SGC7901 /ADR stanica (p 0,05). Analiza intenziteta bojanja COX-2, PKC-α i P-gp ekspresija pokazala iste rezultate (tablica 2). Pregled

Učinak PAB na COX-2, PKC-a i P-gp izraz na miševima ksenografta pregled

Kako bi se razjasnila molekularni mehanizam koji su uključeni u poništavanju učinaka PAB na SGC7901 /ADR stranih tijela in vivo, ekspresija COX-2, PKC-a i p-gp u tumorima iz različitih skupine reagensa tretirane određuje se pomoću Western blot analize. Kao što je prikazano na slici 5, za kontrolnu skupinu NS razinu ekspresije COX-2, PKC-a i P-gp u SGC7901 stanica ksenografta je manja u odnosu od onih u SGC7901 /ADR tumora stanica (p < 0.05) , Za tumora SGC7901 /ADR stanica, razine ekspresije tri proteina od interesa u kontrolne skupine i kontrolne Tween grupe NS su značajno viši u usporedbi s drugim skupinama (p < 0,05), i nije bilo značajne razlike između dvije skupine (p > 0,05). Razina ekspresije COX-2, PKC-a i P-gp u tretiranoj PAB-skupine su znatno niže u usporedbi s onima od tretiranog ADR-skupine (p < 0.05). Ekspresija P-aktin korištena je kao interna kontrola i razinu ekspresije COX-2, PKC-a i P-gp smanjeni uzastopce između kontrolnih grupa, ADR grupa, PAB skupina i PAB + ADR (p <0.05) pregled

Rasprava pregled

PAB je jedan od glavnih biološki aktivnih komponenti root kore ljekovita biljka Pseudolarix kaempferi pregled i prikazuje znatan citotoksičnost prema nekoliko stanica raka. linije. In vitro studije su također pokazale da preokreće MDR karcinoma inhibicijom povećane ekspresije P-gp, bez očite nuspojave [13], [15], [20], [21]. Također je pokazano da PAB ima antitumorsko djelovanje u miševa modelima ksenografta ljudskih raka debelog crijeva i hepatocelularnog karcinoma [13], [20], i bez poznatih nuspojava PAB na životinjama su prijavljene. Naša prethodna studija pokazala je da PAB ima snažno inhibicijsko djelovanje na SGC7901 stanične linije in vitro, te potiče apoptozu želučanih stanica karcinoma preko kaspaze puta [16]. Naš sadašnji in vivo studija pruža daljnji dokaz da PAB je zaštita protiv želučanih tumora u mišjim modelima sa korištenjem SGC7901 stanice i SGC7901 /ADR stanica. Naši preliminarni eksperimenti su pokazali da PAB na 25 mg /kg, ne samo inhibira rast karcinoma želuca, ali je također dobro podnosi miševa. Osim toga, uključili smo kontrolnu Tween grupu da ne mogu utjecati na vodene otopine koja je korištena da bi se otopila PAB na tumorima [13]. Za osjetljive stanice, antitumorski efekti PAB nisu dali značajne razlike u usporedbi s ADR-a, tradicionalnog kemoterapije droga. Osim toga, PAB je biološki aktivan spoj je onaj koji vrši svoj povratni učinak na SGC7901 /ADR stanične linije tumora ciljanjem putove signaliziranja pomoću P-gp prekomjerne ekspresije in vivo. Pregled

P-gp je 170-kDa membrane protein koji djeluje kao izbacivanje lijeka crpke, čime se dobiva kontinuirano defekta u unutarstaničnom nakupljanje tvari [22]. Rezistencije na više lijekova fenotip je glavni uzrok tumor kemoterapije ispada je uglavnom produkt prekomjernom ekspresijom P-gp u većini tumora, uključujući želučanog novotvorine. [23] Nadalje, inhibicija ovog puta može biti način da preokrenu MDR želučanih stanica raka [3], [24]. Pregled

COX-2, može inducirati enzima koji katalizira pretvorbu arahidonske kiseline u prostanoide ( PG) i sudjeluje u više fizioloških i patoloških zbivanja, izazvana je raznih upalnih i mitogcnc podražaja [25]. Jaka veza između MDR i prekomjernu ekspresiju COX-2 je prikazana u mnogo različitih vrsta tumora. Ovi prethodni rezultati sugeriraju da COX-2 modulira ekspresiju i aktivnost P-gp i uključen je u razvoj MDR fenotipa [26] - [28]. Štoviše, akumulirana dokaz je pokazao da COX-2 inhibitori su u stanju senzibiliziranju stanica raka na antiproliferacijskih efekata kemoterapijskih lijekova mijenjanjem aktivnost vezivanje ATP-proteina. COX-2 inhibitori mogu čak smanjiti MDR blokiranjem COX-2 posredovane povećanje ekspresije i aktivnosti MDR1 karcinoma, in vitro i in vivo [6], [7], [29]. Stoga smo hipotezu da COX-2 može regulirati ekspresiju P-gp u tumorskim tkivima te inhibiciju taj put je od velikog značaja za obrat rezistencije na više od raka na lijekove za kemoterapiju, pregled

Otkrili smo da je za SGC7901 /ADR stanica tumora, razine ekspresije COX-2 i P-gp u kontrolnoj skupini NS očigledno bili viši od onih za -tnora SGC7901 stanica. Nakon injektiranja PAB, očito smanjenje tih razina ekspresije nije opažen. Međutim, ADR je manje učinkovit za suzbijanje razine COX-2 i P-gp izraz SGC7901 /stanične ksenografta ADR, a kada je u kombinaciji s PAB, zabilježena je niža razina proteina. Dakle, predložili smo da modulacija ekspresija COX-2 od strane PAB može smanjiti ekspresiju i aktivnost P-gp, inhibira rast i inducira apoptozu, osim što djeluje u suradnji s ADR-u suzbijanju tumora otpornih na lijekove, pa čak i ukidanja MDR fenotip želuca. pregled

PKC je serin /treonin kinaza, uključena u prijenos signala potrebnog za staničnu proliferaciju i diferencijaciju [30]. Od PKC izoformi, prekomjerna ekspresija i pojačana aktivnost PKC-a su najuže povezane s regulacijom MDR fenotipa u ljudskoj raka želuca [31]. Rezultati prikazani ovdje podržavaju ideju da PKC-α fosforilira P-gp, modulira istjecanja funkciju P-gp, te u konačnici dovodi do rezistencije na lijekove [32]. Inhibicija PKC-a sa specifičnim inhibitorom ili rušeći PKC-a s siRNA dovodi do smanjenja ekspresije MDR1, povećana toksičnost lijekova protiv raka, i ukida MDR [8] - [10]. Dakle, nagađati da PKC-α signalnog sustav može imati ulogu u modulaciji MDR1 izraz u želuca. Pregled

Pod normalnim okolnostima, PKC je neaktivan u stanicama, a aktivacija vezana uzvodno PGE aktivaciju. COX-2 je povezan s membranom povezane prostaglandin E2 sintaze (MPGES-1), i sintezu PGE posredovanog ovih proteina povećava i aktivira nizvodno PKC-a put [33]. Pokazano je da je selektivni COX-2 inhibicija specifičnih inhibitora ili siRNA ima terapeutski učinak na inhibiciju ekspresije PKC-a i P-gp, istodobno, istovremeno, unazad MDR [26], [34]. Studija je pokazala da PGE2 posreduje indukciju MDR1 izražavanja putem PKC puta [35]. Rezultati naših eksperimenata pokazali su da PAB može inhibirati PKC-α ekspresiju -tnora SGC7901 /ADR stanične linije, od kojih je učinak bio jači od onog ADR. Osim toga, kada PAB je u kombinaciji s ADR, izraz inhibicija učinkovitost PKC-α bio je još jači. Varijacije Tendencija PKC-a ekspresije je u skladu s onom COX-2 i P-gp u različitim skupinama reagensa tretiranim rezistentnih SGC7901 /ADR tumora. Pokazano je da PAB inducira zaustavljanje rasta i apoptozu kroz inhibiciju COX-2 u put stanica raka [20], [21]. Pretpostavljamo da PAB inhibira ekspresiju COX-2 u SGC7901 /ADR stanične ksenografta, te da je veza između COX-2 i MPGES-1 smanjuje sintezu PGE, koja smanjuje aktivaciju nizvodno PKC-a. Kao i fosforilaciju P-gp je inhibirana, više lijekova akumulirati u stanicama raka, toksičnost ADR je pojačan i MDR obrnuta. Ovi rezultati pružaju uvid u nove strategije uključuje upotrebu PAB inhibira MDR ljudske želučane raka. Pregled

jedan fokus našeg eksperimenta je inhibitorni učinak pseudolaric kiseline B na potkožne ksenografta humanog želučanog adenokarcinom i usporediti anti-tumorskih učinaka lijekova između različitih liječenih skupina. Osim toga, karakteristika SGC7901 stanica i SGC7901 /ADR stanica su različite. Kroz naše dvije prije pokusa i formalni eksperiment, svi smo našli volumen tumora SGC7901 /ADR stanica nije bila veća od SGC7901 stanica. Pretpostavljamo volumen tumora može biti povezan s broja stanica, vrijeme rasta, karakterističnim stanica i druge vrste faktora. Dakle, nismo u odnosu na volumen tumora između SGC7901 stanica ksenografta i mobilni ksenografta SGC7901 /ADR. Osim toga, mi nagađati da je tijelo promjena težina miševa može biti uglavnom se odnose na toksičnost lijekova i nemam značajan odnos na volumen tumora u našem eksperimentu. Pregled

Drugi fokus našeg eksperimenta je u podlozi molekularni mehanizmi koji su uključeni u višestruke rezistencije na lijekove. Tako smo samo dizajnirani NS kontrolna skupina SGC7901 stanica ksenografta da kontrast i potvrditi iskaza tri vrste proteina iz SGC7901 /ADR stanica ksenografta su zaista značajno veći od onoga iz SGC7901 stanica ksenografta. Osim toga, budući da je odgovor SGC7901 stanica na citostatike je prilično osjetljiviji od SGC7901 /ADR stanica u oba bazičnih i kliničkih pokusa, kako bi se poboljšala osjetljivost rezistencije stanica na citostatike je naš fokus istraživanja. Dakle, nismo usporedili izraze COX-2, PKC-a i P-gp za tumore iz SGC7901 i raznim tretmanima ove skupine, izuzev NS kontrolnoj skupini Western analizom i imunohistokemijski bojenja. Pregled

Naša studija otkrila da biljni diterpenoid PAB ne samo značajno je smanjen rak želuca SGC7901 stanicama in vivo, ali i prikazuje očite učinke inhibicije prema tumora otpornih na lijekove SGC7901 /ADR stanica. Osim toga, kombinacija PAB s ADR može inhibirati rast raka želuca i razvoj ksenografta u golih miševa. Važno je napomenuti da je kao neka vrsta tradicionalne kineske medicine, učinak PAB o tjelesnoj masi golih miševa bio je prilično niža od one ADR u našem eksperimentu, što je očito prednost koja čini PAB više siguran i podnošljiv lijek za terapija raka. PAB možda neće biti samo novi djelotvorni lijek za inhibiciju rasta raka želuca i unazad svoje MDR, ali se također može koristiti kao odličan pomoćno sredstvo s tradicionalnim kemoterapeuticima i kirurško liječenje nakon daljnjeg razvoja i istraživanja. Pregled

u ovom istraživanju, ispitali smo, po prvi put, inhibicijski učinak PAB protiv humanog karcinoma želuca a vraćanje na učinak na MDR in vivo ksenografta golih miševa modela. Utvrdili smo da je njegova inhibicija MDR posredovana kroz Cox-2 /PKC-a /P-gp put, koji pruža ključnu teorijsku podlogu u vezi molekularne mehanizme želuca terapije protiv raka. Međutim, nismo proučavali mehanizme MDR u odnosu na ekspresiju gena i propisa. Kao što su molekularni mehanizmi unazad MDR su iznimno komplicirane i višestruke vrste proteina, geni i čimbenici mogu biti uključeni, petlja koja smo predložili može biti samo dio mehanizma za vožnju unatrag MDR. Više in-dubina i konkretni mehanizmi regulacije trebaju biti razjašnjeni u budućim istraživanjima. Pregled

U zaključku, PAB ima značajan inhibicijski učinak na rak želuca, in vivo i može preokrenuti MDR od raka želuca za kemoterapijskih lijekova. Mehanizam protiv MDR posredovana barem djelomično preko COX-2 /PKC-a /P-gp puta. Naša studija nudi široku perspektivu za budućnost istraživanja PAB u želučanom terapije protiv raka. Pregled

popratne podatke pregled Kontrolni popis S1. pregled DOLAZE Smjernice za provjeru pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0107830.s001 pregled (DOC) pregled