Hladiny survivin génu v periférnej krvi pacientov s karcinómom žalúdka nezávisle predpovedať survival

hladiny survivin génu v periférnej krvi pacientov s rakovinou žalúdka nezávisle predpovedať prežitie
abstraktné
pozadia
detekciu cirkulujúcich nádorových buniek (CTC) je považovaná za sľubný prostriedok pre zlepšenie stratifikáciu rizika u pacientov so solídnymi nádormi. Skúmali sme, či je expresia génov súvisiacich s CTC pridáva prognostickú silu staging TNM systému u pacientov s karcinómom žalúdka.
Metódy
Sedemdesiat chorých s TNM štádiu I až IV karcinóm žalúdka boli dodatočne prihlásili. Periférne krvné vzorky boli testované pomocou kvantitatívnej PCR v reálnom čase (qrtPCR) pre expresiu štyroch spojených CTC génov: karcinoembryonální antigén (CEA), cytokeratin-19 (CK19), vaskulárny endoteliálny rastový faktor (VEGF) a survivin (BIRC5).
Výsledky
Génová expresia survivinu, CK19, CEA a VEGF bol vyšší ako u zdravých kontrol 98,6%, 97,1%, 42,9% a 38,6% prípadov, v danom poradí, čo ukazuje na potenciálnu diagnostickú hodnotu ako survivinu a CK19 , Pri viacerých premenných analýzu prežitia, TNM staging a hladiny mRNA survivin boli zachované ako nezávislé prognostické faktory, ktoré preukazujú, že survivin expresie v periférnej krvi pridá prognostické informácie k TNM systém. Na rozdiel od predtým publikovaných dát, prepis hojnosť CEA, CK19 a VEGF nebola spojená s klinickým výsledkom pacientov.
Závery
hladiny génovej expresie survivinu pridať významnú prognostickú hodnotu pre aktuálny pracovný TNM systém. Potvrdenie týchto nálezov vo väčšom perspektívnom multicentrického série by mohlo viesť k vykonávaniu tohto biomarkeru v bežnej klinickej praxi s cieľom optimalizovať rozvrstvenia riziká a nakoniec personalizovať terapeutických opatrení na liečbu týchto pacientov.
Pozadie
rakovina žalúdka reprezentuje štvrtou najčastejšou rakovinou a druhou najčastejšou príčinou úmrtí na nádorové ochorenie na celom svete. Odhadovaná Súčasný výskyt rakoviny žalúdka je približne 16,2 /100 000 osôb /rok (world štandardizovaná miera, WSR), s najvyšším výskytom vo východnej Ázii, východnej Európe a Južnej Amerike [1]. V súčasnej dobe jediný prognostický systém bežne používané na liečbu pacientov s karcinómom žalúdka je založený na nádorom Node-metastázy (TNM) staging systému Medzinárodnej únie proti rakovine [2], v ktorom miera penetrácie nádoru (PT) a stavu uzlín (PN) [3] sú dve hlavné prognostické ukazovatele u pacientov bez vzdialenej metastatické ochorenie. Pacienti v raných štádiách sú považované za kandidátov na vyliečenie chirurgicky. Avšak, 50% pacientov s karcinómom žalúdka trpí nádorovým relapsov aj po radikálnej operácii [4, 5]. To znamená, že existujúce staging systém Nezdá sa, že presne predpovedať individuálne riziko pacienta recidívy rakoviny. V skutočnosti táto klasifikácia identifikuje široké kategórie s výrazne odlišným prognostickým podskupiny v rámci každej fáze, čo robí tento systém optimálne pre individuálny terapeutický prístup. Toto je ilustrované skutočnosťou, že niektorí pacienti v súčasnosti klasifikované ako "s nízkym rizikom" nie sú predložené adjuvantnej terapie, hoci oni predsa relapsu ochorenia skúsenosti. Naopak, niektorí pacienti v súčasnosti podstupujú adjuvantnú liečbu kvôli TNM klasifikácia "vysoko rizikové", by nebolo potrebné túto liečbu [6]. S cieľom vyriešiť tento problém a zlepšiť na prognózu chorých, sú naliehavo potrebné nové parametre spoľahlivo predpovedajú výsledok pacientov. Pacienti, ktorí podstúpili potenciálne kuratívny chirurgické zákroky udržať riziko recidívy, ktorá pochádza z mikroskopických nádorových zvyškov známych ako minimálne reziduálne choroby (MMR). MMR môže mať vplyv na rôzne telesné dutiny, vrátane kostnej drene, lymfatických uzlín a periférnej krvi [7]. V posledných rokoch sa niekoľko štúdií sa zameralo na detekciu cirkulujúcich nádorových buniek (CTC) s ohľadom na ich klinické dôsledky u pacientov s karcinómom žalúdka. Výsledkom je, že kvantitatívne polymerázovej reťazovej reakcie (qrtPCR) a varianty tejto techniky, ktorý je považovaný za najcitlivejší spôsob vyhodnocovania génovej expresie, ktoré boli použité v detekcii nádorových markerov, ktoré indikujú prítomnosť CTC v krv [8].
V súčasnej analýze sme sa zamerali na profilovanie periférnej krvi 70 patentov postihnutých adenokarcinóme žalúdka pomocou qrtPCR. Testovali sme štyri biomarkerov, z toho dve prítomnosti, reklama dvaja z agresivite nádoru, a jeden z nich, survivin, pridajte nezávislé prognostické sily do pracovnej systému TMN. To by mohlo umožniť lepšie stratifikácii rizika pacienta, a teda aj lepšie terapeutické riadenie, a to najmä v adjuvantnej
Metódy Pacienti
V tejto štúdii sme predmetu 70 pacientov (39 mužov, 31 žien ,. Veková 28 - 90 rokov, priemerný vek 68 rokov), ktorí podstúpili chirurgický zákrok (úplné alebo čiastočné gastrektómii) pre histologicky dokázaný karcinóm žalúdka od októbra 1998 do novembra 2007, a pre ktoré bol k dispozícii periférny krvný vzorku. Štúdia, ktorá je v súlade s Helsinskou deklaráciou, bola schválená miestna etickou komisiou univerzity v Padove (schvaľovacie číslo: 70/2006). Písomný informovaný súhlas týkajúce sa použitia biologických vzoriek na účely vyšetrovania bol získaný od všetkých pacientov. V čase analýzy, 33 (47,1%) bolo nažive, zatiaľ čo 37 (52,9%), zomrel. Medián follow-up bol 15 mesiacov (rozmedzie 6-119 mesiacov). Medián prežitia bol 25 mesiacov. charakteristiky nádorové sú zhrnuté v tabuľke 1. hĺbka invázie nádoru (kategória T), rozsah lymfatických uzlín (N) a makroskopické metastázy (kategória M) boli kategorizované podľa UICC TNM staging system.Table 1 pacientom a nádorové charakteristiky .
Parameters
N
(%)
Pacienti
všetky
70
(100,0)
male
39
(55,7)
samica
31
(44,3)
vek (roky)
≤ 65
21
(30,0) Hotel > 65
49
(70,0)
Umiestnenie archívov
multicentrickej
5
(7,1)
hornej tretine
11
(15,7)
strednej tretine
19
(27,1)
dolnej tretine
35
(50,0)
TNM štádium
I (IA + IB)
10
(14.3)
II
14
(20,0)
III (IIIA + IIIB)
19
(27,1)
IV
27
(38,6)
bunkových línií
ľudského karcinómu žalúdka bunkové línie NCI-N87, získaného z American Type Culture Collection (Manassas, USA), sa inkubuje v médiu RPMI-1640 (Invitrogen - Gibco, Carlsbad, CA, USA) s obsahom 10% fetálneho teľacieho séra . (Euroclone - Celbio, Pero, MI), 10 mM HEPES, 1 mM pyruvátom sodným (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO), pri 37 ° C v 5% CO 2
NCI-N87 je žalúdočné karcinómu bunková línia odvodená od pečeňových metastáz z dobre diferencovaného karcinómu žalúdka odobratej pred cytotoxickej liečby. Podľa denníka výrobcu, bunky exprimujú povrchové glykoproteíny, karcinoembryonální antigén (CEA).
Bunkové stanovenie s obohatenými vzorkami
Štúdia bunkovej stúpli bola vykonaná za účelom zistenia citlivosti tejto techniky qrtPCR pre detekciu nádorových buniek v periférnej krvnej mononukleárny bunky (PBMC). PBMC boli získané od zdravých dobrovoľníkov, a boli počítané a zriedené 1: 1 v RPMI médiu. Žalúdočné rakovinové bunky N87 boli spočítané a sériovo zriedené 1 × 10 6 buniek /ml až 1 buniek /mililiter v PBMC. Celková RNA bola extrahovaná a postupy spätného prepisuje z 2 ml každej frakcii. qrtPCR pre dvoch gény potom boli vykonané, ako je popísané nižšie.
syntézu vzorkovania, extrakcia RNA a cDNA
A 6 ml podiel žilovej krvi sa získa z každého pacienta v čase chirurgického zákroku. na spracovanie vzoriek bolo vykonané v priebehu dvoch hodín po odobratí krvi. Vzorka bola centrifugován pri 2000 x g počas 10 minút, a frakcie PBMC sa zhromaždia a uložia sa v tekutom dusíku.
Zmrazené vzorky boli rozmrazené a celková RNA bola extrahovaná metódy guanidínu Tiokyanatan-fenol-chloroformom (TRIzolu Reagent, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Integrita izolované RNA bola stanovená analýzou qrtPCR beta aktínu endogénnej referenčného génu (b-aktínu), ako je popísané nižšie [9].
Celková RNA (7 ug na 100 ul konečného objemu reakcia) bola reverzne transkribovaných s použitím náhodné priméry a MultiScribe reverznej transkriptázy (cDNA High-Capacity reverznej transkripcii kit, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Reakčná zmes bola inkubovaná počas 10 minút pri teplote 25 ° C, potom pri teplote 37 ° C počas 120 minút. cDNA uskladnili pri -80 ° C až do použitia.
v reálnom čase kvantitatívne PCR
transkripčný úrovni štyroch génov (tj karcinoembryonální antigén CEA [], cytokeratin-19 [CK19], od survivinu a cievneho endotelu rastový faktor [VEGF]) boli merané v periférnej krvi pacientov pomocou kvantitatívnej PCR v reálnom čase (qrtPCR) s použitím metódy relatívnou kvantifikácie (2 -ΔΔCt metóda) [10, 11]. Použitie 2 -ΔΔCt metódy sú dáta prezentovaná ako rozkladací zmene génovej expresie normalizovaného referenčného génu a vzhľadom k vzorke kalibračnej. Účelom normalizácie je upraviť hodnotu, ktorá predstavuje transkripčný hladiny každého génu množstvom mRNA prítomné v každej vzorke: toto je obvykle získavajú rozdelením úrovne expresie každého génu tými referenčného génu (tiež s názvom "upratovanie" gén). Upratovanie izieb gény sú vyjadrené konštitučne a - v ideálnom prípade - nie sú ovplyvnené experimentálnymi manipuláciami: preto by mali približne zodpovedať celkové množstvo mRNA testovaný v každej vzorke [12]. Ako referenčný gén v tejto štúdii sme použili beta-aktínu, jeden z najčastejšie používaných domácnosti génov. Br &relatívnej kvantifikácie PCR štúdie, tzv "kalibrátor" je reprezentovaný génovej expresie vybranej vzorky, ktoré výraz profil každej vzorky záujmu, sa upraví: tento prístup umožňuje vyšetrovateľa porovnať profil expresie vzoriek záujmu spolu navzájom, pokiaľ ide o ich rozkladacia zmeny vzhľadom na jednej vzorke (kalibrátora)
. zvyčajne je kalibrátor neošetrený vzorka (napr funkčné štúdie), vzorka v čase nula (napríklad v štúdii časový priebeh) alebo akékoľvek nepríbuzných vzorky (napr zdravých kontrol v štúdii pacientov, alebo normálne fibroblasty v rakovinové bunky štúdie čiara) [10]. Bazén cDNA odvodené z PBMC 20 zdravých darcov bol použitý ako zdroj kalibrátora v našej štúdii. Vyhodnotenie 2 -ΔΔCt uvádza násobnú zmenu génovej expresie vzhľadom k kalibrátora. Pre kalibrátor ΔΔCt rovná nule, a 2 0 rovný jednej, takže prehyb zmena génovej expresie vzhľadom k kalibrátora sa rovná jednej, podľa definície.
Metóda bola potvrdená pre naše experimentálne systému kontroly, či účinnosť amplifikácie cieľov a b-aktínu génov boli podobné. Testy TaqMan Gene Expression špecifické pre CEA, CK19, od survivinu a VEGF boli zakúpené od Applied Biosystems. Aby nedošlo k amplifikácii kontaminovanú genómovej DNA sa pár primerov bol umiestnený na spojenie medzi dvoma exóny. Test qrtPCR bola vykonaná s použitím systému Sequence Detection ABI PRISM 7300. PCR reakcia prebieha v zmesi (30 ul) obsahujúce 15 ul 2 x TaqMan Universal PCR Master Mix, 1,5 ul 20 x TaqMan Gene Expression testu (všetky reagencie od firmy Applied Biosystems), 12,5 ul vody a 1 ul templátu cDNA , Päťdesiat cyklov amplifikácie boli vykonávané pri 95 ° C (15 sekúnd) a 60 ° C (1 minúta) a expresné hladiny mRNA boli normalizované proti kvantifikované b-aktínu expresie mRNA pre každú vzorku.
Štatistická analýza Štatistická analýza bola
vykonáva s použitím V. 4.57 softvér Stat View (Abacus Concepts, London, UK) a V7.0.0 softvér StatXact (Cytel softvér Corporation, USA). Korelácia medzi hladinami génov (vysoké v porovnaní s nízkou expresiou génu, ako je definované hodnotou mediánu) a kategórií TNM ochorení zastávok bola hodnotená pomocou testu Cochrane-Armitage trend. Krivky prežitia boli odhadnuté použitím metódy Kaplan-Meyer a jednorozmerné porovnaní prežitie boli vypočítané v súlade s log-rank testu. Transkripční hladiny štyroch génov, spolu s antropometrických faktormi a TNM stupňoch (v závislosti na 5. vydanie predstavovať systém AJCC TNM vydanej v roku 1997), boli použité ako nezávislé premenné v analýze s viacerými premennými prežitie, ktoré sa vykonáva za použitia Cox proporcionálny nebezpečenstvo regresného modelu [13]. Výber premenných, ktoré prispievajú k významnému prediktívneho modelu bola vykonaná postupným spôsobom. . Pravdepodobnostné hodnôt < 5% boli považované za štatisticky významné
Výsledky
Cell zlepenie: citlivosť na qrtPCR techniky
bunkové línie N87, hladiny mRNA CEA, CK19, survivin, a VEGF gény boli veľmi vyjadrené (Obrázok 1): a preto sa toto rakovina žalúdka bunková línia predstavuje platný pozitívna kontrola pre naše experimenty. Úrovne Obrázok 1 génovej expresie štyroch génov v n87 ľudských buniek karcinómu žalúdka (merané pomocou kvantitatívnej PCR v reálnom čase: pozri text pre podrobnosti). Prirodzený logaritmus expresných hladín je uvedený na osi y: os pôvod (0) predstavuje referenčnú vzorku (nazvaný kalibrátora), s ktorou sú všetky experimentálne vzorky v porovnaní relatívneho spôsobe kvantifikácie (pozri text), podrobnosti
. na stanovenie limitu detekcie (citlivosť) techniky qrtPCR, serial 10 riedenie (v PBMC) z N87 karcinómu žalúdka bunky boli testované trojmo podľa qrtPCR pomocou CEA a survivin ako génových markerov. CEA a survivin mRNA boli detekované až 1 bunka /10 8 PBMC riedenie :.
To zodpovedá zistenie 1 až 10 malígnych buniek na 10 ml periférnej krvi (dáta nie sú uvedené) expresie markerov vo vzorkách krvi
vzorky periférnej krvi od všetkých 70 pacientov boli hodnotené štyri génových markerov. Výraz bol pozitívny (vyšší ako kalibrátora) v 98,6%, 97,1%, 42,9%, 38,6% vzoriek pre survivinu, CK19, CEA, VEGF, v danom poradí (tabuľka 2). Vzhľadom k tomu, nájdených hladiny génovej survivin a CK19 takmer u všetkých pacientov, sú vyššie ako u zdravých kontrol, tieto nálezy ukazujú na diagnostický potenciál oboch úrovniach genes.Table 2 transkripčných štyroch prognostických markerov v periférnej krvi pacientov s rakovinou žalúdka.
Marker
Nad kalibrátora (%) *
Pod kalibrátora (%) *
Undetectable (%)

survivin
69 (98,6)
1 (1,4)
0 (0,0)
CK19
68 (97,1)
2 (2,9) NETHRY.cz 0 (0,0 )
CEA
30 (42,9)
21 (30,0)
19 (27,1)
VEGF
27 (38,6)
43 (61,4) NETHRY.cz 0 (0,0 )
* úrovne génovej expresie bola meraná pomocou kvantitatívnej PCR v reálnom čase: using relatívna metódy kvantifikácie, vzorky boli klasifikované ako nad alebo pod úrovňou zistených v kalibrátora (vzorky zlúči periférnej krvi od zdravých darcov)
navyše. ak budeme považovať za 75. percentil hladín survivin vyjadrenie na javisku, mali sme významné zvýšenie trend (p = 0,04) pre stupňov od I až III, ale nie pre štádiu IV (obrázok 2). Obrázok 2 úrovne na survivin génu meranej v periférnej krvi 70 pacientov s TNM štádiu I až IV karcinómu žalúdka. Trend Test Analýza ukazuje významné zvýšenie od survivinu transkripčných úrovní v pacientov s štádiu I s rakovinou žalúdka (III trend teste bola hodnota p = 0,04). Pre každý stĺpec je hlásená priemer ± SD
Analýza prežitie
Po priemernej dobe sledovania až 26 mesiacov, medián celkového prežívania (OS) pre TNM štádiu I-II nebol dosiahnutý .; medián OS pre fázu III a IV bolo 25 a 13 mesiacov, respektíve (log-rank test P-hodnota < 0,0001, obrázok 3). Obrázok 3 Celkové prežitie pre TNM štádiu I-II, III a IV u všetkých pacientov (log-rank test P-hodnota < 0,0001).
Upon jednorozmerné analýze prežitia medzi štyrmi génmi sme testovali len survivin výraz mohol identifikovať dve skupiny pacientov s výrazne odlišnou prognózou. V skutočnosti, s ohľadom na 75. percentil hladín génovej transkripcie logaritmicky transformovaných (1,508) ako limitná bod, medián OS na vysokej (viac ako 1,508) a nízke (≤1.508) survivin mRNA množstvo bolo 14 a 41 mesiacov, v danom poradí (log- rank p-hodnota = 0,036, obrázok 4). Obrázok 4 prežitie Kaplan-Meier krivky pacientov s vysokým (viac ako 75. percentil) alebo nízkym (menej ako 75. percentil) transkripčný hladiny survivinu namerané v periférnej krvi. Log-rank test P-hodnota = 0,036.
Multiviariačnou analýzy prežitie, vrátane TNM štádiu, veku, pohlavia a hladiny mRNA štyroch markerov ukázalo, že iba TNM štádium a hladiny mRNA survivin namerané v periférnej krvi nezávisle predpovedať OS pacientov , Pomer rizika (HR) spojená s hladinami survivin indikuje zvýšenie rizika úmrtia na 100 násobný nárast survivin výrazu (tabuľka 3) .Table 3 viacrozmerné analýzy prežitia 70 pacientov s rakovinou žalúdka.
kovarianty
HR
spoločností 95% CI
P-hodnota


dolná hranica
Horný limit

TNM štádiu I
1 (referencie) -
-
-
etapa II
1,20
1,01
1,45
0,048
fáze III
1,34
1,05
1,70
0,017
fázy IV
3,17
1,38
6,77
0,004
survivin *
1,34
1,14
1,53 Hotel < 0,001
HR: pomer rizika; CI: interval spoľahlivosti; * HR spojené s úrovňami survivinu udáva zvýšenie rizika smrti pre 100-násobné zvýšenie expresie survivin.
Vzhľadom k tomu, len tieto štyri nezávislé premenné boli uložené u Coxovho modelu, táto analýza naznačuje, že expresie génov survivin môže pridať užitočné prognostické informácie dobre zavedených faktory, ako je TNM predstavovať systém.
diskusia
v tejto štúdii sme zistili, že transkripčný hladiny survivinu namerané v periférnej krvi pacientov s karcinómom žalúdka nezávisle koreluje s ich celkovým prežitím.
-Li overená vo väčších prospektívnych štúdiách, tieto výsledky by umožnilo zvýšiť prognostickú silu obvyklých prognostických faktorov, ktoré sú v súčasnej dobe podľa predloženého parametre TNM zastávky. To je zvlášť dôležité pre pacientov s TNM štádiu I až III ochorenie, pre ktorých je nevyhnutná optimálna stratifikácia rizika identifikovať subjekty s najvyššou pravdepodobnosťou ťažiť z pomocnej liečby.
Naše zistenia majú osobitný význam aj z pohľadu biológie nádorov preto, že gén kóduje survivin kľúčovú anti proapoptotický proteín patriaci do inhibítor apoptózy (IAP) proteínové rodiny. Okrem toho, že jeden z najlepšie charakterizovaných anti-apoptotické faktory [14], survivin je predmetom intenzívneho skúmania vzhľadom na to, že u dospelých, že sa selektívne prakticky vyjadrená len rakovín rôzneho pôvodu; okrem toho, jeho expresie v primárneho nádoru bola spojená s horšou prognózou a odolnosťou proti bežným chemoterapeutík [15]. Tieto pozorovania, aby survivinu ideálny cieľ pre terapiu nádoru-špecifické, napríklad nízkomolekulárnych inhibítorov a imunoterapia špecifickým pre antigén [16].
Expresie proteínu survivinu v primárnych nádorov, vrátane rakoviny žalúdka, bola skúmaná ako prognostický faktor, vyššia úrovne sú spojené s horší výsledok rakoviny [17]. O RNA expresiu, boli hladiny mRNA survivin boli skúmané ako marker cirkulujúcich nádorových buniek (CTC) v rôznych typoch rakoviny, ale dostupné údaje sú zriedkavé [18, 19]. V sérii 26 pacientov s karcinómom žalúdka, survivin mRNA (merané pomocou ELISA na báze qrtPCR) v periférnej krvi bolo hlásené, že koreluje s prognózou pacienta, TNM predstavovať vylúčenie z konečného mutivariable modelu (núti všetky premenné do modelu Cox) [20]. V našom väčšie série (n = 70), pričom prognostický role hladín survivinu v krvi je potvrdené, aj keď je stále TNM predstavovať významný prognostický faktor v konečnom viac premenných modelu (pomocou postupné režim variabilný výber). Napriek značnému spojenie s prognózou pacienta, hladiny mRNA survivin nezvýšil vo všetkých štyroch fázach TNM: trend pre zvýšenie transkripčný množstvo bolo v skutočnosti dokázaná len u pacientov s stupňami I až III ochorenia (Obrázok 2). Toto zistenie sila závisí na nízkej veľkosti vzorky jednotlivých stupňov TNM (a následné nízke štatistické sily), ale môže sa tiež ukazuje, že survivin hrá úlohu v lokoregionálnej, a nie vo vzdialenej metastatického ochorenia (tam, kde iné gény by mohli mať väčší význam, ako je v poslednej dobe hlásených [21])
na rozdiel od iných štúdií [9, 22 až 26], úrovne CK19 a CEA nekoreluje s prežitím pacientov v našej sérii, a to buď na univariable (dáta nie sú uvedené), alebo viac premenných analýzu prežitia :. tento môže závisieť od viacerých faktorov. Po prvé, zaradenie v našej analýze viac premenných (s postupným režimu variabilného výberu) z markeru nepovažuje za inými autormi nedáva porovnaní neuskutočniteľné.
Za zmienku stojí, niektoré pozitívne správy použiť iba univariable analýzu prežitia, čo ohrozuje spoľahlivosť a reprodukovateľnosť ich výsledkov, raz očistení o dobre zavedené prognostické faktory (tj štádia TNM) boli realizované [9, 25, 27, 28]. Okrem toho, v súlade s našimi výsledkami ďalšie vyšetrovatelia, ktoré hlásia nedostatok súvislosť medzi cytokeratinům pozitívnych buniek prítomnosťou a prognózu [29] (pozri tabuľku 4) .Table 4 Vybrané série analyzovať prognostické role cirkulujúcich nádorových buniek (CTC) u pacientov s rakovinou žalúdka.
Author

Year

Ref.

Patients

Method

Survival Analýza
Markers
Nálezy
Koga T et. al.
2008
[9]
101
Kvantitatívny RT-PCR
jednorozmerných
CK18, CK19, CK20, CEA
CK19 je lepší ukazovateľ, a je použiteľný pre odhadnúť prognózu alebo adjuvantnej liečbu
Yie SM et. al.
2008
[20]
26 (rakovina žalúdka)
RT-PCR ELISA
Multivariate
survivin
Stav survivin-vyjadrujúcim CTC je silným a nezávislým prediktorom recidívy
Hiraiwa K. et. Al.
2008
[22]
44 (rakovina žalúdka)
CellSearch systém
mnohorozmernom
CD45 (-) buniek vs CK (+) bunky
CTSS významne koreluje s pokročilé štádium nádoru
Illert B et. al.
2005
[23]
70
kvantitatívnej RT-PCR
Multivariate
CK20
CK20 je nezávislý prognostický ukazovateľ
Yeh KH et. al.
1998
[24]
34
vnorené kvantitatívnej RT-PCR
Jednorozmerná
CK19 CK19
vyjadrenia CTC sú spojené so zlou prognózou
Seo JH et. al.
2005
[25]
46
Kvantitatívny RT-PCR
nie je vykonaná
CEA CEA
mRNA významne koreluje s klinickým opakovania
Wu CH et. al.
2006
[26]
42
Kvantitatívny RT-PCR
nie je vykonaná
hTERT, CK19, CK20, CEA CEA
mRNA koreluje s vyšším rizikom pooperačných opakovanie /metastázy
UEN YH et. al.
2006
[27]
52
kvantitatívnej RT-PCR
jednorozmerných
c-met, MUC1
c-Met a MUC1mRNA významne korelujú s prognózou
Mimori K et. al.
2008
[28]
810
Kvantitatívny RT-PCR
jednorozmerných
MT1-MMP
MT1-MMP je nezávislý faktor pre stanovenie recidívy a vzdialené metastázy
Pitucha-Noworolska A. et. Al.
2007
[29]
57
prietokovej cytometrie
univariantní
CD45 (-) bunky vs CK (+) bunky
prítomnosť CK (+) buniek nemá žiadnu prognostický význam
týchto protichodných údajov môže závisieť na tom, že CK19 a CEA sú markery CTC prítomnosti, ale nie nevyhnutne CTC schopnosť metastázovať: v skutočnosti, že je dobre prijímaný, že iba časť CTC má biologický potenciál by mohol viesť k metastatických ložísk, zatiaľ čo väčšina CTC nakoniec zomrie, bez toho, aby škodlivé pre hostiteľa [7]. V súlade s tým, markery CTC "agresivity", ako je survivin môže odhaliť, že je viac informatívne, pokiaľ ide o koreláciu s prognózou pacienta.
Dôležité je, že v tejto štúdii sa mRNA hojnosť survivinu a CK19 bola vždy väčšia, než je nájdený v zdravých kontrol s výnimkou jedného a dvoch prípadoch, v uvedenom poradí. To podčiarkuje význam využitia kvantitatívne metódou (qrtPCR), ktorá nám umožnila stratifikácii rizikových pacientov na celom rozsahu stupnice, zatiaľ čo štandardné PCR by sa zaraďujú prakticky všetkých pacientov ako pozitívne. Na druhú stranu, toto zistenie - ktoré sa podľa našich najlepších vedomostí zatiaľ nebol predtým - naznačuje, že tieto gény môžu byť využité aj na diagnostické účely, aj keď vyhradenej štúdie špeciálne pre tento cieľ je oprávnené
Ako. záverečná úvaha, by sme chceli pripomenúť, že metódy založené na PCR neumožňujú identifikovať zdroj buniek meraných markerov: v skutočnosti, všetky tieto metódy vyžadujú lýzu buniek získaných z periférnej krvi pacientov, aby sa z neho odstránilo mRNA použiť na vyhodnotenie expresie cieľových génov. Okrem CTC, ďalšie potenciálne zdroje PCR-detekovaných génov sú PBMC, cirkulujúcich endotelových buniek (CEC), kostnej drene odvodené cirkulujúcich kmeňových buniek, rovnako ako kožné bunky (napr keratinocyty, fibroblasty, melanocyty) kontaminujúce vzorku v priebehu odobratie krvi. Avšak, CTC je pravdepodobné, že hlavným zdrojom buniek na survivin, ako jeho expresie je v normálnych dospelých tkanivách veľmi obmedzené a namiesto toho je obmedzený hlavne na malígnych bunkách [30]. V tomto ohľade, cystometrické metódy sú menej náchylné k falošne pozitívnym výsledkom, z nich vyplýva, bunky na báze protilátky triedenie a následne cytologické identifikácie nádorových buniek, ktorá predchádza ich fenotypovej charakterizáciu [31].
Závery
hladiny génovej expresie survivinu pridať významnú prognostickú hodnotu pre aktuálny TNM predstavovať systém pacientov s karcinómom žalúdka.
validácie týchto nálezov vo väčších sériách prospektívnej by mohlo viesť k optimalizácii rozvrstvenia rizika a nakoniec personalizovať terapeutických opatrení na liečbu týchto pacientov. pôvodné predloženej súbory deklarácia
autorov pre obrazy
Nižšie sú uvedené odkazy na adresára pôvodné autorov predložený súbory obrazov. "Pôvodný súbor pre Obrázok 1 12967_2009_422_MOESM2_ESM.eps autorského 12967_2009_422_MOESM1_ESM.eps autorov pôvodného súboru na obrázku 2 12967_2009_422_MOESM3_ESM.eps autorského pôvodného súboru pre obrázok 3 12967_2009_422_MOESM4_ESM.eps autorského pôvodného súboru na Obrázok 4 protichodnými záujmami
autori vyhlasujú, že nemajú žiadne protichodné záujmy.

• Klinicko-patologické rysy a prognostické role KRAS, BRAF, PIK3CA a národné regulačné orgány mutácií v pokročilým karcinómom žalúdka
• Stent proti gastrojejunostomy pre zmiernenie žalúdočné obštrukcie: systematický prehľad