PLOS ONE: Synergistic roll mellan p53 och JWA: Prognostic och Predictive Biomarkers i Gastric Cancer

Abstrakt

Expression av p53 tycks vara korrelerad till prognosen i patienter med malignitet, men dess roll i magcancer har varit kontroversiella . Nyligen rapporterade vi att JWA, en ADP-ribosylering liknande faktor sex interagerande protein 5 (ARL6ip5), var både prognostisk för total överlevnad och prediktiv för platinabaserad behandling av magsäckscancer. I denna studie, som syftar vi att undersöka p53-expression som en prognostisk och prediktiv markör i resektabelt gastric cancer, ensam och i kombination med JWA. Expression av p53 undersöktes i tre stora patientgrupper (total n = 1155) av magcancer. Högt uttryck av p53 var signifikant korrelerad med ogynnsamma clinicopathologic parametrar och minskade totala patientöverlevnad. Dessutom patienter med högt p53 uttryck i tumörer förvärvade anmärkningsvärd överlevnad från adjuvans första linjens platinabaserad kemoterapi. Synergin mellan p53 och JWA i att förutsäga patientens resultat visades, medan ingen signifikant förhöjt prediktiva värdet om kemoterapi observerades. Således är p53 uttryck en potent prognostic och prediktiv faktor för resektabelt magsäckscancer med adjuvans platinabaserad kemoterapi. En kombinerad effekt av p53 med JWA som effektiva prognostiska indikatorer konstaterades för första gången

Citation. Liu X, Wang S, Xia X, Chen Y, Zhou Y, Wu X, et al. (2012) Synergistic roll mellan p53 och JWA: Prognostic och Predictive biomarkörer i magcancer. PLoS ONE 7 (12): e52348. doi: 10.1371 /journal.pone.0052348

Redaktör: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, USA

emottagen: 3 augusti, 2012; Accepteras: 12 november 2012, Publicerad: 21 december 2012 |

Copyright: © 2012 Liu et al. Detta är en öppen tillgång artikel distribueras enligt villkoren i Creative Commons Attribution License, som tillåter obegränsad användning, distribution och reproduktion i alla medier, förutsatt den ursprungliga författaren och källan kredit

Finansiering:. Denna studie stöddes delvis av projektet finansieras av Priority Academic Program Development (pappa) i Jiangsu lärosäten (http://jsycw.ec.js.edu.cn); National Natural Science Foundation i Kina (30930080 och 81110027) (http://www.nsfc.gov.cn); Stiftelsen Cancer Center of Nanjing Medical University (08ZLKF08) (http://202.195.178.127/zlsys). Finansiärerna hade ingen roll i studiedesign, datainsamling och analys, beslut att publicera, eller beredning av manuskriptet

Konkurrerande intressen:.. Författarna har förklarat att inga konkurrerande intressen finns

Introduktion

Magcancer drabbar omkring en miljon människor varje år, är den näst vanligaste orsaken till cancerrelaterad dödlighet i världen med en total fem års överlevnad på mindre än 30% [1]. Den dåliga resultat har förblivit i stort sett oförändrad under de senaste decennierna trots förbättringar i kirurgisk, kemoterapi och strålbehandling [2]. Slående skillnader i prognos bland patienter efter standard kirurgi finns uppgift om särskilda biomarkörer finns ett akut behov [3]. Dessutom är valet av patienter som kommer att gynnas av kemoterapi en viktig fråga som en stor fraktion unnessesarily behandlas och bara få allvarliga biverkningar [4]. Således är effektiva molekylära markörer akut behov för att undvika över- eller underbehandling.

Proteinet p53 (som kodas av den humana genen TP53
) är kanske den mest kända av alla tumörsuppressorer, och kännetecknas genom förmågan att inducera cellcykelstopp, DNA-reparation, senescens, och apoptos [5]. Mutation eller funktionell inaktivering av p53 är en nästan universell inslag i human cancer, spelar en avgörande roll i tumörbildning sedan mutant p53 kan förvärva nya onkogena egenskaper [6] - [9]. Till skillnad från vildtyp p53-protein som bryts ner snabbt, muterade former har en förlängd halveringstid, som gynnar intranukleär lagring, blir detekterbara immunhistokemiskt [10] - [12]. Ansamlingen av p53-protein i fallet med magcancer har kopplats till prognos och förutsägelse av behandling [13], [14]. Men dess närstående roll och mekanismen hittills förblir kontroversiell [15], [16].

Våra senaste rön inblandade att JWA, även känd som ARL6ip5, liknande med p53 i vissa avseenden, är avgörande för cellöverlevnad och effektiv DNA-reparation efter oxidativ DNA-skada, såväl som kemiskt inducerad cancer cellapoptos [17], [18]. Dessutom JWA och XRCC1, en annan DNA-reparationsproteinet, kan vara kandidat prognostic och prediktiva biomarkörer för patienter med magcancer [19]. Dessutom, SNP i är JWA
gen associerad med ökad benägenhet för magcancer i en kinesiska befolkningen [20]. Därför är vi betydligt intresserade om JWA skulle fungera som en samarbetsvillig med p53 för att förbättra prediktiva styrka i magcancer.

Häri vi syftar till att belysa den translationella betydelse och identifiera uttrycksmönster p53 i tre stora oberoende kohorter av gastric cancerpatienter och att undersöka möjligheten att prognostic och predictive roll i denna markör. Mer fängslande skulle en hypotes valideras på huruvida p53 och JWA kan kombineras som en ny prediktor med större noggrannhet i överlevnad utvärdering.

Material och metoder

Patienter och Prover

Tre oberoende retrospektiv patientgrupper studerades. Utbildningen kohorten och testa kohorten samlades i Nantong cancersjukhus, Nantong City, i östra delen av Jiangsu-provinsen och validerings kohorten rekryterades i Yixing folksjukhus, Yixing City, i södra delen av Jiangsu-provinsen, Kina. Vävnaderna erhölls från de respektive patologi divisioner. Inklusionskriterier var magcancer behandlas med radikal gastrektomi med eller utan adjuvant kemoterapi. Uteslutningskriterier var patienter med tidigare magcancer eller aktivt icke-magcancer. Även de som fått pre-kirurgisk kemo- eller strålningsterapi uteslöts. Skriftligt informerat samtycke erhölls från varje patient före vävnads förvärv och före operation genomfördes. Institutionella godkännande förvärvades från etikprövningsnämnden i Nanjing Medical University före denna studie.

Patienter behandlade med enbart kirurgi

utbildning kohorten ingick 103 patienter som bara genomgick radikala gastrektomi på Nantong cancersjukhus från en ^{st maj 1990 en st juni 1995. emellertid var 20 prover utelämnades på grund av uppgifter som saknas och ett prov förlorades under antigenåtervinning eller utan tumörceller som finns i kärnan, så 82 parade patientvävnader var slutligen utvärderas för p53 uttryck.}

Test kohorten bestod av samtliga 640 kirurgiska fall från Nantong Cancer Hospital från en ^{st december 2000 en st april 2005 och validerings kohorten ingår 1022 kirurgiska fall i Yixing folksjukhus från en januari 1999 till 31 st december 2006. Dessa patienter behandlades med enbart eller med postoperativ adjuvant kemoterapi kirurgi (för detaljer, se fig. S1). Fördelningen av demografiska egenskaper och de utvalda clinicopathologic variabler patienter mellan de två distrikten (Nantong och Yixing) beskrevs tidigare [19]. På grund av saknad överlevnadsdata, endast 578 och 998 av dessa patienter ingick. Dessutom, på grund av förlorade kärnor eller otillräckliga tumörceller i vävnaden, var 485 och 588 tumörkärnor analyserades med avseende p53-uttryck i testning och validering kohort, respektive.}

Patienter behandlade med adjuvant kemoterapi

i tränings kohorten, ingen av patienterna erhöll någon form av adjuvant terapi. Av de 485 patienter som används för analys i test kohorten var 111 patienter (22,9%) behandlas med adjuvant kemoterapi efter kurativ resektion. De regimer som ingår kombinerad kemoterapi med fluorouracil, leukovorin och oxaliplatin (FLO) (6 fall); monoterapi med mitomycin C (46 fall); fluorouracil derivat (47 fall); och andra behandlingar (12 fall). Av de 588 patienter i validerings kohorten regimen för 223 patienter (37,9%) med postoperativ kemoterapi ingår kombinerad kemoterapi med FLO (87 fall); kombinerad kemoterapi med fluorouracil, leukovorin och Platinol (FLP) (79 fall); kombinerad kemoterapi med fluorouracil och paclitaxel (FP) (11 fall); kombinerad kemoterapi med etoposid, leukovorin, fluorouracil och Platinol (ELFP) (28 fall); och andra behandlingar (18cases). När det gäller de resekerbara gastric patienter med kemoterapi, fördelningen av demografiska egenskaper och de utvalda clinicopathologic variabler patienter mellan FLO grupp och FLP gruppen var liknande (alla P Hotel > 0,05), med undantag för histologisk typ ( P
= 0,001, tabell S1). Dessutom 7 patologiskt bekräftade magcancer och respektive godartade färskfrusen magslemhinnan vävnader från senaste patienter i Nantong cancersjukhus erhölls för Western blot-analys.

Överlevnad (OS) var den primära slutpunkten för denna analys. Överlevnadstiden fastställdes från och med dagen för kirurgi till dagen för dödsfall eller den sista uppföljningen. Dödsdatum för varje fall erhölls från patientjournaler eller patienternas familjer genom uppföljande telefonsamtal och ytterligare en dubbel-kontrolleras av lokala civila avdelningen och offentliga säkerhetsavdelningen. Detaljerad clinicopathologic informationen erhölls. Lauren kriterier användes för att klassificera tumörerna i tarm typ eller diffus typ [21] och iscensatt enligt tumör, Noder, Metastaser (TNM) riktlinjer [22].

Konstruktion av Tissue microarray (TMA) och immunohistokemi

paraffininbäddad arkiverade vävnadsmaterial av tumör och omgivande normal gastric vävnad användes för TMA konstruktion. TMA framställdes såsom tidigare publicerats [19]. I korthet, duplicera 1,0 mm kärnor diameter av vävnad från varje prov stansades från paraffin tumör blocket och motsvarande icke-tumörvävnader i utbildning kohorten eller från kärnor av primära tumörbiopsier provnings- och validerings kohorter. Som en vävnadskontroll ades biopsier av normala gastriska epitel vävnader införas i de fyra vinklar och centrum av varje objektglas.

Ett standardprotokoll användes för immunfärgning av TMA. Den detaljerade processen beskrevs tidigare [19]. IHC utfördes med användning DO7 monoklonal antikropp (1:80; Dako, Carpinteria, CA), som detekterar vildtyp och muterade former av p53-proteinet, tillsammans med Elivision ™ Super HRP Kits (Maixin-Bio, Fujian, Kina) med tillämpning av varierande upptäckt och antigenåtervinning metoder. Utelämnandet av den primära antikroppen tjänade som negativ kontroll. Färgnings betyg för kontrollerna vävnads i varje microarray bild var pre utvärderas som en kvalitetskontroll av immunfärgning.

Utvärdering av Immunohistokemi

Först färgning av p53 i vävnaden bedömdes oberoende av två patologer förblindade till kliniska data, genom att tillämpa en semi-kvantitativ immunreaktivitet poäng (IRS) i tränings kohorten. De bedömningskriterier för IRS har rapporterats på annat håll [23]. Intensiteten för immunofärgning visades i Fig. S2. Överensstämmelsen för IRS färgning poäng p53 mellan de två patologer var 74 (90%) i 82 tumörer i övningsuppsättningen; och några avvikelser löstes med konsensus med hjälp av en flerskärms mikroskop. Variationen i p53 färgning var 4 (5%) i de dubbla kärnor 82 tumörer. Dessa fall färgades av hel-slide IHC och ytterligare poäng.

Det optimala cutoff värde IRS erhålls av mottagaren-operatör karakteristiska (ROC) analys och området under kurvan (AUC) vid olika Gränsvärdena av p53 IRS för 1, 3 och 5 år av total överlevnadstid beräknades. Det optimala värdet av cutoff punkter p53 IRS i Nantong distriktet kohort (kombinerad utbildning kohort och testa kohorten) var fyra på grund av att det prediktiva värdet av denna brytpunkten för död var den bästa (Fig. S3). Under dessa betingelser, var prover med IRS 0-4 och IRS 12/05 klassificeras som låg och hög expression av p53 i tumörer, respektive. Efter fastställande av immunohistokemiska bedömningskriterier i Nantong distriktet kohorten var uttrycket av p53 i Yixing distriktet kohorten (validering kohort) görs av samma patologer med exakt samma förfarande.

Western blotting

Western blotting utfördes såsom beskrivits tidigare [19]. Monoklonal mus-anti-p53-antikropp (1:1000; Dako, Carpinteria, CA), och monoklonal mus-anti-β-aktin antikropp (1:2000; Beyotime Biotechnology, Nantong, Kina) användes för den primära antikroppen. Immunoreaktiva band detekterades med en Phototope-HRP Western blot detektionskit (Cell Signa Technology Inc, Beverly, MA, USA). För densitometrisk analys, var p53 proteinbanden på blöts mätt från Image J programvara (version 1.44, Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA), efter normalisering till motsvarande β-aktin nivå.

Statistisk analys

Sambandet mellan p53 uttryck och clinicopathologic parametrar utvärderades genom Fishers exakta test. Det differentiella uttrycket av p53 i primära tumörer och deras motsvarande icke-tumörer bedömdes av Wilcoxon test (grupperade) och Spearman rank-order korrelation (råa poäng). Korrelationen mellan uttrycket av p53 och JWA grundades av Spearman rank-order korrelation (råa poäng) och Fishers exakta test (grupperade). Sannolikhet för skillnader i OS som en funktion av tiden säkerställdes genom användning av Kaplan-Meier-metoden, med ett log-rank test för signifikans. Univariat eller multivariat Cox regressionsanalys utfördes för att uppskatta de råa hazard ratio (HRS), justerat HRs och deras 95% konfidensintervall (CI), med justering för potentiella confounders. Sedan vi analyserat det prediktiva värdet av de parametrar som använder tidsberoende ROC kurva analys för censurerade uppgifter och beräknad AUC av ROC kurvor. Vi utvärderade föreställningar av olika poäng genom att rita (t, AUC [t]) för olika värden av uppföljning tiden (t). Alla statistiska analyser genomfördes av Statistical Analysis System (version 9.1.3, SAS Institute, Cary, NC), STATA statistisk programvara (version 10.1, StataCorp, College Station, TX), och R (version 2.10.1, The R Stiftelsen för statistiska beräkningar). Ett p-värde på < 0,05 ansågs statistiskt signifikant

Resultat

Ökad p53 Expression i Gastric Cancer Versus Angränsande normala vävnader

Sju par av humana magcancer prover. , inklusive primär magcancer vävnader och matchas normal magslemhinna valdes för att testa p53-proteinuttryck genom Western blöt. Förhöjda expression av p53 inträffade i 6 av 7 gastric tumörer jämfört med parade normal magslemhinna (Fig. 1A). Immunohistokemisk färgning av gastrisk vävnad microarray (TMA) användes för att ytterligare bekräfta p53-uttryck i 82 gastriska patienter i tränings kohort cancerpatienter. Det visades att p53 färgning huvudsakligen lokaliserad i kärnor (Fig. 1B). Fördelningen av skillnaderna i IRS för p53 uttryck i tumörer och matchade icke-tumörer visades i Fig. 1C. Dessutom har p53-uttryck signifikant ökad i 65 av 82 (79,2%) av magcancer jämfört med matchade normala gastriska vävnader ( P Hotel < 0,001, Wilcoxon test, Fig. 1C). I alla tre oberoende grupper av patienter som behandlats enbart med kirurgi endast ett uttryck för p53 negativt korrelerad med JWA i cancervävnader ( P Hotel < 0,001 för alla korrelationer, Tabell 1).

Korrelation mellan p53 expression och kliniskt patologiska funktioner hos patienter som behandlats med enbart kirurgi

i alla tre kohorter, vittnade vi att p53-uttryck i cancervävnader var signifikant korrelerad med lymfkörtelmetastaser (N-kategori). Ökat uttryck av p53 var nära förknippad med högre TNM etapp i utbildning och test kohorter, men utan betydelse i valideringen kohorten. Dessutom ökat uttryck av p53 särskilt i samband med andra kliniskt patologiska egenskaper, såsom djup invasion (T-kategori), fjärrmetastaser (M-kategori), tumördiameter och histologiska typ i respektive kohort. Intressant i alla patienter som behandlas med enbart kirurgi (n = 817), fann vi mer intestinal typ patienter uppvisade låg medan mer diffus typ patienter uppvisade hög p53-expression ( P Hotel < 0,001, data visas inte ). Expression av p53 hade ingen korrelation med ålder och kön (tabell 1).

Korrelation av p53 uttryck och OS hos patienter som behandlats med enbart kirurgi

I tränings kohorten, 82 primära tumörprover som lämpar sig för analysen visade en statistiskt signifikant negativ korrelation mellan p53 uttryck och totalt 5-års överlevnad med hjälp av Kaplan-Meier överlevnadskurvor ( P Hotel < 0,001). Dessa fynd valideras i två oberoende och större kohorter av gastric cancerpatienter med minst fem års uppföljning (n = 374 och n = 365, respektive) (Fig. 2A-C). Andra betydande negativa prediktorer för överlevnad av univariat analys i de tre oberoende kohorter var lymfkörtel metastas (N-kategorin, P Hotel < 0,01 för alla, tabell S2) och klinisk TNM stadium ( P
≤.001 för alla, tabell S2).

multivariat Cox regressionsanalys indikerade att låg p53-expression var en självständig positiv prognostisk faktor för magcancer i alla tre kohorter ( P Hotel < 0,001 för alla, Tabell 2). För att ytterligare utvärdera prognostiska värdet av p53-expression genomförde vi en tidsberoende ROC analys för censurerade data, som indikerade att kombinationen av klinisk risk poäng (TNM stadium, histologisk typ och tumördiameter) och p53 bidrog mycket mer än kliniska parametrar ensam i både träning och testning kohorter (Fig. 3). Till exempel i test kohorten, AUC vid årets 5 Blev 0,707 (95% CI = 0,653-0,761) för klinisk riskpoäng, medan den ökade signifikant till 0,856 (95% CI = 0,818-0,894) i kombination med p53 risk göra. Men var denna effekt inte signifikant i validerings kohort på grund av den relativt högre AUC (cirka 0,8) av kliniska prediktorer (Fig. S4).

Samband mellan p53 Expression och OS i patienter med adjuvant kemoterapi

I test- och validerings kohorter, OS analyserades mellan de patienter som fick adjuvant kemoterapi jämfört med dem som inte gjorde det. Data visade ingen skillnad i OS mellan kirurgi enda grupp och varje regim av postoperativa adjuvant kemoterapi (data visas ej) förutom i gruppen som fick fluorouracil- leukovorin-oxaliplatin (FLO) (n = 87, log-rank test, P
= 0,032, Fig. 4). En multivariat Cox regressionsanalys inklusive sex variabler (ålder, kön, TNM stadium, histologiska typer, tumördiameter och kemoterapi) utfördes för att indikera fördelen av kemoterapi på OS. Det fanns en statistiskt signifikant fördel för dem som fick FLO kemoterapi efter operation under operationen ensam gruppen (HR = 0,55; 95% CI = 0,37-0,82, data visas ej). Noterbart var denna effekt bara i patienter med högt p53 uttryck där adjuvant FLO uppenbarligen ökade OS jämfört med enbart kirurgi (HR = 0,56; 95% CI = 0,35-0,89, Tabell S3, log-rank test, P
= 0,014, Fig. 4).

Vi analyserade också betydelsen av en annan platinabaserad kemoterapi, fluorouracil-leukovorin-Platinol (FLP) regim (n = 79) i resectable magsäckscancer. Resultaten inte utgöra en signifikant överlevnadsskillnad (log-rank test, P
= 0,134, Fig. S5), medan patienter med låg p53 uttryck som får FLP regim visas även en sämre överlevnad jämfört med dem som fick kirurgi bara ( P
= 0,003, Fig. S5). Dessutom patienter som genomgår FLP behandling med hög p53-expression hade ingen signifikant överlevnads avvikelse jämfört med dem med enbart kirurgi ( P
= 0,648, Fig. S5). Ytterligare multivariat analys klar att högre risk för dödlighet observerades hos patienter med låg p53 uttryck som får FLP behandling jämfört med kirurgi endast (HR = 1,91, 95% CI = 1,08-3,36 tabell S4).

synergieffekt av p53 med JWA Expression på OS hos patienter som behandlats med kirurgi enbart eller adjuvant kemoterapi

patienter med enbart kirurgi var vidare skiktas i tre olika grupper på grundval av färgning för p53 och JWA: p53 hög med JWA låg, p53 låg med JWA hög och både hög eller båda låga. Det visade sig att patienter med p53 låg och JWA hög hade en bästa resultatet av överlevnad i dessa tre grupper ( P Hotel < 0,001, log-rank test, Fig. 2D-F). Multivariat Cox regressionsanalys visade att kombinerad expression av låg p53 och hög JWA var oberoende positiv prognostisk faktor för magcancer i alla tre kohorter ( P Hotel < 0,001 för alla, tabell 2). För att ytterligare utvärdera prognostiska värdet av p53 plus JWA uttryck genomförde vi en annan tidsberoende ROC analys, som visade att kombinationen av den kliniska risken poäng och p53 plus JWA bidragit med mer än samarbete med klinisk risk poäng med endast p53 i båda utbildning och test kohorter (Fig. 3). Till exempel, i utbildning kohorten, AUC vid årets fem var 0,568 (95% CI = 0,400-0,737) för klinisk riskpoäng plus p53 riskpoäng, medan det var betydligt ökade till 0,865 (95% CI = 0,786-0,944) när kombinationen av den kliniska risk poängen med p53 plus JWA riskpoäng användes. Men denna effekt var återigen inte framgår i validerings kohorten grund av den anledningen som nämns ovan (Fig. S4).

Baserat på bidrag av p53 expressionsnivån för kemoterapi resultatet stratifierat vi sådana patienter i samarbete med JWA som följande: FLO behandlingsgruppen med hög p53-expression delades upp i p53 hög med JWA låg och p53 hög med JWA hög; och FLP behandlingsgruppen med låg p53-expression också delas in i p53 låg med JWA låg och p53 låg med JWA hög. OS ades reevaluated mellan dessa undergrupper. Dock ingen tydlig överlevnads skillnad presenteras i synergiska mönster med JWA (Fig. S6).

Diskussion

Gastric cancer är en heterogen sjukdom där resultatet varierar även hos patienter med liknande kliniska och patologiska funktioner. Även med kirurgi i tidiga skeden, kan prognosen vara dyster, och adjuvant kemoterapi är effektiv endast i subgrupper av patienter. Nya molekylära markörer behövs som traditionella mellansystem för magcancer är otillräckliga för att förutsäga resultat [24]. I denna studie, spelade vi och visade att högt uttryck av p53 var signifikant korrelerad med ogynnsamma clinicopathologic parametrar och minskade totala patientöverlevnad. Dessutom patienter med högt p53 uttryck i tumörer förvärvade anmärkningsvärd överlevnad från adjuvans första linjens platinabaserad kemoterapi (FLO eller FLP). Synergin mellan p53 och JWA i att förutsäga patientens resultat visades, medan ingen uppenbar förhöjda prediktiva värdet om kemoterapi observerades.

I den aktuella studien fann vi uppenbarligen ökat uttryck av p53-protein i mag cancervävnader jämfört med matchade normala slemhinnan, vilket tyder på en potentiellt viktig status av p53 i gastric cancer. Enligt uppgift, p53
genen är muterad i nästan 50% av alla humana tumörer inklusive magcancer [25] och det muterade proteinet förblir i cellerna för en längre tid, möjliggör detektion av immunohistokemi [26], [27 ]. Därför är det allmänt accepterat att positiv färgning representerar huvudsakligen de mutanta formerna av p53, medan vildtyp-p53-protein bryts ned snabbare och förefaller svag eller negativ färgning [10], [26]. Våra data överensstämde med studier från andra forskare, som visade att positiv p53-expression var associerad med ogynnsamma clinicopathologic egenskaper och en dålig prognos av gastric cancerpatienter som har genomgått kurativ gastrektomi [28] - [30]. Det är värt att notera att vissa skillnader i clinicopathologic funktioner finns mellan Nantong och Yixing kohorter. Sedan Nantong cancersjukhus är en cancer specialsjukhus medan Yixing folksjukhus är en omfattande en, patienter i den förstnämnda är ofta mer avancerat stadium jämfört med senare. Följaktligen patienter i Nantong kohort visade sämre clinicopathologic egenskaper. Dessutom, p53 och JWA expression endast detekterades i vävnader här men inte i blod eller serum hos patienter med ventrikelcancer på grund av att de inte är utsöndrade proteiner. Intressant, en tidigare studie visade en stark korrelation mellan hög p53 autoantikroppar i serum hos magsäckscancerpatienter och dålig prognos, lymfkörtel metastasering och låg differentiering [31]. Dessutom visade det sig att p53-expression i magsäckscancer vävnader korrelerade med serum p53 antikroppar [32]. Vi hade inte sera samlas in för en liknande analys, men det skulle vara mycket intressant som ett blodprov är enklare och förmodligen mer reproducerbar än immonohistochemistry. När det gäller JWA är en serumtest fortfarande pågår och behöver demonstreras i framtiden.

En fascinerande och viktig fråga att locka oss mest är varför kunde högt uttryck av p53 spela exakt motsatta roller på prognostic och predictive effekt. Detta fenomen kan hänföras till olika former av p53 och deras distinkta egenskaper i cancerbiologi och behandling motstånd. Det är allmänt känt muterade p53-proteiner är starkt uttryckt i många cancerformer och bidra till malign transformation, spridning och metastaser delvis genom att hämma vildtyp p53 liksom andra medlemmar av p53 familj [6], [33]. Mus-modeller lager knock-in mutationer av p53 visade att mutanta p53-proteiner kan köra tumörbildning, invasion och metastas genom dominant negativ hämning av vildtyp p53 tillsammans med förstärknings-of-funktion eller "neomorphic 'aktiviteter som kan hämma eller aktivera funktionen av andra proteiner [34], [35]. Likaså i vår studie, hög p53-expression i gastriska tumörer korrelerade med lymfkörtelmetastaser, högre TNM stadium och andra ogynnsamma clinicopathologic funktioner, vilket leder till en mer aggressiv fenotyp med en sämre prognos när obehandlade. I kontrast, det positiva prediktiva effekten av högt p53-expression på överlevnad i både platina behandlade patienter kan peka på en dubbel roll av p53 i kemo-resistens. För närvarande är ett stort hinder i platina kemoterapi reparation av platina skadat DNA som resulterar i ökat motstånd, minskad apoptos, och slutligen behandlingssvikt. Vildtyp-p53 kan delvis spela en sådan roll under denna process via cellcykelstopp och efter reparation av skador som induceras av kemiska medel [36] - [39]. Omvänt, muterade p53-proteiner inte kan fungera i DNA-skador reparation som deras vildtyp motsvarighet där patienterna blir mer känsliga för kemikalier [36], [40], [41]. Dock måste den detaljerade mekanismen för mutant p53 i platina behandling ska utredas vidare. Det bör noteras att patienterna fick mer överlevnad av FLO än från FLP, som kan vara delvis på grund av att FLO minskar toxicitet jämfört med FLP som nämnts tidigare [19].

JWA är en typisk stressrespons gen såväl som en tumörsuppressor [18], [42]. In vitro och in vivo-studier har bekräftat att förlusten av JWA tryckt celldifferentiering och ökad migration cell och metastaser [42] - [44]. Våra senaste resultat manifeste låg JWA uttryck i gastriska tumörer korrelerade med ogynnsamma clinicopathologic indikatorer men bättre kemoterapi resultatet [19]. I den aktuella studien fann vi att JWA förbättrade prognostiska värdet av p53, vilket tyder på att förlusten av JWA kombineras med p53-mutation kan öka tumör aggressivitet och metastaser, vilket förmodligen eftersom JWA är också en medlem av DNA-reparationsvägen och eventuellt spela en ömsesidig roll i gastrisk karcinogenes. Fängslande, även om båda markörerna separat var prediktiva för platina behandling, kombinationen inte förbättra det prediktiva värdet, men detta resultat hämmas av liten grupp patienter i undergrupperna. Ett större antal patienter som får platinabaserad kemoterapi regimer bör ingå i vår framtida studier för att ytterligare validera våra resultat. Dessutom har ingen direkt reglerande effekt som påvisats mellan p53 och JWA (data visas ej), kanske de agerar i olika reparationsvägar [17], [18], [45] - existerar [48] och indirekt relation mellan dem under vissa situationer. Dessutom kan p53 och JWA synergistiskt reglera samma molekyler eller signalvägar som behöver belysas i fortsatta studier.

Sammanfattningsvis visade vi ett sammanlagt värde av tumör p53 med JWA som effektiva prognostiska faktorer för första gången , som vi förstår det. Även om en bestämd samverkan av dessa två proteiner är ännu inte bevisats, kan det ge potentiella prediktorer för adjuvant kemoterapi med en platinabaserad regim.

Bakgrundsinformation
figur S1.
Consort schema för vävnadsmicroarray studien
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s001
(TIF) Review figur S2.
Representativa bilder av p53 immunohistokemisk färgning i human magcancer. En negativ färgning; B, svag positiv färgning; C, måttlig positiv färgning; D, stark positiv färgning (A-D: skala bar, 25 pm) katalog doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s002
(TIF) Review Figur S3.
ROC kurvor som visar förhållandet mellan arean under kurvan (AUC) vid olika cutoff värden av p53 immunreaktivitet poäng (IRS) för 1, 3 och 5 års totala överlevnadstiden
doi:. 10,1371 /journal.pone. 0052348.s003
(TIF) Review figur S4.
ROC analyser för klinisk risk poäng, den kombinerade p53 eller p53 plus JWA och klinisk risk poäng i validerings kohorten. AUC = area under kurvan
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s004
(TIF) Review Figur S5.
Överlevnadskurvor enligt p53 uttrycksmönstret i validerings kohort behandlats med eller utan FLP. P
värden beräknades med log-rank test. Obs: S, ensam kirurgi; . FLP, fluorouracil-leukovorin-Platinol
doi: 10.1371 /journal.pone.0052348.s005
(TIF) Review Figur S6.
överlevnadskurvorna som visar synergistisk effekt av p53 /JWA uttrycksmönster i validerings kohort emot adjuvant kemoterapi. P
värden beräknades med log-rank test. Obs: S, ensam kirurgi; FLO, fluorouracil- leukovorin-oxaliplatin; FLP, fluorouracil-leukovorin-Platinol
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s006
(TIF) Review tabell S1.
Fördelningen av demografiska och clinicopathologic egenskaper hos patienter som behandlats med eller utan kemoterapi
doi:. 10,1371 /journal.pone.0052348.s007
(DOC) Review tabell S2.

• PLOS ONE: adjuvant kemoterapi för äldre patienter med magsäckscancer efter D2 Gastrectomy
• PLOS ONE: Clinical and Prognostic Association of transkriptionsfaktor SOX4 i Gastric Cancer