PLOS ONE: Signification pronostique de rs1045411 Tag SNP dans HMGB1 du cancer gastrique agressif dans une population chinoise

Résumé

preuves convaincantes ont suggéré que le groupe de haute mobilité box-1 (HMGB1) gène joue un rôle crucial dans le développement du cancer et de la progression. Cette étude visait à évaluer les effets des polymorphismes nucléotidiques simples (SNP) dans gène HMGB1 de la survie du cancer gastrique (GC) patients. Trois SNP marqueurs de HMGB1
gène ont été sélectionnés et génotypés en utilisant Sequenom IPEX système de génotypage dans une cohorte de 1030 patients du GC (704 dans la série de formation, 326 dans le jeu de validation). Multivariée de Cox modèle de risque proportionnel et Kaplan-Meier Curve ont été utilisés pour l'analyse de pronostic. génotypes AG /AA de rs1045411 SNP dans HMGB1
gène étaient significativement associés à une meilleure survie globale (OS) dans un ensemble de 704 patients du GC en comparaison avec les génotypes GG (HR = 0,77, IC à 95%: 0.60-0.97 , P
= 0,032). Cet effet pronostique a été vérifiée dans un ensemble de validation et d'analyse indépendants mis en commun (HR = 0,80, IC à 95%: de 0,62 à 0,99, P
= 0,046; HR = 0,78, IC à 95%: 0,55 à 0,98, P
= 0,043, respectivement). Dans une analyse stratifiée, l'effet protecteur de rs1045411 AG /AA génotypes était plus importante chez les patients présentant des couches indésirables comparativement aux patients ayant des couches favorables. En outre, de forts effets prédictifs communs sur OS des patients du GC ont été notées entre les génotypes rs1045411 et classification Lauren, la différenciation, le stade ou la chimiothérapie adjuvante. En outre, une analyse fonctionnelle indique un effet significatif de rs1045411 sur l'expression de HMGB1. Nos résultats suggèrent que rs1045411 dans HMGB1
est significativement associée à des résultats cliniques des patients du GC chinois après la chirurgie, en particulier dans ceux ayant le statut agressif, ce qui garantit une validation supplémentaire dans d'autres populations ethniques

Citation.: Bao G, Qu F, Il L, Zhao H, Wang N, Ji G, et al. (2016) Importance pronostique de Tag rs1045411 SNP dans HMGB1
du cancer gastrique agressif dans une population chinoise. PLoS ONE 11 (4): e0154378. doi: 10.1371 /journal.pone.0154378

Editeur: Qing Yi-Wei, Cancer Institute Duke, ÉTATS-UNIS

Reçu le 23 Janvier 2016; Accepté 12 Avril 2016; Publié: 26 Avril 2016

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intérêts concurrents:. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

. Présentation

le cancer gastrique (GC) est le quatrième cancer le plus répandu dans le monde, ce qui représente environ 8% des nouveaux cancers et 10% des décès par cancer [1]. Parmi ces cas, 70% ont eu lieu dans les pays en développement, et la moitié du total mondial a eu lieu en Asie orientale, principalement en Chine [2]. Au cours des dernières décennies, en dépit de l'augmentation significative de l'investissement et les progrès dans le diagnostic et le traitement de la GC, la survie globale (OS) pour GC avancée est toujours mauvais, avec un taux de survie à 5 ans de moins que 25% [3 ]. Actuellement, la survie et le pronostic des patients du GC dépendent encore du stade de la tumeur au moment du diagnostic. Cependant, en raison des différences importantes au sein clairement au même stade, le stade tumoral ne suffit pas pour prédire le pronostic de GC [4]. Par conséquent, pour découvrir les signatures moléculaires comme marqueurs pronostiques fiables pour GC est très important et exigeant. Au cours des dernières années, des études ont porté sur l'étude des variantes génétiques qui prédisposent au développement et à la progression du GC [5].

box-1 groupe Mobilité élevée (HMGB1), un membre important du groupe de haute mobilité superfamille de protéines, contient deux domaines de liaison à l'ADN de l'acide 80-amino (A-box et B-box) et une queue carboxyle acide [6]. Il fonctionne comme une protéine de structure de chromatine dans le noyau et d'une cytokine pro-inflammatoire extracellulaire. Comme une protéine nucléaire, HMGB1 se lie non spécifiquement à la sillon de l'ADN et facilite l'assemblage de cibles spécifiques au site ADN [7]. En revanche, les fonctions de HMGB1 extracellulaire comme une cytokine qui propage des réponses inflammatoires Infection- ou blessures provoquée [8]. La libération constante de HMGB1 à partir de cellules tumorales nécrotiques peut créer un microenvironnement ressemblant à une inflammation chronique; une condition connue pour contribuer au développement de tumeurs malignes épithéliales, en particulier le cancer associé à une inflammation [9]. En effet, de nombreuses études ont déjà démontré la surexpression de la protéine HMGB1 dans de nombreux types de cancer [13/10], y compris GC [14]. En outre, des preuves convaincantes ont en outre confirmé que HMGB1 sur-expression est étroitement liée au développement de la tumeur par la médiation de la prolifération, l'invasion et la migration des cellules cancéreuses [15, 16]. Par conséquent, HMGB1 peut être un candidat intéressant comme marqueur pronostique roman ou cible thérapeutique pour GC.

évidences cumulables ont suggéré que des fonds génétiques peuvent influer sur le risque et le pronostic du GC [17]. nucléotide polymorphisme (SNP) est la variation génétique la plus courante, et peut-être les biomarqueurs de substitution prometteurs de fonds génétiques des patients pour prédire la réponse thérapeutique et le pronostic [18]. Les variantes génétiques ont été identifiés chez l'homme HMGB1
gène [19], mais l'association entre HMGB1
polymorphisme du gène et de la survie de GC résultat n'a jamais été déterminée. Étant donné le rôle crucial de HMGB1 dans le développement et la progression du cancer, il est plausible que les polymorphismes de HMGB1
peuvent affecter les résultats cliniques de GC. Ici, nous avons évalué les effets de trois SNP marqueurs dans HMGB1
sur les résultats cliniques de 1030 patients GC chinoise (704 dans l'ensemble de la formation, 326 dans l'ensemble de validation indépendante) ayant reçu un traitement de résection radicale. En outre, l'effet d'un SNP d'étiquette pertinente identifiée sur la régulation de l'expression du gène a ensuite été examiné par un in vitro
analyse fonctionnelle. Au meilleur de notre connaissance, ceci est la première enquête de l'association entre les polymorphismes de HMGB1
et le résultat clinique de la GC.

Éthique Matériaux et méthodes

Cette étude a été approuvée par le Comité d'éthique de la quatrième université médicale militaire. Les procédures ont été réalisées conformément aux lignes directrices approuvées et à la Déclaration de 1964 Helsinki et ses modifications ultérieures ou à des normes éthiques comparables. Le consentement éclairé signé a été obtenu à partir de chaque participant inclus dans l'étude.

Population
Étude

Un total de 1030 patients chinois Han avec adénocarcinome gastrique primaire étaient inscrits à partir de deux sites indépendants, Hôpital Tangdu et Xijing Hôpital des maladies digestives, à Xi'an, en Chine. Tous les cas de GC reçu une résection chirurgicale et n'a pas eu d'antécédents d'autres cancers ou tout traitement anticancéreux préopératoire ou une transfusion sanguine à moins de 3 mois avant la chirurgie. Il n'y avait pas d'âge, le sexe, ou des restrictions au stade de la maladie pour le recrutement de cas. Parmi eux, les 704 patients (département de chirurgie générale, Hôpital Tangdu, entre Juillet 2008 et Juin 2013) ont été utilisés comme un ensemble d'apprentissage dans cette étude. Un autre groupe de 326 patients (Hôpital Xijing de maladies digestives, entre Janvier 2008 et Décembre 2010) ont été utilisés comme un ensemble de validation indépendante. L'objectif était d'identifier la valeur pronostique cliniquement significative des SNP au sein de HMGB1
gène de l'ensemble de la formation et testé dans l'ensemble de validation indépendante.

Les données démographiques et cliniques

les données démographiques et cliniques ont été recueillies au moyen d'entrevues en personne lors de la visite initiale ou de suivi dans les cliniques, les dossiers médicaux, ou en consultation avec les médecins traitants, y compris l'âge, le sexe, l'origine ethnique, région résidentielle, moment du diagnostic, le temps de la chirurgie et /ou chimiothérapie adjuvante (ACT), le temps de rechute et /ou la mort, le stade de la tumeur, la classification Lauren, la différenciation, le type histologique, et le protocole de traitement. Les données de suivi a été mis à jour à intervalles de 6 mois par le biais sur place interview, les communications téléphoniques, ou de l'examen des dossiers médicaux par des spécialistes de recherche formés. La dernière date de suivi a été Juin 2015 et la durée médiane de suivi était de 51 mois (extrêmes 6-89 mois). Le pourcentage de patients perdus au cours du suivi était de 9,8%. OS a été défini comme le temps de la chirurgie à la mort spécifique à GC. RFS (de survie sans récidive) a été défini comme le temps de la chirurgie à la date de la première récidive ou de métastases à distance du GC. Les patients vivant au dernier suivi ont été censurés.

Collecte, traitement et conservation des spécimens

Avant la chirurgie, le sang veineux 5 ml a été prélevé sur chaque GC patients pour extraire l'ADN en utilisant l'E.Z.N.A. sang Midi Kit ADN (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA). Soixante tissus cancéreux gastriques ont été simultanément recueillies à partir de l'ensemble de validation quantitative en temps réel transcription inverse PCR (RT-PCR).

Sélection de SNP et de génotypage

L'étiquette candidate de sélection SNPs de le gène de la protéine HMGB1 a été réalisée comme une procédure en deux étapes. Tout d'abord, nous avons utilisé un ensemble d'outils de sélection SNP sur le Web (http://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) à la recherche SNPs candidats de HMGB1
[20]. Tous les polymorphismes validés dans HMGB1 région
gène, y compris 5 kb en amont du premier exon et 5 kb en aval du dernier exon, ont été considérés comme candidat SNP. Ces SNP avec une fréquence mineure allèle ≥ 5% dans le HapMap CHB (Han chinois à Pékin) population et un déséquilibre de liaison pairwise carré coefficient de corrélation (r ^{2) > 0,8 ont été choisis comme SNP candidats. Deuxièmement, les SNP marqueurs ont été choisis parmi ces SNP candidats à l'aide de la base de données HapMap Project International Phase II de la population chinoise (http://www.hapmap.org/, consulté le 18 Novembre 2013) et HAPLOVIEW version 4.2. Enfin, trois SNP marqueurs (moyenne r 2 = 0,981) ont été sélectionnés: rs1045411 (G > A), rs1412125 (T > C) et rs2249825 (C > G) .Genotyping a été réalisée à l'aide Sequenom iPLEX système de génotypage (Sequenom Inc., San Diego, CA, USA) selon le protocole du fabricant. Les personnes de laboratoire qui ont effectué les tests de génotypage ont été aveuglés à l'information des patients. des contrôles de qualité internes et les contrôles négatifs ont été utilisés pour assurer l'exactitude de génotypage, et 5 échantillons ont été choisis au hasard et génotypés en double avec 100% de concordance. taux d'appel pour le génotypage se situait entre 99,3% et 99,7%. Les informations détaillées des SNP et les résultats de génotypage ont été répertoriés dans le tableau S1.}

Functional test

Les effets fonctionnels de rs1045411 tag SNP situés dans le 3'UTR de HMGB1
gène ont été étudiés en utilisant le dosage par rapporteur luciférase. En bref, 49 pb d'ADN double brin portant soit le génotype sauvage ou génotype variante de rs1045411 a été synthétisé et cloné dans le vecteur PMIR-REPORT (Ambion, Austin, Texas, USA) en utilisant des enzymes de restriction Spe I et Hind III (Takara, Dalian, Chine). Toutes les constructions ont été confirmées par séquençage d'ADN. lignées de cellules GC humaines SGC-7901 et la lignée cellulaire de rein embryonnaire humain HEK-293T, dans lequel a-miR-505 a été indentified être exprimé positivement en utilisant le kit TaqMan microRNA Reverse Transcription (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) comme précédemment décrit [21], ont été co-transfectées avec soit PMIR-rs1045411-A ou PMIR-rs1045411-G (200 ng /puits) avec ou sans anti-miR-505 (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) et le contrôle interne plasmide rapporteur pRLTK (Promega, Madison, WI, USA) (20 ng /puits) en utilisant Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) dans une plaque de 24 puits avec 2 x 10 ^{5 cellules par puits. SGC-7901 et des lignées cellulaires HEK293 ont été achetés dans le Type Culture Collection de l'Académie chinoise des sciences (CAS) (Shanghai, Chine), où ils ont été vérifiés par la détection des mycoplasmes, l'ADN-dactyloscopie, la détection de l'isoenzyme et la détection de la vitalité des cellules. Un flacon congelé de chaque ligne 147 de la cellule, qui a été immédiatement élargi et congelé lorsqu'il est reçu du vendeur, a été réanimé et utilisé pour la présente étude. Après 48 h, les cellules ont été recueillies pour déterminer l'activité luciférase en utilisant un kit dual-luciférase système de dosage de rapporteur (Promega, Madison, WI, USA) avec un luminomètre (Tecan, Mannedorf, Suisse). Toutes les transfections ont été effectuées en triple, et toutes les expériences ont été répétées trois fois de façon indépendante.}

Pour mieux évaluer l'effet de tag SNP génotypes rs1045411 sur l'expression de HMGB1
ARNm, l'ARN total a été isolé à partir 60 échantillons de tissus GC (30 avec génotype AA et 30 avec des génotypes AG /GG de rs1045411), conformément aux instructions du fabricant. Ensuite, l'ADNc a été synthétisé en utilisant PrimeScript RT kit de réactifs (Takara, Dalian, Chine). RT-PCR a été réalisée en utilisant les suivantes HMGB1
amorces: avant, 5'-TAAGAAGCCGAGAGGCAAAA-3 '; inverser, 5'-AGGCCAGGATGTTCTCCTTT- 3 'et β-actine a été utilisée comme un contrôle interne (amorces: avant, 5'-AAGACGTACTCAGGCCATGTCC-3', à l'inverse, 5'-GACCCAAATGTCGCAGTCAG-3 ') [13]. Expression relative de Les taux d'ARNm de HMGB1 a été déterminé selon la méthode de quantification relative et 2 ^{-ΔΔCt analyse.}

L'analyse statistique

Statistiques Les analyses ont été effectuées à l'aide d'IBM logiciel SPSS Statistics 19.0 (IBM). Normalement, les variables continues ont été distribuées exprimées en moyenne ± écart-type, alors que les variables continues anormalement distribuées ont été exprimés en moyenne et la fourchette. Le χ de Pearson ^{2-test a été utilisé pour tester les différences de variables catégoriques. La différence des variables continues normalement réparties entre deux groupes a été analysée à l'aide de l'étudiant t
-test, tandis que le test de Mann-Whitney U a été utilisé pour la comparaison des variables continues anormalement distribuées. Multivariée de Cox modèle de régression des risques proportionnels a été appliquée pour évaluer l'effet du SNP individuel et les caractéristiques des patients sur OS ou RFS. Les ratios de risque (RR) et les intervalles de confiance à 95% (IC) ont été estimées avec ajustement pour l'âge, le sexe, la classification Lauren, la différenciation, le stade TNM et ACT. Les courbes de Kaplan-Meier et les tests du log-rank ont ​​également été utilisés pour évaluer l'effet des SNP individuels sur le temps de survie. Statistiques signification a été fixé à un niveau de 0,05 et tous les Les valeurs P
rapportés dans cette étude étaient deux côtés.}

Résultats

Répartition des caractéristiques des patients et le pronostic analyse

les caractéristiques des patients du GC ont été résumées dans le tableau S2. En raison de la date de fin fin du recrutement des patients pour l'ensemble de la formation, la durée médiane de suivi était plus courte dans l'ensemble de la formation (46 mois, allant de 6 à 80 mois) que dans l'ensemble de validation indépendante (72 mois, allant de 6-89 mois). Ainsi par rapport aux patients dans l'ensemble de validation indépendante, ceux de l'ensemble de la formation avaient des taux inférieurs de rechute (58,4% vs
. 66,8%, P
= 0,005) et la mort (41,4% vs
. 55,8%, P
= 0,001). Il n'y avait pas de différences entre jeu de formation et de validation prévu en termes d'âge, site de la tumeur, la classification Lauren, le stade TNM, la différenciation et ACT ( valeur P
allant 0,082 à 0,898). Au dernier suivi, 641 patients (423 et 218 dans la formation et la validation ensemble, respectivement) ont développé une rechute et 482 morts (300 et 182 dans la formation et la validation ensemble, respectivement). Multivariée de Cox analyse de régression a montré qu'il y avait un risque important de mortalité et de récidive plus élevé chez les patients de type diffus, une mauvaise différenciation et le stade de la tumeur III et IV par rapport à ces patients atteints de type intestinal, bien /modérée différenciation et le stade tumoral I et II entre jeu de formation, ensemble de validation et analyse groupée. En outre, l'ACT à base de platine après la chirurgie a montré un effet protecteur significatif sur les deux OS et RFS des patients du GC (S3 Tableau).

Association des Les SNPs HMGB1 de avec les résultats cliniques chez les patients du GC

Nous avons évalué l'association de HMGB1
génotypes SNP avec les résultats cliniques de GC à l'aide de la Cox analyse de régression multivariée avec ajustement pour l'âge, le sexe, site de la tumeur, la classification Lauren, la différenciation, le stade TNM et ACT (comme indiqué dans le tableau 1). Les résultats ont montré que tag rs1045411 SNP était significativement associée avec OS des patients du GC dans l'ensemble de la formation. Par rapport aux patients avec le génotype GG, ceux qui ont des allèles variants (AG et génotypes AA) avaient un risque significativement plus faible de décès (HR = 0,77, IC à 95%: 0,60 à 0,97, P
= 0,032). Cette découverte importante a été confirmée dans l'ensemble de validation et des analyses indépendantes mises en commun, avec des RR de 0,80 (IC à 95%: 0,62 à 0,99; P
= 0,046) et 0,78 (IC à 95%: de 0,55 à 0,98; P
= 0,043), respectivement. Kaplan-Meier analyse des courbes a également fourni une forte association avec OS. Les patients porteurs de génotypes AG /GG de rs1045411 avaient un meilleur OS, que ceux avec le génotype GG dans le jeu de la formation ( P
= 0,024, figure 1A), ensemble de validation ( P
= 0,017, figure 1B ) et analyse groupée ( P
= 0,001, figure 1C).

analyse stratifiée sur l'association de rs1045411 avec OS par des variables
hôtes

Nous avons effectué des analyses stratifiées pour évaluer les associations entre les génotypes de rs1045411 et OS des patients du GC selon l'âge, la classification Lauren, la différenciation, le stade TNM et ACT. Les effets protecteurs importants conférés par rs1045411 était plus important dans les sous-groupes indésirables avec une gamme de HR 0,39 à 0,69 (figure 2A). Pour plus de détails, l'importante diminution du risque de mortalité associé aux génotypes contenant variants-(AG /AA) de rs1045411 a été observée chez les patients âgés (HR = 0,69, IC à 95%: 0,48 à 0,99), type diffus (HR = 0,67, 95% CI: de 0,47 à 0,95), une mauvaise différenciation (HR = 0,66, IC à 95%: de 0,45 à 0,95), le stade clinique III et IV (HR = 0,58, IC à 95%: de 0,37 à 0,93) et sans ACT (HR = 0,39, 95 % CI: de 0,20 à 0,76). En outre, l'analyse stratifiée présente a montré une tendance similaire pour RFS avec une gamme de HR 0,44 à 0,79 (figure 2B). Les résultats indiquent que les génotypes AG /AA de rs1045411 conféré le pronostic plus favorable dans les groupes adverses.

effet conjoint entre rs1045411 et classification Lauren, la différenciation, le stade ou ACT sur OS

Des études antérieures ont montré que les deux variations génétiques et les caractéristiques cliniques interagissent pour jouer un rôle critique dans la progression du GC [17]; et que là où existent des interactions, les effets des éléments cliniques sur la progression tumorale sont modifiés par génotypes. Par conséquent, une analyse conjointe a été réalisée pour évaluer l'effet potentiel de modulation de rs1045411 dans ces caractéristiques cliniques (classification Lauren, la différenciation, le stade et ACT) représentant l'état de progression de la tumeur sur OS des patients du GC. Comme le montre le tableau 2, il y avait une interaction significative entre les génotypes de rs1045411 et la classification Lauren, la différenciation, le stade ou ACT (tous P
_{interaction < 0,001). Par rapport aux individus porteurs de génotypes AG /AA et de type intestinal, ceux avec génotype GG et le type diffus avaient un risque significativement accru de décès (HR = 2,09, IC à 95%: 1,42 à 3,08, P
< 0,001). Les résultats similaires ont également été trouvés chez les patients porteurs du génotype GG avec une mauvaise différenciation (HR = 2,48, IC à 95%: 1,70 à 3,62, P
< 0,001), chez les patients avec génotype GG de stade III /IV ( HR = 2,99, IC à 95%: 2,04 à 4,38, P
< 0,001), et chez les patients porteurs du génotype GG avec ACT (HR = 4,49, IC à 95%: 2,70 à 7,45, P
<. 0,001) en comparaison avec le groupe de référence correspondant}

effets fonctionnels de rs1045411 sur l'expression génique

analyse bioinformatique (http://www.microrna.org/microrna/home. faire) a révélé une proximité de rs1045411 tag SNP à l'microRNA prédit des sites de liaison (hsa-miR-505) dans la région 3 'non traduite (3'UTR) de HMGB1
gène [22] (figure 3A ). Nous avons confirmé d'abord l'expression de miR-505 dans le SGC-7901 et des lignées cellulaires HEK-293T, et a constaté que miR-505 avait un niveau d'expression relativement plus élevé (figure 3B). Afin de déterminer si les génotypes de rs1045411 tag SNP dans la 3'UTR de la HMGB1
gène pourrait modifier l'expression des gènes, deux lignées de cellules ont été transfectées avec des plasmides luciférase rapporteurs contenant soit la nature (GG) ou variante (AA) génotype rs1045411 SNP (figure 3C). Les résultats ont démontré que les SNP rs1045411 ont montré de façon significative un effet sur l'activité normalisée de luciférase dans les cellules transfectées. Par rapport aux cellules transfectées avec des constructions portant le génotype sauvage (GG) de rs1045411 SNP, les cellules transfectées avec des constructions portant variante génotype (AA) ont présenté une importante diminution de l'activité luciférase. L'effet anti-miR-505 sur l'activité de luciférase des plasmides rapporteurs a également été évaluée dans cette étude. Les résultats ont montré que l'activité de la luciférase de deux UTR construit (p-RIV-G et p-RIV-A) était significativement augmentée par l'anti-miR-505 dans les deux lignées cellulaires avec des différences éliminées de l'activité luciférase entre les deux plasmides rapporteurs. De plus, nous avons utilisé RT-PCR quantitative pour étudier l'effet des SNP génotypes rs1045411 sur HMGB1 expression de l'ARNm dans 60 tissus GC (30 avec génotype GG et 30 avec des génotypes AG /AA) de jeu de validation. Comme le montre la figure 3D, nous avons constaté que le niveau de HMGB1 d'expression de l'ARNm était significativement plus élevé chez les porteurs avec des espèces sauvages (GG) génotype rs1056560 que ceux qui ont porté variante (AG /AA) génotypes (1,04 ± 0,50 vs
. 0,79 ± 0,37, P
= 0,004).

Discussion

dans cette étude, nous avons étudié l'association des polymorphismes génétiques dans HMGB1
gène avec le pronostic des patients du GC par une analyse en deux étapes de formation et de validation des ensembles. Nous avons démontré que les génotypes AG /AA de tag rs1045411 SNP dans HMGB1
3'-UTR sont significativement associés à un meilleur système d'exploitation dans un ensemble de 704 patients du GC par rapport aux génotypes GG. Cette association significative a été confirmée dans un ensemble de validation indépendante de 326 patients du GC, ainsi qu'une analyse groupée de tous les 1030 patients du GC. analyse fonctionnelle a indiqué que les génotypes de SNP rs1045411 ont eu une influence significative sur l'expression d'ARNm de HMGB1
dans les tissus du GC, ainsi que deux lignées de cellules tumorales. En outre, l'effet favorable du pronostic rs1045411 était plus évidente dans les sous-groupes de patients négatifs GC. En outre, l'analyse conjointe a trouvé une interaction significative des éléments de gènes-clinique. Au meilleur de notre connaissance, cette étude pour la première fois signalé l'association entre HMGB1 polymorphismes géniques
et GC pronostic. Une fois validé, HMGB1
rs1045411 SNP peut être utilisé comme un marqueur pronostique en combinaison avec les facteurs pronostiques cliniques traditionnels pour la prise de décision du traitement individuel GC.

Les preuves croissantes suggèrent que HMGB1 élevée est associée à des métastases tumorales et de mauvais pronostic [16, 23-26], ce qui rend HMGB1 un biomarqueur tumoral attractif. Il a été suggéré que les fonctions de HMGB1 comme une protéine potentiellement oncogène de favoriser la progression de la tumeur [15, 27, 28] et sa surexpression dans des cellules cancéreuses affecte la réponse des lymphocytes T anti-cancéreux par l'activation de la signalisation intracellulaire [15, 29]. En effet, l'expression élevée de HMGB1 a été détectée dans des patients atteints de GC et d'autres types de cancer [30-32], et son expression est étroitement associée à la tumorigenèse [33], l'invasion tumorale et les métastases [29]. En outre, Chung et al [34] ont démontré que les niveaux de HMGB1 sériques ont également été significativement associés à une invasion tumorale, les métastases, la croissance, ainsi que d'un mauvais pronostic. Collectivement, ces résultats confirment un rôle important de HMGB1 dans la transformation de cancer, la croissance tumorale et l'invasion.

Malgré les recherches approfondies de l'expression de HMGB1 dans les tissus et son activité sérologique correspondante sur l'évolution du cancer, il y a quelques études portant sur l'effet du SNP dans gène de HMGB1 sur le pronostic du cancer ou de la réponse au traitement à ce jour. Dans un groupe de patients chinois atteints d'un cancer du poumon, les deux SNP rs2249825 et rs141215, ont été associés à la chimiothérapie des réponses à base de platine [35]. De même, chez les patients présentant un carcinome épidermoïde oral, un autre HMGB1
polymorphisme rs3742305 au SNP a été associée à la progression tumorale et la survie sans récidive [36]. Cependant, nous avons exclu les rs3742305 SNP de la présente étude, car il est en fort déséquilibre de liaison avec les rs1045411 SNP. Dans cette étude, nous avons constaté que contenant la variante (AG /AA) génotypes de tag rs1045411 SNP étaient significativement associés à un meilleur système d'exploitation chez les patients avec GC, en soutenant un rôle important de HMGB1 dans l'évolution de la GC.

Depuis SNP rs1045411 est situé dans la région 3'UTR de HMGB1
gène, il peut influencer l'expression de HMGB1
gène chez les patients du GC. À ce jour, cependant, il n'y a aucune étude pour évaluer les fonctions des rs1045411 SNP. Nous avons constaté que rs1045411 se trouve à proximité d'un site prévu microARN de liaison (a-miR-505) [22], ce qui suggère qu'une telle variation à cette position peut affecter la stabilité de l'ARNm et l'activité de liaison à micro-ARN, modulant ainsi l'expression du gène [ ,,,0],37]. En effet, nos dosages de rapporteur de luciférase ont confirmé une influence significative de rs1045411 sur la régulation post-transcriptionnelle de HMGB1
gène dans un mode miR-505-dépendante. De plus, en examinant le niveau d'expression HMGB1 ARNm dans des échantillons de tissus 60 GC avec des données génotypiques de rs1045411 SNP, nous avons constaté que les tissus porteurs contenant la variante (AG /AA) génotypes ont diminué de manière significative les niveaux d'expression HMGB1 d'ARNm par rapport à ceux qui ont sauvage homozygote (GG ) génotype. Pris ensemble, nos données expérimentales indiquent que l'effet pronostique favorable conféré par contenant variante (AG /AA) génotypes de rs1045411 a été étroitement associé à une expression aberrante de HMGB1
.

Notre étude a démontré que les effets protecteurs significatifs ou à la limite de la variante contenant (AG /AA), les génotypes des SNP rs1045411 sur le système d'exploitation et RFS des patients atteints de GC ont été trouvés presque complètement dans le négatif (mais pas favorables) des patients strates. Ceci est en accord avec les études antérieures montrant que les SNP affectent la survie au cancer plus important chez les patients des sous-groupes spécifiques. Par exemple, Wang et al
[38] ont rapporté que PSCA
rs2294008 est significativement associée à la survie des résultats parmi diffus type de cancer gastrique, mais le cancer gastrique pas de type intestinal. Pu et al
[39] ont également suggéré que les variantes génétiques liées microARN est plus remarquable associée à petite survie non de cancer du poumon chez les patients à un stade précoce. Nous avons également observé un effet d'interaction significative entre les génotypes rs1045411 et éléments cliniques tels que la classification Lauren, la différenciation, le stade clinique, et une chimiothérapie adjuvante dans la modulation du pronostic de GC. Ces corrélations significatives suggéré que les SNP rs1045411 pourraient avoir un rôle de modulation potentiels de ces caractéristiques cliniques représentant la progression tumorale. Cependant, les mécanismes sous-jacents restent à être étudiée plus à l'avenir.

La présente étude a plusieurs caractéristiques distinctes. Tout d'abord, les patients inscrits proviennent principalement du Shaanxi et les zones adjacentes, qui est approprié pour effectuer des recherches dans la population en raison de la stabilité géographique avec faible taux de mobilité. Deuxièmement, la grande taille de la population par rapport inscrits dans cette étude nous a permis de mener une analyse de scène stratifié dans la formation et de validation des ensembles, ce qui limitait les facteurs de confusion de la tumeur et le traitement hétérogénéité. Une limitation majeure de cette étude est que la petite population relative dans l'ensemble de validation peut entraîner des faux négatifs. En outre, étant donné que notre étude a été limitée aux Chinois Han, nous ne pouvons pas exclure la question de la généralisation. Les futures études dans des populations plus importantes et d'autres groupes ethniques sont garantis.

Dans l'ensemble, comme la première étude en observant l'effet de polymorphismes HMGB1
géniques sur GC pronostic dans une population chinoise, nos données suggèrent fortement que tag rs1045411 SNP dans HMGB1
gène a un effet significatif sur le résultat clinique des patients du GC, en particulier pour les patients atteints de stade avancé ou toute autre situation clinicopathologique agressive. La présente étude a une importance clinique potentielle pour aider à affiner les décisions thérapeutiques dans le traitement de GC.

Informations complémentaires
Tableau S1. Les informations et les résultats de génotypage SNP HMGB1
doi: 10.1371. /Journal.pone.0154378.s001
(DOC)
S2 Table. Certaines caractéristiques démographiques et cliniques de la population de patients de cancer de l'estomac
doi:. 10.1371 /journal.pone.0154378.s002
(DOC)
S3 Tableau. Répartition des caractéristiques des patients et l'analyse de pronostic dans l'ensemble de la formation et de l'ensemble de validation
doi:. 10.1371 /journal.pone.0154378.s003
(DOC)

• PLOS ONE: Tumeur contenu graphique assistée par analyse PCR numérique HER2 /CEP17 de cancer gastrique Biopsie Specimens
• PLOS ONE: Signification pronostique de l'analyse moléculaire du liquide péritonéal pour les patients atteints de cancer gastrique: A Meta-Analysis