PLOS ONE: significado prognóstico da rs1045411 Tag SNP em HMGB1 do Câncer Gástrico agressivo em um Population

Abstract

evidências convincentes têm sugerido que grupo de alta mobilidade box-1 (HMGB1) gene desempenha um papel crucial na desenvolvimento e progressão de cancro. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em gene HMGB1
na sobrevida de pacientes com câncer gástrico (CG). Três SNPs tag de HMGB1
gene foram selecionados e genotipados usando o sistema de genotipagem Sequenom IPEX em uma coorte de 1030 pacientes do GC (704 em conjunto de treinamento, 326 em conjunto de validação). Multivariada Cox modelo de riscos proporcionais e curva de Kaplan-Meier foram usados ​​para análise prognóstico. genótipos AG /AA de rs1045411 SNP em HMGB1
gene foram significativamente associados com uma melhor sobrevida global (OS) em um conjunto de 704 pacientes GC quando comparados com os genótipos GG (HR = 0,77 CI, 95%: 0.60-0.97 , P
= 0,032). Este efeito prognóstico foi verificado em um conjunto de validação independente e agrupados análise (HR = 0,80, 95% CI: 0,62-0,99, P
= 0,046; HR = 0,78, 95% CI: 0,55-0,98, P
= 0,043, respectivamente). Na análise estratificada, o efeito protetor do rs1045411 genótipos AG /AA foi mais proeminente em pacientes com estratos adversa, em comparação com pacientes com estratos favorável. Além disso, foram observados efeitos preditivos conjuntas fortes no OS de pacientes GC entre os genótipos rs1045411 e classificação Lauren, diferenciação, estágio ou quimioterapia adjuvante. Além disso, ensaio funcional indicou um efeito significativo do rs1045411 em HMGB1
expressão. Nossos resultados sugerem que rs1045411 no HMGB1
está significativamente associado com resultados clínicos de pacientes GC chineses após a cirurgia, especialmente naqueles com estatuto agressivo, o que garante maior validação em outras populações étnicas

Citation.: Bao G, Qu F, Ele L, Zhao H, Wang N, Ji G, et al. (2016) significado prognóstico da Tag rs1045411 SNP em HMGB1
do Câncer Gástrico agressiva na população chinesa. PLoS ONE 11 (4): e0154378. doi: 10.1371 /journal.pone.0154378

editor: Qing-Yi Wei, Cancer Institute, Duke, Estados Unidos

Recebido: 23 Janeiro, 2016; Aceito: 12 de abril de 2016; Publicação: 26 de abril de 2016

Este é um artigo de acesso aberto, livre de todos os direitos autorais e pode ser livremente reproduzido, distribuído, transmitido, modificado, construído em cima, ou de outra maneira usado por qualquer pessoa para qualquer finalidade lícita. O trabalho é feito disponível sob a dedicação de domínio público da Creative Commons CC0

Data Availability:.. Todos os dados relevantes estão dentro do papel e seus arquivos de suporte de informação

Financiamento: Este trabalho foi apoiado por subsídios da National Natural Science Foundation da China (No. 81272201 e No. 81.572.916 para GB; No. 81.200.330 para NW)

Conflito de interesses:. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

. introdução

o câncer gástrico (CG) é o quarto tipo de câncer mais comum no mundo, representando cerca de 8% dos novos cancros e 10% das mortes por câncer [1]. Destes casos, 70% ocorreram em países em desenvolvimento, e metade do total mundial ocorreu na Ásia Oriental, predominantemente na China [2]. Ao longo das últimas décadas, apesar do aumento significativo no investimento e os avanços no diagnóstico e tratamento de GC, a sobrevida global (OS) para GC avançada ainda é sombrio, com uma taxa de sobrevida em 5 anos de menos que 25% [3 ]. Actualmente, a sobrevivência e o prognóstico dos doentes GC ainda dependem da fase do tumor na altura do diagnóstico. No entanto, devido às diferenças importantes claramente dentro da mesma fase, a fase do tumor por si só não é suficiente para prever o prognóstico de GC [4]. Portanto, para descobrir novas assinaturas moleculares como marcadores prognósticos fiáveis ​​para GC é muito importante e exigente. Nos últimos anos, estudos têm-se centrado sobre a investigação de variantes genéticas que predispõem ao desenvolvimento e progressão da GC [5].

box-1 grupo alta mobilidade (HMGB1), um importante membro do grupo de alto mobilidade superfamília de proteínas, contém dois domínios de ligação de ADN-ácido 80-amino (da caixa-A e B-box) e uma cauda carboxilo ácido [6]. Ele funciona como uma proteína estrutural da cromatina dentro do núcleo e uma citocina pró-inflamatória extracelularmente. Como uma proteína nuclear, a HMGB1 se liga não especificamente ao sulco menor do ADN e facilita a montagem dos alvos de ADN específicas do local [7]. Em contraste, as funções extracelulares de HMGB1 como uma citocina que se propaga respostas inflamatórias Infecção- ou provocada-lesão [8]. A libertação constante a partir de HMGB1 células tumorais necróticas podem criar um microambiente semelhante a inflamação crónica; uma condição conhecida por contribuir para o desenvolvimento de doenças malignas epiteliais, especialmente cancro da inflamação associada [9]. De facto, vários estudos têm demonstrado previamente a sobre-expressão de HMGB1 em muitos tipos de cancro [10-13], incluindo GC [14]. Além disso, evidências convincentes confirmaram, ainda, que a sobre-expressão de HMGB1 está intimamente relacionada com o desenvolvimento do tumor por mediar a proliferação, invasão e migração de células cancerosas [15, 16]. Portanto, a HMGB1 pode ser um candidato interessante como um novo marcador de prognóstico ou alvo terapêutico para GC.

Acumulando evidências têm sugerido que origens genéticas podem afectar o risco e prognóstico de GC [17]. polimorfismo de um único nucleótido (SNP) é a variação genética mais comum, e podem ser os biomarcadores substitutos promissores de origens genéticas dos pacientes para prever a resposta terapêutica e prognóstico [18]. variantes genéticas foram identificadas em humanos HMGB1
gene [19], mas a associação entre o HMGB1
polimorfismo do gene e os resultados de sobrevivência GC nunca foi determinada. Dado o papel crucial de HMGB1 no desenvolvimento e progressão do câncer, é plausível que os polimorfismos de HMGB1
podem afetar os resultados clínicos de GC. Aqui, foram avaliados os efeitos de três tag SNPs em HMGB1
sobre os resultados clínicos de 1030 pacientes chineses GC (704 no conjunto de treinamento, 326 no conjunto de validação independente) que receberam tratamento ressecção radical. Além disso, o efeito de um SNP tag relevante identificado na regulação da expressão do gene foi ainda examinado por um ensaio funcional in vitro
. Para o melhor de nosso conhecimento, esta é a primeira investigação da associação entre os polimorfismos de HMGB1 Comprar e a evolução clínica de GC.

Materiais e Métodos

Ética

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da Quarta Universidade médica Militar. Os procedimentos foram realizados de acordo com as directrizes aprovadas e a Declaração de Helsínquia 1964, e suas alterações posteriores ou padrões éticos comparáveis. O consentimento informado assinado foi obtido de cada participante incluídos no estudo.

População do estudo

Um total de 1030 pacientes chineses han com adenocarcinoma gástrico primário foram inscritos em dois locais independentes, Tangdu Hospital e Xijing Hospital de Doenças do Aparelho digestivo, em Xi'an, China. Todos os casos GC recebeu a ressecção cirúrgica e não tinha história prévia de outros tipos de câncer ou qualquer tratamento anticâncer pré-operatório ou transfusão de sangue dentro de três meses antes da cirurgia. Não houve idade, sexo, ou restrições estágio da doença para o caso de recrutamento. Entre eles, os 704 pacientes (Departamento de Cirurgia Geral, Tangdu Hospital, entre julho de 2008 e junho de 2013) foram usados ​​como um conjunto de treinamento neste estudo. Outro grupo de 326 pacientes (Xijing Hospital de Doenças do Aparelho Digestivo, entre janeiro de 2008 e dezembro de 2010) foram utilizados como um conjunto de validação independente. O objetivo foi identificar o valor prognóstico clinicamente significativa de SNPs dentro HMGB1
gene a partir do conjunto de treinamento e testou-o no conjunto de validação independente.

Os dados demográficos e clínicos

os dados demográficos e clínicos foram coletados através de entrevistas feitas pessoalmente na visita inicial ou acompanhamento nas clínicas, registros médicos, ou consulta com os médicos que tratam, incluindo idade, sexo, etnia, região residencial, momento do diagnóstico, tempo de cirurgia e /ou quimioterapia adjuvante (ACT), o tempo de recidiva e /ou morte, estágio do tumor, classificação Lauren, diferenciação, tipo histológico e protocolo de tratamento. informações de acompanhamento foi atualizada em intervalos de 6 meses através no local entrevista, comunicação por telefone, ou revisão dos prontuários por especialistas de pesquisa treinados. A última data de acompanhamento Era junho de 2015 e a mediana de duração de seguimento foi de 51 meses (intervalo de 6-89 meses). A porcentagem de pacientes perdidos durante o seguimento foi de 9,8%. OS foi definido como o tempo desde a cirurgia à morte específica em GC. RFS (sobrevida livre de recidiva) foi definido como o tempo desde a cirurgia até a data da primeira recidiva ou metástase distante do GC. Pacientes vivos no último follow-up foram censurados.

Recolha, tratamento e preservação de espécimes

Antes da cirurgia, o sangue 5 ml venoso foi coletado de cada pacientes GC para extrair DNA usando o E.Z.N.A. sangue DNA Midi Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, EUA). Sessenta tecidos cancerosos gástricas estavam reunidos simultaneamente a partir do conjunto de validação para ensaios em tempo real quantitativa transcrição reversa PCR (RT-PCR).

selecção SNP e genotipagem

A tag candidato SNPs seleção de gene HMGB1
foram realizados como um processo de dois passos. Em primeiro lugar, foi utilizado um conjunto de ferramentas de seleção SNP baseados na Web (http://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) para procurar SNPs candidatos da HMGB1
[20]. Todos os polimorfismos validados em região
gene HMGB1, incluindo 5 kb a montante do primeiro exão e 5 kb a jusante do último exão, foram considerados candidatos SNPs. Esses SNPs com uma frequência menor alelo ≥ 5% no HapMap CHB (chineses han em Pequim) da população e um desequilíbrio de ligação em pares quadrado do coeficiente de correlação (r ^{2) > 0,8 foram seleccionados como candidatos SNPs. Em segundo lugar, tag SNPs foram escolhidos a partir desses SNPs candidatos que utilizam o banco de dados HapMap Projeto Internacional de Fase II da população chinesa (http://www.hapmap.org/, acessado 18 de novembro de 2013) e HAPLOVIEW versão 4.2. Finalmente, três tag SNPs (média r 2 = 0,981) foram seleccionados: rs1045411 (G > A), rs1412125 (T > C) e rs2249825 (C > G) .Genotyping foi realizado usando o sistema de genotipagem Sequenom Iplex (Sequenom Inc., San Diego, CA, EUA) de acordo com o protocolo do fabricante. As pessoas de laboratório que realizou os ensaios de genotipagem estavam cegos à informação dos pacientes. controles de qualidade internos e controles negativos foram usadas para garantir a precisão genotipagem e 5 amostras foram selecionados aleatoriamente e genotipados em duplicado com 100% de concordância. taxa de chamada para genotipagem variou entre 99,3% e 99,7%. As informações detalhadas de SNPs e resultados de genotipagem foram listadas na Tabela S1.}

Ensaio funcional

Os efeitos funcionais de rs1045411 tag SNP localizados na 3'UTR de HMGB1
gene foram investigadas através da utilização do ensaio de repórter luciferase. Resumidamente, 49 pb de DNA de fita dupla transportando quer genótipo selvagem ou genótipo variante rs1045411 foi sintetizado e clonado no vector PMIR-REPORT (Ambion, Austin, Texas, EUA), utilizando enzimas de restrição Spe I e Hind III (Takara, Dalian, China). Todas as construções foram confirmadas por sequenciação de ADN. linhas celulares de GC humanos SGC-7901 e a linha celular de rim embrionário humano HEK-293T, na qual tem-miR-505 foi identificado a ser expressa de forma positiva pela utilizando o kit TaqMan microARN Transcrição Reversa (Applied Biosystem, Foster City, CA, EUA) como previamente descrita [21], foram co-transfectadas com ambos os PMIR-rs1045411-a ou PMIR-rs1045411-G (200 ng /poço) com ou sem anti-miR-505 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) e o controlo interno pRLTK plasmídeo repórter (Promega, Madison, WI, EUA) (20 ng /cavidade) utilizando Lipofectamina 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA) numa placa de 24 poços com 2 × 10 ^{5 células por poço. SGC-7901 e linhas de células HEK293 foram adquiridos a partir Type Culture Collection da Academia Chinesa de Ciências (CAS) (Xangai, China), onde foram verificados por detecção de micoplasma, DNA-impressão digital, detecção de isozima e detecção vitalidade celular. Um frasco congelado de cada linha de células 147, que foi imediatamente congelado e expandido quando está a ser recebida do fornecedor, foi reanimado e utilizado para o presente estudo. Após 48 h, as células foram colhidas para determinar a actividade da luciferase utilizando um estojo duplo de luciferase sistema de ensaio repórter (Promega, Madison, WI, EUA) com um luminómetro (Tecan, Mannedorf, Suíça). Todas as transfecções foram efectuadas em triplicado e todas as experiências foram repetidas três vezes, independentemente.}

Para avaliar ainda o efeito de genótipos rs1045411 tag SNP na expressão de HMGB1
ARNm, ARN total foi isolado a partir de 60 amostras de tecido GC (30 com o genótipo AA e 30 com genótipos AG /GG de rs1045411) de acordo com as instruções do fabricante. Então, cDNA foram sintetizados utilizando kit reagente PrimeScript RT (Takara, Dalian, China). RT-PCR foi efectuada utilizando os seguintes HMGB1
iniciadores: para a frente, 5'-TAAGAAGCCGAGAGGCAAAA-3 '; reverso, 5'-AGGCCAGGATGTTCTCCTTT- 3 ', e β-actina foi utilizado como um controlo interno (iniciadores: para a frente, 5'-AAGACGTACTCAGGCCATGTCC-3'; reverso, 5'-GACCCAAATGTCGCAGTCAG-3 ') [13]. A expressão relativa de HMGB1
níveis de mRNA foi determinada utilizando o método de quantificação relativa e 2 Análise ^-ΔΔCt.

A análise estatística

Estatísticas análises foram realizadas com a IBM SPSS Statistics 19.0 software (IBM). variáveis ​​contínuas com distribuição normal foram expressos como média ± SD, enquanto as variáveis ​​contínuas anormalmente distribuídos foram expressos como mediana e amplitude. χ de Pearson ^{2-ensaio foi usado para testar as diferenças de variáveis ​​categóricas. A diferença das variáveis ​​contínuas com distribuição normal entre dois grupos foi analisada por meio de Student t
-teste, enquanto Mann-Whitney U foi utilizado para a comparação das variáveis ​​contínuas anormalmente distribuídos. Multivariada Cox modelo de regressão de risco proporcional foi aplicada para avaliar o efeito do SNP individual e características dos pacientes no sistema operacional ou RFS. taxas de risco (HR) e intervalos de confiança de 95% (IC) foram estimados com ajuste para idade, sexo, classificação Lauren, diferenciação, estádio TNM e ACT. curvas de Kaplan-Meier e testes-log rank também foram usados ​​para avaliar o efeito dos SNPs individuais em tempo de sobrevivência. Estatísticas significância foi estabelecido em um nível de 0,05 e tudo valores P
relatados neste estudo foram dois lados.}

Resultados

Distribuição das características dos pacientes e prognóstico análise

características dos pacientes GC foi resumido na Tabela S2. Devido à data de término tardio de paciente inscrição para o conjunto de treinamento, a mediana do tempo de seguimento foi menor no conjunto de treinamento (46 meses, variando de 6 a 80 meses) do que no conjunto de validação independente (72 meses, variando de 6-89 meses). Assim, em comparação com os pacientes no conjunto de validação independente, aqueles no conjunto de treinamento tiveram menores taxas de recidiva (58,4% vs
. 66,8%, P
= 0,005) e morte (41,4% vs
. 55,8%, P
= 0,001). Não houve diferenças entre conjunto de treinamento e validação definido em termos de idade, local do tumor, classificação Lauren, estágio TNM, diferenciação e ACT ( valor P
variando 0,082-0,898). No último acompanhamento, 641 pacientes (423 e 218 no conjunto de treinamento e validação, respectivamente) desenvolveram recidiva e 482 morreram (300 e 182 no conjunto de treinamento e validação, respectivamente). Multivariada Cox análise de regressão mostrou que houve significativamente maior risco de morte e recorrência em pacientes com tipo difuso, pobre diferenciação e estágio do tumor III e IV em comparação com aqueles pacientes com o tipo intestinal, bem /moderada diferenciação e estágio do tumor I e II entre conjunto de treinamento, conjunto de validação e análise agrupada. Além disso, a ACT à base de platina após a cirurgia mostraram um efeito protetor significativo em ambos OS e RFS dos pacientes do GC (S3 Tabela).

Associação de HMGB1
SNPs com o resultado clínico em pacientes GC

Foi avaliada a associação de HMGB1
genótipos SNP com o resultado clínico GC usando a análise de regressão multivariada de Cox com ajuste para idade, sexo, local do tumor, classificação Lauren, diferenciação, estádio TNM e ACT (como mostrado na Tabela 1). Os resultados mostraram que tag rs1045411 SNP foi significativamente associada com o OS de pacientes GC no conjunto de treinamento. Em comparação com pacientes com o genótipo GG, aqueles com alelos variantes (AG e genótipos AA) tiveram um risco significativamente menor de morte (HR = 0,77 IC 95%: 0,60-0,97, P
= 0,032). Este achado significativo foi confirmado no conjunto de validação independente e agrupados análise, com horas de 0,80 (IC 95%: 0,62-0,99; P
= 0,046) e 0,78 (95% CI: 0,55-0,98; P
= 0,043), respectivamente. Kaplan-Meier análise de curvas também forneceu uma forte associação com o OS. Pacientes portadores de genótipos AG /GG de rs1045411 tiveram melhor OS do que aqueles com o genótipo GG no conjunto de treinamento ( P
= 0,024, Fig 1A), conjunto de validação ( P
= 0,017, Fig 1B ) e análise agrupada ( P
= 0,001, Fig 1C).

a análise estratificada na associação de rs1045411 com o oS por variáveis ​​hospedeiras

Realizamos análises estratificadas para avaliar as associações entre os genótipos de rs1045411 e OS de pacientes GC por idade, classificação Lauren, diferenciação, estádio TNM e ACT. Os efeitos protectores significativos conferidos pela rs1045411 foi mais proeminente em subgrupos adversos com uma gama HR 0,39-0,69 (Fig 2A). Para mais detalhes, a significativa diminuição do risco de morte associado com os genótipos contendo variantes (AG /AA) de rs1045411 foi observado em pacientes mais velhos (HR = 0,69, 95% CI: 0,48-0,99), tipo difuso (HR = 0,67, 95% CI: 0,47-0,95), falta de diferenciação (HR = 0,66, 95% CI: 0,45-0,95), estágio clínico III e IV (HR = 0,58, 95% CI: 0,37-0,93) e sem ACT (HR = 0,39, 95 % CI: 0,20-0,76). Além disso, a presente análise estratificada mostrou uma tendência semelhante para RFS com uma gama HR 0,44-0,79 (Fig 2B). Os resultados indicaram que os genótipos AG /AA de rs1045411 conferido o prognóstico mais favorável nos grupos adversos.

efeito conjunto entre rs1045411 e classificação Lauren, diferenciação, palco ou ACT no OS

Estudos anteriores mostraram que ambas as variações genéticas e características clínicas interagem para desempenhar papéis críticos na progressão GC [17]; e que, quando existem interacções, os efeitos clínicos de elementos na progressão tumoral será modificado por genótipos. Portanto, uma análise conjunta foi realizada para avaliar o potencial efeito modulador do rs1045411 nestas características clínicas (classificação Lauren, diferenciação, palco e ACT), que representa o status da progressão do tumor no OS de pacientes do GC. Como mostrado na Tabela 2, houve uma interação significativa entre os genótipos de rs1045411 e classificação Lauren, diferenciação, palco ou ACT (todo o P
_{interação < 0,001). Em comparação com os indivíduos com genótipos AG /AA e tipo intestinal, aqueles com o genótipo GG e tipo difuso teve um aumento significativo do risco de morte (HR = 2,09, 95% CI: 1,42-3,08, P Art < 0,001). Os resultados semelhantes também foram encontrados em pacientes portadores do genótipo GG com pobre diferenciação (HR = 2,48 IC 95%: 1,70-3,62, P Art < 0,001), em pacientes com o genótipo GG da fase III /IV ( HR = 2,99, 95% CI: 2,04-4,38, P Art < 0,001), e em pacientes portadores de genótipo GG com ACT (HR = 4,49 IC 95%: 2,70-7,45, P
<. 0.001) em comparação com o grupo de referência correspondente}

efeitos funcionais de rs1045411 sobre a expressão gênica

análise de Bioinformática (http://www.microrna.org/microrna/home. fazer) revelou uma proximidade de rs1045411 tag SNP ao microRNA previu sítios de ligação (HSA-miR-505) na região 3 'não traduzida (3'UTR) de HMGB1
gene [22] (Fig 3A ). Em primeiro lugar, confirmou a expressão de miR-505 em SGC-7901 e linhas de células HEK-293T, e descobriram que o miR-505 tinha um nível de expressão relativamente mais elevada (Figura 3B). Para investigar se os genótipos de rs1045411 tag SNP no 3'UTR do HMGB1
gene pode alterar a expressão genética, duas linhas de células foram transfectadas com plasmídeos repórter luciferase contendo ou o selvagem (GG) ou variante (AA) genótipo de rs1045411 SNP (Fig 3C). Os resultados demonstraram que rs1045411 SNP mostraram significativamente um efeito sobre a actividade de luciferase normalizada em ambas as células transfectadas. Em comparação com células transfectadas com constructos que transportam genótipo selvagem (GG) de rs1045411 SNP, as células transfectadas com constructos que transportam genótipo variante (AA) exibiu uma redução significativa da actividade de luciferase. O efeito de anti-miR-505 sobre a actividade de luciferase dos plasmídeos repórter também foi avaliada no estudo. Os resultados mostraram que a actividade da luciferase de duas construções UTR (p-MIR-L e p-MIR-A) foi aumentada significativamente por anti-miR-505 em ambas as linhas celulares com diferenças de actividade de luciferase eliminados entre dois plasmídeos repórter. Além disso, utilizou-se RT-PCR quantitativa para investigar o efeito de genótipos rs1045411 SNP na expressão de ARNm de HMGB1 em 60 tecidos de GC (30 com o genótipo GG e AG 30 com genótipos /AA) de conjunto de validação. Como mostrado na Fig 3D, verificou-se que o nível de expressão de ARNm de HMGB1 foi significativamente maior nas portadoras com selvagem (GG) de genótipo rs1056560 do que aqueles que realizada genótipos variante (AG /AA) (1,04 ± 0,50 vs
. 0,79 ± 0,37, P
= 0,004).

Discussão

no presente estudo, foi investigada a associação de polimorfismos genéticos em HMGB1
gene com o prognóstico dos pacientes GC pela análise de dois estágios de formação e validação conjuntos. Nós demonstramos que os genótipos AG /AA de rs1045411 SNP tag no HMGB1
3'-UTR estão significativamente associados com um melhor sistema operacional em um conjunto de 704 pacientes GC quando comparado com os genótipos GG. Esta associação significativa foi confirmada em um conjunto de validação independente de 326 pacientes GC, bem como uma análise conjunta de todos os 1030 pacientes do GC. Ensaio funcional indicou que SNP genótipos rs1045411 teve uma influência significativa sobre a expressão de ARNm de HMGB1
tecidos em GC, bem como duas linhas de células de tumor. Além disso, o efeito prognóstico favorável de rs1045411 foi mais evidente nos subgrupos adversos de pacientes do GC. Além disso, a análise conjunta encontrada uma interação significativa de elementos de genes-clínica. Para o melhor de nosso conhecimento, este estudo, pela primeira vez relatada a associação entre o HMGB1 polimorfismos
genes e prognóstico GC. Depois da validação, HMGB1
rs1045411 SNP pode ser utilizado como um marcador de prognóstico em combinação com fatores prognósticos clínicos tradicionais para a tomada de decisão da GC tratamento individual.

As evidências crescentes sugerem que a HMGB1 elevada é associado com a metástase do tumor e o prognóstico pobre [16, 23-26], fazendo com que a HMGB1 um biomarcador tumoral atraente. Tem sido sugerido que as funções de HMGB1 como uma proteína potencialmente oncogénico para promover o progresso do tumor [15, 27, 28], e a sua sobre-expressão em células de cancro afecta a resposta de células T anti-cancro, através da activação de sinalização intracelular [15, 29]. De facto, a expressão elevada de HMGB1 tem sido detectada em doentes com de GC e de outros tipos de cancro [30-32], e a sua expressão está intimamente associada com a tumorigénese [33], invasão tumoral e metástase [29]. Além disso, Chung et al [34] demonstraram que os níveis de HMGB1 no soro foram também significativamente associado com a invasão do tumor, metástases, crescimento, bem como mau prognóstico. Colectivamente, estes resultados suportam um papel importante de HMGB1 na transformação câncer, o crescimento do tumor e invasão.

Apesar das extensas investigações de expressão HMGB1 nos tecidos e a sua actividade serológica correspondente sobre a evolução do cancro, existem alguns estudos que evidenciem o efeito dos SNPs em gene HMGB1
no prognóstico do cancro ou resposta ao tratamento até agora. Num grupo de pacientes com cancro do pulmão chineses, dois SNPs, rs141215 e rs2249825, têm sido associados com respostas quimioterapia baseada em platina [35]. Da mesma forma, em pacientes com carcinoma epidermóide de boca, outro HMGB1
polimorfismo no rs3742305 SNP tem sido associada com a progressão do tumor e sobrevida livre de recidiva [36]. No entanto, foram excluídos os rs3742305 SNP do presente estudo porque está em forte desequilíbrio de ligação com os rs1045411 SNP. No presente estudo, verificou-se que contendo variante (AG /AA) genótipos de rs1045411 SNP tag foram significativamente associados com um melhor sistema operacional em pacientes com GC, apoiando um papel importante de HMGB1 na evolução GC.

Desde SNP rs1045411 está localizado na região 3'UTR do HMGB1
gene, pode influenciar a expressão de HMGB1
gene em pacientes GC. Até à data, no entanto, não há estudos para avaliar as funções dos rs1045411 SNP. Descobrimos que rs1045411 está em estreita proximidade para um local previsto microARN ligação (tem-miR-505) [22], o que sugere que uma tal variação a esta posição pode afectar a estabilidade de ARNm e a actividade de ligação a microARN, modulando assim a expressão do gene [ ,,,0],37]. Na verdade, os nossos ensaios de repórter de luciferase confirmou uma influência significativa do rs1045411 na regulação pós-transcricional de HMGB1
gene de uma forma miR-505-dependente. Além disso, examinando nível de expressão de mRNA HMGB1 em amostras de tecido de 60 GC com dados de genótipos de rs1045411 SNP, descobrimos que os tecidos que transportam contendo variante (AG /AA) genótipos tinha diminuído significativamente os níveis de expressão de mRNA HMGB1 em comparação com aqueles com wild homozigoto (GG ) genótipo. Tomados em conjunto, os nossos resultados experimentais indicaram que o efeito prognóstico favorável conferida por contendo variante (AG /AA) genótipos de rs1045411 foi intimamente associado com expressão aberrante de HMGB1
.

O nosso estudo mostrou que os efeitos protetores significativos ou limítrofes de contendo variante (AG /AA) genótipos de rs1045411 SNP no oS e RFS dos pacientes do GC foram encontrados quase completamente na adverso (mas não em favoráveis) pacientes estratos. Isto está de acordo com estudos anteriores que mostram que SNPs afetar a sobrevivência de câncer mais proeminente em pacientes subgrupo específico. Por exemplo, Wang et al
[38] relataram que PSCA
rs2294008 está significativamente associado com a sobrevivência resultados entre difusa do tipo de câncer gástrico, mas cancro gástrico não intestinal-tipo. Pu et al
[39] sugeriram também que as variantes genéticas relacionadas com o microRNA é mais notável associada com a sobrevivência do cancro do pulmão de não pequenas células em pacientes em fase inicial. Observou-se também um efeito significativo de interação entre genótipos rs1045411 e elementos clínicos, tais como classificação de Lauren, diferenciação, estádio clínico e quimioterapia adjuvante na modulação do prognóstico da GC. Estas correlações significativas sugeriu que rs1045411 SNP pode ter papéis moduladores potenciais em tais características clínicas que representam a progressão do tumor. No entanto, os mecanismos subjacentes continuam a ser investigado no futuro.

O presente estudo tem várias características distintas. Primeiro, os pacientes enquadrados vêm principalmente de Shaanxi e áreas adjacentes, o que é adequado para a realização de pesquisas de base populacional por causa da estabilidade geográfica com taxa baixa mobilidade. Em segundo lugar, o tamanho da população grande em relação matriculados no presente estudo nos permitiu realizar a análise fase-estratificado em treinamento e validação conjuntos, o que limitava os fatores de confusão de tumor e heterogeneidade do tratamento. Uma grande limitação do estudo é que a pequena população relativa no conjunto de validação pode resultar em falso-negativos. Além disso, uma vez que nosso estudo foi restrita a chineses han, não podemos descartar a questão generalização. Futuros estudos em populações maiores e outras etnias são garantidos.

No geral, como o primeiro estudo observando o efeito de polimorfismos HMGB1
gene no prognóstico GC em uma população chinesa, nossos dados sugerem fortemente que tag rs1045411 SNP em HMGB1
gene tem um efeito significativo sobre o desfecho clínico dos pacientes GC, especialmente para pacientes com estágio avançado ou qualquer outra condição clínico-patológico agressivo. O presente estudo tem significado clínico potencial para ajudar a refinar as decisões terapêuticas no tratamento de GC.

Informações de Apoio
Tabela S1. As informações e genotipagem resultados de HMGB1 SNPs
doi: 10.1371. /Journal.pone.0154378.s001
(DOC)
S2 Table. Seleccionado características demográficas e clínicas de população de pacientes de câncer gástrico
doi:. 10.1371 /journal.pone.0154378.s002
(DOC)
S3 Tabela. Distribuição das características dos pacientes e análise de prognóstico no conjunto de treinamento eo conjunto de validação
doi:. 10.1371 /journal.pone.0154378.s003
(DOC)

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