PLoS ONE: прогностическое значение Tag SNP rs1045411 в HMGB1 агрессивного рака желудка в китайском Population

Абстрактный
<р> Убедительные доказательства предполагают, что группа высокой мобильности бокс-1 (HMGB1) ген играет ключевую роль в развитие рака и прогрессии. Целью данного исследования являлась оценка влияния единичных нуклеотидных полиморфизмов (SNP) в HMGB1
генов на выживание рака желудка (GC) пациентов. Три тега ОНП от HMGB1
гена были выбраны и генотипирование с использованием системы генотипирования Sequenom IPEX в когорте 1030 GC пациентов (704 в обучающем наборе, 326 в проверке обоснованности). Многофакторный Кокс модели пропорциональных рисков и Каплана-Мейера кривой были использованы для анализа прогноза. генотипов AG /А.А. SNP rs1045411 в ген HMGB1
были в значительной степени связано с улучшением общей выживаемости (OS) в наборе 704 больных ГХ при сравнении с GG генотипов (HR = 0,77, 95% ДИ: 0.60-0.97 , P
= 0,032). Этот прогностический эффект был подтвержден в независимом проверке обоснованности и объединенного анализа (HR = 0,80, 95% ДИ: 0.62-0.99, P
= 0,046; ОР = 0,78, 95% ДИ: 0.55-0.98, P
= 0,043, соответственно). В стратифицированной анализе, защитный эффект rs1045411 генотипов AG /AA была более выраженной у пациентов с неблагоприятными пластах, по сравнению с пациентами с благоприятным толщ. Кроме того, были отмечены сильные совместные прогнозного воздействия на ОС пациентов GC между rs1045411 генотипов и классификации Lauren, дифференциация, стадии или адъювантной химиотерапии. Кроме того, функциональный анализ показали существенное влияние rs1045411 на HMGB1
выражения. Наши результаты свидетельствуют о том, что rs1045411 в HMGB1
значительно связан с клиническими результатами китайских пациентов GC после операции, особенно в тех, с агрессивным статусом, который требует дальнейшего проверки в других этнических групп
<р> Цитирование.: Бао G, Цюй F, L Он, Чжао H, Ван N, G Ji, и др. (2016 г.) прогностическое значение тега SNP rs1045411 в HMGB1
агрессивного рака желудка в китайской популяции. PLoS ONE 11 (4): e0154378. DOI: 10.1371 /journal.pone.0154378
<р> Редактор: Цин-Yi Вэй, институт рака Duke, Соединенные Штаты
<р> Поступило: 23 января, 2016 г. Принято: 12 апреля 2016; Опубликовано: 26 апреля 2016
<р> Это открытая статья доступа, свободной от всех авторских прав, и могут быть свободно воспроизведены, распространять, передавать, изменять, построен на, или иным образом использоваться кем-либо для любой законной цели. Работа доступна под общественное достояние Creative Commons cc0
<р> Доступность данных:.. Все необходимые данные находятся в пределах своих подтверждающей информации, файлов бумаги и
<р> Финансирование: Эта работа была поддержана грантами от Национального фонда естественных наук Китая (№ 81272201 и № 81572916 к GB; N: 81200330 к NW)

конкурирующие интересы:. авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

. Введение
<р> рак желудка (GC) является четвертым наиболее распространенным видом рака в мире, что составляет около 8% новых случаев рака и 10% смертей от рака [1]. Из этих случаев, 70% имели место в развивающихся странах, и половина мирового объема произошло в Восточной Азии, главным образом, в [2] Китай. За последние несколько десятилетий, несмотря на значительное увеличение инвестиций и достижений в области диагностики и лечения ГК, общая выживаемость (OS) для продвинутых GC по-прежнему мрачны, с 5-летней выживаемости менее 25% [3 ]. В настоящее время выживаемость и прогноз больных GC-прежнему зависит от стадии опухоли на момент постановки диагноза. Тем не менее, в связи с явно важных различий в рамках той же стадии, стадия опухоли сама по себе не является достаточным для прогнозирования рака GC [4]. Поэтому, чтобы открыть новые молекулярные подписи, как надежные прогностические маркеры для GC является очень важным и требовательным. В последние годы исследования были сосредоточены на изучении генетических вариантов, которые предрасполагают к развитию и прогрессированию GC [5].
<Р> Группа Высокая мобильность бокс-1 (HMGB1), является важным членом группы с высокой подвижностью белок надсемейство, содержит два 80-аминокислоты, ДНК-связывающие домены (A-бокс и B-боксов) и кислотную карбоксильную хвост [6]. Он функционирует в качестве структурного белка хроматина в ядре и провоспалительного цитокина внеклеточно. В качестве ядерного белка, HMGB1 связывается неспецифически с малой бороздке ДНК и облегчает сборку мишеней ДНК конкретных участков [7]. В противоположность этому, внеклеточные функции HMGB1 как цитокин, распространяющейся infection- или травмы вызывали воспалительные реакции [8]. Постоянное высвобождение HMGB1 от некротических опухолевых клеток может создать микросреду, напоминающую хроническое воспаление; условие, как известно, способствуют развитию эпителиальных злокачественных опухолей, особенно ассоциированных с воспалением рака [9]. На самом деле, многочисленные исследования, которые ранее продемонстрировали избыточная экспрессия HMGB1 во многих типах рака [10-13], в том числе GC [14]. К тому же, убедительные доказательства еще больше подтвердили, что HMGB1 избыточная экспрессия тесно связана с развитием опухоли путем опосредования пролиферацию, инвазию и миграцию раковых клеток [15, 16]. Поэтому HMGB1 может быть интересным кандидатом в качестве нового прогностического маркера или терапевтической мишени для GC.
<Р> Накопленные доказательства предполагают, что генетический фон может повлиять на риск и прогноз GC [17]. Single нуклеотидного полиморфизма (SNP) является наиболее распространенной генетической изменчивости, и могут быть перспективными суррогатные биомаркеры генетического происхождения пациентов предсказать терапевтический ответ и прогноз [18]. Генетические варианты были определены в человеческой HMGB1
гена [19], но связь между HMGB1
полиморфизма гена и исход выживания GC никогда не была определена. Учитывая решающую роль HMGB1 в развитии и прогрессии рака, то вполне вероятно, что полиморфизмы HMGB1
может повлиять на клинические результаты ГХ. При этом, мы оценивали эффекты трех тегов ОНП в HMGB1
на клинические исходы 1030 Китайский GC пациентов (704 в обучающем наборе, 326 в независимой проверке обоснованности), получивших радикальное лечение засечки. Кроме того, эффект идентифицированного соответствующего тега SNP на регуляции экспрессии генов дополнительно исследовали с помощью в пробирке
функциональном анализе. Насколько нам известно, это первое исследование ассоциации между полиморфизмом HMGB1
и клинический исход GC.

Материалы и методы

Этика
<р> Это исследование было одобрено Этического Комитета Четвертого военного медицинского университета им. Эти процедуры были выполнены в соответствии с утвержденными руководящими принципами и к 1964 году Хельсинской декларации и ее последующими изменениями или сравнимых этических норм. Подписанное информированное согласие было получено от каждого участника включенных в исследование.

Исследуемая популяция
<р> В общей сложности 1030 Хань китайских пациентов с первичной аденокарциномы желудка были зарегистрированы из двух независимых сайтов, Tangdu больницы и Xijing Больница заболеваний пищеварительной системы, в г. Сиань, Китай. Все случаи GC получили хирургической резекции и не имели в анамнезе других видов рака или любой предоперационное лечение противораковым или переливание крови в течение 3-х месяцев до операции. Там не было возраста, пола, или ограничения стадии заболевания для случая набора. Среди них 704 больных (кафедра общей хирургии, Tangdu больницы, в период с июля 2008 года по июнь 2013 года) были использованы в качестве обучающей выборки в данном исследовании. Другая группа из 326 пациентов (Xijing больницы заболеваний пищеварительной системы, в период с января 2008 года по декабрь 2010 года) были использованы в качестве независимого набора проверки. Цель состояла в том, чтобы выявить клинически значимое прогностическое значение ОНП в пределах гена из обучающего набора HMGB1
и проверили его в независимой проверке обоснованности.

Демографические и клинические данные
<р> Демографические и клинические данные были собраны путем в личных интервью при начальном посещении и последующего наблюдения в клиниках, медицинских записей, или консультации с лечащим врачом, в том числе возраста, пола, этнической принадлежности, жилой регион, время постановки диагноза, время операции и /или адъювантной химиотерапии (ACT), время рецидива и /или смерти, стадия опухоли, классификации Lauren, дифференциации, гистологического типа и протокол лечения. Последующая информация была обновлена ​​на 6-месячными интервалами через на месте интервью, телефонной связи, или обзор медицинских записей подготовленными специалистами научно-исследовательских. Последние последующие даты было в июне 2015 года и средний период наблюдения длительность составила 51 месяцев (диапазон 6-89 месяцев). Процент пациента, утраченного в ходе наблюдения составила 9,8%. ОС была определена как время от операции до GC конкретной смерти. RFS (безрецидивная выживаемость) была определена как время от операции до даты первого рецидива или отдаленных метастазов ГХ. Пациенты живы в последнего наблюдения были подвергнуты цензуре.

Сбор, обработка и сохранение образцов
<р> Перед хирургическим вмешательством, 5 мл венозной крови отбирали у каждого пациентов GC для извлечения ДНК с использованием E.Z.N.A. Кровь ДНК Midi Kit (Omega Bio-Tek, Норкросс, Джорджия, США). Шестьдесят желудка раковые ткани были одновременно собраны из набора для проверки в режиме реального времени количественный ПЦР с обратной транскрипцией (RT-PCR) анализы.

Выбор SNP и генотипирование

Кандидат тег выбора ОНП из HMGB1
гена были выполнены в виде процедуры двухэтапного. Во-первых, мы использовали набор веб-инструментов выделения SNP (http://snpinfo.niehs.nih.gov/snpfunc.htm) для поиска кандидатов ОНП из HMGB1
[20]. Все проверенные полиморфизмы в HMGB1 ген
область, в том числе 5 кб выше первого экзона и 5 кб ниже по потоку от последнего экзона, считались кандидатом ОНП. Те ОНП с малой частотой аллеля ≥ 5% в HapMap БКИ (ханьцев в Пекине) населения и парным неравновесия по сцеплению квадрат коэффициента корреляции (г ^{2) > 0,8 были выбраны в качестве кандидатов ОНП. Во-вторых, теги SNPs были выбраны из этих кандидатов ОНП с использованием базы данных Международного проекта HapMap Второй этап китайского населения (http://www.hapmap.org/~~HEAD=pobj, доступ к 18 ноября 2013 г.) и HAPLOVIEW версии 4.2. И, наконец, три тега SNP, (среднее значение г 2 = 0,981) были выбраны: rs1045411 (G > А), rs1412125 (Т &° С) и rs2249825 (C > G) .Genotyping проводили с использованием системы генотипирования Sequenom Iplex (Sequenom Inc., San Diego, CA, USA) в соответствии с протоколом производителя. Лабораторные лица, проводившие генотипирования анализы были ослеплены информации пациентов. Внутренний контроль качества и отрицательного контроля были использованы для обеспечения точности генотипирования и 5 образцов были выбраны случайным образом и генотип в двух экземплярах со 100% согласованности. Стоимость вызова для генотипирования колебалась от 99,3% до 99,7%. Подробная информация о ОНП и результаты генотипирования были приведены в таблице S1.}

Функциональный анализ
<р> Функциональные эффекты тег SNP rs1045411, расположенных в 3'UTR из гена HMGB1
были исследованы с помощью с помощью анализа люциферазы репортера. Вкратце, 49-ВР двухцепочечную ДНК, несущий либо дикого генотипа или вариант генотип rs1045411 был синтезирован и клонирован в pMIR-REPORT вектора (Амбион, Остин, Техас, США) с использованием рестрикционных ферментов Spe I и Hind III (Takara, Далянь, Китай). Все конструкции были подтверждены путем секвенирования ДНК. линии человека GC клеток SGC-7901 и линия эмбриональных клеток почки человека НЕК-293Т, в котором-микроРНК-505 был идентифицировал быть положительно выражено с помощью TaqMan микроРНК обратной транскрипции комплект (Applied биосистемы, Фостер Сити, Калифорния, США), как ранее описал [21], были котрансфицируют либо pMIR-rs1045411-A или pMIR-rs1045411-G (200 нг /лунку) с или без анти-MIR-505 (Applied Biosystems, Foster City, CA, США) и внутреннего контроля репортер плазмиду pRLTK (Promega, Madison, WI, USA) (20 нг /лунку) с использованием Липофектамина 2000 (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США) в 24-луночный планшет с 2 × 10 5 клеток на лунку. SGC-7901 и линии HEK293 клеток были приобретены из коллекции типовых культур Китайской академии наук (CAS) (Шанхай, Китай), где они были проверены с помощью обнаружения микоплазмы, ДНК-дактилоскопической, обнаружение изоферментному и обнаружения жизнеспособность клеток. Замороженную ампулу каждой линии 147 клеток, которая была немедленно размножали и замораживали при поступает от поставщика, был реанимирован и используется для настоящего исследования. Через 48 часов собирают клетки, чтобы определить активность люциферазы с использованием системы репортер набора для анализа двойного люциферазы (Promega, Madison, WI, USA) с помощью люминометра (Tecan, Mannedorf, Швейцария). Все трансфекцию проводили в трех экземплярах, и все эксперименты были независимо друг от друга повторяют три раза.
<Р> Для дальнейшей оценки влияния тег SNP rs1045411 генотипов на выражение HMGB1
мРНК, общая РНК выделяли из 60 образцов ткани GC (30 с генотипом АА и 30 с АГ /GG генотипов rs1045411) в соответствии с инструкциями изготовителя. Затем кДНК синтезировали с использованием набора реагентов PrimeScript RT (Takara, Далянь, Китай). ОТ-ПЦР проводили с использованием следующих HMGB1
праймеры: вперед, 5'-TAAGAAGCCGAGAGGCAAAA-3 '; обратный, 5'-AGGCCAGGATGTTCTCCTTT- 3 ', и β-актин был использован в качестве внутреннего контроля (праймеры: вперед, 5'-AAGACGTACTCAGGCCATGTCC-3'; обратный, 5'-GACCCAAATGTCGCAGTCAG-3 ') [13]. Относительное выражение HMGB1
уровни мРНК определяли, используя относительный метод количественной оценки и 2 -ΔΔCt анализ.

Статистический анализ
<р> Статистика анализы проводились с использованием IBM SPSS Statistics 19.0 программного обеспечения (IBM). Обычно распределенные непрерывные переменные были выражены как среднее ± стандартное отклонение, в то время как аномально распределенные непрерывные переменные были выражены как медианы и дальности полета. χ Пирсона 2-тест был использован для проверки отличия категориальных переменных. Отличие нормально распределенных непрерывных переменных между двумя группами анализировали с помощью Стьюдента T
-test, в то время как тест Манна-Уитни U использовали для сравнения аномально распределенных непрерывных переменных. Многофакторный Кокс пропорционального риска регрессионной модели была применена для оценки влияния отдельных SNP и характеристик пациентов ОС или RFS. Отношения риска (ч) и 95% доверительный интервал (ДИ) были оценены с учетом возраста, пола, классификации Lauren, дифференциация, стадии TNM и ACT. Кривые Каплана-Мейера и лог-ранговый тесты были использованы для оценки влияния отдельных полиморфизмов на времени выживания. Статистика значимость была установлена ​​на уровне 0,05 и все значения P
в этом исследовании были двусторонними.

Результаты

Распределение характеристик пациентов и прогноз анализ <бр> <р> характеристики GC пациентов были обобщены в таблице S2. В связи с поздним дату окончания приема пациента для обучающей выборки, средний срок наблюдения был короче в обучающем наборе (46 месяцев, в пределах от 6 до 80 месяцев), чем в независимой проверке обоснованности (72 месяцев, начиная от от 6 до 89 месяцев). Таким образом, по сравнению с пациентами в независимой проверке обоснованности, те, в обучающем наборе имели более низкие показатели рецидивов (58,4% против
. 66,8%, P
= 0,005) и смерти (41,4% против
. 55,8%, P
= 0,001). Там не было никаких различий между обучающей выборки и проверки, установленной с точки зрения возраста, сайт опухоли, классификация Лорен, TNM стадия, дифференцировка и ACT ( P
значение в диапазоне от 0,082 до 0,898). В последнем наблюдения, 641 пациентов (423 и 218 в обучении и проверке набора, соответственно) разработали и рецидивы 482 умер (300 и 182 в обучении и проверке набора, соответственно). Многофакторный Кокс регрессионный анализ показал, что существуют значительные выше смерти и риск рецидива у пациентов с диффузной типа, плохой дифференциации и опухоли стадии III и IV по сравнению с теми пациентами с кишечной типа, а /умеренной дифференцировки и стадия опухоли I и II среди обучающей выборки, набор проверки и совокупный анализ. Кроме того, на основе платины ACT после операции показали значительное защитное действие на обоих ОС и RFS пациентов GC (S3 Table).

Ассоциация HMGB1
ОНП с клиническим исходом у пациентов GC

Мы оценили ассоциацию HMGB1
SNP генотипов с GC клиническим исходом с использованием многомерного Cox регрессионного анализа с учетом возраста, пола, опухоли, Лорен классификации, дифференциации, стадии TNM и ACT (как показано в таблице 1). Результаты показали, что тег SNP rs1045411 был в значительной степени связано с ОС больных ГХ в обучающем наборе. По сравнению с пациентами с генотипом GG, те, с одним из вариантов (аллелей AG и генотипов АА) имели значительно более низкий риск смерти (HR = 0,77, 95% ДИ: 0.60-0.97, P
= 0,032). Это значительное открытие было подтверждено в независимой проверке обоснованности и объединенного анализа, с ГКР от 0,80 (95% ДИ: 0.62-0.99; P
= 0,046) и 0,78 (95% ДИ: 0.55-0.98; P
= 0,043), соответственно. Анализ Каплана-Мейера также обеспечили сильную ассоциацию с ОС. Пациенты, несущие AG /GG генотипов rs1045411 имели лучшую ОС, чем те, с GG генотипа в тренировочном наборе ( P
= 0,024, рис 1А), набор проверки ( P
= 0,017, рис 1В ) и объединенный анализ ( P
= 0,001, рис 1C).

Стратифицированная анализ ассоциации rs1045411 с ОС по переменные хоста
<р> Мы провели слоистые анализы для оценки ассоциаций между генотипами rs1045411 и OS пациентов GC по возрасту, классификации Lauren, дифференциация, стадии TNM и ACT. Значительные защитные эффекты, предоставляемые rs1045411 был более заметным в неблагоприятных подгрупп с диапазоном HR от 0,39 до 0,69 (рис 2А). Для получения дополнительной информации, значительное снизился риск смерти, связанный с вариантом содержащих генотипов (AG /AA) от rs1045411 наблюдалась у пациентов пожилого возраста (HR = 0,69, 95% ДИ: 0.48-0.99), диффузного типа (HR = 0,67, 95% ДИ: 0.47-0.95), плохая дифференциация (HR = 0,66, 95% ДИ: 0.45-0.95), клиническая стадия III и IV (HR = 0,58, 95% ДИ: 0.37-0.93) и без ACT (HR = 0,39, 95 % ДИ: 0.20-0.76). Кроме того, настоящий стратифицированной анализ показал аналогичную тенденцию к RFS с диапазоном HR от 0,44 до 0,79 (фиг.2В). Результаты показали, что генотипы AG /А.А. rs1045411 присвоил более благоприятный прогноз в неблагоприятных группах.

Совместный эффект между rs1045411 и классификации Lauren, дифференциация, стадии или ACT на OS

Предыдущие исследования показано, что оба генетические вариации и клинические характеристики взаимодействуют, чтобы играть решающую роль в прогрессии GC [17]; и что там, где взаимодействие действительно существуют, эффекты клинических элементов на опухолевой прогрессии будет изменен генотипов. Таким образом, совместный анализ был проведен для оценки потенциального модулирующего эффекта rs1045411 в этих клинических характеристик (классификация Lauren, дифференциация, стадии и ACT), представляющий состояние прогрессии опухоли на OS пациентов GC. Как показано в таблице 2, наблюдалось значительное взаимодействие между генотипами rs1045411 и классификации Lauren, дифференциация, стадии или ACT (все P
<суб> взаимодействие &л; 0,001). По сравнению с частными лицами, несущих генотип AG /AA и кишечного типа, те, с GG генотипом и диффузного типа, имели значительно повышенный риск смерти (HR = 2,09, 95% ДИ: 1.42-3.08, P
&л; 0,001). Аналогичные результаты были также обнаружены у пациентов, несущих генотип GG с плохой дифференциации (HR = 2,48, 95% ДИ: 1.70-3.62, P
&л; 0,001), у больных с генотипом GG стадии III /IV ( HR = 2,99, 95% ДИ: 2.04-4.38, P
&л; 0,001), а также у пациентов, несущих генотип GG с ACT (HR = 4,49, 95% ДИ: 2.70-7.45, P
&л;. 0,001) по сравнению с соответствующей контрольной группой

Функциональные эффекты rs1045411 на экспрессию генов
<р> анализ биоинформатики (http://www.microrna.org/microrna/home. делать) выявило тесную близость тег SNP rs1045411 к предсказанной микроРНК сайты связывания (HSA-микроРНК-505) в 3'-нетранслируемой области (3'UTR) из гена HMGB1
[22] (рис 3A ). Сначала мы подтвердили экспрессию микроРНК-505 в SGC-7901 и линии НЕК-293Т клеток, и обнаружили, что микроРНК-505 имел относительно высокий уровень экспрессии (рис 3B). Для того, чтобы исследовать вопрос о том, что генотипы тег SNP rs1045411 в 3'UTR из ген HMGB1
может изменить экспрессию генов, две клеточные линии, трансфицированные люциферазы плазмид, содержащих либо дикий (GG) или вариант (AA) генотип SNP rs1045411 (рис 3C). Результаты показали, что SNP rs1045411 значительно показал влияние на нормализованном активность люциферазы в трансфецированных клетках обоих. По сравнению с клетками трансфицированных конструкций, несущих дикого генотипа (GG) из SNP rs1045411, клеток, трансфицированных конструкций, несущих вариант генотипа (АА) наблюдалось значительное уменьшилась активность люциферазы. Эффект анти-MIR-505 на активность люциферазы репортера плазмид также оценивали в исследовании. Результаты показали, что активность люциферазы двух UTR конструкций (п-MIR-G и п-MIR-А) была значительно увеличена с помощью анти-MIR-505 в обеих клеточных линиях с ликвидированных различиями активности люциферазы между двумя репортерных плазмид. Кроме того, мы использовали количественный RT-PCR, чтобы исследовать влияние SNP rs1045411 генотипов на экспрессию мРНК HMGB1 в 60 тканях GC (30 с GG генотипом и 30 с генотипами AG /AA) из комплекта проверки. Как показано на рис 3D, мы обнаружили, что уровень экспрессии мРНК HMGB1 была значительно выше у носителей с диким (GG) генотип rs1056560, чем те, кто нес вариант (AG /AA) генотипов (1,04 ± 0,50 против
. 0,79 ± 0,37, P
= 0,004).

Обсуждение
<р> В настоящем исследовании мы исследовали ассоциацию генетических полиморфизмов в HMGB1
гена с прогноз больных ГХ двухступенчатым анализа обучения и проверки наборов. Мы показали, что генотипы AG /AA тега SNP rs1045411 в HMGB1
3'-UTR значительно связаны с лучшей ОС в наборе 704 пациентов GC по сравнению с GG генотипов. Это значимая связь была подтверждена в независимом наборе проверки 326 пациентов GC, а также анализе всех пациентов GC 1030. Функциональный анализ показал, что SNP rs1045411 генотип оказали значительное влияние на экспрессию мРНК HMGB1
в GC тканях, а также две линии опухолевых клеток. Кроме того, благоприятный прогностический эффект rs1045411 был более очевидным в неблагоприятных подгруппах пациентов GC. Кроме того, совместный анализ показал значительное взаимодействие генов-клинических элементов. Насколько нам известно, это исследование впервые сообщили о связи между HMGB1 полиморфизма генов
и GC прогнозом. После завершения проверки, HMGB1
SNP rs1045411 может быть использован в качестве прогностического маркера в сочетании с традиционными клиническими факторами прогноза для принятия решений ГК индивидуального лечения.
<Р> Растущие доказательства предполагают, что повышенная HMGB1 является связанный с метастазами опухоли и неблагоприятным прогнозом [16, 23-26], что делает HMGB1 привлекательный биомаркеров опухоли. Было высказано предположение, что HMGB1 функционирует в качестве потенциально онкогенного белка, чтобы способствовать прогрессу опухоли [15, 27, 28], а его избыточная экспрессия в раковых клетках, влияет на противораковый Т-клеточный ответ через активацию внутриклеточной сигнализации [15, 29]. В самом деле, повышенная экспрессия HMGB1 был обнаружен у пациентов с ГК и другими видами рака [30-32], и его экспрессия тесно связана с онкогенеза [33], инвазия опухоли и метастазирование [29]. Кроме того, Чанг и др [34] показали, что сывороточные уровни HMGB1 были также в значительной степени связано с опухолевой инвазии, метастазировании, роста, а также плохим прогнозом. В совокупности эти данные подтверждают важную роль в трансформации HMGB1 рака, роста опухоли и инвазии.
<Р> Несмотря на обширные исследования экспрессии HMGB1 в тканях и его соответствующей серологического активности на эволюцию рака, есть несколько исследований, посвященных эффект полиморфизмов в HMGB1
гена на прогноз рака или реакции на лечение до сих пор. В группе китайских пациентов с раком легких, двух полиморфизмов, rs141215 и rs2249825, были связаны с платиновыми на основе ответов химиотерапии [35]. Кроме того, у пациентов с оральным плоскоклеточный рак, другой HMGB1
полиморфизм на rs3742305 SNP был связан с опухолевой прогрессии и безрецидивной выживаемости [36]. Тем не менее, мы исключили rs3742305 SNP из настоящего исследования, так как она находится в сильном неравновесном сцеплении с rs1045411 SNP. В настоящем исследовании мы обнаружили, что вариант, содержащий (AG /AA) генотипы тегов SNP rs1045411 были в значительной степени связано с лучшей ОС у пациентов с GC, поддерживая важную роль в эволюции HMGB1 GC.
<Р> Так как SNP rs1045411 расположена в 3'UTR области ген HMGB1
, он может влиять на экспрессию гена HMGB1
у больных GC. На сегодняшний день, однако, нет никаких исследований для оценки функций rs1045411 SNP. Мы обнаружили, что rs1045411 находится в непосредственной близости к предсказанному сайта микроРНК связывания (HAS-микроРНК-505) [22], предполагая, что такое изменение в этой позиции может влиять на стабильность мРНК и активности связывания микроРНК, модулируя экспрессию генов [ ,,,0],37]. Действительно, наши люциферазы анализы подтвердили значительное влияние rs1045411 на пост-транскрипционной регуляции гена HMGB1
в микроРНК-505-зависимым образом. Кроме того, путем изучения уровня экспрессии HMGB1 мРНК в 60 GC образцов ткани с генотипом данных SNP rs1045411, мы обнаружили, что ткани, несущие вариант, содержащий (AG /AA) генотипы имели значительно сниженные уровни экспрессии мРНК HMGB1 по сравнению с теми, с гомозиготной дикой природе (GG ) генотип. Взятые вместе, наши экспериментальные данные указывают на то, что благоприятный прогностический эффект предоставляемое вариант, содержащий (AG /AA) генотипы rs1045411 был тесно связан с аномальным выражение HMGB1
.
<Р> Наше текущее исследование показало, что существенные или пограничные защитные эффекты варианта содержащих (AG /AA) генотипы SNP rs1045411 ОС и RFS пациентов GC были найдены почти полностью в неблагоприятный (но не в благоприятных) страты пациентов. Это согласуется с предыдущими исследованиями, показавшими, что ОНП влияют на выживание рака более заметным в конкретных пациентов подгруппы. Например, Ван и др
[38] сообщили, что ВВЦУ
rs2294008 значительно связан с выживанием исходы среди диффузного типа рака желудка, но не кишечного типа рака желудка. Pu и др
[39] также показали, что микроРНК связанные генетические варианты более удивительно связаны с немелкоклеточного рака выживаемость клеток легких у пациентов на ранних стадиях развития. Мы также наблюдали значительный эффект взаимодействия между rs1045411 генотипов и клинических элементов, таких как Lauren классификации, дифференциации, клинической стадии и адъювантной химиотерапии в модуляции прогноз GC. Эти значимые корреляции предположили, что SNP rs1045411 могут иметь потенциальные роли модулирующих в этих клинических характеристик, представляющих прогрессии опухоли. Тем не менее, основные механизмы остаются дальнейшего изучения в будущем.

Настоящее исследование имеет несколько различных особенностей. Во-первых, включались больные в основном приходят из провинции Шэньси и прилегающих к нему районах, который подходит для проведения исследований на основе населения из-за географической стабильности с низким уровнем мобильности. Во-вторых, относительная большая численность населения, обучающихся в данном исследовании позволило нам провести этап стратифицированной анализ в обучении и проверки наборов, которые ограничивают сопутствующих факторов опухоли и лечения гетерогенности. Одним из основных ограничений этого исследования состоит в том, что относительная небольшая популяция в наборе проверки может привести к ложным негативов. Кроме того, поскольку наше исследование было ограничено китайцами, мы можем не исключает проблему Обобщаемость. Будущие исследования в больших популяциях и других этники гарантированы.
<Р> В целом, в первом исследовании наблюдения эффекта гена HMGB1
полиморфизмы на GC прогнозе в китайской популяции, наши данные убедительно свидетельствуют, что тег SNP rs1045411 в ген HMGB1
оказывает существенное влияние на клинический исход пациентов GC, особенно для пациентов с продвинутой стадии или другого агрессивного состояния. клинико-патологическими Настоящее исследование имеет потенциальное клиническое значение, помогая совершенствовать терапевтические решения в лечении GC.

Поддержка Информация
S1 Таблица. Информация и результаты генотипирования HMGB1 ОНП
DOI: 10.1371. /Journal.pone.0154378.s001
(DOC)
S2 Таблица. Отдельные демографические и клинические характеристики рака желудка популяции пациентов
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0154378.s002
(DOC)
S3 Таблица. Распределение характеристик пациентов и анализ прогноз в наборе кадров и множество Validation
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0154378.s003
(DOC)

• PLoS ONE: Опухоль Содержание Chart-Assisted HER2 /CEP17 цифровой ПЦР анализ рака желудка биоптатах
• PLoS ONE: прогностическое значение молекулярного анализа перитонеальной жидкости для пациентов с раком желудка…