Indukcija kromosoma nestabilnosti i raka želuca mijenjanjem ekspresije mitotičkih kontrolnim gena kod miševa izloženih Areca-nut

indukcije kromosoma nestabilnosti i raka želuca mijenjanjem ekspresije mitotičkih kontrolnim gena kod miševa izloženih Areca-maticom pregled Sažetak pregled Pozadina
Postoje jake indicije za uzročno-posljedičnu vezu između potrošnje Areca-matice i raka. U Meghalaya, Indija, raznolikost Areca-orah se koristi kao sirovina i neprerađenom obliku čiji kemijski sastav i farmakološko djelovanje su izvijestili. Ipak, malo toga znamo o početnoj put su uključeni u Areca-orah povezane karcinogeneze jer je teško procijeniti njegove učinke na genetskim promjenama bez uplitanja drugih miješanja čimbenika. Dakle, ova studija je provedena na miševima kako bi se provjerila sposobnost sirove Areca-matice (RAN) da uzrokuje rak i praćenja ekspresije određenih gena uključenih u karcinogeneze. Ova studija nije bila namijenjena izolirati aktivne sastojke iz RAN i gledati svoje djelovanje.
Metode pregled tri skupine miševa (n = 25 u svakoj) su snimljene, a upotrebljavaju se u različitim vremenskim točkama za različite eksperimentalne analize , Ostale tri skupine miševa (n = 15 u svakoj) smatrani su za indukcijsko tumor studija. U svakom setu, dvije grupe su davani ran-ekstrakt ad libitum
u vodi za piće, sa ili bez vapna. Ekspresija određenih gena je određen konvencionalnom RT-PCR i imunoblotingom. Miševi su dobili cijeli ran-ekstrakta sa i bez vapna u cilju da oponašaju stil prehranu ljudi iz RAN. | Rezultati
histološkog preparata od tkivu želuca otkrila koja je tekla induciranog raka želuca. Postupno povećanje u učestalosti rani anafaza i ancuploidnih stanica uočeno je u stanicama koštane srži s većim prirastom sljedećim RAN + vapno administeration. Razine p53, Bax, Securin pregled i p65 pregled u jednjaka i želuca stanice su povišena tijekom prvih dana izlaganja ran a one različitih mitoze kontrolnim proteinima su regulirani. Apoptoze stanična smrt je otkrivena u ne-kancerogene želuca stanice, ali ne i kod tumorskih stanica koji su pokazali izražajnost Bax Netlogu i odsutnosti PARP Netlogu. Pregled Zaključak
Ova studija sugerira (a) RAN izaziva rak želuca, međutim, prisutnost vapna promovira veću transformaciju stanica i na taj način je razvio rak ranije, (b) perturbacije u komponentama segregaciju kromosoma strojeva mogu biti uključeni u početnom procesu karcinogenosti i (c) važnosti prijevremene anafaza kao screening marker za identifikaciju mitoze nedostataka na kontrolnoj točki tijekom ranih dana.
ključne riječi
kromosoma nestabilnost mitoze kontrolnu točku geni Securin pregled Apoptoza Pozadina pregled jednjaka karcinom pločastih stanica (ESCC) i želučani karcinom su najčešći tumori u Indiji, s najvećom incidencija ESCC se u sjeveroistočnim država Indije [1]. Postoje snažne indicije za uzročno-posljedičnu vezu između Areca-orah ili Quid žvakanje navike i raka. Nekoliko studija u različitih vrsta životinja pokazala su pozitivan indukcija tumora u oba cilja (obraz-torbica, jednjaka i želuca) i ne-ciljne (pluća i jetre) tkiva kada arecoline (ARC) ili Areca-matica ekstrakt primijenjuje na različite načine takvih kao oralna intubacija [2], pomiješana s hranom [3], a obraz-torbica primjene [4]. Dakle, čini se da je potrebna metabolička aktivacija alkaloida za konačnu pretvorbu u konačan karcinogeni, koja je pod snažnim utjecajem fiziološkim uvjetima i prisutnost određenih faktora [5]. Izvješća su pokazala stvaranje reaktivnih vrsta kisika (ROS) iz Areca-matica sastojaka u alkalnim uvjetima [6, 7]. Zbog prisutnosti vapna u betel-funti pripravka, slina Areca-matica 'chewers tipično mijenja s neutralnog do alkalnim uvjetima koji bi mogao biti idealno za generiranje ROS [7]. Nair i sur. [6] Također su primijetili da, osim ARC, auto-oksidacija Areca-matica polifenola mogao generirati H 2O 2 i superoksidnih radikala u lužnatom pH.
U državi Meghalaya, Indija, razne Areca orah, lokalno nazvan 'Kwai ", koristi se kao nezrele i neprerađenom sirovom obliku koji ima veći sadržaj alkaloida, polifenoli i tanini u odnosu na suhom obliku. [8] Betel-quid koristi u Meghalaya sadrži sirovu Areca-maticu (RAN), vapno tijesto i mali dio betel-lista bez duhana i drugih sastojaka. Ovdje ljudi progutati cijelu funti nakon žvakanja, umjesto pljuvanja to koji bi mogao biti važan faktor za ESCC i raka želuca. Nedavno, 40% uzoraka raka jednjaka prikupljeni od bolesnika Meghalaye države imaju samo RAN-žvakanje navike pokazao brisanje mikrosatelitni markera D9S1748 i D9S1749, koji se nalazi u neposrednoj blizini eksona 1B o lokusu CDKN2A /ARF pregled gena na 9p21. Promotor Hipermetilacija od lokusu CDKN2A pregled gena bila je značajno viša u uzorcima s naviku Ran-žvakanja samo od onih koji imaju naviku korištenja i vodio i duhana [9]. Do sada, ne znamo mnogo o početnim način uključuje u betel-nut povezane karcinogeneze u jednjaka i želuca. Također je teško procijeniti učinke čisto i pretežno Areca-orah-inducirana genetičkih promjena u ljudskom bez ometanja od strane drugih miješanja faktora kao što duhana za žvakanje ili pušenja, konzumiranja alkohola, raznih vrsta ne-vegeterian hrane itd Osim toga, prisutnost vapno čini alkalne uvjete koji nije idealan za in vitro
stanične kulture, a time i učinak Areca-matice ne mogu biti testirane u sustavima sa staničnom kulturom. S obzirom na to, ovo istraživanje je provedeno u miševima kako bi se provjerila sposobnost ran-ekstrakta sa ili bez vapna, za indukciju raka i istovremeno evaluaciju ekspresije uzorka određenih gena koji imaju važnu ulogu u inicijalnom procesu karcinogeneze. pregled kemijski sastav i farmakološko djelovanje Areca-matice su izvijestili i pregledao nekoliko radnika [10, 11]. Nekoliko studija na životinjama su potvrdila da Areca-matica proizvodi i betel specifični nitrozamini, imaju sposobnost da inducira neoplastične promjene u eksperimentalnih životinja [11]. Znatan dokazi pokazuju da Areca-orah-alkaloidi, pretežno arecoline (ARC) su glavni čimbenici u BN-toksičnosti [11]. Pokazano je da luk može izazvati DNK oštećenja u stanicama miša koštane srži [12] i takve DNA štete može se smanjiti kada ARC upravlja s N-acetil-L-cistein [13]. Dakle, to je vrijedno spomenuti da ova studija nije bila namijenjena izolirati aktivne sastojke iz RAN i gledati svoje djelovanje. Cilj istraživanja bio je utvrditi početno put su uključeni u Ran povezan karcinogeneze kod miševa te stoga miševi su dobili cijeli ran-izvadak sa i bez vapna u cilju da oponašaju navike potrošnje od čovjeka.
Nekoliko gena, kao i p53 , p65, Securin pregled i mnogi drugi, poznato je da se najčešće prekomjerno izražen tijekom karcinogeneze [14-16]. Nadalje, genetska nestabilnost je također povezan s kromosomom nestabilnost (CIN), što dovodi do aneuploidije, znak za rak. Kao aneuploidija mogu olakšati tumorigenesis preko gubitka funkcije tumorskog supresorskog gena. Uočeno je da je djelomični gubitak kontrole nadzorne točke diobenog vodi CIN ljudskih stanica raka [17, 18]. Dakle, u ovom istraživanju, procijenili smo ekspresije p53, p65, Securin Netlogu i nekoliko mitoze i montaže kontrolne točke vretena gena u različitim vremenskim točkama. Uočili smo da RAN mogu izazvati rak želuca tako perturbing komponente segregaciju kromosoma strojeva. pregled metoda
Priprema ekstrakata
Nakon granatiranja vlaknastih kaputi od neobrađenog sirovog i nezrele Areca-maticu (RAN), 100 g Ran je stavljeno i suspendira u 125 ml destilirane vode i dobro se promiješa, čime se dobije glatku pastu za dobivanje vodenog ekstrakta iz RAN. Nakon 24 h, pasta se miješa kroz 3 sata na 37 ° C i vodeni ekstrakt je sakupljen centrifugiranjem. Ovaj postupak ekstrakcije je ponovljen još jednom dodavanjem 125 ml vode u ostatak. Oba ekstrakti se spoje, predstavljaju 100 g RAN u 250 ml destilirane vode, filtrira i zamrznuti na - 80 ° C. Filtrat se liofilizira u Secfroid Lyolab bii Lyophilizer (Danska). Liofilizirani masa je držana na 4 ° C do upotrebe. Ekstrakt sadržavala 0,9 g /100 g vode-na izvlačenje materijala. Pregled Životinje održavanja i liječenja
Swiss albino miševa (25-30 g), 2-3 mjeseca stari su održavane u laboratoriju u kavezima zajednice u sobi s kontrolirana temperatura (20 ± 2 ° C), a kontrolirani rasvjetu (12 h svjetlo, 12 h mrak). Standardna dijeta miš (NMC ulje Mills Ltd, Pune, India) i voda ad libitum pregled su korišteni u svim eksperimentima. Pokusi su provedeni u skladu s institucionalnim smjernicama i odobren od strane naših "Institucionalni standardima za zbrinjavanje životinja i korištenje" ploče.
U set-1, tri skupine miševa (n = 25 u svakoj) preneseni, koji je korišten pri različitim vremenske točke za različite eksperimentalne analize. U Skupini-2, tri skupine miševa (n = 15 u svakoj) smatrani su za indukcijsko tumor studija. Slika 1 daje shematski pregled o cjelokupnom eksperimentalnom protokolu koji se razmatra u ovom istraživanju. U svakoj skupini, jedna je skupina bila tretirana s jednostavnim pitke vode smatra se ne liječi, dok su dvije skupine daju RAN ekstrakt ad libitum pregled u vodi za piće sa ili bez vapna (pH 9,8). Procijenjeno je da je svaki miš konzumira 1 mg ekstrakta dnevno. Kao oralna administeration je nastavljeno 60 dana, nakon čega je doza povećana od 1 mg do 2 mg po danu do 120 dana. Isto tako, svakih 60 dana kasnije kada je doza veća je za 1 mg po potrošnji dan. Slika 1 prikazuje dijagram toka eksperimentalnog dizajna za analizu sirovog Areca-maticom posredovane Karcinogeneza na miševima. Randomizacije sirovo Areca-matica; d- dana. pregled Priprema metafazi i bodovanje kromosomskih aberacija
Za pripremu metafaze, stanice koštane srži (BMC) prikupljeni su iz dva miševa po točku iz neobrađenih, 15 i 30 dana tretirane skupine i tri miša po mjestu za odmor. U tretiranim skupinama, BMC su sakupljene nakon 15, 30, 60, 120 i 180 dana tretmana. BMC su također prikupljeni iz dvaju miševa koji imaju tumor želuca. BMC su sakupljeni nakon 2 kolhicin tretmana h (15 mg /kg). Životinje su ubijeni cervikalnom dislokacijom. Femuri diseciran i BMC bili ispiru injektiranjem 2 ml 0.075 M KCl prethodno ugrijane na 37 ° C. Stanice su tretirane u hipotoničnoj otopini tijekom 15 minuta, te fiksiran u octene kiseline i metanola (1: 3). Stakalca su pripravljeni metodom sušenja plamena, obojena s 5% Giemsa za 5 minuta i stavljeni na sintetičkoj podlozi. Slike metafazi namaza su uzeti pod Zeiss Axioskop mikroskopom (Njemačka).
Za kromosomske studije, pločice su kodirane nasumce i najmanje 100 i šire Metaphase ploče su odabrani za studije iz svakog miša. Izvršili smo broj kromosoma na metafaze širenja. Kromosomske aberacije su označeni kao izokromatidni pauze i kromatida pauze. Vidi proširenom Eksperimentalne procedure za detalje u dodatne datoteke 1. Dopunske informacije
imunoblot pregled stanica iz koštane srži, jednjaka (grebanje unutarnji sloj) i želuca (grebanje unutarnji dio) su isprane dva puta s PBS (fosfatom puferirana slana otopina), pa se liziraju u puferu radioimunološkim-taloženje (0,1% SDS-a, 2 mM EDTA, 1% NP-40, 1% natrijevog deoksiholata, 50 mM natrijevog fluorida i 100 u /ml aprotinina). Nakon 30 minuta inkubacije na ledu, stanični lizati su centrifugirani 15 min na 4 ° C, a količina proteina je određena pomoću testa bicinkroniničnoj kiselina proteina. Jednaku količinu proteina (40 ug) iz svakog uzorka je stavljeno u svaku jažicu; jednako opterećenje je dodatno potvrđena imuno s aktina antitijela. Uzorci su naneseni na Novex tris-glicin 4-20% gelu i elektroforeza je izvedena na NuPAGE sustav za elektroforezu (Invitrogen, USA). Proteini su prebačeni na poliviniliden difluorid (PVDF) membranu (Sigma) slijedećim standardnim protokolom. Membrane su obilježeni sa 1: 1000 razrjeđenje mišjeg monoklonskog protutijela protiv p53
(Pab 240, ab-26; Abcam, USA), Bax pregled (6A7, ab5714, Abcam, USA), Securin
(DCS-280; ab3305, Abcam, USA), β-aktin pregled (AC-15, ab6276, Abcam, USA) i zečjih poliklonskih protutijela na NF-κβ p65
(ab31481, bcam, USA). Mrlje su isprane 3 puta po 10 minuta svaki u TBST puferu pH 7,6 (1 M Tris Cl, 5 M NaCl i 0,05% Tween 20) i inkubiraju sa sekundarnim protutijelom (alkalnom fosfatazom konjugiranom sa anti-mišji IgG, ili alkalnom fosfatazom konjugiranom antirabbit IgG 1: 2000, Abcam, USA) tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Nakon opsežnog ispiranja, blot je uronjeno u otopini 4 ml supstrata od BCIP /NBT sistema (Bangalore Genei, Indija). Dovoljno obojenje se dobije u roku od 15 min. Svaki imunobloting je izveden u tri miševa po točki. Pregled Histopatološka procjena tkiva pregled želudac je sakupljen iz netretirane kontrole i iz dva ran + vapno u miševa tretiranih s tumorom. U drugom setu, želudac tkiva također prikupljeni iz liječi, kao i iz skupine koja se liječe od 300 dana sa Ran-ekstrakta sa i bez vapna. Tri miševi su nasumično su odabrane iz svake skupine. Ovi miševi nisu imali nikakvu obavijest o tumoru izvana. Uzorci tkiva (5-7 um) su obrađene za histološku podjelom kao i po standardnom protokolu [19] i obojeni s hematoksilinom i eozinom [20]. Sekcije su zatim promatra pod svjetlosnim mikroskopom i fotografirali (Carl Zeiss, Njemačka). Pregled, ekstrakcija RNA i konvencionalne RT-PCR analiza pregled Stanice su sakupljene grebanje unutarnji sloj jednjaka i želuca od netretirane kontrole, trčala i trčala + vapno tretira miš (tri miševa po točki). Stanice koštane srži se prikupe iz bedrene kosti miša. Ukupna RNA je izolirana pomoću Trizol a zatim pročisti uporabom RNeasy Mini Kit (Qiagen) prema uputama proizvođača. Reverzna transkripcija provedena je s 1 ug ukupne RNA iz svakog uzorka pomoću Quantiscript reverzne transkriptaze, Quantiscript RT-pufer i RT Primer pomiješan QuantiTect reverzna transkripcija kit (Qiagen GmbH, Hilden, Njemačka) prema naputku proizvođača. Pojačanje cDNA je provedena u 20 ul otopine koja sadrži 2 jal cDNA, 10 pmol par klica za Aurora A, Aurora B, Mad2, Bub1 i GAPDH (za sekvencijama, pogledajte dodatne datoteke 1: dodatne informacije), respektivno, a 10 ul RT qPCR Master mix (Qiagen GmbH, Hilden, Njemačka). PCR se sastojao od početne denaturacije na 94 ° C 5 min, potom 30 reakcijskim ciklusa (30 sekundi na 94 ° C, 30 sekundi na 60 ° C i 30 sekundi na 72 ° C), a konačni ciklus na 72 ° C 10 min. GAPDH je korišten kao unutarnje kontrole. Sve PCR produkti su razdvojeni elektroforezom na agaroznom gelu etidij bromid-obojena i vizualizirane s UV svjetlošću, pregled: Analiza protočnom citometrijom stanica pregled mišjih stanica koštane srži i stanice prikupi grebanje unutarnji sloj jednjaka i želuca oba netretirani i tretirani tijekom 260 dana s RAN sa ili bez vapno su fiksirane s 70% etanolom. Želudac tumorske stanice su također prikupljeni i fiksne. Fiksirane stanice su isprane u PBS i resuspendirane u 500 ul otopine propidij jodid (50 ug /ml propidijevog jodida, 0,2 mg /ml RNase) kroz 1 sat na sobnoj temperaturi u mraku. 10.000 stanica su dobiveni za svaki uzorak i analiziran s FACS Calibur (Becton Dickinson). CellQuest Pro software je upotrijebljen za brojčano staničnog ciklusa pretinaca za procjenu postotka stanica rasprostranjena u različitim fazama staničnog ciklusa. Ispitivanja markiranja pregled Annexin V pregled apoptičkoj smrti stanice je određen primjenom annexinV-fluorescein izotiocijanat postupak u tumorskim stanicama želuca i također u unutarnjem sloju stanica u želucu i jednjaku liječi i ran sa i bez vapna tretiranog miša nakon 260 dana neprekidnog administeration. Stanični talog je ponovno suspendiran u PBS-u. Stanice su obojeni propidiumjodidom i Annexin-V-FITC upotrebom BD PharmingenTM aneksina V: FITC Detection Kit apoptoze (BD-Pharmingen bioznanosti, San Diego, CA), kao i po uputama proizvođača. Ukratko, nakon prikupljanja i ispiranje dva puta s PBS, stanice su resuspendirane u veznom puferu (500 ul). FITC-Annexin-V (5 ul) se doda u stanice i zatim se doda 5 ul PI prema protokolu. Uzorci su zatim inkubirani 15 minuta u mraku na sobnoj temperaturi i podvrgnuta protočnom citometrijom procjenu. Pregled Statistička analiza pregled Vrijednosti su izražene kao srednja vrijednost ± SEM i srednja vrijednost ± SEM za kontrolne i eksperimentalne uzorke i statističke analize su izvedeni Studentovim t testom s GraphPad Prism softverom 5.1. Vrijednosti se smatraju statistički signifikantne, ako je p vrijednost je 0,05 ili manji. Pregled Rezultati
Opći opažanja
od petnaest miševa dva miša rak želuca, nakon 220 i 256 dana nakon hranjenja RAN ekstrakt vapnom (Slika 2A a i b). Ne tumora razvijen je u miša bilo neliječene ili upravlja sa samo RAN. Histološka poglavlje jasno razlikovati između normalnog (slika 2a c) i tumorskom želucu (Slika 2A d-F). Međutim, histološki priprema tkivu želuca također napravljen od tri očito normalnih traže miševa nasumce odabranih iz ove grupe, nakon 300 dana hranjenja Ran ekstrahira sa i bez vapna. I RAN sa i bez vapna pokazala svoju sposobnost da inducira raka u želucu. Dva od tri miševa tretiranih samo s RAN pokazala prekancerozne fazu (displazije), dok su sva tri miševi tretirani s RAN + vapna pokazao karcinom (slika 2b). Slika 2 disecira miša i Histopatologija i zdravih i tumorskih tkiva želuca nakon tretmana s RAN sa i bez vapna. A. secirao miša s (a) normalan želudac i (b) tumorskog želudac označeno strelicom. Patohistološki od normalnog (c) i tumora želuca (d, e i f) da inducirana ran ekstrakta s vapnom. Strelice pokazuju ulcerated neoplazmi u (d) i tumora gigantskih stanica u (E i F). Uvećanje indiciran bilo 10X ili 40X. B. Patohistološki normalne i tumorske želucu miševima nakon trčala i trčala + tretman vapna za 300 dana. U svim pločama, "Normal" označava miša bez tumora ", Displazija" ukazuje na miševe s pretkarcinomsku tkivu želuca. "Karcinom" ukazuje na miševe s tumorskom želudac. Displazija pokazuje anisokaryosis (varijacije u veličini jezgara) i anisocytosis (varijacije u veličini stanica). Uvećanje indiciran ili 10x, 40x i 100x.
Studirao je na metafazi širi
bi se utvrdilo da li kontinuirana administeration ekstrakta Ran (od 15 do 180 dana), sa ili bez vapna ima ikakav učinak na kromosomima, proučavali smo metafazi namazi nakon 2 sata tretmana sa kolhicin, u uzorcima koštane srži. Podaci otkrila postupno povećanje mitoze figure s prerano odvojene sestrinskih kromatida (slika 3a i C), kako u trčala i trčala + vapna davati miša, u usporedbi s nitko u netretiranih miševa. Također je jasno iz studije koja je vodila + vapno davati miš koštane srži pokazala je statistički značajno veća učestalost takvog prijevremenog anafaza nego samo trčao daju (slika 3A). Nakon 180 dana neprekidnog administeration od RAN + vapno, 34,4% prijevremene anafaza u usporedbi s 18,4% (p = 0,002) u RAN primjenjuje miša BMC su vidjeli. Slika 3 kariotipizacijom genomske nestabilnosti u stanicama koštane srži miševa nakon izlaganja ekstrakta vodio s (RAN + L) ili bez vapna (RAN). (A) Postotak metafaza s preranom sestra-kromatida razdvajanja. Dva miševa u trenutku za netretiranog, 15 i 30 dana tretirane skupine i tri miševa po točku za ostatak. Najmanje 100 metafaza mrežu za svakog miša. (B) Normalno metafaza proširila iz stanica miša koštane srži. (C) Prijevremena sestra-kromatida odvajanje od miša izložena RAN. Nosači pokazuju sestra kromatide leži odvojeni u mitoze brojkama koje pokazuju fenotip. (D i E) metafazi namaz je pokazao 37 i 38 kromosoma, odnosno. (F, G i H) metafazi namaz je pokazao više od 60 kromosoma. (I) pokazali su više od 80 kromosoma. Pregled Računali smo broj kromosoma u metafazi širi shvatiti značaj rani anaphases u odnosu na stabilnost kromosoma. Netretiranih stabilno (2n = 40) kariotip (Slika 3B) i nisu pokazivali nikakve aneuploidna stanica. Mi je promatrati nisku učestalost ancuploidnih stanica (Slika 3D-I, Tablica 1) u RAN-upravljao, sa i bez vapna, za 120 dana, a uočeno je da je učestalost ancuploidnih stanica postupno povećava. Srednja frekvencija (13,8%) ancuploidnih stanica postignuto u oba želudac kod miševa s tumorima. Sveukupno, učestalost ancuploidnih stanica bio slijedeći ran + vapno administeration nego samo RAN (Tablica 1) .table jedan kromosom analiza stanica miša koštane srži nakon izlaganja RAN izvući sa ili bez vapna pregled Liječenje uzorak pregled
dana tretmana
Ukupno namaz postigao
kromosoma br.
aneuploidije
preranog sestra

37
38
39
40
41
42
> 60 pregled
% (prosječno)
kromatida odvajanje%
Neliječena
0 pregled 110 pregled 110
0
0 pregled 104 pregled 104 pregled, 0
0 pregled RAN pregled 120 pregled 105 pregled 1 pregled 1 pregled 103 pregled 1.9 pregled 17.5 pregled 120 pregled 2
1 pregled 2 pregled, 115 pregled 4.1 pregled 18.7 pregled 105 pregled 1 pregled 2 pregled, 102 pregled 2.8 (2.9) pregled, 18,3 (18,2)
RAN + vapno pregled 100 pregled 2 pregled, 2 pregled, 1 pregled 95 pregled 5.0 pregled 31,7 pregled 105 pregled 2 pregled, 2 pregled, 3
98 pregled 6.6 pregled 28.6 pregled 110 pregled 3
2 pregled, 1 pregled 103 pregled 1 pregled 6.4 (6.0) pregled, 28,3 (29,5)
p = 0.015a pregled ran pregled 180 pregled 101 pregled 1 pregled 2 pregled, 1 pregled 97 pregled 3.9
18,0
124
2
2. pregled 1 pregled 119
4.0
17,7 Netlogu 114 pregled 3
2 pregled, 1 pregled 108 pregled 5.3 (4.4)
19,4 (18.4)
ran + vapno pregled 112 pregled 3
3
3
103 pregled 8.0 pregled 32,6 pregled 105 pregled 2 pregled 2
1 pregled 98
1 pregled 1 pregled 6.6 pregled 34.9 pregled 110 pregled 4
2 pregled, 101 pregled 2 pregled, 1 pregled 8,2 (7,6)
35,6 (34,4) pregled, p = 0.002a
ran + vapno pregled 220 pregled 232 pregled 6
9
12 pregled 194
7 pregled 2 pregled, 2 pregled, 16.4 pregled 8.2 pregled (s uznapredovalim tumorom) pregled, 256 pregled 234 pregled 5
4
7 pregled 208 pregled 5
2 pregled, 3 pregled 11,1 (13,8)
7,1 (7,6)
statistički značajna u paru t-testa; dvosmjerni p vrijednost je prikazana.
kromosomske aberacije su označeni uglavnom kao kromatida pauze. Vrlo niska frekvencija izokromatidni pauze uočeno i nisu pronađeni razmjena aberacije. Učestalost kromatida pauze i neprirodnih metafazi se postupno povećava od 60 do 180 dana od ran-administeration sa ili bez vapna. Učestalost aberacija bio slijedeći ran + vapno administeration nego samo RAN. Učestalost aberacija bio u oba napredne tumora želuca kod miševa. (Za više detalja aberacije, pogledajte dodatne datoteke 1: dopunske informacije).
Smanjena ekspresija mitoze i kontrolne točke vretena gena u miševe ran liječenih
S obzirom na gore spomenute studije, ispitali smo ekspresiju AuroraA, AuroraB, MAD2 pregled i Bub1 pregled geni u koštanoj srži, jednjaka i želuca stanice onih miševa koji nisu bili liječeni ili primjenjuje ekstrakt trčao sa i bez vapna za 120, 180 i 260 dana. Konvencionalni Rezultati RT-PCR (Slika 4) pokazali su da stanice prikupljene iz jednjaka i želuca pokazala uglavnom smanjenu ekspresiju tih gena u odnosu na netretirane jedan i kao pod-izražavanja bila je dosljedna i značajna u RAN + vapna davani miševima. Međutim, izraz svih tih gena u BMC nije se mijenjala u svim značajnim način osim prekomjerna ekspresija Mad2 Netlogu i Bub1 pregled je navedeno u BMC miša prikupljene nakon 260 dana administeration. Slika 4 gornja ploča- Izražavanje mitoze na kontrolnoj točki gena u miša koštane srži (BM), jednjaka i želuca stanice nakon izlaganja s RAN izvući sa ili bez vapna za 120, 180 i 260 dana. Niži ploča- Kvantitativna Denzitometrijska analiza ekspresije profila mitoze kontrolnu točku geni mRNA razine u stanicama jednjaka i želuca nakon Pokazalo 260 dana izlaganja. Vrijednosti su srednja vrijednost ± SEM za tri nezavisna eksperimenta. Vrijednosti su normalizirane na odgovarajućim GAPDH vrijednosti. * P < 0,05; ** P < 0.01; *** P < 0.001. Značajno razlikuje u odnosu na negativne /pozitivne kontrole (kako je određeno u paru t-test). Pregled, analiza prekomjerna ekspresija gena kroz imunoblot pregled razinama p53, p65, Bax pregled i Securin pregled u BMC od miševa nakon administeration od RAN ekstrakt sa ili bez vapna, 60, 90 i 180 dana, kao i one jednjaka i želuca nakon 180 dana hranjenja su pregledane imunoblot. Razina tih proteina su također ispitani s stanica prikupljenih tkiva po kap iz netretiranih miševa. Rezultati pokazuju da je izražavanje p53, p65, Bax Netlogu i Securin pregled značajno povišene u svim tkivima u Ran upravlja miševa. Takvo pojašnjenje bila je značajno viša u RAN + vapna nego samo trčao upravlja miševa (Slika 5). Slika 5 gornja ploča- Reprezentativnu western blot otkrivanje P65, p53, securin, Bax i ß-aktin u mišje koštane srži (BM), jednjaka i želuca stanice nakon izlaganja s RAN izvući sa ili bez vapna. Za BM stanice su sakupljene nakon 60, 120 i 180 dana, dok je za jednjaka i želuca, stanice su skupljene tek nakon 180 dana izlaganja. P-aktin je korišten kao kontrola za punjenje. Donja ploča- Kvantitativna Denzitometrijska analiza razine proteina navedenih gena u koštanoj srži, jednjaka i želuca stanice nakon 180 dana od izlaganja je prikazano. Vrijednosti su srednja vrijednost ± SD za tri nezavisna eksperimenta. Vrijednosti su normalizirane na odgovarajuće p-aktin vrijednosti. * P < 0,05; ** P < 0,01 značajno različite u usporedbi s negativnim /pozitivnom kontrolom (kao što je određeno Spareni t-test).
Protočne citometrije studije o staničnom ciklusu i detekciju apoptičkih stanica dvostrukom bojenje i imunoblotingom
Analiza protočnom citometrijom sadržaja DNA u koštanoj srži , jednjaka i želuca stanice miša prikupljene nakon 260 dana RAN + vapno uprave (Slika 6a), pokazalo je da je došlo do porasta u fazi stanica G1 kako u koštanoj srži i jednjaka u odnosu na kontrolu. Međutim, u želucu, postotak stanica u sub-G1 fazi povećana, što se može pripisati zbog apoptotičke smrti stanica. Da biste to potvrdili, dual bojanje annexinV i PI je provedena. Podaci na slici 5b pokazuju povećanu pozitivno bojenje s Annexin-V u kvadrantu 2 i 3 u želucu stanica, ali ne i jednjaka stanicama RAN + vapna davani miševima. Slika 6 Analiza staničnog ciklusa i apoptoze u miševa tretiranih s RAN vapnenom (A) Analiza staničnog ciklusa nakon 260 dana izlaganja s RAN ekstrahira s vapnom u koštanoj srži, jednjaka i želuca stanicama miša i iz tumora želuca stanica. (B) Reprezentativni cytograms Aneksina V u odnosu na PI intenziteta fluorescencije koje je utvrdila protočnog analize u mišjim jednjaka i želuca stanica nakon 260 dana izlaganja s RAN s vapnom i od tumora želuca stanica. Unutar cytogram, kvadrant 1 i 2 predstavljaju rane i kasne apoptoze stanica, odnosno; kvadrant 3, živih stanica; kvadrant 4, mrtve stanice. (C) Western blot za apoptotičnih markera u normalnim (neobrađen) i tumora želuca stanice. β-aktin je korišten kao kontrola za punjenje.
Zanimljivo protočne citometrijske analize tumorskih stanica prikupljenih od miševa koji su razvili tumor u želucu, nakon 220 i 256 dana kontinuirane administeration Ran i vapna, pokazala značajno smanjenje u G1 stanicama s istodobna porast u sub-G1 stanica (Slika 6a). Dual bojenje ukazuje na to da pod-G1 stanice su uglavnom nekrotičnog mrtvih stanica (kvadrant 4) (Slika 6b). Znatno viša razina p53 Netlogu i Bax pregled proteini su kod tumora nego normalnim želučanih stanica (Slika 6c). Međutim, utvrđeno je PARP pregled biti odsutna u oba tumorskih stanica u želucu iako PARP pregled i njegove 29 kD odcijepi proizvoda bili su prisutni u normalnim uzorcima želučane (Slika 6c). Pregled Rasprava pregled sadašnjeg istraživanje je provedeno kako bi vidjeli ako ad libitum pregled administeration od RAN izvući sa ili bez vapna u vodi za piće može izazvati jednjaka ili želuca u miša, a ako se to dogodi, ono početno procesi su uključeni. U ovom istraživanju, miševi su dobili cijeli ran-izvadak sa i bez vapna da bi se oponašala stil prehranu ljudi iz RAN. Osim toga, doza također je povećana s vremena na vrijeme kao što se događa na čovjeka. Naši rezultati su pokazali da su i ran sa i bez vapna izazivaju rak želuca, iako, napominje se da je prisutnost vapna s RAN promovira veću transformaciju stanica i na taj način je razvio rak želuca ranije nego RAN sama. Čini se da se rak izazvan je u želucu zbog veće izloženosti njegova obloga morao RAN dok jednjaka sluznica je bio izložen samo kratko vrijeme pijenja Ran pomiješana s vodom.
Dokazano je ranije da alkalni pH je idealan za generiranje ROS po autoxidation od Areca-matica polifenola [6, 7]. Također je pokazano da se katehin frakcija ekstrakta Areca-matice aktivno stvara ROS pri lužnatom pH koji inducira oštećenje DNK u vitro pregled [21, 22]. Svi autori pročitali i odobrili konačnu rukopis. Pregled

• Iskazivanje LINE-1 endonukleaze varijanti u rak želuca: njegova povezanost s kliničkopatološkim parametrima
• Gastroprotektivni mehanizam Paederia foetida Linn. (Broćike) - popularna jestiva biljka koristi plemenske zajednice North-East India