PLOS ONE: β, β-Dimethylacrylshikonin Induz mitocôndrias Dependente apoptose através da via ERK em células gástricas Human Cancer SGC-7901

Abstract

β, β-Dimethylacrylshikonin, um dos componentes ativos nos extratos de raiz de Lithospermum erythrorhizon, posses antitumorais atividade. Neste estudo, foram discutidos os mecanismos moleculares de β, β-dimethylacrylshikonin na apoptose de células SGC-7901. β, β-Dimethylacrylshikonin reduziu a viabilidade celular de células SGC-7901 numa dose e modo dependente do tempo e da apoptose celular induzida. β, tratamento β-Dimethylacrylshikonin em células SGC-7901 regulada negativamente a expressão de XIAP, cIAP-2 e Bcl-2 e sobre-regulada a expressão de Bak e Bax e causou a perda de potencial de membrana mitocondrial e a libertação de citocromo c . Além disso, β, tratamento β-dimethylacrylshikonin conduziu à activação de caspases-9, 8 e 3, e a clivagem de poli (ADP-ribose) polimerase (PARP), que foi abolido por pré-tratamento com o inibidor da pan-caspase Z-VAD-FMK . β, β-Dimethylacrylshikonin induziu a fosforilação da quinase regulada por sinal extracelular (ERK) em células SGC-7901. U0126, um inibidor da MEK específica, bloqueou a activação de ERK pela β, β-dimethylacrylshikonin e β revogada, a apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin. Nossos resultados demonstraram que β, inibiu o crescimento de células SGC-7901 câncer gástrico através da indução de via de sinalização ERK, e forneceu uma pista para avaliação pré-clínica e clínica de β, β-dimethylacrylshikonin para terapia de câncer gástrico-dimethylacrylshikonin β.

citação: Shen XJ, Wang HB, Ma XQ, Chen JH (2012) β, β-Dimethylacrylshikonin Induz mitocôndrias Dependente apoptose através ERK Caminho no gástrico humano células cancerosas SGC-7901. PLoS ONE 7 (7): e41773. doi: 10.1371 /journal.pone.0041773

editor: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Estados Unidos da América

Recebido: 01 de março de 2012; Aceite: 25 de junho de 2012; Publicação: 27 de julho de 2012

Direitos de autor: © Shen et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiada por doações de Zhejiang Provincial Natural Science Foundation da China para X-QM (LY12H28005), ea fundação da ciência de Zhejiang chinês University Medical a H-BW (2011ZY05). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o cancro gástrico é um dos tumores malignos agressivos, embora com o desenvolvimento de radioterapia, quimioterapia e bioterapia, os efeitos secundários graves são inevitáveis ​​[1], por conseguinte, drogas anti-tumor mais eficazes com menos efeitos secundários para o tratamento de câncer gástrico são necessários.

Lithospermum erythrorhizon é uma importante erva chinesa. Ele tem alguns componentes ativos: Deoxyshikonin, Isobutyrylshikonin, Acetylshikonin, Isovalerylshikonin, β, β-Dimethylaerylshikonin (Fig. 1a) e shikonin [2]. Na medicina tradicional chinesa, exibe várias funções biológicas, incluindo anti-microbiano, anti-inflamatória, anti-tumoral, regulação imune e propriedades anti-HIV [3] - [6]. O efeito anti-tumoral de shikonin e seus derivados foram primeiro provado pela sua actividade contra o crescimento do tumor em sarcoma murino-180 [7]. Shikonin exposições efeito não apenas por matar células tumorais directamente, mas também por inibição da angiogénese tumoral [8]. Estudos revelaram que shikonin apoptose induzida em melanoma humano maligno, cancro da bexiga, cancro cervical, cancro do pulmão e cancro do fígado, e assim por diante [9] - [13]. No entanto, tem menos efeitos colaterais e efeitos mais proteção sobre as células normais humanos [14], [15]. Hsu PC et ai mostraram que shikonin levou à célula apoptose através de sobre-regulação de p27, p53, Bax e sub-regulação de Bcl-2 e Bcl-xL em carcinoma colorrectal humano COLO 205 células [16]. A invasão tumoral inibida por shikonin em algumas células cancerosas podem através da infra-regulação de NF-kB mediada por MMP-9 expressão [17]. Shikonin também induz apoptose via produção de ROS em carcinoma hepatocelular [12]. Singh et al F também descobriram que shikonin diminuição dos níveis de EGFR fosforilados, ERK e cinases de tirosina de proteína e um aumento dos níveis intracelulares de proteínas relacionadas com a apoptose, o que causou células de carcinoma epidermóide a sofrer apoptose [18].

evidência recente mostrou que β, β-dimethylacrylshikonin teve efeito anti-tumor significativo no carcinoma hepatocelular por activação da caspase-3 [19]. No entanto, tal efeito de β, β-dimethylacrylshikonin em células de cancro gástrico humano não foi relatada e os mecanismos moleculares ainda não são bem compreendidas. Assim, no presente estudo, vamos discutir efeito do β, β-dimethylacrylshikonin em células de câncer gástrico humano SGC-7901 e sua sinalização relacionada a compreender melhor o mecanismo de β, β-dimethylacrylshikonin sobre o câncer gástrico.

materiais e Métodos

materiais e reagentes

células SGC-7901 foram comprados da Academia chinesa de Ciências Cell Bank of Type Culture Collection (Xangai, China). β, β-Dimethylacrylshikonin foi comprado de Tokyo Chemical Industry (Tóquio, Japão). MTT e DAPI foram adquiridos a partir de Calbiochem (San Diego, CA, EUA). U0126 foi adquirido a Cell Signaling (Boston, MA, EUA). inibidor pan-caspase (Z-VAD-FMK) foi comprado de Beyotime Instituto de Biotecnologia (Xangai, China). Anticorpo para o citocromo c foi adquirido da Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, EUA). Os anticorpos contra ERK, fosfo-ERK, a Bcl-2, Bcl-XL, XIAP, cIAP-2, survivn, Bax, Bak, caspase-9, caspase-3 clivada, clivado da PARP e β-actina foram adquiridos a partir de Cell Signaling ( Boston, MA, EUA). Kit de FITC-anexina V de detecção da apoptose foi adquirido da Becton Dickinson (San Diego, CA, EUA).

Cultura de células e ensaio de proliferação de células

células SGC-7901 foram cultivadas em meio RPMI 1640 com 10% de soro fetal bovino (Hyclone, UT), e mantida a 37 ° C numa atmosfera humidificada de 5% de CO _{2. Em seguida, as células foram semeadas numa placa de 96 poços a uma concentração final de 5 x 10 ^{3 células /poço e incubadas em meio RPMI 1640 contendo 10% de FCS durante 24 h, após o que, as células foram tratadas com a concentração indicada de β, β-dimethylacrylshikonin durante 24 h e 48 h. O meio foi removido e foi adicionado meio fresco a cada poço, juntamente com 20 jil de solução de MTT (5 mg /ml). Após 4 h de incubação, 150 uL de DMSO foi adicionado a cada poço. As placas foram lidas a comprimentos de onda de 570 nm, utilizando Varioskan flash multimodo Reader (Thermo Scientific, EUA). Quatro reduplicate poços foram utilizados para cada tratamento, e as experiências foram repetidas três vezes.}}

alterações morfológicas

células SGC-7901 foram colocadas na cavidade de uma placa de seis poços. Após 24 h de cultura de células, que foram tratadas com β, β-dimethylacrylshikonin para os períodos de tempo indicados. A morfologia celular foi observada utilizando um microscópio invertido. (Modelo IX70; Olympus, Tóquio, Japão)

DAPI (4 ', 6-diamidino-2-phenylindole) coloração

células SGC-7901 foram colocados na cavidade de uma placa de seis poços. Após 24 h de cultura de células, que foram tratadas com β, β-dimethylacrylshikonin para os períodos de tempo indicados, em seguida, as células foram fixadas em acetona fria durante 30 minutos, e incubada com DAPI (1 mg /ml) durante 30 min. Os núcleos apoptóticos caracterizado como intensivamente coradas foram detectados por microscopia fluorescente. (Modelo IX71; Olympus, Tóquio, Japão)

anexina V /PI ensaios para apoptose

Para anexina V /PI ensaios, células foram coradas com AnnexinV-FITC e PI, e avaliadas quanto a apoptose por citometria de fluxo de acordo com o protocolo do mannufacturer (BD PharMingen, San Diego, CA, EUA). Resumidamente, 1 x 10 ^{5 as células foram lavadas duas vezes com PBS, e coradas com 5 ul de AnnexinV-FITC e 5 ul de PI em 500 ul de tampão de ligação durante 15 minutos à temperatura ambiente no escuro. As células apoptóticas foram determinadas usando o software diva BD FACS (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ). Anexina V coloração serve como uma medida de externalização fosfatidilserina e células que são anexina V + /PI -. Representam células início apoptóticos}

A medição do potencial de membrana mitocondrial

Cells ( 5 × 10 ^{5 células /ml) foram tratados com ou sem β, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /L) durante 24 h e manchados com JC-1 (BD MitoScreen JC-1 Kit, Becton Dickinson, EUA) para 15 min a 37 ° C. potencial de membrana mitocondrial foi detectada por citometria de fluxo (FACSCanto II, Becton Dickinson, EUA).}

Bloting análise ocidental

As células foram tratadas com a concentração indicada de β, β-dimethylacrylshikonin durante o tempo indicado em meio RPMI 1640 com FCS a 10%. As células foram recolhidas em PBS arrefecido em gelo, e os extractos celulares foram preparados em tampão RIPA com o cocktail inibidor de proteinase a partir de Calbiochem (San Diego, CA). As concentrações proteicas dos lisados ​​de células foram determinadas e fervido com tampão de gel de carga durante 10 min a 100 ° C. As amostras contendo 30 ug de proteína total foram sujeitas a electroforese em géis de 10% SDS-poliacrilamida e transferidos para uma membrana de PVDF (Millipore, Temecula, CA). Após transferência, a membrana foi bloqueada em TBST (TBS contendo 0,1% de Tween 20) contendo 5% de leite desnatado durante 2 horas, seguido por incubação durante a noite a 4 ° C com anticorpos primários apropriados. Após lavagem três vezes em TBST, as membranas foram incubadas durante 2 h a 37 ° C com anticorpos secundários conjugados com peroxidase apropriados 1:5000 rábano. Finalmente, as membranas foram visualizadas utilizando o sistema de detecção de quimioluminescência aumentada (Kit Immun-Star WesternC, Bio-Rad, EUA).

Imunofluorescência coloração

Immunofluorescene coloração foi usada para analisar a distribuição subcelular de citocromo C em células SGC-7901 induzidas por β, β-dimethylacrylshikonin. As células cultivadas em coverlips vidro estéreis foram fixadas em acetona fria durante 10 min. Após permeabilizadas com 0,3% de Triton X-100 durante 20 min à temperatura ambiente, as células foram bloqueadas em 3% de albumina de soro de bovino durante 30 minutos e incubadas durante a noite a 4 ° C com anticorpo anti-citocromo C (01:30). Após lavagem três vezes em PBS, as células SGC-7901 foram marcadas com o anticorpo secundário conjugado 488-Alexa Fluor. DAPI foi subsequentemente adicionado para coloração nuclear. A análise microscópica foi realizada utilizando um microscópio fluorescente (modelo IX71; Olympus, Tóquio, Japão).

A análise estatística

Os dados reportados são a média ± desvio padrão (SD) de três experimentos independentes. Eles foram avaliados por análise de uma via de variância (ANOVA). Diferenças significativas foram estabelecidos em p <. 0,05

Resultados

β, β-Dimethylacrylshikonin inibe a viabilidade das células SGC-7901

A fim de determinar o efeito citotóxico de β, β-dimethylacrylshikonin em células de câncer gástrico. células SGC-7901 foram tratados com 2,5, 5, 7,5, 10 nmol /L de β, β-dimethylacrylshikonin durante 24 h e 48 h, a viabilidade reduzida das células tratadas com β, β-dimethylacrylshikonin foi 92,41 ± 6,06%, 76,49 ± 3,18%, 67,19 ± 1,82%, e 61,76 ± 0,18%, respectivamente, às 24 h em comparação com as células tratadas com veículo (Fig. 1B). Para o tratamento de 48 horas, a viabilidade celular foi de 52,03 ± 9,45%, 38,99% ± 1,43, 30,70 ± 1,58%, e 27,4 ± 0,31% (Fig. 1B). A metade da concentração máxima inibitória (IC _{50) de β, β-dimethylacrylshikonin para células SGC-7901 foi 11,04? M e 2,89? M às 24 h e 48 h, respectivamente.}

β, β-Dimethylacrylshikonin induz SCG -7901 células apoptose

células SGC-7901 foram primeiro tratados com β, β-dimethylacrylshikonin, os resultados mostraram que as células marcadas foram submetidos a alterações morfológicas após tratamento com 10 nmol /L β, β-dimethylacrylshikonin em comparação com o controlo não tratado para 24 h. Na presença de β, β-dimethylacrylshikonin, o número de células SGC-7901 reduziu as células e tornou-se rodada para cima e pequena em forma, e separando a partir da placa em comparação com o grupo de controlo negativo (Fig. 2A). β, β-dimethylacrylshikonin também induziu a condensação nuclear com DAPI coloração intensiva em comparação com o nuclear de células de SGC-7901 de controlo durante 24 h (Fig. 2B).

Para determinar se a citotoxicidade de β, β-dimethylacrylshikonin envolvido apoptose , foi avaliado o efeito apoptótico de β, β-dimethylacrylshikonin em células SGC-7901 por citometria de fluxo para a Anexina V e iodeto de propídio (PI) coloração. A percentagem de células apoptóticas precoces (anexina V ^{+ /PI -) foi de 1,6%, 7,2%, 18,1%, 24,3%, e 24,4% em resposta ao veículo, 2,5, 5, 7,5, e 10 umol /L β, β-dimethylacrylshikonin respectivamente, durante 24 h (Fig. 2C). Interessantemente, as células apoptóticas tardias (anexina V + /PI +) foram significativamente aumentados em células SGC-7901 (29,7% com 7,5 mmol /L e 33,6% com 10 pmol /L β, tratamento β-dimethylacrylshikonin ) (Fig. 2C).}

β, β-dimethylacrylshikonin induz eventos mitocondriais associadas com a apoptose em células SGC-7901

proteínas da família Bcl-2 incluem proteínas pró-apoptóticas (Bax, Bak e bid) e proteínas anti-apoptóticas (Bcl-2, Bcl-xL, CIAP-2, XIAP e survivina). Eles podem activar ou inibir a libertação dos factores a jusante que conduzem à activação de caspase-3 e PARP na execução da apoptose [20]. A fim de detectar as proteínas relacionadas com a apoptose, proteínas pró-apoptóticas (Bax, Bak) e proteínas anti-apoptóticas (XIAP, CIAP-2, Bcl-2, Bcl-xL, survivina) foram detectados por transferência de Western após SGC-7901 As células foram tratadas com diferentes concentrações de β, β-dimethylacrylshikonin (0, 2,5, 5, 7,5 e 10 umol /L) durante 24 h. Os resultados indicaram que β, β-dimethylacrylshikonin diminuir a expressão de XIAP, cIAP-2, Bcl-2 (Fig. 3A). No entanto, a sub-regulação de XIAP e Bcl-2, foi menos pronunciada, enquanto a sub-regulação de cIAP-2 foi bastante dramática e dependente da dose. Não houve alteração significativa da Bcl-xL e survivn em células SGC-7901. Se β, β-dimethylacrylshikonin pode modular a expressão de proteínas pró-apoptóticas (Bax, Bak) foi também examinada. Descobrimos que β, β-dimethylacrylshikonin aumentou a expressão de Bak de uma forma dependente da dose, mas teve pouco efeito sobre o Bax (Fig. 3B).

proteínas da família das caspases são enzimas importantes para a execução da apoptose. Entre os membros da família da caspase, caspase-3 é um executor chave para a apoptose em células de mamíferos [21]. Ele pode ser activada através da morte mediada por receptor extrínseca da caspase-8 e as mitocôndrias via dependente de caspase-9 via intrínseca [22], [23]. A fim de melhor compreender o mecanismo molecular da apoptose, as células SGC-7901 foram tratadas com β, β-dimethylacrylshikonin e detectada por análise de transferência de Western para a mudança de caspase-3 expressão, caspase-8 e caspase-9, os resultados mostraram um elevação dependente da dose da caspase-3 clivada, caspase-8 e clivada, β-dimethylacrylshikonin tratada células caspase-9 em β. clivagem de PARP, outra característica bem conhecida da apoptose, também foi encontrada em β, as células tratadas β-dimethylacrylshikonin (Fig. 3C). disfunção mitocondrial induzida por apoptose que é, muitas vezes a consequência de uma diminuição do potencial de membrana mitocondrial. Tem sido mostrado para ser central para a via apoptótica. As células SGC-7901 foram tratadas com ou sem β, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /L) durante 24 h, os resultados mostraram o potencial de membrana mitocondrial foi reduzida de 98,6% para 56,9% depois de β, β-dimethylacrylshikonin foi tratado com o SGC- 7901 células (Fig. 3D). A seguir, examinou a distribuição e localização subcelular de citocromo c para descobrir se a via de mitocôndrias está envolvido em β, β-dimethylacrylshikonin apoptose induzida. Depois de células SGC-7901 foram tratadas com β, β-dimethylacrylshikonin (10 umol /L) durante 24 h, a distribuição do citocromo c foi visualizado com um microscópio confocal a laser, as células tratadas β, β-dimethylacrylshikonin apresentaram morfologia turva (Fig. 3E) em contraste com a aparência obviamente clara nas células de controlo, indicando a translocação de citocromo c a partir da mitocondria para o citoplasma em β, β-dimethylacrylshikonin células tratadas.

para determinar o papel da activação da caspase em β, β-dimethylacrylshikonin- apoptose induzida, que trataram células SGC-7901 com inibidor pan-caspase Z-VAD-FMK (10 mmol /L) antes de β, o tratamento β-dimethylacrylshikonin. O inibidor da pan-caspase Z-VAD-FMK pré-tratamento diminuiu a expressão de caspase-3 clivada, PARP clivada e β reduzida, a apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin (Fig 3F &. L). Estes dados mostraram que a via da cascata de caspases mitocondrial mediada joga um papel muito importante na β, a apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin.

β, β-Dimethylacrylshikonin sustentada induz a activação de ERK em células SGC-7901

Verificou-se que MAPK sinalização envolvidos em diversos acontecimentos de estresse celular e a apoptose induzida por estímulos de células [24], [25]. Estudámos, portanto, a activação de ERK, JNK e p38 após β, tratamento β-dimethylacrylshikonin. Como mostrado na Fig. 4A & B, os níveis de fosforilação de ERK e JNK foram aparentemente aumentada em resposta ao β, tratamento β-dimethylacrylshikonin durante 2 h, e os níveis de fosforilação exibiu um modo dependente da dose. Além disso, os níveis de fosforilação de ERK últimos vinte e quatro horas. No entanto, não se observaram alterações significativas dos níveis de fosforilação de p38 após a β, tratamento β-dimethylacrylshikonin (Fig. 4C). Estes resultados sugerem que a activação sustentada do ERK está envolvida na β, a apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin em células SGC-7901.

A via de sinalização de ERK está envolvida na β, β-dimethylacrylshikonin apoptose induzida em SGC-7901 células

em seguida, examinou se a β, a ativação sustentada β-induzida por dimethylacrylshikonin da via de sinalização ERK desempenha um papel na apoptose. Como mostrado na Fig. 5A & B, ensaio de mancha de Western revelou que U0126 (um inibidor de MEK específica) inibiu a activação de ERK sustentada e a clivagem de caspase-3, a PARP em β, tratamento β-dimethylacrylshikonin enquanto o inibidor da pan-caspase Z-VAD-FMK não teve efeito sobre β, activação de ERK (Fig. 5D) β-dimethylacrylshikonin-induzida. Além disso, U0126 reduzida, a apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin β em células SGC-7901 (Fig. 5C). Estes resultados mostraram que β, a apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin em células SGC-7901 são mediadas pela activação sustentada da via de sinalização de ERK.

Discussão

shikonin derivados são os componentes activos isolados a partir de o chinês ervas Lithospermum erythrorhizon [5]. Estes compostos são promissores candidatos a fármacos que tenham sido referidos como tendo múltiplos efeitos anticancro in vivo e in vitro [5], [26]. Entre os componentes de Lithospermum erythrorhizon, β, β-Dimethylaerylshikonin tem importantes efeitos anti-tumorais em comparação com outros ingredientes activos [27]. No que diz respeito à actividade anti-cancro, a apoptose das células-rendido shikonin através da activação da via dependente de caspase foi encontrada em muitos tumores malignos. Neste estudo, nós investigamos o efeito de β, β-dimethylacrylshikonin em células SGC-7901 câncer gástrico humanos. Os nossos resultados indicam que o tratamento de células SGC-7901 com β, β-dimethylacrylshikonin apresentou um efeito citotóxico significativo contra células SGC-7901 numa dose e forma dependente do tempo, e β, β-dimethylacrylshikonin apoptose induzida em células de SGC-7901 foi evidenciado pela um aumento de células início apoptóticos (anexina V ^{+ /PI -). e células tarde apoptóticos (anexina V + /PI +)}

O rácio de anti-e a expressão da proteína pro-apoptótica, tal como a Bcl-2 /Bax, é crucial para a indução de apoptose, e que determina a susceptibilidade das células à apoptose [28]. As mitocôndrias desempenham um papel importante na transdução de sinal de apoptose [29]. O translocalização de proteínas apoptóticas do citosol para a mitocôndria conduz à libertação de citocromo c e segundo activador derivado de mitocôndrias de caspases por um decréscimo no potencial da membrana mitocondrial [30], [31]. Shikonin tem sido relatado para induzir a apoptose pela via mitocôndrias em células HepG2 [32]. No presente estudo, mostrou que β, β-dimethylacrylshikonin regulada negativamente a expressão de XIAP, cIAP-2 e Bcl-2 e sobre-regulada a expressão de Bak e Bax, e causou a perda de potencial de membrana mitocondrial e libertação de citocromo c em células SGC-7901, consistente com mitocôndrias apoptose dependente. A observação de β, β-dimethylacrylshikonin mediada por activação de caspase-9, caspase-3, e subsequente clivagem de PARP, bem como o resultado de que o pan-caspase inibidor de Z-VAD-FMK reduz β, apoptose β-induzida por dimethylacrylshikonin em células SGC-7901, sugerindo que a via da cascata de caspases mediada por mitocondrial desempenha um papel fundamental na β, a apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin. Tomados em conjunto, os nossos resultados indicaram que β, β-dimethylacrylshikonin regula os níveis de proteínas relacionadas à apoptose expressão, faz com que o citocromo c liberação e trigs morte apoptótica celular dependente de caspase.

proteínas quinases Mitógeno-ativadas (MAPK) regular diversificada programas celulares, incluindo embriogénese, a proliferação, a diferenciação e a apoptose [33]. As proteínas da família da MAPK são compostas por três proteínas cinases: ERK1 /2 (quinases reguladas por sinais extracelulares 1 e 2), a JNK (quinase c-Jun N-terminal) e p38 [34], [35]. Em geral, a activação de ERK transiente conduz à proliferação celular, mas a activação de ERK é sustentado assoctiated com diferenciação [36]. Emergindo evidência sugere que a activação da ERK contribui para a apoptose. Jeong et ai. mostrou que kaempferol causada células de cancro a sofrer apoptose através de uma via dependente de ERK [21], [37], [38]. Recentemente, foi relatado que icaritin induz a inibição do crescimento e apoptose em PSMCs humanos pela via de sinalização de ERK [39]. Li et al. demonstrado que a activação da via de sinalização /MEK /ERK RAF desempenha um papel crucial na apoptose induzida por cálcio de células epiteliais do cristalino [40]. Aqui também descobrimos que a activação de ERK sustentada está envolvido em β, a inibição do crescimento induzida por β-dimethylacrylshikonin e apoptose em células SGC-7901. U0126, um inibidor específico da MEK (MAPK /ERK-quinase), β eficazmente bloqueada, a activação de ERK e β atenuada, apoptose β-induzida por dimethylacrylshikonin, sugerindo que os efeitos pró-apoptóticos de β, β-dimethylacrylshikonin em β-induzida por dimethylacrylshikonin células SGC-7901 são mediadas pela activação sustentada da via de ERK1 /2 de sinalização.

em conclusão, observou-se que β, β-dimethylacrylshikonin inibiu o crescimento celular e a apoptose induzida em células de SGC-7901. Estudamos também os mecanismos subjacentes envolvidos na β, apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin. Os nossos resultados indicaram que β, apoptose β-induzida por dimethylacrylshikonin envolve na redução de XIAP, cIAP-2, e a expressão da proteína Bcl-2 e a indução da expressão da proteína Bak e Bax, e causou a perda do potencial de membrana mitocondrial e a libertação de citocromo C em células SGC-7901. Os nossos resultados também demonstraram que β, a apoptose induzida β-dimethylacrylshikonin envolve a activação de caspase-3, caspase-8 e caspase-9 e a clivagem de PARP. Além disso, via de sinalização ERK também participou de β, apoptose induzida por β-dimethylacrylshikonin. Nossos resultados indicaram que β, β-dimethylacrylshikonin poderia ser desenvolvido como um potencial agente anticancerígeno contra o cancro gástrico humano.

Reconhecimentos

Gostaríamos de agradecer H-BW por sua assistência técnica e também agradecer X -QM e J-HC pelos comentários sobre este artigo.

• PLOS ONE: Plasma microRNAs, miR-223, miR-21 e miR-218, como novos biomarcadores potenciais para câncer gástrico Detection
• PLOS ONE: a associação entre SNPs individuais ou haplótipos da metaloproteinase de matriz 1 e câncer gástrico suscetibilidade, progressão e Prognosis