PLoS ONE: N-terminal polipeptida Aneksina A2 Smanjuje Infekcija Mycoplasma hyorhinis na želudac stanica raka

Sažetak pregled

Mycoplasma infekcije u čovjeka i njegova kontaminacija u staničnim kulturama širom svijeta problema. Lijekovi trenutačno na raspolaganju za prevenciju ili liječenje infekcije Mycoplasma pate od niske osjetljivosti, jak otpor i visoku toksičnost. Naš dosadašnji rad pokazao da Mycoplasma hyorhinis pregled ( M pregled. hyorhinis pregled) infekcija je posredovana interakcijom P37 M Netlogu. hyorhinis pregled i Aneksin A2 (ANXA2) stanica domaćina, međutim paralelno vrijednost tog mehanizma bila nepoznata. Ovdje, sintetizirali smo N-terminalni dio ANXA2 polipeptida (A2PP) i utvrdili da A2PP mogao smanjiti infekcije M Netlogu. hyorhinis pregled želučanih stanica raka i blok M
. hyorhinis pregled migracija stanica zaraze izazvane. Nadalje, utvrdili smo da A2PP mogao smanjiti M
. hyorhinis pregled onečišćenje prolaz stanica. Osim toga, u usporedbi s komercijalnim antibioticima se obično koriste u staničnoj kulturi za sprečavanje M
. hyorhinis pregled infekcija, A2PP pokazao je više učinkovitosti, ali nisku toksičnost na rast stanica. Dakle, naša studija po prvi put otkrio A2PP potencijal za liječenje i prevenciju M Netlogu. hyorhinis pregled infekcije pregled

Izvor:. Yuan S, Qu L, Shou C (2016) N-terminal polipeptida Aneksina A2 Smanjuje infekciju Mycoplasma hyorhinis pregled na rak želuca stanice , PLoS ONE 11 (1): e0147776. doi: 10,1371 /journal.pone.0147776 pregled

Urednik: Gernot Zissel, Universitatsklinikum Freiburg, Njemačka pregled

Primljeno: 16. listopada 2015. godine; Prihvaćeno: 7 siječnja 2016; Objavljeno: 26 siječanj 2016 pregled

Copyright: © 2016 Yuan i sur. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

dostupnost podataka. Sve relevantne podaci u radu. Microarray podataka je pohranjena u NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (pristupnog no.GSE73777) pregled

Financiranje:. Financira Nacionalna zaklada prirodoslovni Kine (81572532). http://www.nsfc.gov.cn/publish/portal1/. SCC dobio sredstva. U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da nema suprotstavljenih interesa postoji

Uvod

patogenih mikoplazme, uključujući Mycoplasma pneumoniae ( M pregled. pneumoniae pregled), mikoplazma hyorhinis ( M pregled. hyorhinis pregled), oralni mikoplazme ( M pregled. orale pregled) i Mycoplasma genitalium ( M pregled. genitalium pregled), pripadaju klasi mollicutes, što je najmanji mikroorganizam dnevni u prirodi i može udvostručiti samostalno [1-2]. Mnoge studije su pokazale da je infekcija s tim mikoplazmi bila povezana s razvojem tumora [3-8]. M pregled. orale pregled uzrokuje kromosoma nepravilnosti u diploidnih stanica i potiče staničnu transformaciju [6]. Infekcija s M Netlogu. hyorhinis pregled ili M pregled. genitalium pregled može povećati migraciju i invazivnosti prostate epitelnih stanica [3]. M pregled. hyorhinis pregled infekcija je povezana s artritis, serositis, neplodnost i rak čovjeka [9-12]. Pregled

Osim toga, onečišćenje mikoplazma u staničnoj kulturi je ozbiljan problem i stopa prolaznih stanica zaražene mikoplazme je visoka. Kultura stanica je naširoko koristi u prirodnim znanostima, kao što je u temeljnim istraživanjima, klinička ispitivanja istraživanja, razvoja i proizvodnje bioloških proizvoda, kao i na području biofarmaceutsko i cjepiva proizvodnje. Sprječavanje stanice od kontaminacije je važno osigurati kvalitetu istraživanja. Onečišćenje mikoplazma je najčešći problem u staničnoj kulturi s incidencijom od 30% -60% [1]. Pokazalo se da su četiri vrste mikoplazmi čine više od 95% infekcija u kulturi stanica, uključujući i M pregled. orale pregled, arginin mikoplazma ( M pregled. arginini pregled), M pregled. hyorhinis pregled, a Levin je ne Acholeplasma ( A pregled. laidlawii pregled) [13,14,15,16]. Zbog male veličine, mikoplazma se teško može naći pod svjetlosnim mikroskopom i lako se ignorira od strane istraživača. U posljednjih nekoliko godina, brojni antibiotici koji se koriste za liječenje mikoplazme puta rezultirala pojavom rezistencije mikoplazma. Iz tih razloga, neophodno je razviti nove sredstva za sprečavanje ili smanjenje Mycoplasma infekcije. Pregled

Naš dosadašnji rad pokazao da je M
. hyorhinis pregled infekcije ovisi o interakciji P37 (glavni protein membrane od M pregled. hyorhinis pregled) i domaćin ANXA2 preko svojih N-terminalne domene. Također smo otkrili poliklonsko protutijelo na P37 može blokirati infekciju M Netlogu. hyorhinis pregled i smanjenje M pregled. hyorhinis pregled -promoted migracija želučane stanice raka [17]. Na temelju ovih otkrića, podigli smo hipotezu da peptid koji se sintetizira u skladu s aminokiselinskom slijedu ANXA2 N-terminalnog područja (od 1 ^{st 30 th AA, ovdje nazvan ovog peptida kao A2PP), mogla blokirati M
. hyorhinis pregled infekcija putem svoje konkurencije s ANXA2 i može se iskoristiti kao lijek za prevenciju M
. hyorhinis pregled infekcija u staničnoj kulturi. U ovom istraživanju, testirali smo tu hipotezu i usporediti učinke A2PP s drugim lijekovima u prevenciji M
. hyorhinis pregled infekcija. Pregled}

Materijali i metode pregled

staničnoj kulturi pregled

AGS rak želuca stanična linija je iz American Type Culture Collection (ATCC). BGC823 rak želuca stanična linija uspostavljena je u Pekingu sveučilišnih narodne bolnice, a nabavljen je od Cell kulturni centar kineske Akademije medicinskih znanosti (Peking, Kina). AGS i BGC823 stanice su kultivirane u RPMI-1640 mediju s dodatkom 10% fetalnog telećeg seruma dobiven od Invitrogen (Carlssbab, CA, USA). Mycoplasma Test je proveden prije svakog novog eksperimenta metodom PCR M Netlogu. hyorhinis P37 pregled. Pregled

Mycoplasma Razmnožavanje i Co-Kultura pregled

razmnožavanje mikoplazme i ko-kulture je izveden kao što je ranije opisano [17,18,19]. Pregled

antitijela i reagensi pregled

Anti-P37 monoklonsko antitijelo PD4 je stvorena i ranije karakterizira [5,20,21]. Poliklonski anti-P37 antitijelo dobiveno je od imunizacijom kunića sa GST-fuzijski protein P37 nakon standardnog protokola. Anti-EGFR i anti-fosfo-EGFR nabavljen je od Cell Signaling Technology (CST, USA). Anti-ANXA2 je iz Novus biotehnologiju (Novus biotehnologiju, USA). Anti-fosfo-ANXA2 je iz Santa Cruz (Santa Cruz, CA, USA). A2PP (1 ^{st 30 th aa) i raznih skraćenih A2PP peptidi, uključujući A2PP-ND4 (5 og do 30 th aa), A2PP-ND8 (9 og do 30 th aa), A2PP-Nd12 (13 rd do 30. th aa), A2PP-Nd16 (17 og do 30 th aa), A2PP-CD4 (1 st do 26 th aa), A2PP-CD8 (1 st do 22 nd aa), A2PP-Cd12 (1 st do 18 th AA), A2PP- CD16 (1 st do 14 th aa), zajedno sa slučajnim kontrolnim peptidima (ConP) su sintetizirani Sbsbio (Peking, Kina). Antimikrobni lijekovi mikoplazma I (miko I) i mikoplazma II (miko II) kupljeni su od M &C GENE TEHNOLOGIJA (Peking, Kina). Ciprofloksacin (CIP) bio je od Double-Crane Pharm (Peking, Kina). Pregled}

Detekcija M Netlogu. hyorhinis pregled kvantitativnim PCR (qPCR) pregled

DNK izolirana je iz AGS ili BGC823 stanica nakon M Netlogu. hyorhinis pregled infekcije DNA pufera za lizu (50 mM Tris pH 8,5, 1 mM EDTA, 0,5% Tween-20, te 200 mg /L proteinaze K) prema standardnom protokolu. qPCR je provedeno s 30 ng DNA i SYBR Green Real-time PCR 2 × mješavina na komplet (Takara, Otsu, Japan), koristeći jedan korak sustav od ABI (Foster City, CA, USA). Reakcijski programa i P37
specifičnih primera (naprijed: 5'-TATCTCATTGACCTTGACTAAC-3 'naličju: 5'-ATTTTCGCCAATAGCATTTG-3') koje su [22] prijavljen. Za usporedbu M
. hyorhinis pregled razine DNA u stanicama, GAPDH pregled (naprijed: 5'-TGAAGGTCGGAGTCAACGG-3 ', obrnuti: 5'-CCTGGAAGATGGTGATGGG-3') povećan je kao kontrola i podaci analizirani su pomoću 2 ^{-ΔΔCt metoda. Klice su sintetizirani Sangon (Shanghai, Kina). Pregled}

Western blot-pregled

Stanice su sakupljene iz posude za uzgoj sa 2 × SDS pufera za nanošenje. Poliakrilamid gel elektroforeze (SDS-PAGE), te Western blot su provedena kao što je prethodno opisano [23]. Pregled

Cell ELISA pregled

96 jažica nasađene su sa stanicama (1 × 10 ^{4 /i), nakon čega slijedi tretiranje navedenih peptida i infekcije M
. hyorhinis pregled 24 h. Stanice su imobilizirane s 0.05% glutaraldehidom kroz 10 min, a zatim Cell ELISA je izvedena kao što je prethodno opisano [24]. Pregled}

krute faze vezivanja i padajućih Ispitivanje pregled

Rekombinantni GST-P37 i GST proteini bili generirani i pročišćen kao što je ranije opisano [17]. GST-P37 i GST se razrijedi u puferu (0,1 M _{2CO 3, 0,1 M NaHCO 3, pH 9,6) i obložene u 96 jamica pločica na 4 ° C preko noći. Ploče su isprane PBS tri puta i blokira 5% obranog mlijeka /PBS na sobnoj temperaturi (RT) tijekom 2 sata. Nakon ispiranja s PBS-om, doda se navedeno koncentracije biotin-konjugiranom A2PP (sintetiziranima Sbsbio) i inkubira se na sobnoj temperaturi 2 sata. Nakon ispiranja s PBST 3 puta, streptavidin-konjugirane HRP (Baltimore Pike, West Grove, PA, SAD) i inkubirano na sobnoj temperaturi tijekom 30 minuta. Nakon razvijanja boje s ortho-fenilendiaminom (Sigma), optičke gustoće pri 490 nm (OD490) zabilježen pomoću čitača mikroploča (Bio-Rad 550). Za padajućeg testu, 100 ng GST-P37 ili GST protein ko-inkubiraju s 20 uM biotin-A2PP i streptavidinom kuglica (GE Healthcare, Pittsburgh, PA, USA) u puferu za vezanje (50 mM Tris-HCl pH 8,0, 150 mM NaCl, 0,5% NP-40, 0,5 mM DTT, 1 mM PMSF i 1 × kompletan inhibitori proteaze) pri 4 ° C preko noći. Talozi su isprani s veznim puferom četiri puta i analiziran je Western blotom. Pregled}

Co-Imunoprecipitacija pregled

M pregled. hyorhinis pregled inficirane stanice (BGC823 ili AGS) su homogenizirani u puferu za liziranje (50 mM Tris-HCl pH 8,0, 150 mM NaCl, 1% Triton X-100, 0,5 mM DTT, 1 mM PMSF i 1 × kompletna inhibitori proteaze) pri 4 ° C kroz 10 min. Nakon 12, 000 g centrifugiranje tijekom 10 minuta na 4 ° C, supernatanti su skupljeni. Protein lizati (500 ug) inkubirane s 20 uM A2PP ili ConP, 1 ug protiv ANXA2 plus protein G sefaroznih kuglica (GE Healthcare) pri 4 ° C preko noći. Pre-imunih IgG (1 ug) je korišten kao kontrola. Precipitirani kuglice su isprane s puferom za četverostruko ispran u 2 × pufera za nanošenje, kuhana i analiziran je Western blotom. Pregled

eseja imunoflorescencije pregled

Stanice su posađene na pokrovna i kultivirane preko noći. Sljedećeg dana, stanice su tretirane s naznačenim peptidima i inficirane s M
. hyorhinis pregled 24 h. Zatim su stanice isprane s ledeno hladnim PBS tri puta, fiksirane u 4% paraformaldehidom tijekom 15 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon blokiranja 1 sata u 5% BSA /PBS, stanice su inkubirane s navedenim antitijelima na sobnoj temperaturi kroz 1 sat. Dalje, stanice su isprane 3 puta ponovno s PBST i inkubirane s FITC i TRITC-obilježenim sekundarnih antitijela tijekom 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon ispiranja s PBS-om i counterstaining sa DAPI, stanice su postavljene na 50% glicerol /PBS. ZEISS® LSM780 Osnove optike mikroskop (Zeiss Microsystems, Oberkochen, Njemačka) je promatrati lokalizaciju navedenih proteina. Pregled

Cell Migracija Test pregled

Transwell® komora s 8,0 um pora membrane (Corning, NY, USA) je korišten u testu stanične migracije. Dno komora je ispunjena 800 jal mediju koji sadrži 10% FBS kao kemoatraktant. Stanice su resuspendirane u mediju bez seruma koji sadrži M
. hyorhinis pregled plus A2PP ili ConP, zatim se pažljivo prenese na gornju komoru svake transjažice aparata pri gustoći od 2 x 10 ^{5 stanica /mL (120 ul /komora). Stanice su ostavljene da migriraju tijekom 24 sata pri 37 ° C. Gornja površina svake membrane je izbacila stanica s pamučnom krpom. Stanice su prodrle na donjoj strani membrane su fiksirani u hladnim metanolom, obojene s 0.1% kristalno ljubičastog i broje u devet slučajno odabranih mikroskopskih polja po jažici. Svaki uzorak je bio pripravljen u trostrukim komore i svaki eksperiment ponovljen je najmanje 3 puta. Pregled}

proliferacije stanica pregled

želucu kancerozne stanice su nasađene na ploče za uzgoj kulture s 96 jažica u gustoći od 5 × 10 ^{3/100 ul /jamici u triplikatima, te se tretira sa naznačenim reagensa. Proliferaciju stanica kvantificirane su stanične ušća s CloneSelect Imager (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Pregled}

Microarray Analiza i Real-Time RT-PCR

AGS i BGC823 stanice ( 1 × 10 ^{6 po 10 cm 2 ploče) se pomiješa s A2PP, CIP, miko i i miko II za 24 sati, isprana s PBS, te su sakupljene u Trizol reagensa. Uzorci RNK su ispitani u OE Biotechnology (Shanghai, Kina) pomoću Affymetrix GeneChip ® PrimeView ™ Human Gene Expression Array. Microarray podataka je pohranjena u NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (pristupnog no.GSE73777). Sirovi podaci su snimljeni pomoću Affymetrix GeneChip naredbu konzole (verzija 4.0, Affymetrix). Zatim Genespring softvera (verzija 12.5, Agilent Technologies) je bio zaposlen do kraja osnovne analize s sirovih podataka. Za početak, sirovi podaci su normalizirani s RMA algoritam. Različito izražena geni su potom identificirani kroz mnogostrukost promjene. Prag set za gore i na dolje reguliranih gena bila je puta promjena ≥ 2.0. Nakon toga, GO i KEGG analize su primijenjene za odabir iz gena koji se odnose na stanični ciklus i stanične apoptoze. Real-time RT-PCR je korištena za validaciju rezultata microarray i izvodi u skladu s uputama proizvođača koja (SYBR, Tovobo). Razina ekspresije povezanih gena su normalizirani do GAPDH pregled i 2 -ΔΔCT se koristiti za izračunavanje relativne ekspresije gena. Primeri za real-time RT-PCR ( ATF pregled, naprijed, 5'-GAGTGGCGACAGGATAGAGC-3 ', obrnuti, 5'-TTTAGCCTCCCTCCCTTAGC-3'; DDIT3 pregled, naprijed, 5 ' -GCGCATGAAGGAGAAAGAAC-3 ', obrnuti, 5'-ACCATTCGGTCAATCAGAGC-3'; CEBPB pregled, naprijed, 5'-AGCGACGAGTACAAGATCCG-3 ', obrnuti, 5'-AGCTGCTCCACCTTCTTCTG-3') su sintetizirani Sangon <. br>}

Statistička analiza pregled

Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± SD. Razlike su analizirani pomoću varijance SPSS 11,0 programa i P < 0,05 smatrala se statistički značajnom. Pregled

Microarray pristupni broj pregled

Microarray podataka je pohranjena u NCBI Gene Expression Omnibus (GEO) (prist. GSE73777). Pregled

Rezultati

A2PP nema nikakvog utjecaja na održivost ili migracije stanica rak želuca pregled

kako bi se procijenila uloga ANXA2 je N-terminalne domene u M Netlogu. hyorhinis pregled infekcija, što prvo sintetizirani A2PP peptid koji odgovara N-terminalni kraj ANXA2 (slika 1A). Biotin označeni A2PP je pokazala da je posebno u interakciji s GST-P37 u analizi krutog obvezujuća faza (Slika 1B) i padajući testnom (slika 1C). Primijetili smo da A2PP ne utječu na morfologiju AGS i BGC823 stanica (Slika 1D). Osim toga, u koncentracijama manjim od 20 uM, A2PP ne inhibira proliferaciju stanica (slika 1E), što ukazuje da A2PP ima minimalnu toksičnost za stanice. EGFR je uključen u regulaciju ANXA2 fosforilaciju [17,25,26], a A2PP imao učinak na fosforilacije i razina proteina EGFR i ANXA2 [Slika 2A]. Štoviše, A2PP nije imala utjecaj na migracije AGS i BGC823 stanica (Slika 2b i 2c). Stanična lokalizacija ANXA2 regulirano je njegova fosforilacija, što je presudno za njegovu funkciju [17,27,28]. Pronašli smo A2PP nije promijenio subeelularnim lokalizaciju endogenog ANXA2 (Slika 2D). Ovi rezultati pokazuju da je samo A2PP nema učinke na maligne fenotipova ili EGFR-ANXA2 signalizaciju želučanih stanica raka. Pregled

A2PP Pad M pregled. hyorhinis pregled Infekcija pregled

Naš dosadašnji rad pokazao je da N-terminalni ANXA2 posreduje M Netlogu. hyorhinis pregled infekcija [17]. Kao što je prikazano na rezultat staničnog ELISA testom, otkrili smo da je M
. hyorhinis pregled infekcije bio blokiran A2PP na način ovisan o dozi kod BGC823 i AGS stanice, ali tretirane ConP-stanice su još uvijek vrlo zaraženo M Netlogu. hyorhinis pregled (slika 3A). Ovi rezultati su podržani od strane qPCR testovi (Slika 3b). Dosljedno, A2PP također smanjila razina proteina od P37 proteina u Western blot analize (Slika 3C i 3D). Međutim, razine phophos-AXNA2 i phophos-EGFR u zaraženim stanicama podregulirani obradom s A2PP (Slika 3C i 3E), a ukupna razina AXNA2 te EGFR su relativno stabilne (Slika 3C). U analizi imunofluorescencije, A2PP ustanovljeno je da inhibira M
. hyorhinis pregled zaraze izazvane akumulacije P37 i co-lokalizacija između P37 i ANXA2 (slika 4a). U co-eseja imunoprecipitacije s proteinskim lizati iz M Netlogu. hyorhinis
zaražene stanice, A2PP smanjio interakciju između P37 i ANXA2 (slika 4b). Zajedno, ovi dokazi podržava ideju da A2PP bi moglo smanjiti M
. hyorhinis pregled infekcije i potvrdili prijašnje otkriće da je potreban N-terminalni ANXA2 za posredovanje M pregled. hyorhinis pregled infekcija [17]. Pregled

A2PP potiskuje M pregled. hyorhinis pregled izazvanih migracija pregled

Naša dosadašnja istraživanja predložili su da M
. hyorhinis pregled infekcija može potaknuti migraciju želučanih stanica raka [17, 23]. U ovom istraživanju, primijetili smo da je M
. hyorhinis pregled -promoted migracija želučanih stanica raka nije bio pod utjecajem ConP, ali je ovisno o dozi inhibiran A2PP (slika 5A i 5B). Ovi rezultati ukazuju na to da A2PP inhibiran M
. hyorhinis pregled induciranu migracije, koji je bio povezan s njegove sposobnosti da smanjuje infekcije promovirao fosforilacije EGFR i ANXA2 (Slika 3C i 3e).

A2PP ima esencijalni Motiv za smanjenje M pregled. hyorhinis pregled Infekcija pregled

Kako bi opisali kritičnu motiv A2PP, tražili smo utvrditi da li raznolikim skraćenih peptida A2PP (Slika 6a) mogao smanjuje M
. hyorhinis pregled infekcija. U qPCR analize, A2PP i parcijalna peptida A2PP-ND4, ND8, Nd12, CD4, CD8 i Cd12 smanjena M
. hyorhinis pregled infekcije želuca stanice raka, ali A2PP-Nd16 i A2PP-CD16 nije uspio smanjiti M
. hyorhinis pregled infekcije (Slika 6b). Sličan uzorak inhibicije bio je dobiven iz Western blot analizi (slika 6C). Ovi rezultati ukazuju na postojanje određenog motiva A2PP je neophodna za njegovu sposobnost da se smanji M
. hyorhinis pregled infekcija. Kako bi se dodatno map osnovne sekvence ovog potencijalnog motiva, sintetizirali smo dva peptida koji odgovaraju 11 ^{og -20 th aa (nazvao kao A2PP-10aa) i 13 og -18 th aa (nazvao kao A2PP-6aa) (Slika 7A). U qPCR testom, oba peptida može smanjiti M
. hyorhinis pregled infekcije (Slika 7B), koji je podržan od strane Western blot analizi (slika 7c). Osobito, Inhibicijski učinci A2PP-10aa bolji od onih A2PP-6aa, ali učinke oba peptida manje robusno kao one A2PP (Slika 7B i 7C). Thesefore, središnje sekvence (11 og -20 th) od A2PP mogao biti bitan motiv da inhibiraju M pregled. hyorhinis pregled infekcija. Pregled}

Usporedba A2PP s drugim lijekovima u prevenciji M
. hyorhinis pregled Infekcija pregled

M pregled. hyorhinis pregled je bio jedan od glavnih izvora onečišćenja stanične kulture [13,14,15]. Najbolji način da se eliminiraju M
. hyorhinis pregled infekcija odbaciti stanice i brzo sterilizirati sve kontaktirali žile, ali neke su zaražene stanice se ne mogu zamijeniti u nekoliko slučajeva. Prema tome, to je imperativ da koristite specifične antimikrobne pristupe za sprečavanje ili uklanjanje M
. hyorhinis pregled infekcija. Tu su različite antimikrobne tvari za sprečavanje M
. hyorhinis pregled iz zaraziti. Na primjer, ciprofloksacin (CIP) mogla iskorijeniti M
. hyorhinis pregled u odgovarajućoj koncentraciji [29]. Dva antimikrobni komponente navedene kao mikoplazme I (miko I) i mikoplazma II (miko II) može smanjiti M pregled. hyorhinis pregled infekcije blokiranjem njegove proteina i sinteze nukleinske kiseline. Međutim, neki problemi, kao što su niske osjetljivosti, jak otpor i visoku toksičnost može ograničiti svoje programe u kulturi stanica. Na temelju tih razmatranja, vjerujemo potrebno je usporediti učinkovitost A2PP, CIP, miko I. i miko II u sprečavanju M
. hyorhinis pregled infekcija. Western hibridizacija i qPCR testovi, otkrili smo da su inhibitorni učinak A2PP je na M Netlogu. hyorhinis pregled infekcija bila je slična onoj od miko mene, ali je bolje od onih CIP i miko II (Sl 8A i 8B). Zanimljivo, otkrili smo da A2PP također može učinkovito eliminirati M
. hyorhinis pregled infekcije jako inficiranih stanica u procesu prolaza od P _{1 do P 3 (slika 8C i 8d). Osim toga, u usporedbi s miko I i miko II A2PP je manje inhibitorni učinak na proliferaciju stanica (Slika 9A). Kako bi istražili mehanizme A2PP, CIP, miko I. i efekata miko II na proliferaciju stanica, proveli smo microarray analize i prikazivan podskup različito izražene gena u A2PP, CIP, miko sam i miko II tretira stanice. Kvantitativni RT-PCR analiza pokazala je povećanu ekspresiju gena apoptoze vezane ( ATF5 pregled, DDIT3 pregled, CEBPB pregled) by miko I i liječenje miko II, ali malo promjene bile promatrana u A2PP i CIP skupine (Slika 9b). Ovi rezultati pokazuju da A2PP ima manju toksičnost i veću preventivno potencijal blokiranja M
. hyorhinis pregled infekcije u kulturi stanica. Pregled}

Rasprava pregled

Mycoplasma infekcije i kontaminacija još uvijek prevladava i danas i donijeti značajne rizike za bolesnika i kvaliteti istraživanja. U posljednjih nekoliko godina, nekoliko studija sugerira da mikoplazma infekcije također bio povezan s tumorigenezi [3-8]. Mycoplasma infekcije mogu izazvati oštećenja DNA, utječu na ekspresiju gena i poremetiti kontrolne točke staničnog ciklusa i apoptotičnog odgovora [30]. M pregled. hyorhinis pregled pronađen je u 56% želučanih karcinoma, 55,1% od raka debelog crijeva i 39,7% raka dojke tkiva [20]. Osim toga, serološki ispitivanja pokazala da 36% benigna hiperplazija prostate (BPH) i 52% tkiva karcinoma prostate bile su M pregled. hyorhinis pregled pozitivnih [4]. Ove studije ukazuju na moguću vezu između M Netlogu. hyorhinis pregled infekcija i pojava tumora [4,20]. Štoviše, u procesu stanične kulture, najčešći izvori onečišćenja su mikoplazme, bakterije i plijesni, ali je stopa kontaminacije mikoplazme je relativno veća [13]. Rezultati iz različitih skupina su pokazali da je stopa zaraze mikoplazme varirala od 15 do 80%, a neki čak dosegao 100% [15,31]. Analiza DNA sekvence iz 1000 genoma projekta implicira da 7% uzoraka je kontaminirano mikoplazme [32]. Međutim, sprečavanje Mycoplasma infekcije i kontaminacije je teško. Prvo, zbog pleomorfne, plastičnosti, filtracije i lako topljivosti, mikoplazme mogao proći kroz membranu mikrofiltracijom lako ih čini postoje na površini stanice domaćina ili da se endocitozom ubačen u stanice [1,13,33]. Drugo, mikoplazma nedostaje zidovima stanica, što ih čini neosjetljivi na antibiotike koji inhibiraju sintezu stanične stijenke, kao što je penicilin. Efektivna antimikrobna sredstva postoje, ali njihova kontinuirana primjena u kulturi stanica se ne preporučuje zbog toksičnosti za stanice. Konačno, mikoplazma je atipični bakterija uzrokuje difficulities u točna dijagnoza [34]. Pregled

Brojne anti-mikoplazme lijekovi su razvijeni, kao što je eritromicin, leukomicin, roksitromicin, ofloksacin, i ciprofloksacin. Međutim, nuspojave, toksičnost i otpora dalje donose nevolje za smanjenje zagađenja [10,11,35-38]. Osim toga, kontinuirana primjena tih antibiotika ne može u potpunosti eliminirati mikoplazmičnih za još jednu ili čak tjedana [39,40]. Dakle, važno je pronaći nove načine koje se mogu eliminirati bakterije Mycoplasma infekcije ili kontaminacije učinkovito i pravodobno. Rješenje za ovaj cilj, vjerojatno se može naći kroz karakterizaciju molekularnih mehanizama u podlozi mikoplazme infekcije. Pregled

Naša prethodna studija je otkrila da je interakcija P37 protein AXNA2 posredovanog M pregled. hyorhinis pregled infekcija [17]. U ovoj studiji mi najprije sintetizira N-terminalni polipeptid ANXA2 (A2PP) i potvrđene specifičnu interakciju s GST-P37 proteina u krutoj fazi za vezanje i streptavidin padajuće testovima. Inspirirani su u interakciji, pitali smo da li A2PP može antagonizirati infekciju M Netlogu. hyorhinis pregled. otkrili smo da A2PP, u odgovarajućoj koncentraciji (20 uM), smanjeni M
. hyorhinis pregled infekcija, inhibiran infekcije promovira migracija i smanjuje infekcije izazvali fosforilacije EGFR i ANXA2 u želučanim stanicama raka. Ovi učinci su povezani sa smanjenim interakcije između P37 i ANXA2. Treba napomenuti da je sama A2PP izloženi minimalnim učinkom na proliferaciju stanica i fosforilacija EGFR i ANXA2, sugerirajući da A2PP je vjerojatno da će biti koristan reagens za smanjenje M
. hyorhinis pregled infekcija. Ovaj pojam bio podržan od usporedbe A2PP-a i efekte poslovnih antibiotika "na proliferaciju stanica i M Netlogu. hyorhinis pregled infekcije, koja je pokazala da A2PP doista imao manju toksičnost na stanice, ali snažnu sposobnost suzbijanja infekcije. Pregled

Unatoč toj A2PP, 30 aa polipeptid, može smanjiti M pregled , hyorhinis pregled infekcije učinkovito, još uvijek je potrebno da shvate da li Skraćeni oblici A2PP mogao postići sličan anti- M
. hyorhinis pregled sposobnosti. Pomoću nekoliko skraćenih peptide A2PP, otkrili smo da su središnje sekvence (11 ^{og -20 th) od A2PP mogao biti bitan motiv da inhibiraju M pregled. hyorhinis pregled infekcija. Međutim, inhibitorne učinke parcijalna peptida još uvijek nisu bile tako jako kao full length A2PP, sugerirajući da bočne sekvence su neophodni za održavanje odgovarajuće strukture za postizanje učinkovitije vežu s P37. Daljnja istraživanja su potrebna kako bi pronašli učinke modifikacije i /ili one mutacije tog motiva na inhibirajući M
. hyorhinis pregled infekcije pregled}

Izvori pregled

Hvala i zahvalno priznaje Lin Meng, dr Zhihua Tian (svi iz Pekinškog Sveučilišta u Cancer Hospital & Institut). Za pružanje kritičnih reagensa ili tehnička pomoć. pregled

• PLoS ONE: Pušači inhibira cisplatin apoptozi putem Reguliranje α5-nAChR /Akt signalizacije u ljudskoj rak želuca Cells
• PLoS ONE: niska učestalost sinkroni ili Metachronous tumore, nakon endoskopske submukozalnim seciranja za rano raka želuca sa nediferncirana Histology