Background VerfÜgung
Claudins sinn als robuste menaarbecht Proteinen bekannt, an hiren Ausdrock Muster an gastric Kriibs ass nach ëmstridden. D'Relatiounen tëscht den Ausdrock Musteren vu robuste menaarbecht Proteinen an entholl Verbreedung zu fréi gastric Kriibs ass wäit nach aus kloer. VerfÜgung
Kanu VerfÜgung
den Ausdrock Musteren vun claudin-18 an Ki-67 ze ermëttelen an fréi gastric Kriibs bei de invasiv virun a ronderëm normal gastric mucosa an der biologescher Funktioun vun claudin-18 an d'Prolifératioun an Invasioun vu Kriibs Zellen ze ermëttelen. VerfÜgung
Method VerfÜgung
Pressekonferenz-fënnef fréi gastric Kriibs lesions via Bild mucosal resection oder Bild submucosal resection geläscht sech bewäert. All gastric Kriibs lesions sech als ënnerscheet adenocarcinoma mat der japanescher Course vun Gastric Carcinoma diagnostizéiert. Ze bewäerten epithelial Prolifératioun, immunostaining mat Ki-67 ass gesuergt, an d'Etikette index war berechent. Fir den Ausdrock vun epithelial knapper menaarbecht Proteinen, immunofluorescent staining vun claudin-18 bewäerten war gesuergt. D'immunoreactivity vun claudin-18 war no der Zuel vun Kierchefënster Zellen graded. Korrelatioun Analyse gouf vun Spearman d'Geleeënheet Korrelatioun souguer gemaach gesuergt. Transfection vun claudin-18 kleng interfering RNS (siRNA) war an MKN74, engem claudin-18-positiv gastric Kriibs Zell Linn dichteg, den Effet vun claudin-18 op Prolifératioun an Invasioun vu Kriibs Zellen ze ermëttelen. VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Claudin-18 war vill verwandelt-reglementéiert gastric Kriibs Verglach zu gastric normal mucosa oder intestinal metaplasia Ëmfeld. D'Ki-67 Etikette Index vun gastric Kriibs am invasiv virun war inversely mat der claudin-18 Niveau soll, mee dass am mucosal lesion war net soll. Claudin-18 knockdown gefördert bedeitend d'Prolifératioun vu MKN74 Verglach mat Kontroll siRNA-transfected Zellen. MKN74 Invasioun geklomme mat claudin-18 siRNA transfection Verglach mat Kontroll siRNA transfection. VerfÜgung
Konklusiounen VerfÜgung
Down-Regulatioun vun claudin-18 mat der proliferative Potential am invasiv virun gastric Kriibs verbonnen ass, suggeréiert, dass et eng dréien Roll an gastric Kriibs Werdegang huet VerfÜgung
Fro:. Oshima T, Shan J, Okugawa T, Chen X, Hori K, Tomita T, et al. (2013) Down-Veruerdnung vun Claudin-18 Ass Associéierten mat der Proliferative an invasiv Potential vun Gastric Cancer op der invasiv Front. PLoS NËMMEN 8 (9): e74757. Doi: 10.1371 /journal.pone.0074757 VerfÜgung
Redakter: DunFa Peng, Barnard University Medical Center, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung
Arnaque: 28, Mee 2013; Akzeptéiert: 6 August, 2013; Publizéiert: 20. September 2013 VerfÜgung
Copyright: © 2013 Oshima et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung
Funding:. Dës Aarbecht war duerch de Ministère vun der Educatioun, Kultur, Sport, Wëssenschaft an Technologie vu Japan duerch eng Grant-zu-Hëllef fir wëssenschaftlech Fuerschung (C) 2010-2012 (Nr 22590691) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung
Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
Gastric Kriibs (GC) ass de véiert stäerkste Toast festgestallte malignancy an d'zweet Équipe gemeinsam Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang veruerteelt weltwäit [1], [2]. Intramucosal GC kann curatively vum Bild Behandlung behandelt ginn. Weideren huet d'Bild vum submucosal dissection (ESD) Technik d'Zeechen fir Bild Behandlung erweidert an en Triple resection vun intramucosal groussen Asatz an submucosal gehumpelt invasiv fréi GCs [3]. An en Triple resection vun ESD erméiglecht korrekt Diagnos Kriibs Déift [4]. VerfÜgung
knapper junctions (TJs) sinn spezialiséiert Membran Domainen am meeschte mat enger steriler Regioun vun Polarisatioun epithelial an endothelial Zellen [5]. Claudins sinn déi grouss TJ Proteinen; si besteet aus op d'mannst 27 Member Proteinen an sinn an engem Otemschwieregkeeten-spezifesch Manéier ausgedréckt [6], [7]. Si regléieren paracellular permeability a Bosnien epithelial Zell Polaritéit vun hire Zonk Funktioun [6], [8]. Eng grouss Kierper vun rezent Beweiser hindeit datt claudins sinn Schlëssel strukturell a funktionell Komponente vun TJ strands [6], [9], a si kënnen eng wichteg Roll an tumorigenesis an inflammation [10], [11]. VerfÜgung
D'gastric epithelium geet mat enger Rei vun Ännerungen an claudin Ausdrock aus normal mucosa zu intestinal metaplasia an adenocarcinoma. Obwuel GCs kuerzem vun mucin-baséiert Ausdrock séiert sech [12], [13], e claudin-baséiert GC Chronologie och proposéiert ginn [14]. Mir hunn am Rapport och dass verwandelt-Regulatioun vun claudin-3 zu der Verbreedung vun intramucosal GC Zesummenhang war [15]. Kuerzem, claudin-18 hummeren-out Mais sech gastric mucosal atrophy an paracellular H Am Moment studéieren, d'Expressioun Niveau vun claudin-18 zu GC um invasiv virun a ronderëm gastric mucosa war fir d'éischt Kéier iwwerpréift ginn, an d'Korrelatioun tëscht der claudin-18 Niveau an d'Ki-67 Etikette index (LI) zu GC bewäert huet. Den Effet vun claudin-18 op Prolifératioun an invasiveness kënschtlech VerfÜgung war och iwwerpréift. VerfÜgung kennen VerfÜgung A hannereneen Serie vun 74 Patiente mat fréi GC studéiert (Table 1). GC lesions (n = 75), datt curative waren oder ESD weiderentwéckelt huet sech bewäert. GCs mat submucosal Invasioun (n = 31) waren an dëser Etude mat abegraff. Double Cancers waren nëmmen an eng männlech Patient festgestallt. All vun de GC sech als ënnerscheet adenocarcinoma mat der japanescher Course vun Gastric Carcinoma [18] klassifizéiert. Patient Anonymitéit war agekacht. Dës Etude gouf am Aklang mat der Deklaratioun vun Helsinki gesuergt a gouf duerch den IFLA- Comité /Finanzpolitiker Kritik Verwaltungsrot vun Hyogo College vun Medezin virausgesat. D'Thema vum Awëllegung geschriwwen. VerfÜgung Immunohistochemistry VerfÜgung Echantillon sech mat 10% formalin Léisung fix an paraffin Ënnerbewosstsinn. Sektiounen waren zu 3 μm deck Géigewier an sech mat hematoxylin an eosin (HIEN) geschriwwen. Ze bewäerten epithelial Prolifératioun, goufen Echantillon mat Ki-67 monoclonal antibody (Invitrogen, Karlsbad CA, USA), gefollegt vun incubation mat biotinylated Päerd-Anti-Maus Secondaire antibody (Vecteure Laboratoiren, Burlingame, CA, USA) incubated. D'streptavidin-biotin komplex Method (Vecteure Laboratoiren) benotzt gouf de immunoreactivity ze visualiséieren. Kären sech mat hematoxylin counterstained. VerfÜgung Immunofluorescent Staining vun Junctional Proteinen VerfÜgung Kanengchen anti-claudin-18 polyclonal antibody (Invitrogen) an Cy3-conjugated Geess anti-Kanéngchen IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratoiren, West Grove , PA, USA) Secondaire antibody sech benotzt immunoreactivity ze visualiséieren. D'Spezifizitéit vun der Reaktioun war vun incubation getest mat Net-immun Kanéngchen serum (Dako, Glostrup, Dänemark). VerfÜgung Buteur vun Immunostaining vun Claudin-18 an Ki-67 VerfÜgung Immunoreactivity war Uschléi duerch zwee onofhängeg Observateuren (T.Ok., XC), an déi zwee sech blann op der clinicopathological Fonctiounen a Krankheete mat all Prouf verbonne Resultater. Non neoplastic gastric mucosa ouni intestinal metaplasia (Net-IM) a mat intestinal metaplasia (IM) a Kriibs Regioune waren évaluéieren. D'immunoreactivity vun claudin-18 gouf mat den Kriteren graded: 0, Feele vun Membran staining; 1+, manner wéi 10% vun entholl Zellen mat komplett Membran stain; 2+, 10% bis 50% vun entholl Zellen mat komplett Membran staining; Iwwer 3, méi wéi 50% bis 75% vun entholl Zellen mat komplett, staark Membran staining; an 4+, méi wéi 75% vun Zellen mat kompletten, ganz staark Membran staining. Fënnef niddereg-Muecht Felder goufen an all Regioun vun de Fäll an der heeschen stoung analyséiert war berechent. All vun de Rubriken huet zweemol Faarwen der reproducibility vun de Resultater ze confirméieren. D'Ki-67 LI war no Zielen 1000 Kriibs Zellen berechent. VerfÜgung klenger Interfering RNS (siRNA) Knockdown Experimenter VerfÜgung Fir siRNA silencing vum Mënsch claudin-18, ON-ZILER plus SMARTpool an enger auslännescher -specific Kontroll siRNA war vun Dharmacon Galaxy (Bailly, CO, USA) kaaft. D'MKN74 Zell Linn (japanesch Collection vun Research Bioresources Zell Bank, Rekorder, Japan), deen ass CLDN18 VerfÜgung -positive, war d'Auswierkunge vun claudin-18 knockdown op der Verbreedung an Invasioun Eegeschafte vun GC Zellen ze studéieren ausgewielt . Zellen sech mat 25 nm siRNA benotzt DharmaFECTTM3 (Dharmacon Galaxy) transfected. Kontroll a Kontroll siRNA Gruppen sech mat der transfection reagents ouni siRNA an der transfection reagents mat Net-spezifesch Kontroll siRNA, bzw. behandelt. Assays goufen 3 Deeg gesuergt no der MKN74 Zellen transfected goufen. VerfÜgung Zell prolifération Assay VerfÜgung Zell Prolifératioun gouf vun engem colorimetric assay vun Zell Nuetsvolen alles baséiert op de Rëss vun der tetrazolium Salz WST-1 vun Kënschtlech dehydrogenases (Takara Bio Galaxy Otsu, Japan). D'absorbance vun der formazan Hoerfaarw geformt, déi mat der Zuel vun metabolically aktiv Zellen an der Kultur deemolegt Weltbild, war um 450 nm 1 h gemooss nom reagent Schan. VerfÜgung Missiounen Assay VerfÜgung MKN74 Zell Invasioun no de Protokoll d'Produktioun; war zu 24-gutt Biocoat Matrigel Invasioun CHAMBERS (Becton Dickinson, Franklin sin, NJ, USA 8 μm) assayed. Déi ënnescht CHAMBERS sech mat RPMI1640 mat 10% FBS gefëllt, an Zellen (2 × 10 statistique Analys VerfÜgung statistique Evaluatioun Leeschtung war mat SPSS13.0 (SPSS, Chicago, IL, USA). Korrelatioun Analyse gouf vun Spearman d'Geleeënheet Korrelatioun souguer gemaach ginn (RS) gesuergt. Multiple Vergläicher mat der Kruskal-Wallis Test vun Scheffe d'Test duerno gesuergt. Single Vergläicher sech duerch de Mann-Whitney Test gesuergt. P VerfÜgung &Si besteet;. 0,05 war bedeitendst als VerfÜgung Expression vun Claudin-18 zu Gastric Mucosa an Carcinoma VerfÜgung A Ganzen 75 ënnerscheet GC Fäll sech an dëser Etude analyséiert. D'Sektiounen sech mat claudin-18, an de Niveau vun staining Kierchefënster war graded. Claudin-18 war am héijen Niveau an gastric epithelial Zellen op der enger steriler a lateral Säit Grenzen an Net-IM awer net zu IM oder ënnerscheet adenocarcinoma Zellen (Figebam. 1A) fonnt. Den Niveau vun claudin-18 huet sech wesentlech méi an Kriibs Zellen wéi an Net-IM an IM, wéi och vill manner an IM Verglach zu Net-IM (Figebam. 1B). VerfÜgung Detektioun vun Claudin-18 an GCs mat submucosal Missiounen VerfÜgung Vertriederin GC Fäll mat submucosal Invasioun gewisen, datt dichten claudin-18 staining um invasiv virun submucosal iwwerfale-Kriibs Zellen evident war, an Ki-67 LI war niddereg um lesion (Figebam. 2A ). An engem Fall mat niddereg claudin-18 staining um invasiv virun submucosal iwwerfale-Kriibs Zellen, war Ki-67 LI um lesion héich (Figebam. 2A). VerfÜgung Korrelatioun vun der Claudin-18 Level an Ki -67 LI VerfÜgung d'Ki-67 LI vun GC zu mucosa an submucosa war duerch de Prozentsaz vun Ki-67-positiv Käre alles. Fir d'Korrelatioun tëscht der Ki-67 LI an der claudin-18 Niveau festzestellen, gouf Korrelatioun Analyse gesuergt. D'mucosal Ausdrock Niveau vun claudin-18 war net méi soll mat der Ki-67 LI (RS = 0,07, P = VerfÜgung 0.60). Wéinst dem groussen der submucosal claudin-18 Ausdrock Niveau inversely mat der submucosal Ki-67 LI (RS = -0,550, P VerfÜgung = 0.0010) (Figebam. 2B) soll. VerfÜgung Effekt vun claudin-18 siRNA op d'Zouhuelen a Missiounen GC BTS VerfÜgung a GC Zell Linn, MKN74, constitutively claudin-18 ausgedréckt, an der mRNA Niveau vun claudin-18 vun siRNA géint claudin- bedeitend reduzéiert huet 18 (Figebam. 3A). Immunofluorescence staining mat claudin-18 erofgaangen och no transfection (Figebam. 3B). An claudin-18 verwandelt-reegelen MKN74, war Zell Wuesstem vill fräi (Figebam. 4A), an der Invasioun vun den Zellen war wesentlech méi (Figebam. 4B). VerfÜgung verännert Ausdrock vun claudins um submucosal invasiv virun kéint bis de Werdegang vun GC Zesummenhang ginn. Rezent Studien hindeit, datt och zu gehumpelt invasiv GC ouni lymphatic a wiere Invasioun submucosal, kéint ESD als curative Operatioun machbar ginn [19]. Mä, ass et nach net kloer wéi enge Fäll vun gehumpelt invasiv GC submucosal kann ouni weider Agrëff der ESD gefollegt ginn. Am Moment studéieren, war et fonnt, datt et eng ëmgedréit, et gesäit Korrelatioun tëscht der claudin-18 Niveau an Ki-67 komm, bei der invasiv virun submucosal invasiv GC war, an datt claudin-18 reglementéiert GC Zell Invasioun an Prolifératioun. Ki-67 immunohistochemistry gouf um Fliessband entholl Zell Prolifératioun fir mitotic Zielen Aen. Etuden hu bewisen, dass Ki-67 mat Strenz an metastatic Zellen zu malignancies soll ass [20]. An dëser Etude, war nëmmen waren /ESD-resected GC zu deem de Hinweis limitéiert ass fir d'ënnerscheet Typ vun GC studéiert. Dofir, uginn dës Donnéeën, datt d'Ki-67 Niveau bei der invasiv virun ze metastatic Zellen zu malignancies dinn huet, an dass e Verloscht vun claudin-18 war ee vun de lues vun GC aggressiveness a kéint zu der Entwécklung vun Metastasen Zesummenhang ginn, déi necessitates zousätzlech Agrëff der ESD Behandlung VerfÜgung Claudins sinn an enger Rei vun malignancies wéi GC abnormal reegelen, hepatocellular carcinoma, biliary TRACT carcinoma, Broscht Kriibs, keen Auto Zell carcinoma, an Vollek [15], [21] -. [ ,,,0],25]. De Klimawandel an claudins um junctions ass mam Verloscht vu robuste Haftung an Polaritéit vun epithelia assoziéiert. Verloscht vun Polaritéit ass mat méi bewosst Prolifératioun an epithelial-ze mesenchymal Transitioun, iwwerdeems Pann an knapper menaarbecht investéiert ofzeänneren Zell-Zell Interaktioune assoziéiert, deen zu Invasioun an Metastasen Zesummenhang sinn [23], [26], [27]. An observational Studien, Verloschter am claudin-3 an -4 hunn am GC Zellen am invasiv virun gemellt ginn a sech ze vergläichen mat Kriibs Werdegang an Metastasen fonnt [14]. Down-Regulatioun vun claudins huet och an e puer aner epithelial erhéijen gemellt ginn, dorënner Verloscht vun claudin-1 zu Broscht Kriibs [28] an colonic Kriibs [29], esou wéi och de Verloscht vun claudin-7 an Broscht Kriibs [30] an Kapp an Hals Kriibs [31]. der Invasioun vun entholl Zellen Betreffend, Ausdrock vun claudin-7 verkierzt um invasiv Fassad gin soll mat der Déift vun Invasioun an lymphatic Abannung vun squamous Zell carcinoma vun der esophagus [32] fonnt. Obwuel claudin-3 an claudin-7 Ausstralung an der submucosal invasiv virun niddreg ware wéi an mucosal lesions an eiser leschter Etude, claudin-3 an claudin-7 Niveauen am invasiv virun sech net mat der Ki-67 LI [15] soll. Wéinst dem claudin-18 op der invasiv virun war inversely mat der Ki-67 LI am Moment Etude soll. Dës Donnéeë kënnen zu de Conclusiounen Zesummenhang sinn, datt claudin-3 an claudin-4 net ze lymph Node Metastasen dinn sech [33]. Ausserdeem, kann dës observational Etuden net erklären, ob dës Ännerungen direkt entholl Invasioun an Metastasen betreffen. VerfÜgung Claudin-18 ass haaptsächlech am Mo. an haett epithelial Zellen ausgedréckt. Claudin-18a2 ass de Formulaire fir Mo an der isoforms si liicht anescht. An enger viregter Rapport, war gastric Typ claudin-18 zu GCs verluer [17]. Allerdéngs, während intestinal metaplasia, den Ausdrock Muster vun claudins Ënnerscheed schon aus, datt vun normal gastric epithelia. Den Ofbau vun claudin-18 gouf fonnt mat intestinal metaplasia am Mo. verbonne ginn [17]. Dofir, beweisen de Verloscht vun claudin-18 Ausdrock vun fortgeschratt GC [17] kann net einfach de Charakter vun de Kriibs. Och an de Prozess vun GC Werdegang, kéint den Ausdrock Niveau änneren. Fir d'Funktioun vun dëse Zil- Molekülle beschen, mer geduecht, et wier wichteg erhéijen gläichzäiteg Bühn ze iwwerpréifen, a mir évaluéiert de Niveau vun claudin-18, déi Invasioun an Metastasen beaflossen kéinten, an liicht invasiv GC lesions submucosal. Ausserdeem, gastric mucosal claudin-18 kann net nëmmen op TJs Aarbecht, well d'ausgedréckt Lokalisatioun op der Zell Uewerfläch net just bei TJs war. Weider Ermëttlungen gi waren um lateral Membran gestallt an pathophysiological TJ FAQ Ausdrock ze iwwerpréifen. VerfÜgung Fir iwwerpréifen, ob déi hire Restaurant zu claudin-18 Niveauen am submucosal invasiv erfollegräich zu der Verbreedung bäigedroen an Invasioun vu Kriibs Zellen, eng siRNA Approche war vun Ufank d'FAQ am MKN74 GC Zell Linn ze knockdown, wat fir claudin-18 positiv ass. Soumat huet de Moment studéieren fir eng éischte Kéier d'Funktioun vun claudin-18 zu GC eng genetesch Approche benotzen, an dass Verloscht vun claudin-18 ass an zwee Prolifératioun an Invasioun vun GC Zellen Équipe. Zesumme mat deenen Daten, Verloscht vun claudin-18 op der submucosal invasiv virun uginn der Acquisitioun vun méi aggressiv Charakteristiken a kéint Zell-Zell dissociation während Invasioun erlaben. Allerdéngs war eng begrenzten Dauer vun dëser Etude, datt nëmmen MKN74 iwwerpréift ginn hätt, well et déi eenzeg ënnerscheet gastric Kriibs Zell Linn déi claudin-18 ausgedréckt war esou wäit wéi mer iwwerpréift. Dofir, kann ähnlech Phänomener net mat anere gastric Kriibs Zell Linnen reproduzéiert ginn. VerfÜgung zwee weider-Regulatioun a verwandelt-Regulatioun vun claudins gemellt goufen an de Kriibs Prozess [34], [35] Équipe ze ginn. Fir d'Analyse vun der Funktioun vun claudins zu Kriibs Zellen, hunn genetesch Approche zu claudins och zu verschiddenen Kriibs Zellen gemellt ginn. Knockdown vun claudin-1 vun siRNA duerchgesat an d'inhibition vun Migratioun zu colonic Kriibs Zellen [36]. D'overexpression vun claudin-6, claudin-7, oder claudin-9 verstäerkte der invasiv Potential vun engem gastric adenocarcinoma Zell Linn [37]. Esou claudin-entschlof Prolifératioun an Invasioun kann Foussvollek Virworf, well claudins am wier epithelial junctions Équipe gin sinn bekannt. Dës kontrovers Donnéeën hindeit, datt d'Fonctioun vum claudins béid sinn subtype- an Zell Typ-spezifesch. VerfÜgung Wéi eng begrenzten Dauer vun dëser Etude, et ass nach net kloer, datt dëst claudin-18 Niveau ofgeholl um submucosal invasiv virun ass eigentlech zu Kriibs Metastasen Équipe, well et schwiereg ass de natierleche Geschicht vun Ufank GCs ze verfollegen. Allerdéngs, uginn d'Donnéeën an dëser Etude, déi eng méi niddreg claudin-18 Niveau bei der invasiv Fassad gouf mat méi proliferative Tendenz assoziéiert. Et ass néideg fir elo iwwerpréiwen, ob dës Ofsenkung vun der claudin-18 Niveau kann als metastatic an prognostic uweist nom Bild resection an enger Zukunft Etude benotzt ginn. VerfÜgung Am Resumé, huet et fir d'éischte Kéier gewisen ginn, datt claudin-18 ass heterogeneously um submucosal invasiv virun fréi GC, a verwandelt-Regulatioun vun ausgedréckt claudin-18 mat der proliferative an invasiv Potential vun GC verbonnen ass. Dës Conclusiounen weg datt claudin-18 enger Jarnéier Roll vun de Werdegang vun GC huet a kann e Kandidat uweist vun Krankheet Werdegang ginn. A claudin-18 knockdown Experimenter bestätegt dass Ennerdréckung vun junctional claudin-18 Verbreedung an Invasioun vun GC Zellen gefördert. VerfÜgung Mir soen der Madame Noriko Kamiya fir technesch Assistenz. VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Arbeschterlidder VerfÜgung