Background VerfÜgung
Casticin eent vun den Haapt aktiv Komponente vun kritt ass Fructus Viticis VerfÜgung an huet gemellt ginn op enger Rei vu Kriibs anti-carcinogenic Aktivitéit ze huele Zellen mä de preziser Mechanismus dëser Aktivitéit Basisdaten bleift onkloer. VerfÜgung spontan a Methode VerfÜgung Apoptotic Aktivitéite vun casticin (1.0 μmol /l) an Trail (25, 50 Dummeldéng /ml) eleng oder a Kombinatioun an der gastric Kriibs Zell Linnen BGC-823, SGC-7901 an MGC-803 vun der Benotzung vun enger Zell apoptosis Elisa erkennen Kit fonnt goufen, Flux cytometry (FCM) mat propidium Kaliumiodid (PI) staining an Aktivitéite vun caspase-3, - 8 a -9 vun Elisa an Rëss vun polyADP-ribose polymerase (PARP) FAQ westlech blot Analyse benotzt. Doud kenne (DR) Ausdrock Niveauen benotzt FCM Analyse a westlech blotting bewäert. 2 ', 7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA) war als Studiebäihëllefe benotzt d'Erhéijung vun reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros) Niveau vun Zellen ze moossen. Multiple Interventiounen, wéi siRNA transfection an pharmacological inhibitors benotzt goufen d'Mechanisme vun dësen Aktiounen ze entdecken. VerfÜgung Resultater VerfÜgung Subtoxic Konzentratioune vun casticin vill Rallye-entschlof cytotoxicity an apoptosis zu BGC-823 potentiated, SGC-7901 an MGC-803 Zellen. Casticin dramatesch DR5 receptor Ausdrock upregulated mee hat keng Auswierkungen op DR4 oder decoy kenne. Läsche vun DR5 vun siRNA reduzéiert bedeitend der apoptosis entschlof vun der Co-Applikatioun vun Trail an casticin. Gene silencing vun der CCAAT /enhancer bindend FAQ homologous FAQ (schneiden) an pretreatment mat salubrinal, eng endoplasmic reticulum (ËH) Stress inhibitor, attenuated casticin-entschlof DR5 receptor Ausdrock, an apoptosis an Ros Produktioun. Casticin downregulated den Ausdrock Niveau vun der Zell Iwwerliewe Proteinen cFLIP, BCL-2, XIAP, an survivin. Zousätzlech, casticin och den Ausdrock vun DR5 FAQ zu anere gastric Kriibs Zellen (SGC-7901 an MGC-803) entschlof. VerfÜgung Conclusioun /Grousses VerfÜgung Casticin verbessert Rallye-entschlof apoptosis duerch d'downregulation vun Zell Iwwerliewe Proteinen an der upregulation vun DR5 kenne duerch Aktiounen op der Ros-ER Stress-schneiden Passerelle VerfÜgung Fro:. Zhou Y, Tian L, Long L, vergläichbar M, Liu F, Cao J (2013) Casticin Potentiates Rallye-entschlof Apoptosis vun Gastric Cancer BTS duerch Endoplasmic Reticulum Stress. PLoS NËMMEN 8 (3): e58855. Doi: 10.1371 /journal.pone.0058855 VerfÜgung Redakter: Kaustubh Datta, Universitéit vun Nebraska Medical Center, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: 11 Juni, 2012; Akzeptéiert: 8 Februar 2013; Publizéiert: 11. Mäerz 2013 VerfÜgung Copyright: © 2013 Zhou et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht war vun der Project vun NSFC (Nummer 30760248), de Projet vun wessenschaftlech Fuerschung vun Hunan Province de Administration Bureau vun der traditioneller chinesescher Medezin (Nummer 2010081), de Projet vun wessenschaftlech Fuerschung vun Hunan Province, Chiffer vun Education (Nummer 10C0975), Major ënnerstëtzt Projet Element vun wessenschaftlech Fuerschung vun Hunan Province de Chiffer vun Education (Nummer 09A054) an de Projet vun wessenschaftlech Fuerschung vun Changsha City Bureau vun Science a Technology (Nummer K1104060-31). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Fructus Viticis VerfÜgung ( Manjingzi VerfÜgung ass de Chinese Numm) nämlech Uebst vun Vitex trifolia L. VerfÜgung (Famill Verbenaceae VerfÜgung) dat ass eng traditionell chinesesch Medezin als eng anti-demagogesch Agent benotzt. Casticin ass eent vun de aktiv Komponenten ofgeleet vun Fructus Viticis VerfÜgung [1]. Vill Studien hu bewisen, datt casticin enormen anti-carcinogenic Aktivitéit zu Broscht [2], cervical [3], Aarbecht [4], haett an Colon Kriibs [5], [6], souwéi am gastric Kriibs [7] kënschtlech VerfÜgung. Et huet och gemellt ginn, datt casticin de Wuesstem vun mënschlech myelogenous Leukämie Zellen bremst [8] an induces den Doud vun Leukämie Zellen vun der Aféierungs- vun entweder apoptosis oder engem mitotic Katastroph [9]. VerfÜgung Viru Kuerzem, virdrun Aarbecht vun eis Labo uginn, dass den Effet vun casticin op apoptosis vum Mënsch hepatocellular carcinoma Zellen am DR5 Passerelle Équipe ass onofhängeg vun de Status vun p53 [10]. Et ass dokumentéiert, datt d'CCAAT /enhancer bindend FAQ homologous FAQ (schneiden), och als Wuesstem verhaft an DNA Schued Gentherapie 153 (GADD153) bekannt, direkt DR5 Ausdrock duerch eng schneiden bindend Site vun de 5-Reliefsailen Regioun vun der DR5 Gentherapie reguléieren [11], [12]. Mir, an anerer, hu gemellt, datt e puer Drogen, wéi 5, 7-dimethoxyflavone a Police-celecoxib, DR5 Ausdrock duerch schneiden-ofhängeg transactivation vun der DR5 Gentherapie [13] induce - [15]. Doriwwer eraus, hunn e puer Studien eng enk Relatioun tëscht endoplasmic reticulum (ËH) Stress an DR5 Ausdrock gewisen. ËH Stress ass entschlof wann matt Proteinen am ËH lumen cumuléiert [16]. Et schéngt, datt dës Äntwert spezifesch apoptotic Weeër aktivéieren kann schwéier beschiedegt Zellen eliminéiert ginn, an déi FAQ folding Mängel kënne net [17] geléist ginn, [18]. Verschidde ËH Stress inducers, wéi MG132 [12], tunicamycin [19] an thapsigargin [20], hunn konsequent gewise gi DR5 Ausdrock op Zell Fläch ze induce. Obwuel de molekulare Mechanismen fir DR5 FAQ Ausdrock vun ËH Stress inducers mat stimuli an Zell Zorte variéieren kënnen, d'ËH Stress-inducible Transkriptiouns Faktor, Dann huet e Lien tëscht ËH Stress an DR5 gëtt. Mä, ob casticin induces DR5 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen a wa jo, d'Natur vun der molekulare Mechanismus Équipe ass onbekannt. VerfÜgung Eng rezent Etude huet bewisen, dass effektiv entholl necrosis Faktor-α-Zesummenhang apoptosis-Pinguin ligand ( Trail) -based geschéckt Therapie kann duerch upregulating DR4 an DR5 Ausdrock erreecht gin, an direkt gezielt Mitochondrie entholl Zell hir apoptosis-Pinguin Eegeschafte [21] ze stimuléieren. D'Kapazitéit vun Mitochondrie apoptosis zu Mediate ass rigoréis duerch Membere vun der BCL-2 superfamily [22] gereegelt. Suppressing anti-apoptotic FAQ Ausdrock, mat antisense RNS oder siRNA, dës Distanz zu Kriibs Zellen ze Trail [23] sensitize gouf. Als Resultat, Agenten déi esou anti-apoptotic Proteinen als survivin, bewosst FADD-wëll interleukin-1β-Ëmrechnung Aktivitéit inhibitory FAQ (cFLIP), BCL-2, an X-Hausnummeren inhibitor vun apoptosis FAQ (XIAP) sensitize kann eventuell Kriibs downregulate Zellen zu der apoptotic Auswierkunge vun Trail [23], [24]. VerfÜgung am Moment studéieren, also, do hu mer op enquêtéiert ob casticin Rallye-entschlof Kriibs Zell apoptosis potentiates, a wa jo, wéi casticin dëser potentiates Effet. Mir hu fonnt, datt casticin potentiated Rallye-entschlof apoptosis vun DR5 duerch d'Ros-ER Stress-schneiden Passerelle upregulating a vun der Expressioun vun der Zell Iwwerliewe Proteinen downregulating BCL-2, XIAP, cFLIP, an survivin zu gastric Kriibs Zellen. VerfÜgung Subtoxic Konzentratioune vun casticin verbessert selektiv Rallye-entschlof cytotoxicity zu gastric Kriibs Zellen VerfÜgung D'cytotoxicity vun casticin an Trail, eleng oder zu geschéckt, an mënschlechen gastric Kriibs Linnen iwwerpréift war BGC- 823, SGC-7901 an MGC-803, wéi déi vun der MTT assay alles. Casticin an Trail ëmmer eleng cytotoxicity vun gastric Kriibs Zellen, an e KZ-ofhängeg Manéier (Sauerdall 1A an B). Schmäerzhafte cytotoxicity (&Si besteet; 20%) war bei engem nidderegen Konzentratioun vun casticin (1.0 μmol /l, Dorënner 1A) observéiert. Traitement vun gastric Kriibs Zellen mat 25-50 Dummeldéng /ml Trail fir 24 h entschlof limitéiert cytotoxicity (&Si besteet; 20%). Allerdéngs, Co-Behandlung vun gastric Kriibs Zellen mat casticin (1.0 μmol /l) an Trail (25 Dummeldéng /ml oder 50 Dummeldéng /ml) fräi Ofstand der cytotoxic Effekter Verglach mat Behandlung mat casticin oder Trail eleng (Dorënner 1c). Well mer fonnt hunn, datt de kombinéiert Behandlung mat casticin an gastric Kriibs Zelle betraff entschlof cytotoxicity Trail nächst mir den Effet vun der Behandlung op der och mënschlech gastric mucosa epithelial Zell Linn 1 GES-iwwerpréift. Spannen, induce der Kombinatioun vun casticin an Trail rauszesichen cytotoxicity zu GES-1 Zellen (Dorënner 1D) .These Resultater weisen, datt subtoxic Konzentratioune vun casticin selektiv Mënsch gastric Kriibs Zellen sensitized zu Rallye-entschlof cytotoxicity. VerfÜgung Subtoxic Konzentratioune vun casticin gastric Kriibs Zellen ze Rallye-entschlof apoptosis VerfÜgung sensitize fir ze kucken, ob apoptosis zu Zell Wuesstem inhibition folgenden Co-Behandlung mat casticin an Trail, Équipe ass mir éischt iwwerpréift apoptosis Flux cytometric Analyse mat Erhéijunge hypodiploid Zell ze entdecken Populatiounen. D'Resultater bekannt dass den Taux vun apoptosis 3,78 ± 1,3% war, 4,69 ± 1,7% an 37,1 ± 4,9% (mengen ± Fils, n VerfÜgung = 3) fir casticin (1 μmol /l), Trail (50 Dummeldéng /ml) an casticin plus Trail, bzw. (Dorënner 2A). Sous-G1 Populatioun vun BGC-823 Zellen war vill um 12 h fräi, an erreecht 24 h der pretreatment mat 1 μmol /l casticin vun 50 NG duerno /ml Trail (Dorënner 2B). Mir sech nächsten der histone /DNA ofgesprengt Niveau vun gastric Kriibs Zell Linnen BGC-823, SGC-7901 an MGC-803 der Zell apoptosis Elisa erkennen Kit benotzt. Figur 2C illustréiert dass kombinéiert Behandlung vun casticin an Trail synergistically histone /DNA véiermol entschlof. D'histone /DNA ofgesprengt Niveau vun BGC-823 goufen der 12 h nik an erreecht 24 h folgenden Co-Behandlung mat casticin (1 μmol /l) an Trail (50 Dummeldéng /ml, Dorënner 2D). VerfÜgung Mir nächst iwwerpréift ob caspases sech tatsächlech während Aféierungs- vun apoptotic Zell Doud vun der kombinéiert Behandlung mat casticin an Trail zu gastric Kriibs Zellen ausgeléist. Traitement vun gastic Kriibs Zellen mat 1 μmol /L casticin eleng fir 24 h induce net all Aktivitéit vun caspase-3, -8 an -9. An enger Äntwert op Trail (50 Dummeldéng /ml), d'Aktivitéiten vun caspase-3, -8 an -9 änneren rauszesichen. Ee entschlof den Traitement vun casticin an Trail der Aktivatioun vun caspase-3 an -8 a liicht caspase-9 ageschalt (Dorënner 2 E, F an G). VerfÜgung Mir iwwerpréift och déi caspase speziell ausgeléist huet an Äntwert op casticin an Trail Behandlung mat caspase inhibitors, dorënner d'Pan-caspase inhibitor zVAD-fmk, déi caspase-3 inhibitor zDEVD-fmk, déi caspase-8 inhibitor zIETD-fmk an der caspase-9 inhibitor zLEHD-fmk. Als zu Dorënner 2E gewisen, zVAD-fmk, zDEVD-fmk an zIETD-fmk ofgeholl bedeitend de Niveau vun Aktivitéit vun caspase-3 vun den Traitement vun casticin an Trail entschlof, mä zLEHD-fmk no enger Dous Effekt. zVAD-fmk an zIETD-fmk kann gläichzäiteg misst caspase-8 Aktivéierung blockéieren, an zDEVD-fmk deelweis Aktivatioun vun caspase-8 gespaart; Ee no zLEHD-fmk wéineg Afloss op d'Aktivatioun Staat caspase-8 (Dorënner 2F). Weltwäit, fonnt mir dass caspase-9 gehumpelt an Zellen mat casticin an Trail awer net zu Zellen behandelt mat casticin an Trail an der Präsenz vun Z-IETD-fmk, zVAD-fmk an zLEHD-fmk (Dorënner 2G) behandelt ausgeléist gouf. Zesummen, proposéiere dësen Resultater, déi mat der Aféierung vun Trail casticin Aktivéierung caspase-8 induces Offloss vun caspase-9 Aktivéierung [10]. VerfÜgung Mir propagéieren endlech ob casticin Rallye-entschlof PARP Rëss revaloriséiert hätt a fonnt, dass verstäerkte casticin eng Erhéijung vun PARP Rëss an BGC-823 an SGC-7901 Zellen (Dorënner 2H) Rallye-entschlof. Dës Resultater staark unzeginn dat en subtoxic Konzentratioun vun casticin Rallye-entschlof apoptosis vun gastric Kriibs Zellen verbessert. VerfÜgung Casticin den Ausdrock vun DR5 zu gastric Kriibs Zellen induces VerfÜgung Apoptosis vun hepatocellular carcinoma Zellen entschlof vun casticin war an DR5 upregulation [10] Équipe. Dofir, behandelt mir BGC-823 Zellen mat casticin fir 24 h an da westlech blot Analyse gebraucht fir d'Zellen fir Trail receptor Ausdrock ënnersicht. Casticin fräi DR5 Ausdrock vun enger Konzentratioun-ofhängeg Manéier mee hu keen Effekt op DR4 Ausdrock nach DcR1 oder DcR2 Aféierungs- (Dorënner 3A). Schulung vun DR5 Ausdrock vun casticin um 6 Auer geschitt an erreecht um 24 h (Dorënner 3B). Dës Conclusiounen hindeit datt DR5 upregulation ass e Kandidat Mechanismus duerch deen casticin der apoptotic Auswierkunge vun Trail zu BGC-823 Zellen verbessert. VerfÜgung Fir erauszefannen, ob de DR op der Zell Uewerfläch vun der Aféierungs- vun apoptosis vun casticin Équipe war, der Zell-Uewerfläch Ausdrock vun DR5 an DR4 war mat Bluddungen cytometry observéiert. No Zell aussetzt casticin (1.0 μmol /l), war de Niveau vun DR5 op der Zell Uewerfläch fräi (Dorënner 3C). Allerdéngs, casticin hutt Afloss net de Niveau vun DR4 Ausdrock (Dorënner 3D). Zesummen, weg dës Resultater datt casticin den Ausdrock vun DR5 op der Zell Uewerfläch upregulates. VerfÜgung Ob upregulation vun DR5 vun casticin ass speziell un BGC-823 Zellen oder existéiert och an anere Linnen gastric Kriibs Zell, war och ze propagéieren. Casticin entschlof DR5 Ausdrock vun gastric Kriibs SGC-7901 an MGC-803 Zell Linnen, mee hat net ze iwwersinn, Effeten op hiren Ausdrock an immortalization gastric mucosa GES-1 Zell Linn (Dorënner 3). Zesumme, proposéiere dëse Conclusiounen, déi de upregulation vun DR5 vun casticin zu engem bestëmmten Typ vu gastric Kriibs Zell net spezifesch ass. VerfÜgung DR5 Aféierungs- vun casticin ass fir d'Opléisung vum Rallye-entschlof apoptosis zu BGC-823 Zellen néideg fir d'Roll vun DR5 kenne zu der Opléisung vum Rallye-entschlof apoptosis vun casticin festzestellen, déi mir siRNA spezifesch ze DR5 hiren Ausdrock ze downregulate. Transfection vun Zellen mat siRNA fir DR5 awer net mat der Kontroll siRNA reduzéiert casticin-entschlof DR5 Ausdrock. VerfÜgung Fir iwwerpréifen, ob DR5 upregulation implizéiert casticin-verstäerkte Rallye-entschlof gastric Zell apoptosis, cytometric Analyse Flux war benotzt ob ënnersicht Ophiewe vun DR5 Ausdrock vun siRNA konnt den Effet vun casticin op Rallye-entschlof apoptosis attenuate. Figur 4B weist, datt den Effet vun casticin op Rallye-entschlof apoptosis effikassten vun Zellen mat DR5 siRNA transfected ofgeholl huet, hierkommen mat Kontroll siRNA transfected Zellen sech onberéiert. Geholl zesummen, weg dës Resultater datt Aféierungs- vun DR5 fir drëm vun entholl Zellen zu den Auswierkunge vun casticin am Rallye-entschlof apoptosis kritesch ass. VerfÜgung Casticin-entschlof DR5 upregulation ass duerch Aféierungs- vun schneiden mediated zu BGC-823 Zellen VerfÜgung Dann-mediated upregulation vun DR5 huet bewisen ginn [11] - [15]; also, mir nächst propagéieren wéi dës Transkriptiouns Faktor casticin-entschlof Équipe gin kéint DR5 upregulation. Figur 5A weist dass casticin schneiden Ausdrock entschlof, déi an parallel zu der Erhéijung vun DR5 Ausdrock Priedegt. VerfÜgung Fir d'Roll vun schneiden an casticin-entschlof upregulation vun der DR Test, Gentherapie silencing vun schneiden vun siRNA benotzt gouf. Transfection mat schneiden siRNA vill casticin-entschlof DR5 upregulation (Dorënner 5B) opgeléist, iwwerdeems casticin den Ausdrock vun DR5 upregulated an Net-transfected a Kontroll-transfected (Jacquerie RNS) Zell. VerfÜgung Mir Flux cytometric Analyse nächst benotzt fir iwwerpréifen, ob d'Ennerdréckung vun schneiden vun siRNA der sensitizing Auswierkunge vun casticin op apoptosis Rallye-entschlof attenuated. Transfection mat schneiden siRNA reduzéiert bedeitend d'Effekter (vu 37,1 ± 5.3% op 13,5 ± 1,3%, mengen ± Fils, n VerfÜgung = 3) op casticin plus Rallye-entschlof apoptosis (Dorënner 5C), während Behandlung mat Kontroll siRNA hu keen Effet (Dorënner 5C). Dës Resultater weisen, datt Dann ass zu DR5 upregulation Équipe an dréit zu der sensitizing Effet vun casticin op Rallye-entschlof apoptosis an eiser experimentell Modell. VerfÜgung Casticin entschlof endoplasmic reticulum (ËH) Stress an gastric Kriibs Zellen VerfÜgung Et ass bekannt, datt ËH ËH Stress Bewaacher Proteinen (wéi GRP78 an phospho-eIF2α) induces, déi den Ausdrock vun schneiden upregulates [12], [19], [20]. Am Moment studéieren, den Effet vun casticin op den Ausdrock vun ËH Stress Bewaacher Proteinen gouf iwwerpréift. Eis Resultater weisen, datt casticin Exemplar huet all dës lues vun ËH Stress an BGC-823 Zellen (Dorënner 6A) induce. Fir erauszefannen, ob ËH Stress ass an der potentiation vun casticin op apoptosis Équipe entschlof vun Trail, salubrinal, eng inhibitor vun ËH Stress, benotzt gouf. Salubrinal (50 μmol /l) bedeitend geschützt BGC-823 Zellen aus apoptosis entschlof vun der Co-Applikatioun vun casticin an Trail (Dorënner 6B). VerfÜgung Mir getest och ob Behandlung vun BGC-823 Zellen mat der endoplasmic reticulum (ËH) Stress inducer, tunicamycin [25], hätt DR5 FAQ Niveauen elevate an Trail-entschlof apoptotic Zell Doud verbesseren. Mir hu fonnt, datt tunicamycin (3.0 μmol /L) Zäit-dependently d'FAQ Niveau vun DR5 fräi, p-eIF2α, GRP78 a schneiden, an BGC-823 Zellen (Dorënner 6C). Cotreatment mat tunicamycin (3.0 μmol /L) an Trail (50 Dummeldéng /ml) geklomme de Prozentsaz vun Zellen am Sous-G1 Phas, am Verglach mat tunicamycin oder Trail eleng (Dorënner 6D). Dës Resultater Ënnerstëtzung der Hypothes, datt ËH Stress Participatiounen am potentiating Effet vun casticin op apoptosis vun Trail entschlof. VerfÜgung Casticin-entschlof DR5 upregulation an apoptosis potentiation sinn Ros-ofhängeg vun BGC-823 Zellen VerfÜgung mir bewisen, kierzlech, datt 5, 7-dimethoxyflavone verbessert selektiv Rallye-entschlof apoptosis vun Ros ËH-Stress schneiden-mediated DR5 upregulation zu hepatocellular carcinoma Zellen ausléisen stimuléiert [15]. Mir propagéieren also ob casticin induces Ros Produktioun. 2 '7'-dichlorofluorescein diacetate (DFCH-DA) war als Studiebäihëllefe benotzt keng Erhéijung vun Ros Niveau vun Zellen ze moossen. Zäit natierlech Experimenter verroden, datt de Niveau vun Ros Ufank fräi waren um VerfÜgung 1 h, erreecht engem Héichpunkt bei 3 h an persisted fir bis 24 h der Behandlung mat 1.0 μmol /l casticin (Dorënner 7A). Casticin entschlof Ros Produktioun vun enger Konzentratioun-ofhängeg Manéier (Dorënner 7B). VerfÜgung der Relatioun tëscht Ros Generatioun a schneiden-ofhängeg DR5 Aféierungs- Fir zerwéiert, mir iwwerpréift ob Ros reguléieren casticin-entschlof Trail kenne a schneiden an der Presenz a Flichte vun N VerfÜgung -acetylcysteine (NAC), deen ass en Ralley vun Sauerstoff fräi Radikaler. Mir hunn erausfonnt, datt mat NAC pretreatment vun Zellen der casticin-entschlof upregulation vun DR5 reduzéiert a schneiden Ausdrock (Dorënner 7C). VerfÜgung Next mir propagéieren ob Ros eng Roll an der casticin-entschlof Trail potentiation spillt. Als zu Dorënner 7D gewisen, casticin Rallye-entschlof apoptosis zu BGC-823 Zellen bedeitend verstäerkt, a mat NAC pretreatment vun Zellen casticin-entschlof apoptotic Zell Doud Opléisung vun 52,4 ± 3,3% bis 8.2 ± 0,8%, (mengen ± Fils Ofstand reduzéiert, n = 3) suggeréiert datt Ros enger kritescher Roll spillt d'Auswierkunge vun casticin am Rallye-entschlof apoptosis zu mediating. VerfÜgung casticin den Ausdrock vu verschidde Zell Iwwerliewe Proteinen am BGC-823 Zellen downregulates VerfÜgung Et huet, datt vill Anti-apoptotic Proteinen gemellt ginn, wéi survivin, cFLIP, XIAP, BCL-2 an BCL-XL kann Rallye-entschlof apoptosis [25], [26] regléieren. Am Moment studéieren, ze propagéieren mir ob verschidden identifizéiert Zell Iwwerliewe Proteinen waren an der potentiating Effet vun casticin op apoptosis vun Trail entschlof Équipe. BGC-823 Zellen fir 24 h op verschiddene Konzentratioune vun casticin ausgesat goufen a iwwerpréift dann fir BCL-XL, BCL-2, survivin, XIAP, cFLIP, cIAP-1 (bewosst inhibitor vun apoptosis FAQ 1) an TRAF1 (TNF receptor-assoziéiert Faktor 1) Ausdrock. Casticin inhibited BCL-XL, BCL-2, survivin, cFLIP an XIAP Ausdrock (Dorënner 8A). D'Auswierkunge vun casticin op den Ausdrock vun BCL-XL, BCL-2, survivin, XIAP an cFLIP sech dramatesch, wann der downregulation vun cIAP-1 ass net ganz nozekommen. Dës Resultater hindeit, datt downregulation vun Zell Iwwerliewe Proteinen eent vun de Mechanismen ass d'potentiating Effet vun casticin op apoptosis vun Trail entschlof Führerschäin. VerfÜgung Mir iwwerpréift nächst ob casticin konnt den Ausdrock vu pro-apoptotic Proteinen well. Mir hu fonnt, datt casticin Trainer den Ausdrock vun Bax zu enger Konzentratioun-ofhängeg Manéier (Dorënner 8B) upregulated. Casticin fräi och Rëss vun richteg zu enger Konzentratioun-ofhängeg Manéier, wéi déi vun der Ofsenkung vun den Ausdrock vun richteg FAQ (Dorënner 8B) gewisen. Dës Conclusiounen hindeit datt casticin kann gläichzäiteg d'Ausriichtung Mitochondrie-mediated Passerelle an der extrinsic DR-entschlof Passerelle wéi et vum gekierzt pro-apoptotic FAQ Offer. VerfÜgung Am Moment Enquêtekommissioun aktivéieren, mir propagéieren der Fähegkeet vun casticin, engem polymethoxyflavone ofgeleet vun Fructus Viticis VerfÜgung, ma sécher an gastric Kriibs Zellen zu well, an eis Conclusiounen hindeit datt casticin Rallye-entschlof apoptosis zu gastric Kriibs BGC-823, SGC-7901 potentiates an MGC-803 Zellen vun (1) Pinguin DR5 Ausdrock an (2) downregulatin vun Zell Iwwerliewe Proteinen verbonne entholl Zell Resistenz zu Trail. Casticin upregulation vun DR5 schéngt duerch Aktivatioun vun der Ros-ER Stress-schneiden Passerelle (Dorënner 9) mediated gin. VerfÜgung Mir hunn dat casticin entschlof DR5 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen bewisen. Des Resultater sinn am Accord mat deene vun eise fréiere Aarbecht [10], gemellt mir datt de apoptotic Effet vun casticin zu Mënsch hepatocellular carcinoma Zellen zu DR5 upregulation implizéiert ass, mä si Adress net d'Froen wéi bis ob casticin kann Rallye-entschlof apoptosis revaloriséiert oder de Mechanismus vun drëm. Hei, hun mir gewisen, datt DR5 upregulation fir drëm vun Zellen ze Trail kritesch ass, wéi Gentherapie silencing vun der receptor (DR5) attenuated Rallye-entschlof apoptosis. Sou, DR5 up-Regulatioun kann Zellen ze Rallye-entschlof apoptosis [27] sensitize. Vill Mechanismen gewiescht fir Aféierungs- vun der DR, dorënner Ros Generatioun, p53 kopéiert, a NF-κB, DDIT3 (DNA Schued-inducible ët 3), peroxisome proliferator-ageschalt receptor-γ an MAPK Aktivéierung [27], [28] beschriwwen . Am Moment studéieren, hunn mir dass casticin entschlof schneiden an datt Gentherapie silencing vun schneiden vun siRNA den Effet vun casticin op der Aféierungs- vun Drs an op Rallye-entschlof apoptosis gespaart. Eis Conclusiounen sinn ähnlech wéi déi vun anere Studien déi uginn datt Dann zu der DR5 Promoteur Photo'en a upregulates dëser receptor Ausdrock [12], [29]. VerfÜgung Et ass bekannt, datt Dann ass eng typesch ËH Stress-reglementéiert FAQ zu ËH Stress-entschlof apoptosis Équipe [11]. Eis Opklärung vun schneiden Aféierungs- vun casticin hindeit datt casticin ËH Stress ausléisen kann an den Ausdrock Niveau vun GRP78 an eIF2α Erhéijung, déi zousätzlech Proteinen cumuléiert ginn oder während ËH Stress fräi [17]. Dofir, schéngt et wahrscheinlech, datt casticin ËH Stress induces. Salubrinal ass eng selektiv inhibitor vun ËH Stress-entschlof apoptosis [30]. D'Präsenz vun salubrinal vermeintlech gastric Kriibs Zellen aus casticin plus Rallye-entschlof apoptosis geschützt. Sou, schéngt et, datt casticin vun sensibiliséieren ËH Stress Mechanismen apoptosis potentiation induces. VerfÜgung Mir hu fonnt, datt vläicht déi wichtegst Hausnummeren Offloss Signal modulation vun Trail kenne ze casticin Ros ass. Eis Resultater weisen unequivocally datt casticin der Produktioun vun Ros entschlof, an datt Duuscht vun Ros vun der neier Étude N VerfÜgung -acetylcysteine den Effet vun casticin op der Aféierungs- vun schneiden an DR5 attenuated. Mir hu fonnt, datt Duuscht Ros och potentiation vun apoptosis Rallye-entschlof attenuated casticin. Eis Conclusiounen sinn am Accord mat deenen vun virdrun Studien gemellt benotzt sulforaphane, zerumbone an celastrol fir DR5 kopéiert. Resultater vun präsent a virdrun Studien staark weg datt Ros eng grouss Roll an der modulation vun Trail receptor DR5 [31] spillt, [32]. Eis Resultater ginn am Accord mat deene vun der viregter Aarbecht, confirméiert mir dat casticin ëmmer Heefung vun sub-G1 Zellen a fräi Ros Produktioun vun Hela, CasKi an SiHa Zell Linnen, mä net zu PBMCs [33]. Mä mir gewisen, datt casticin der GSH Inhalt reduzéiert ( P &Si besteet; 0,05 VerfÜgung), awer net de Niveau vun intracellular Ros an GmbH /PRF /5 an Hep G2 Zellen Afloss huet [10]. A plausibel Erklärung fir d'visuell Donnéeën Konflikt ass, datt et Differenzen an dach emol eppes dass Aktiounen zu verschiddene Zell Zorte regléieren. VerfÜgung Mir och bestëmmt, datt déi aner Mechanismus vun drëm d'Regulatioun vun Anti-apoptotic Proteinen bënnt. Casticin downregulated den Ausdrock elevels vun BCL-2, BCL-XL, XIAP an survivin, all vun deem ze entholl Zell Resistenz zu Trail verbonne goufen [34], [35]. Tatsächlech downregulation vun XIAP, BCL-2 an BCL-XL Ausdrock gouf dës Distanz ze entholl Zellen ze Trail [36], [37] sensitize. Wang et al. VerfÜgung (2005) [8] zougedréckt datt casticin ofgeholl Niveauen BCL-2 Ausdrock an d'Verhältnis vun BCL-2 /Bax Ausdrock am K562 Zellen downregulated. Eis Resultater sinn och am Accord mat virdrun Studien déi bewisen, dass en Ethanol Extrait vun der gedréchent zaarten Uebst vun Vitex agnus-castus VerfÜgung den Niveau vun BCL-2 ofgeholl, BCL-XL a richteg FAQ, an an der Luucht Niveau vun Bax FAQ [7]. De Rapport vum Chen et al. VerfÜgung (2011) huet viru kuerzem datt Bax upregulated war, iwwerdeems Ausdrock Niveau vun BCL-XL an XIAP vun casticin downregulated sech [33]. VerfÜgung Kobayakawa et al. confirméiert, datt mat Ofstand den Wuesstem vun KB Zellen inhibited casticin mä d'Prolifératioun vu A431 Zellen rauszesichen inhibit, déi zu der normaler Zell Linnen 3T3 Schwäizer Attilio an TIG-103 ähnlech ass [38]. Am Moment studéieren, awer mir dass apoptosis mënschlechen gastric Kriibs Zellen speziell entschlof casticin awer net zu GES-1 Zellen, obwuel de Mechanismus vun selektiv Aféierungs- vun apoptosis sech net ginn huet. Eis Conclusiounen hindeit datt casticin engem spezifeschen kann Agent anti-entholl mat niddereg toxicity. VerfÜgung Am Resumé, eis Resultater weisen, datt casticin zu der Empfindlechkeet vun entholl Zellen vun schreiwen verschidde Mechanismen ze Trail dréit. Casticin ënnerstëtzt Ufank Ros Generatioun a kontrolléiert ËH Stress induces dann DR5 upregulation duerch Aktivatioun vun schneiden déi doduercher Rallye-entschlof Aktivatioun vun DR5-entschlof an Mitochondrie-mediated apoptosis Weeër verbessert. Gläichzäiteg maaachen casticin Rallye-entschlof apoptotic Zell Doud vun inhibition vun Anti-apoptosis FAQ Ausdrock an Aktivéierung vum pro-apoptosis Proteinen. Zukunft Ënnersich soll voll de Potential vun enger Kombinatioun vun casticin an Trail Therapie unzegesin Patienten mat gastric Kriibs ze realiséieren anzeschätzen ginn. Dofir, zousätzlech Studie vun der Aktioun vun casticin zu Déiereschutz Modeller wäert néideg sinn. VerfÜgung Reagents VerfÜgung Casticin (Puritéit ≥ 98%) vun Chengdu Biopurify kaaft huet Phytochemicals Ltd. (Chengdu, China), präsent wéi giel Kristaller (molekulare Gewiicht, 374.3). Casticin war zu Police-sulfoxide (DMSO) opgeléist engem 10 mmol /l Bourse Léisung ze maachen an an enger Zell Kultur mëttel- bis déi néideg Konzentratioun direkt virun benotzen verdënntem. soluble recombinant Mënsch Trail (Pepro tech), Zell Apoptosis Elisa Detektioun Kit (Roche), 2 ", 7'-dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA;: Déi folgend reagents sech aus Hunan Clonetimes Biotech Co. Ltd. (Changsha, China) kaaft molekulare Ämter INC), salubrinal (EMD Chemikalien, Inc. San Diego, CA), N-acetylcysteine (NAC; Fläch), tunicamycin (Fläch), propidium Kaliumiodid (PI; Fläch), Caspase 3 Aktivitéit Detektioun Kit (Millipore), Caspase 8 Colorimetric Aktivitéit Assay Kit 25 (Millipore), Caspase 9 Colorimetric Aktivitéit Assay Kit (Millipore), antibody géint DR5 (ProSci INC). Antibodies géint DR4, PARP, BCL-2, Bax, Offer, survivin, schneiden, GRP78 an ATF4 sech vu Santa Cruz Déi kritt. Anti-XIAP antibody war vun Zell sécher Technology, Danvers, USA kaf. D Systemer (är ganz Famill, Punktzuel) VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung BGC-823, SGC; Caspase inhibitors, wéi zVADfmk, zDEVD-fmk, zIETD-fmk an zLEHD-fmk sech aus R &kaaft. an GES-1 Zellen aus dem Institut Zukunft zu Peking Universitéit; -7901 a MGC-803 mënschlech Zellen gastric Kriibs sech aus der China Centre fir Type Kultur Collection (Wuhan, China CCTCC) kritt. D'Zellen sech am Dulbecco d'geännert Eagle d'mëttel- (DMEM, Life Technologies, Grand Island, NY) ergänzt mat 10% An et Bovine serum (FBS) (Invitrogen), 100 U /ml penicillin an 100 U haten /ml streptomycin zu engem humidified Atmosphär mat 5% CO 2 op 37 ° C. Zellen sech mat verschiddenen Konzentratioune vun casticin oder Trail oder souwuel fir MTT assay behandelt. Casticin (1.0 μmol /l) an Trail (25, 50 Dummeldéng /ml) eleng oder zu geschéckt goufen fir BGC-823 Zellen applizéiert benotzt apoptosis z'entdecken. VerfÜgung MTT assay VerfÜgung BTS sech géint zu engem 96-Meter Plack op eng Dicht vun 0,5104 Zellen /gutt a fir 24 h, gefollegt vun Behandlung mat verschiddenen Konzentratioune vun casticin an Trail fir 24 h oder behandelt mat casticin fir 12 h, gefollegt vun Behandlung mat Trail fir aner 24 h incubated. MTT colorimetric Analyse Leeschtung war wéi virdru beschriwwen [10]. Den IC 50 Wäert, bei deem 50% vun Zell Wuesstem inhibition mat der Police sulfoxide (DMSO) Kontroll Verglach, war vun nonlinear Réckgang Analyse mat GraphPad Prism Software (San Diego, CA) berechent. VerfÜgung Flow cytometry benotzt PI staining VerfÜgung BTS sech op eng Dicht rakommen vun 4 × 10 Histone /DNA ofgesprengt Elisa VerfÜgung D'Zell apoptosis Elisa erkennen Kit apoptosis vun Zellen behandelt ze entdecken war fir mat casticin no de Protokoll d'Hiersteller. Kuerz, sech op eng Dicht vun 1 × 10 zu engem 96-Meter zappen rakommen Zellen Analys vun caspase-3, -8 an -9 Aktivitéiten VerfÜgung D'Aktivitéiten vun caspase-3, -8 an -9 sech mat der Caspase 3 Aktivitéit Detektioun Kit, den 25. an den Caspase 9 Colorimetric Aktivitéit Assay Kit Colorimetric Aktivitéit Assay Kit Caspase 8, respektiv bewäert. Kuerz, goufen Zell lysates no hir jeeweileg Behandlung mat experimentell Agenten virbereet. D'assays sech zu 96-gutt Placke standing vun 20 μg vun Zell lysates zu 100 μl vun Reaktioun gefiermt incubating (1% NP-40, 20 mm Tris-HCl (pH 7.5), 137 mm NaCl, 10% glycerol) mat 5 μM vun der caspase-3 Realitéiten AC-DEVD- p VerfÜgung NA, déi caspase-8 Realitéiten AC-IETD- p VerfÜgung NA oder der caspase-9 Realitéiten AC-LEHD- p VerfÜgung NA. Lysates ware fir 2 h op 37 ° C incubated.
Aféierung VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Fuerscher identifizéieren eng Bakterie mat Anti-SARS-CoV-2 Aktivitéit in vitro:Dolosigranulum pigrum
Gesondste Darmbakterien mat Planzbaséierter oder mediterraner Diät
DeNovix annoncéiert Gewënner vum Platin DS11 FX+ Spektrofotometer / Fluorometer
Fuerschung weist datt Probiotika hëllefe kënnen Angscht an Depressioun ze bekämpfen
Liewerfunktioun ka wichteg sinn am Risiko vun der Alzheimer Krankheet
RNA Sequencing bitt nei Abléck an de Mikrobiom
Glycyrrhizinsäure als Medikamentkandidat fir COVID-19
Therapien fir de Schued entgéintzewierken, verursaacht vum schwéieren akuten Atmungssyndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) ware wéineg a wäit tëscht, trotz Efforten fir nei Medikamenter zentdecken an scho
Infliximab kann d'Effektivitéit vun e puer COVID-19 Impfungen behënneren
Wéi vill Länner schwéier vun widderholle Welle vu schwéieren akuten Otemschwieregkeeten Syndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) Infektioun getraff ginn, mat assoziéierten héijen Taux vun der symptomatesche
Nei computational Modellermethod virausgesäit wéi Darmmikroben sech mat der Zäit veränneren
Eng nei computational Modellerungsmethod benotzt Snapshots vun deenen Aarte vu Mikroben am Darm vun enger Persoun fonnt gi fir virauszegesinn wéi dMikrobial Gemeinschaft mat der Zäit ännert. Den Tool,