Expressie van p53 induceerbare stikstofoxidesynthase en vasculaire endotheliale groeifactor gastrische precancereuze en cancereuze letsels: correlatie met klinische kenmerken

Expressie van p53 induceerbare stikstofoxidesynthase en vasculaire endotheliale groeifactor gastrische precancereuze en cancereuze letsels: correlatie met klinische kenmerken
Abstract achtergrond
De groei en metastase van tumoren afhankelijk van de ontwikkeling van een voldoende bloedtoevoer via angiogenese. Recente studies geven aan dat de induceerbare stikstofoxidesynthase (iNOS), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) en tumor suppressor p53 fundamentele play-merkers van het angiogene proces. Overexpressie van iNOS en VEGF is aangetoond dat angiogenese in tumoren. P53 onderdrukt angiogenese door down-regulering van VEGF en iNOS. De correlatie van expressie van p53, VEGF en iNOS en klinische kenmerken in maagkanker echter niet goed gekarakteriseerd.
Methods
de expressie van p53, iNOS en VEGF in maag precancereuze en cancereuze letsels en de relatie met de klinische kenmerken werd bepaald met immunohistochemie (avidine-biotine-peroxidase complex methode) op 55 willekeurig gekozen GC-patiënten en 60 klachtenvrij onderwerpen uit de massa enquête in de hoge incidentie gebied voor GC in Henan, het noorden van China.
Results Ondernemingen de positieve immunostainig tarieven voor p53, iNOS en VEGF in de maag carcinomen waren 51%, respectievelijk 44% en 51%, en goed gecorreleerd met TNM stadia, maar significant verschil tussen de groepen met een verschillende mate van maagwand niet tonen invasie diepte van GC. Een positieve immunokleuring reactie voor het iNOS-eiwit was significant gecorreleerd met lymfeklier (p = 0,019; Spearman correlatiecoëfficiënt). P53 eiwit accumulatie was hoger in de slecht-gedifferentieerde maagcarcinoom dan in goed gedifferentieerde één. In de maag biopten, werd geen positieve immunosatining waargenomen voor p53, iNOS en VEGF in het histologisch normaal weefsel en chronische oppervlakkige gastritis (CSG). Echter, p53, iNOS en VEGF positieve immunologische kleuring werd waargenomen in de weefsels met verschillende gradaties van laesies van chronische atrofische gastritis (CAG), intestinale metaplasie (IM) en dysplasie (DYS) en de positieve tarieven verhoogd met de laesie progressie CAG IM DYS. Een hoge toevallige positieve en negatieve immunokleuring tarief voor p53, iNOS en VEGF werd waargenomen zowel in biopsie monsters met CAG, IM en DYS van het symptoom-vrije onderwerpen en bij maagkanker weefsel uit de GC patiënten.
Conclusies
huidige resultaten aan dat p53 eiwit accumulatie en verhoogde expressie van iNOS en VEGF verantwoordelijk voor maagkanker en tumor agressiviteit van maagkanker kan zijn.
Maagdarmkanker (GC) is een van de meest voorkomende kwaadaardige ziekten bij China. Hoewel de GC is geweigerd in de sterfte, het blijft de belangrijkste oorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen in dit land (Parkin et al, 1992;. World Health Organization, 1994; Nomura A, 1996). Maagkanker wordt beschouwd als een meertraps progressief proces. De vroege indicator voor het vak predispositie voor GC abnormaal hyperproliferatie van maagepitheelcellen, zoals chronische atrofische gastritis (CAG), DYS en intestinale metaplasie (IM), die als precancereuze laesies van GC (overwogen U et al., 1993 , Correa P, 1992). De informatie over het mechanisme van maagkanker is zeer beperkt. Ondernemingen De groei en verspreiding van tumoren afhankelijk van de ontwikkeling van een adequate bloedtoevoer via angiogenese. Recente studies geven aan dat de induceerbare stikstofoxidesynthase (iNOS), vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) en tumor suppressor p53 fundamentele play-makers van het angiogene proces (Ambs et al, 1994;.. Jekins et al, 1995; Forrester et al, 1996;.. Chiarugi et al, 1998). iNOS is een van de isovormen van stikstofoxidesynthase dat de vorming van stikstofmonoxide, een regulator van vasculaire permeabiliteit katalyseert. VEGF is een dimeer glycoproteïne en heeft specifieke mitogene activiteit voor endotheelcellen. Over-expressie van iNOS en VEGF kunnen angiogenese in tumoren induceren. P53 onderdrukt angiogenese door down-regulering van VEGF en iNOS. Mutant p53 potentieert proteïnekinase C inductie van VEGF expressie (Zhang et al., 2000). In een tumorigeniciteit model met menselijke fibroblast cellen, het verlies van wild-type p53 en transfectie van geactiveerd ras tot verhoogde VEGF expressie (Devavrata et al., 1995). Transiënte transfectie van wild-type p53 en v-src werd gevonden om tegengestelde effecten op humane VEGF-gen promotoractiviteit in humane glioblastoma en getransformeerde humane foetale niercellen uitoefenen (Devavrata et al., 1995). Omdat wildtype p53 niet onderdrukt door hypoxia geïnduceerde transcriptie van het VEGF gen in stabiel getransfecteerde humane colorectaal carcinoom en menselijke hepato- cellen met een induceerbaar p53-oestrogeen-receptor fusieproteïne expressiesysteem (Ambs et al., 1998), dat is voorgesteld dat er behoefte is aan voorzichtigheid bij het interpreteren van p53 functie op basis van cellen die tijdelijk tot overexpressie dit eiwit. Niettemin is mutant p53 gecorreleerd met toegenomen VEGF-expressie in humane longkanker (Ambs et al., 1994) en darmkanker (Ambs et al., 1999) door immunohistochemische kleuring van chirurgische specimens. Vermeld is dat dysfunctie van de p53 /MDM-2 route te vinden in meer dan twee derde van angiosarcoma; dus mutant p53 beïnvloedt de ontwikkeling van angiosarcoma niet alleen gevolgen hebben voor groei en apoptose maar ook, door opreguleren VEGF (Chinrugi et al., 1998). Onze hypothese was dat veranderingen van p53, iNOS en VEGF expressie kan bijdragen aan maagkanker en invloed op het klinische gedrag van GC via angiogenese. De correlatie van expressie van p53, VEGF en iNOS en klinische kenmerken in maagkanker echter niet goed gekarakteriseerd. Belgique Om de veranderingen van p53 karakteriseren, iNOS en VEGF expressie in menselijke maagkanker, de onderhavige studie werd uitgevoerd om bepalen het eiwit niveau van p53, iNOS en VEGF in normale weefsels en de weefsels met verschillende ernst van de letsels van CSG, CAG, DYS, IM en GC met en zonder lymfklier metastase van chirurgisch uitgesneden menselijke GC en maag biopten van symptoom-vrije onderwerpen . De proefpersonen waren afkomstig Linzhou en de nabijgelegen provincie Huixian in de provincie Henan, de hoge incidentie gebied voor GC in het noorden van China.
Materialen en methoden
Patiënten
Het huidige onderzoek onder 55 willekeurig gekozen GC patiënten en 60 symptom- gratis onderwerpen uit de massa enquête in de hoge incidentie gebied voor GC. Vijfenvijftig GC patiënten werden uitgevoerd maagkanker chirurgie aan de Linzhou People's Hospital (n = 26) en de tweede Affiliated Hospital van Henan Medical University (n = 29) van 1996 tot 1998. Voor de operatie, geen van de patiënten kregen alle soorten van chemische of bestralingstherapie. De gemiddelde leeftijd van de patiënten was 61 jaar (30 ~ 77 jaar). Kanker specimens werden geclassificeerd op basis van TNM Fase T1 (19 patiënten, 35%), T2 (14 patiënten, 25%), T3 (12 patiënten, 22%) en T4 (10 patiënten, 18%). De tumoren werden histologisch beoordeeld als goed gedifferentieerd (15 patiënten, 27%), matig gedifferentieerd (14 patiënten, 25%) en slecht gedifferentieerde (26 patiënten, 47%). Van de 55 patiënten, 35 opgetreden lokale lymfeknoop metastasen (64%). Gastric biopsies werden genomen van 60 symptoom-vrij proefpersonen die vrijwillig deel te nemen aan een routine endoscopische screening voor slokdarmkanker en maagkanker in Huixian, China. Geen selectie proces betrokken was. Van de 60 proefpersonen onderzocht, waren er 35 mannen en 25 vrouwen. De mediane leeftijd van de patiënten was 59 jaar (28 ~ 70 jaar). De biopten werden elk genomen uit de pylorus van de maag van elk onderwerp.
Tissue verwerking
Alle chirurgisch resectiepreparaten en biopsie monsters werden gefixeerd met 10% neutrale formaline, ingebed met paraffine, en serieel coupes op 5 micrometer. De coupes werden op de histostick-gecoate glaasjes aangebracht. Vier of vijf aangrenzende linten werden verzameld voor histopathologisch onderzoek (hematoxyline en eosine kleuring) en immunohistochemische kleuring.
Histopathologisch analyse
histopathologische diagnose voor maag epithelia komt overeen met cellulaire morfologische veranderingen en weefselarchitectuur behulp eerder vastgestelde criteria (Wang , e.a., 1994;.. U, et al, 1993). In het kort, CSG: een ontsteking manifesteert zich door een milde lymfocyten en plasma-cel-infiltratie; CAG: glandular morfologie verdwenen gedeeltelijk of volledig afwezig in het slijmvlies en vervangen door bindweefsel, inter-klieren ruimte werd vooral geïnfiltreerd door plasmacellen en lymfocyten; DYS: gekenmerkt door nucleaire atypia met of zonder bouwkundige afwijkingen in de maag epitheel, maar zonder invasie; IM: bevestigd door de aanwezigheid van slijmbekercellen in maagslijmvlies; adenocarcinoom (AC). invasie van neoplastische cellen door de maag basaalmembraan
Immunohistochemische kleuring
anti-p53 antilichaam een ​​monoklonaal muis-anti-serum tegen p53 van menselijke oorsprong en herkent zowel wild-type en mutant p53 ( Ab-6, Oncogene Science, Manhasset, NY). Anti-iNOS antilichaam een ​​monoklonaal muis-anti-serum tegen het C-terminale domein van iNOS van menselijke oorsprong (sc-7271, Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA). Anti-VEGF antilichaam een ​​polyklonaal konijnen anti-serum tegen VEGF van menselijke oorsprong en herkent een aminoterminale epitoop in VEGF 121, 165, 189 en 206 (Ab-2, Oncogene Science, Manhasset, NY). Het avidine-biotine-peroxidase complex methode werd gebruikt voor de immunokleuring van p53, iNOS en VEGF. Kortom, na ontwassen inactiveren endogene peroxidase activiteit belemmert kruisreactiviteit met normale serum (Vectastain Elite Kit, Vector, Burlingame, CA), werden de coupes gedurende de nacht bij 4 □ met een verdunde oplossing van de primaire antilichamen (1: 1000 voor p53, 1: 200 voor iNOS en 1: 100 voor VEGF). Locatie van de primaire antilichamen werd bereikt door latere toepassing van een gebiotinyleerd anti-primair antilichaam, een avidine-biotine complex geconjugeerd aan mierikswortelperoxidase en diaminobenzidine (Vectastain Elite Kit, Vector, Burlingame, CA). De plaatjes werden contra-gekleurd met hematoxyline. Negatieve controles werden vastgesteld door het vervangen van het primaire antilichaam met PBS en normale muis of konijnenserum. Bekende immunokleuring-positieve objectglaasjes werden gebruikt als positieve controles.
Specifieke kleuring voor elk eiwit werd gecategoriseerd als positief of negatief gebaseerd op de aanwezigheid van bruine kleur-kleuring. Meer dan 10% cellen kleurden positief werden beoordeeld als positief. Duidelijke kleuring van kernen (p53), en cytoplasma celmembraan (VEGF en iNOS) was het criterium voor een positieve reactie (Wang et al., 1994). Alle immunokleuring objectglaasjes werden waargenomen door twee pathologen (L D L H Wang en Jiao). De glasplaatjes met andere diagnose door twee pathologen werden opnieuw (minder dan 5%) lezen, totdat de overeengekomen diagnose werd gesteld.
Statistische analyse Ondernemingen De X 2 test werd gebruikt voor het percentage monsters met positieve kleuring . Spearman correlatie testen en lineaire neiging testen werden gebruikt voor de correlatie tussen positieven en verschillende ernst van lesies (p < 0,05 werd als significant beschouwd)
Resultaten
Histopathologisch alle 55 chirurgisch weggesneden gastrische monsters werden bevestigd. adenocarcinoom. Van de 55 patiënten GC, 11 gevallen deden de invasie in submucosa, 44 met hele-spierlaag. Van de 60 onderzochte biopsie-monsters 10 werden gediagnosticeerd als normaal, 15 zoals CSG, 9 als CAG, 16 zoals IM met CAG en 10 als DYS (tabel 1) .table 1 immunoreactiviteit van p53, iNOS en VEGF in normale gastrische epitheel en het epitheel met verschillende ernst van de letsels


P53
iNOS

VEGF

No. monsters onderzocht
No. positieve vlek n (%)
No. positieve vlek n (%)
No. positieve vlek n (%)
Normāla
10

• Support Vector Machine model voor de diagnose van lymfeklier metastase bij maagkanker met multidetector computertomografie: een voorbereidende study
• Gecombineerde functies op basis van MT1-MMP expressie, CD11b + immunocyten dichtheid en LNR voorspellen klinische resultaten van de maag cancer