PLOS ONE: Impact des niveaux d'expression intratumorale de fluoropyrimidine enzymes métabolisant sur les résultats de traitement des Adjuvant S 1-thérapie dans gastrique Cancer

Résumé

Nous avons analysé les taux d'enzymes fluoropyrimidine métabolisant expression (thymidylate synthase [TS ], dihydropyrimidine déshydrogénase [DPD], thymidine phosphorylase [TP] et orotate phosphoribosyltransférase [OPRT]) pour identifier des biomarqueurs potentiels liés aux résultats du traitement dans le cancer gastrique (GC) des patients recevant adjuvant S-1 chimiothérapie. Dans cette étude, 184 patients qui ont reçu une gastrectomie curative (D2 ganglionnaire de dissection) et de l'adjuvant S-1 ont été inclus. Immunohistochimie quantitative et la réaction en chaîne par polymérase inverse ont été effectuées pour mesurer la protéine et les taux d'ARNm de la TS, DPD, TP, et OPRT dans le tissu tumoral. En analyse univariée, une faible expression de la protéine intratumorale DPD a été liée à la détérioration de la survie sans maladie à 5 ans (DFS; 78% contre 88%; P = 0,068). intratumorale faible expression DPD ARNm (1er [plus bas] quartile) a également été lié à DFS pauvres (69% contre 90% de; P < 0,001) par rapport à l'expression de DPD intratumorale élevé (2e à 4e quartiles). Dans les analyses multivariées, faible DPD protéine ou expression de l'ARNm intratumorale était liée à DFS pire (P < 0,05), indépendamment des autres variables cliniques. TS, TP, et l'expression de OPRT niveaux ne sont pas liés aux résultats du traitement. toxicités non-hématologiques sévères (grade ≥ 3) ont eu une tendance vers un développement plus fréquente chez les patients avec une faible expression de l'ARNm DPD intratumorale (29% contre 16%; P = 0,068). En conclusion, les patients GC avec une expression de DPD intratumorale élevée ne disposaient pas des résultats inférieurs suivant adjuvant S-1 thérapie par rapport à ceux avec une faible expression de DPD. Au lieu de cela, une faible expression intratumorale DPD a été lié à une mauvaise DFS

Citation:. Kim J-Y, Shin E, Kim JW, Lee HS, Lee D-W, Kim S-H, et al. (2015) Impact des niveaux d'expression intratumorale de fluoropyrimidine enzymes métabolisant sur les résultats de traitement des Adjuvant S-1 thérapie dans le cancer gastrique. PLoS ONE 10 (3): e0120324. doi: 10.1371 /journal.pone.0120324

Academic Editor: Qing Yi-Wei, Cancer Institute Duke, ÉTATS-UNIS

Reçu le 13 Novembre 2014; Accepté 20 Janvier 2015; Publié 20 Mars, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Kim et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le papier

financement:. Cette étude a été partiellement financé par des subventions de recherche du Fonds Université nationale de Séoul Bundang Hospital Research (02-2014-019) et Jeil Pharmaceutical Company (Séoul, Corée). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:. Cette étude a été financée en partie par Jeil Pharmaceutical Company sous la forme de financement de la recherche à Keun -Wook Lee. Les autres auteurs rapportent aucun conflit d'intérêts. Il n'y a pas de brevets, produits en développement, ou les produits commercialisés à déclarer. Cela ne modifie pas l'adhésion des auteurs à tous les PLOS ONE politiques sur les données et les matériaux de partage, comme détaillé en ligne dans le guide pour les auteurs.

Le cancer gastrique Introduction (GC) est le cinquième la plupart des cancers communs et la troisième cause de décès par cancer dans le monde entier. Environ la moitié des cas se produisent en Asie orientale [1]. La chirurgie est le traitement de choix dans GC localisé, et D2 dissection est considéré comme l'approche standard. En dépit de la dissection D2, la récidive est notée dans plus de 40% des patients atteints de GC à un stade avancé après la chirurgie seule [2, 3]. Récemment, deux études prospectives ont montré que la chimiothérapie adjuvante pour GC réséqué est efficace pour réduire le taux de récidive [2, 3].

S-1 est un agent oral contenant du tegafur (un promédicament du fluorouracil), gimeracil (un un inhibiteur de la dihydropyrimidine déshydrogénase [DPD]) et oxonate de potassium (un inhibiteur de 5-fluorouracile [5-FU] dans le tractus gastro-intestinal) [4]. La chimiothérapie adjuvante de première instance de TS-1 pour le cancer gastrique (ACTS-GC) a révélé que l'adjuvant S-1 chimiothérapie pour 1 année réduit la récidive tumorale chez les patients ayant une résection curative GC [3]; le taux de survie sans récidive à 5 ans était de 65,4% dans l'adjuvant S-1 groupe et 53,1% dans le groupe chirurgie seule (risque relatif [RR], 0,653; 95% intervalle de confiance [IC], 0,537 à 0,793). Sur la base de ces résultats, l'adjuvant S-1 chimiothérapie est actuellement largement utilisé pour prévenir la rechute GC dans les pays d'Asie orientale [5-7].

thymidylate synthase (TS), la thymidine phosphorylase (TP), orotate phosphoribosyltransférase (OPRT ), et DPD sont liés au métabolisme fluoropyrimidine. Plusieurs études ont suggéré que les niveaux de ces enzymes fluoropyrimidine métabolisant expression ont des associations avec des résultats de survie chez les patients recevant une chimiothérapie GC métastatiques palliatifs-S-1 [8-10]. Cependant, ces études ont montré des résultats contradictoires sur la valeur prédictive de ces enzymes dans la chimiothérapie palliative à base de S-1, qui peuvent être dues à des petits nombres de patients et les différences dans S-1 contenant les schémas utilisés parmi les études. Jusqu'à présent, les études sur la relation entre les niveaux d'expression d'enzymes métabolisant fluoropyrimidine et les résultats de l'adjuvant S-1 dans le traitement GC ont été rares. Par conséquent, nous avons analysé les profils protéiques et d'expression de l'ARNm des enzymes fluoropyrimidine métabolisant (TS, DPD, TP et OPRT) pour identifier les marqueurs liés aux résultats du traitement adjuvant S-1 la chimiothérapie chez les patients du GC.

Matériel et méthodes

population Patient

L'utilisation d'un cancer de la GC de cohorte de patients qui a été prospectivement maintenu à l'hôpital Université nationale de Séoul Bundang [5, 6], cette étude a été rétrospectivement conçu. Dans la cohorte prospective, tous les patients ont subi une gastrectomie curative avec D2 dissection et ont été traités avec adjuvant S-1 chimiothérapie. Les patients répondaient aux critères d'admissibilité suivants: jonction gastro-oesophagienne histologiquement confirmé ou adénocarcinome gastrique; stade pathologique II-III en utilisant le American Joint Committee on Cancer (AJCC, 7 ^{e édition); Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) de statut de performance (PS) 0-2; et osseuse adéquate la fonction hépatique osseuse, rénale, et. Deux patients atteints de stade IB et les facteurs de risque supplémentaires (par exemple, N2 métastase ganglionnaire par la classification de la mise en scène japonaise [11]) ont également été inclus.}

Les patients qui ont subi une gastrectomie entre Novembre 2006 et Septembre 2010 ont été inscrits (N = 184 ). Pour cette étude, écrit le consentement éclairé ont été reçues de patients pour l'utilisation de tissus tumoraux archivés et les données cliniques. Le conseil de l'Hôpital Bundang Université nationale de Séoul Institutional Review a approuvé cette étude. (Nombre IRB: B-1205 /154-006)

Traitement et toxicité évaluation

S-1 a été administré par voie orale pour 4 semaines, suivies de 2 semaines de repos. La durée de S-1 traitement a été prévu pour être 1 an s'il n'y avait aucune preuve de récidive de la tumeur, les effets indésirables inacceptables, ou le refus du patient. La posologie initiale et la modification de S-1 dose au cours du traitement ont été déterminés comme dans les rapports précédents [5, 6]. La toxicité a été évaluée selon les critères du National Cancer Institute Common Toxicity (version 3.0).

L'intensité de dose (DI) a été définie comme le rapport de la dose totale S-1 par mètre carré du patient, divisé par le S-1 durée totale de traitement. L'intensité de dose relative (RDI) a été calculé en divisant le DI reçu par le DI prévu.

immunohistochimie (IHC)

diapositives hématoxyline et l'éosine Auparavant colorées ont été examinées, et un représentant formaline fixe paraffine (FFPE) bloc d'archivage a été sélectionné. Tissue blocs de réseau ont été préparés comme décrit dans notre précédente étude (SuperBiochips Laboratories, Séoul, Corée) [8]. Les anticorps primaires suivants ont été utilisés: TS anti-humain (clone TS106, monoclonal de souris, Thermo Scientific; dilution 1:70), OPRT anti-humain (clone 2F5, monoclonal de souris, Abnova; dilution 1: 1000), TP antihumain (44C clone P-GF, monoclonal de souris, Thermo Scientific;. 1: 500 dilution) et DPD anti-humain (clone ERP8811; anticorps monoclonal de lapin; Abcam; dilution 1: 500). liaison de l'anticorps a été détecté en utilisant l'avidine-biotine-peroxydase complexe (Elite ABC Universal kit PK-6200; Vectastain, Burlingame, CA, USA) pendant 10 minutes et la solution diaminobenzidine tétrachlorhydrate (Kit HK 153-5K; Biogenex, San Ramon, Californie, ETATS-UNIS). Les sections ont été colorées avec 0,1% de l'hématoxyline, déshydratées et montées. La coloration a été examiné par deux chercheurs indépendants en aveugle à l'issue clinique. intensités Coloration ont été semi-quantitativement mesurées à un grossissement de 200 × et classés comme négatifs (score = 0), faible (score = 1), modérée (score = 2) ou forte (score = 3). Le pourcentage de cellules immunoréactives a également été évaluée. Le score IHC a été calculé comme suit:. Le score de l'intensité de coloration a été multiplié par le pourcentage de la zone tachée de l'échantillon de la tumeur

transcription inverse réaction en chaîne par polymérase quantitative (qRT-PCR)

Le les niveaux de gènes d'expression d'ARNm ont été quantifiés par qRT-PCR. ARN (500 ng) à partir de tissus FFPE a été soumise à une synthèse d'ADNc en utilisant l'amfiRivert Platinum cDNA Synthesis Master Mix (GenDEPOT). Sept gènes (quatre gènes de la voie fluoropyrimidine et trois gènes de référence) ont été pré-amplifiée à une dilution finale de 0,05 × concentration d'essai Taqman original (Applied Biosystems par Life Technologies). Les conditions thermo-cyclage sont les suivantes: 1 cycle de 95 ° C (10 min), suivie de 14 cycles de 95 ° C (15 s) et 60 ° C (4 min). À la suite de l'amplification de cible, les échantillons ont été dilués à 1: 5 avec un tampon d'ADN en suspension, puis qPCR a été effectuée sur Fluidigm 48,48 dynamique des tableaux en utilisant le système BioMark HD selon le protocole du fabricant. Les échantillons ont été réalisés en trois exemplaires. Trois gènes de référence (ACTB, GAPDH, et FTL) ont été utilisés pour la normalisation des données d'expression génique. les gènes de référence ont été sélectionnés en fonction de leur faible variabilité d'expression de nos données de puces à ADN précédentes (données non présentées). Pour la normalisation des données qRT-PCR, seuil moyen de cycle (Ct) valeurs ont été converties en valeurs d'expression relative (-ΔCt) en soustrayant la moyenne des gènes de référence, où chaque unité reflète une augmentation de 2 fois de l'expression. Les sondes utilisées sont les suivantes: TS (Hs00426586_m1), OPRT (Hs00923517_m1), TP (Hs01034319_g1), DPD (Hs00559279_m1), ACTB (Hs01060665_g1), GAPDH (Hs02758991_g1) et FTL (Hs00830226_gH); des informations plus détaillées sont disponibles sur http://www.appliedbiosystems.com (Applied Biosystems par Life Technologies).

L'analyse statistique

Les différences dans les caractéristiques cliniques ont été comparées à l'aide de tests-c 2, t
-Tests, ou Mann-Whitney test U de. c 2 tests ont été utilisés pour comparer les distributions de fréquence des toxicités liées au S-1 entre les différents groupes. La survie sans maladie (DFS) a été calculée à partir de la date de la chirurgie au moment de la première récidive ou de décès de toute cause. La survie globale (OS) a été défini comme étant l'intervalle entre la chirurgie et la mort de toute cause. La méthode de Kaplan-Meier a été utilisée pour analyser DFS ou OS. Univariée et multivariée des analyses sur DFS ou OS ont été effectuées en utilisant les tests du log-rank et des tests risques proportionnels de régression de Cox, respectivement. Les valeurs P recto-verso de < 0,05 ont été considérées comme significatives. Toutes les analyses de données ont été effectuées en utilisant IBM SPSS Statistics 21 pour Windows (IBM Corp., Armonk, NY, USA).

Résultats de

caractéristiques et livraison de S-1 chimiothérapie patients

les caractéristiques de base des 184 patients sont présentés dans le tableau 1. L'âge médian était de 57 ans (extrêmes, 30-79 ans). gastrectomie laparoscopique a été réalisée chez 50% des patients, et la proportion de patients présentant une maladie de stade III était de 55%. La durée médiane de suivi était de 47,0 mois (extrêmes, 3.5-81.8 mois). Au cours du suivi, la récurrence de la tumeur et la mort ont été confirmés dans 29 (16%) et 22 (12%) des cas, respectivement. Cinq ans DFS et OS taux chez tous les patients était de 83% (Fig. 1 (A)) et 87%, respectivement. Comme la durée de suivi n'a pas été suffisante pour une analyse plus poussée du système d'exploitation, nous avons effectué une analyse de survie seulement pour DFS. DFS résultats en fonction des variables cliniques sont présentés dans le Tableau 1, Fig. 1 (B), et S1 Fig.

Prévues de traitement de 1 an avec S-1 a été achevée en 139 patients (76%), et le nombre moyen de livrées S-1 cycles de chimiothérapie était de 7,4 (95% CI, 7,0-7,8). La moyenne et la médiane AQR pendant toutes les S-1 cycles de thérapie était de 77% (IC 95%, 73-81) et 88% (intervalle, 4-100), respectivement. S-1 traitement était globalement acceptable, et les profils de toxicité sont présentés dans le tableau S1

Impact des niveaux d'enzymes fluoropyrimidine métabolisant expression sur le résultat du traitement:. Univariée analyses

Sur les 184 patients, IHC a réussi à 183 patients. Nous avons fixé la valeur médiane des scores IHC pour chaque protéine (TS, OPRT, TP et DPD) comme la valeur de coupure de diviser les patients en deux groupes. Alors que les niveaux de quatre protéines d'expression ne sont pas significativement liées à DFS (tableau 2), le faible niveau d'expression de DPD (score IHC < 10 [valeur seuil; médiane]) ont montré une tendance à la pire 5 ans DFS (78% vs . 88%, p = 0,068;. La figure 2 (A)). En outre, les patients avec une expression plus élevée de TP (score IHC > 0 [valeur de coupure; médiane]) avaient tendance à avoir une durée plus courte DFS que ceux avec aucune expression de TP (78% contre 87%; P = 0,094). Les niveaux de TS et OPRT expression avait pas d'association avec des résultats DFS (P = 0,914 et 0,109, respectivement).

essais qRT-PCR ont été menées avec succès dans 179 patients. Comme dans les tests IHC, une valeur médiane de niveaux des gènes individuels d'expression de l'ARNm a été défini comme une valeur de coupure pour les groupes. Parmi les quatre gènes, seul le niveau d'expression de l'ARNm DPD a montré une tendance d'avoir un rapport aux résultats DFS; les patients atteints d'expression de l'ARNm inférieur de DPD avaient DFS plus pauvres que ceux qui ont une expression plus élevée de DPD (P = 0,067;. la figure 2 (B)). les niveaux des TS, OPRT, et les gènes TP expression d'ARNm ne sont pas liés à DFS (tableau 2). Ensuite, nous avons classé les niveaux d'expression d'ARNm de DPD en quartiles afin de déterminer si une relation dose-réponse existait entre les niveaux d'expression des gènes de DPD et les résultats de survie. Fait intéressant, seul le groupe de patients dans le plus bas gène DPD expression quartile montré inférieure DFS à d'autres quartiles, mais pas de différence dans les taux DFS a été observée entre les 2 ^{e, 3 e, et 4 e quartiles ( Fig. 2 (C)). Par conséquent, nous avons classé les patients en deux groupes en utilisant cette valeur de coupure (1 er quartile [plus bas DPD expression de l'ARNm] par rapport aux autres quartiles [plus l'expression DPD ARNm y compris le e, 3 e 2, et 4 e quartiles]) dans les analyses suivantes (figure 2 (D.); tableau 2)}

impact des niveaux d'enzymes fluoropyrimidine métabolisant expression sur le résultat du traitement:. multivariée analyses

Parmi les variables cliniques, les facteurs qui ont montré P < 0,10 dans les analyses pour univariée DFS (âge [< 60 ans par rapport aux 60-69 ans vs ≥ 70 ans; P = 0,003], méthode chirurgicale [laparoscopique vs. ouverte; P = 0,082], envahissement ganglionnaire [pas contre oui; P = 0,068], invasion veineuse [no vs. oui; P = 0,045], et le stade [IB /II vs III; P = 0,012]; tableau 1) ont été inclus dans les analyses multivariées. Parmi les protéines ou les gènes liés au métabolisme fluoropyrimidine, ceux avec P < 0,10 dans les analyses univariées pour DFS ont également été incorporés dans les analyses multivariées (tableau 2). Comme le montre le tableau 3, le faible niveau d'expression de la protéine DPD (score IHC < 10; HR, 2,32; IC 95%, 1,08 à 4,96; P = 0,030) et l'expression du gène DPD faible (1 ^{er quartile [quartile inférieur]; HR, 3,67; IC 95%, 1,67 à 8,03; P = 0,001) étaient liés à des pauvres DFS, indépendamment des autres variables cliniques. L'âge avancé (≥ 70 ans) et stade supérieur ont également été associés indépendamment à un mauvais DFS.}

Relation entre le niveau d'expression de DPD et de tolérance à S-1 thérapie

Une corrélation positive entre les scores DPD IHC et les niveaux d'expression d'ARNm a été observée (P = 0,022), bien que les gammes de scores IHC dans les deux groupes (1 ^{er quartile de DPD expression de l'ARNm [DPD IHC score: médiane, 0; gamme, 0-200] vs. autre quartiles [DPD IHC score: médiane, 10; gamme, 0-300]) se chevauchent dans une proportion considérable de cas (S2) Fig}

Aucune différence dans S-1 RDI ou de la fréquence de toxicité (hématologique ou non. hématologique) à partir de S-1 traitement ont été observées entre les patients avec une faible (< 10) et élevée (≥ 10) DPD IHC scores [Table A en S2 Tableau]. Cependant, par rapport aux patients ayant des niveaux DPD ARNm supérieurs intratumoral (2 ^{e à 4 e quartiles), les patients ayant les plus faibles niveaux DPD ARNm (1 er quartile) a montré une tendance de développement sévère non-hématologique toxicités (≥ grade 3) plus fréquemment, bien que statistiquement non significatif (29% contre 16%; P = 0,068); Toutefois, l'incidence de grade ≥ 3 toxicités hématologiques ne différait pas entre les deux groupes. En outre, bien que statistiquement non significative, la proportion de patients qui ont maintenu-1 S RDI ≥ valeur médiane (87,8%) au cours de la chimiothérapie adjuvante a été plus faible chez les patients dans le quartile le plus bas d'expression DPD ARNm que chez les patients dans d'autres quartiles (40% contre 54%; P = 0,111;. Tableau B dans S2 Tableau)}

Discussion

dans cette étude, nous avons exploré la relation entre les niveaux d'expression intratumorale d'enzymes métabolisant fluoropyrimidine et les résultats de survie de l'adjuvant S -1 chimiothérapie. Une expression élevée de DPD intratumorale n'a pas été lié aux résultats de survie inférieurs; à la place, une faible expression de DPD a été associée à DFS défavorable chez les patients traités avec GC adjuvant S-1therapy. Les niveaux d'autres enzymes d'expression ne sont pas corrélés à la DFS. Dans notre étude, les taux d'enzymes fluoropyrimidine métabolisant expression ont été évalués par deux méthodes, à savoir IHC et qRT-PCR.

DPD est l'enzyme initiale et de limitation de vitesse dans le catabolisme du 5-FU. Plusieurs études précliniques ont montré que le niveau inférieur de la DPD intratumorale expression ou l'activité de l'ARNm est associée à une meilleure réponse au 5-FU et que le niveau de la DPD plus élevée dans les cellules tumorales est liée à la résistance du 5-FU [12 à 14]. Des résultats similaires ont également été observées chez les patients atteints de diverses tumeurs solides, y compris GC [14-22]. L'efficacité de la chimiothérapie fluoropyrimidine chez les patients du GC a été montré pour dépendre du niveau d'expression de DPD intratumoral, soit en soins palliatifs [22], adjuvant [19-21], ou néoadjuvant [16-18] paramètres.

Parmi les trois composants comprenant S-1, le gimeracil est utilisé comme inhibiteur de DPD pour maintenir les concentrations prolongées 5-FU dans les tissus de tumeurs [23]. Bien que certaines études ont rapporté que l'efficacité du S-1 est également affectée par les niveaux d'expression de DPD intratumoral comme d'autres fluoropyrimidines [24, 25], la majorité des études ont montré de façon constante que l'effet de S-1 thérapie est pas influencée par intratumorale DPD les niveaux d'expression, notamment dans les GC [8-10, 19, 26-29]. Des études antérieures ont suggéré que S-1 est plus efficace que le 5-FU ou d'autres fluoropyrimidines dans les tumeurs présentant une expression élevée DPD [19, 25, 28, 29]. La relation entre l'efficacité de la chimiothérapie et les taux d'enzymes fluoropyrimidine métabolisant expression contenant S-1-a été étudiée dans GC [8-10]; Cependant, la plupart de ces études comprenaient un petit nombre de patients et ont été effectuées sur des patients du GC métastatique qui ont reçu divers régimes contenant S-1, comme traitement palliatif. Par conséquent, les résultats précédents ne peuvent être généralisés aux patients du GC qui subissent une chirurgie curative et de l'adjuvant S-1 chimiothérapie

Dans notre étude, les résultats du traitement global de D2 gastrectomie suivie d'adjuvant S-1 chimiothérapie était excellent. 5 ans taux DFS de patients de stade IB /II et III étaient de 91% et 77%, respectivement (tableau 1). Parmi les quatre enzymes analysées (TS, DPD, OPRT, et TP), seul le niveau d'expression de DPD est liée à l'issue du traitement de la S-1. la protéine ou de l'ARNm de DPD surexpression ne sont pas corrélés avec la DSV inférieure chez les patients recevant un adjuvant GC S-1 thérapie; cette observation est compatible avec les rapports antérieurs que S-1 est efficace dans les tumeurs à haut intratumorale DPD [19, 25, 29, 30].

Il est intéressant, dans notre cohorte de patients, une faible expression de DPD intratumorale était liée à pire DFS, par rapport à l'expression élevée de DPD. Cette observation était inattendu et déroutant parce que, jusqu'à ce que nous avons finalisé analyse les données de cette étude, il n'y avait pas eu d'étude sur l'association entre les enzymes et les résultats de l'adjuvant S-1 la chimiothérapie chez les patients du GC fluoropyrimidine-métaboliser. Cependant, presque au même moment où nous avons présenté les résultats de cette étude lors d'une réunion universitaire [31], une étude avec la presque même conception avec la nôtre a été rapporté par les enquêteurs ACTS-GC [32]. Dans cette étude, les enquêteurs ACTS-GC ont analysé l'expression intratumorale de 4 gènes (TS, DPD, OPRT et TP) chez les patients inscrits à l'ACTS-GC et étudié leurs rôles possibles en tant que biomarqueurs pour les résultats du traitement. Comme nous, les enquêteurs ACTS-GC ont également suggéré que la faible expression DPD ARNm dans les tumeurs est liée à DFS défavorable; chez les patients du GC qui avaient reçu une chimiothérapie adjuvante de S-1 (N = 401), les patients ayant une faible intratumorale expression DPD ARNm avaient inférieure de 5 ans DFS (60,8% vs 70,8%; P = 0,039) et OS (66,8% contre 78,0 %; P = 0,015) que ceux ayant un niveau d'expression élevé de DPD [32]. Par conséquent, les études à la fois du groupe ACTS-GC et nos enquêteurs ont atteint le même résultat de façon inattendue des cohortes indépendantes de patients.

Comme seuls les patients qui avaient reçu un traitement S-1 ont été inclus dans cette étude, il reste incertain si le niveau d'expression intratumorale DPD est un marqueur prédictif ou de pronostic chez les patients recevant un adjuvant GC S-1 thérapie. Cependant, comme l'ACTS-GC avait le groupe de patients qui avaient reçu la chirurgie seule, sans chimiothérapie adjuvante de contrôle, les enquêteurs ACTS-GC a montré que le bénéfice de l'adjuvant S-1 thérapie est principalement limitée aux patients du GC avec intratumorale forte expression DPD ARNm [ ,,,0],chirurgie suivie par adjuvant S-1 thérapie vs chirurgie seule; HR sur OS, 0,52 (IC 95%; 0,38 au 0,72)]; En revanche, chez les patients présentant une faible expression de DPD intratumorale, un adjuvant S-1 thérapie semble avoir moins d'avantages [chirurgie suivie d'un adjuvant S-1 par rapport à la chirurgie seule thérapie; HR sur OS, 0,85 (IC 95%; 0,56 à 1,28)] [32]. Par conséquent, compte tenu des résultats de l'étude des deux enquêteurs ACTS-GC et nous, nous suggérons prudemment que l'expression intratumorale DPD ARNm pourrait être un biomarqueur prédictif de l'efficacité de l'adjuvant S-1 la chimiothérapie chez les patients atteints de GC après D2 gastrectomie. Cependant, notre suggestion doit encore être étudié dans les futurs essais prospectifs.

Si le niveau d'expression de DPD intratumorale est un biomarqueur prédictif de l'adjuvant S-1 la chimiothérapie chez les patients du GC, les raisons sous-jacentes à faible expression de DPD intratumorale confère inférieure DFS résultats sur les patients du GC recevant adjuvant S-1 traitement nécessitera une enquête plus approfondie. Tout d'abord, bien que les auteurs du groupe ACTS-GC n'a pas enquêté sur l'association entre les profils de toxicité ou ANC de S-1 et le niveau d'expression de DPD intratumorale [32], nous avons analysé les différences de fréquences de toxicité et RDI de S-1 selon les intratumoral niveaux d'expression DPD. Nous ne pouvions pas trouver des différences dans les toxicités et RDI entre les patients DPD-haut et DPD-bas par des notes IHC. Cependant, bien que statistiquement non significatifs, les patients ayant les plus faibles niveaux d'ARNm de DPD intratumoral (1 ^{er quartile) ont montré une tendance à toxicités plus non hématologique de grade ≥ 3 (29% contre 16%; P = 0,068) et semblait avoir une tolérance inférieure à S-1 que les patients avec des niveaux plus élevés d'ARNm DPD (S2) Tableau. Dans une précédente étude [5], nous avons signalé que RDI de S-1 est liée à la DFS des patients GC recevant le traitement adjuvant de S-1 et que la cause la plus fréquente de S-1 réduction de la dose était entérocolite, l'une des plus courantes toxicités non-hématologiques développés au cours de l'adjuvant S-1 thérapie. Bien que si les niveaux d'expression de DPD corrèlent entre les cellules tumorales et les cellules normales de l'hôte reste inconnue, Bertino et al. [15] ont rapporté que la faible expression de DPD intratumorale peut être associée à une toxicité accrue de la capécitabine chez les patients atteints de cancer du poumon. Cui et al. [33] ont rapporté que la concentration sérique d'expression de DPD est associée au développement de la toxicité d'une chimiothérapie à base de S-1 chez les patients atteints de GC métastatiques. Pris ensemble, nous émettons l'hypothèse que les niveaux d'expression de DPD intratumoral peuvent refléter les niveaux globaux DPD dans les tissus normaux de l'hôte, ce qui indique que la faible expression de DPD intratumorale peut être liée à un développement plus fréquent de S-1 toxicités et peut diminuer la tolérance du patient à S-1. Cette hypothèse peut expliquer la DFS inférieure chez les patients présentant une faible expression de DPD intratumorale, par rapport aux patients présentant une expression élevée de DPD, lors de la réception adjuvant S-1 chimiothérapie. Deuxièmement, haute intratumorale DPD en soi
peut conférer une plus grande sensibilité à S-1 à faible DPD intratumorale chez les patients du GC. Shimizu et al. a rapporté que le taux de réponse était significativement plus élevée chez les patients gastriques de carcinome squirrheux métastatiques avec des tumeurs DPD positif que dans les tumeurs DPD-négatives lorsqu'ils sont traités avec une chimiothérapie à base de S-1 [29]. Toutes les suggestions ci-dessus sont génératrice d'hypothèses, et d'autres études sont nécessaires.}

En outre, plusieurs aspects doivent encore être élucidés. La normalisation des méthodes qRT-PCR et l'optimisation d'un point de coupure pour les niveaux DPD ARNm dans des échantillons de tumeurs FFPE doivent être menées. Les enquêteurs du groupe ACTS-GC utilisé le tertile le plus bas des niveaux intratumorales DPD ARNm en tant que point de coupure [32]. Dans notre étude, le quartile le plus bas a été utilisé comme une coupure. Lorsque nous avons effectué une autre analyse en utilisant le tertile le plus bas des niveaux intratumorales DPD comme un cut-off, l'impact des niveaux d'expression DPD sur la prévision DFS était toujours valable dans le univariée (S3 Fig) et des analyses multivariées (S3 Tableau). Le point de coupure le plus approprié des niveaux intratumorales d'expression DPD ARNm pour prédire les résultats du traitement adjuvant du S-1 thérapie doit être validée dans les études futures. En outre, DPD niveaux d'expression de protéines intratumoral mesurées par les scores IHC (intensité de coloration, multiplié par le pourcentage de la zone tachée) ont également été liés à différents résultats du traitement dans notre étude. Cependant, dans l'étude par le groupe ACTS-GC, où les niveaux d'expression de protéines ont été mesurées par l'intensité de coloration uniquement, les auteurs ne pouvaient pas trouver une association entre les résultats IHC et les résultats du traitement [32]. En outre, les chercheurs LOIS-GC ont indiqué que les niveaux intratumoraux d'expression d'ARNm de TS ont également été prédictif de l'efficacité de l'adjuvant S-1 chimiothérapie. Cependant, dans notre étude, les niveaux de TS-si elle a été mesurée par IHC ou qRT-PCR ne sont pas liés aux résultats de survie de l'adjuvant S-1 thérapie expression. Par conséquent, ces différentes observations entre les enquêteurs ACTS-GC et nous (l'utilité de DPD niveaux d'expression de protéines intratumoral mesurées par les niveaux d'expression IHC et TS ARNm pour prédire les résultats du traitement) doivent encore être étudiés à l'avenir.

En conclusion, lors de la réception adjuvant S-1 thérapie, les patients avec GC expression DPD intratumorale élevée ne disposaient pas des résultats inférieurs à ceux avec une faible expression de DPD. Au lieu de cela, une faible ARNm ou l'expression des protéines de DPD a été lié à une mauvaise DFS. L'administration de doses plus faibles de S-1 en raison de toxicités aurait pu conduire à cette inattendue inférieure les résultats du traitement chez les patients ayant des niveaux DPD bas. Les niveaux d'expression d'autres enzymes de fluoropyrimidine-métaboliser (TS, OPRT et TP) ne sont pas liées aux résultats de survie de l'adjuvant S-1 traitement. Les futures grandes études prospectives sur les biomarqueurs prédictifs de l'efficacité de l'adjuvant S-1 traitement sont garantis.

Informations complémentaires
S1 Fig. les résultats de survie selon les étapes: (a) La survie sans maladie et (B) de la survie globale
doi:. 10.1371 /journal.pone.0120324.s001
(DOCX)
S2 Fig. Répartition de (A) IHC scores de niveaux de DPD (B) l'expression de l'ARNm DPD et
(C) La corrélation entre les scores IHC et les niveaux d'expression d'ARNm de DPD
doi:.. 10.1371 /journal.pone.0120324. s002
(DOCX)
S3 Fig. Les courbes de survie sans maladie selon les niveaux intratumorales d'expression de l'ARNm de DPD (lorsque les patients sont classés en tertiles)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0120324.s003
(DOCX)
S1 Table. Toxicités développés au cours de S-1 chimiothérapie (par patient)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0120324.s004
(DOCX)
S2 Table. La comparaison de la livraison de S-1 et toxicités développés entre les groupes d'expression intratumorale DPD-bas et DPD haute [(A) par les scores IHC et (B) par des niveaux d'expression de l'ARNm]
doi:. 10.1371 /journal.pone .0120324.s005
(DOCX)
S3 Tableau. . L'impact des niveaux d'expression DPD ARNm intratumoral sur la survie sans maladie
Les niveaux d'expression d'ARNm DPD ont été divisés en 3 groupes (tertiles)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0120324.s006
(DOCX )

Remerciements

Cet article a été présenté, en partie, comme une présentation par affiches à 2014 ESMO (European Society for Medical Oncology) Congrès, Madrid, Espagne (26-30 Septembre 2014).

• PLOS ONE: LAPTM4B-35, un cancer liés Gene, est associée à un mauvais pronostic aux stades TNM I-III gastriques patients atteints du cancer
• PLOS ONE: surexpression de eucaryote Traduction Initiation Factor 5A2 (EIF5A2) corrèle avec cellule Agressivité and Poor survie dans le cancer gastrique