PLOS ONE: LAPTM4B-35, un cancer liés Gene, est associée à un mauvais pronostic aux stades TNM I-III gastriques patients atteints du cancer

Résumé

Arrière-plan

protéine transmembranaire associée aux lysosomes 4β-35 (LAPTM4B-35), un élément de mammifère 4 tetratransmembrane enjambant superfamille de protéines, a été rapportée pour être surexprimé dans plusieurs cancers. Cependant, l'expression de LAPTM4B-35 et de son rôle dans la progression du cancer de l'estomac (GC) reste inconnue. Le but de cette étude était d'étudier LAPTM4B-35 expression dans GC, son intérêt potentiel pour les paramètres clinicopathologiques et rôle de LAPTM4B-35 au cours de la cancérogenèse gastrique.

Méthodes

Dans la présente étude, la paraffine spécimens -embedded avec GC (n = 240, dont 180 spécimens appariés) et 24 appariés tissus frais congelés ont été analysés. qRT-PCR et immunohistochimie (IHC) ont été utilisés pour analyser l'expression de LAPTM4B-35 en GC. Les effets de LAPTM4B-35 sur la prolifération cellulaire de GC, la migration et l'invasion ont été déterminées par surexpression et knockdown essais.

Résultats

IHC a montré que LAPTM4B-35 a été exprimé dans 68,3% (123/180 ) des tissus du GC, tandis que dans 16,1% (29/180) de leurs tissus gastriques noncancerous adjacents appariés ( P
= 0,000). LAPTM4B-35
niveaux d'ARNm dans les tissus du GC ont également été significativement plus élevée par rapport à leurs tissus noncancerous adjacents appariés ( P
= 0,017). La surexpression de LAPTM4B-35 était significativement associée à degré de différenciation, profondeur de l'invasion, l'invasion lymphovasculaire et métastase ganglionnaire ( P
< 0,05). Les courbes de survie de Kaplan-Meier a révélé que les patients souffrant LAPTM4B-35 expression ont présenté une diminution significative de la survie globale (SG) par étapes patients GC I-III ( P
= 0,006). L'analyse multivariée a montré une expression élevée de LAPTM4B-35 était un facteur pronostique indépendant pour OS chez les patients du GC I-III ( P
= 0,025) stade.

Conclusion

Ces résultats indiquent que LAPTM4B-35 surexpression peut être liée à la progression de la GC et de mauvais pronostic, et peut donc servir de nouveau marqueur du pronostic de prédiction chez les patients du GC

Citation:. Cheng X, Zheng Z, Bu Z, Wu X Zhang L, X Xing et al. (2015) LAPTM4B-35, un cancer liés Gene, est associée à un mauvais pronostic aux stades TNM I-III gastriques patients atteints de cancer. PLoS ONE 10 (4): e0121559. doi: 10.1371 /journal.pone.0121559

Academic Editor: Ken-ichi Mukaisho, Université Shiga de la science médicale, JAPON

reçues: 10 Avril 2014; Accepté 12 Février 2015; Publié 7 Avril, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Cheng et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Disponibilité des données: Toutes les données pertinentes sont dans le ses fichiers de renseignements à l'appui du papier et

financement: Ce travail a été soutenu par le national Natural science Foundation de Chine (n ° 30471677 et 81141024) et national Key Technology R & D Programme (Beijing municipal la science et de la technologie. projet Z121100007512010). Les bailleurs de fonds ont contribué à la conception de l'étude, la performance, les réactifs, les matériaux, l'analyse des données et de la décision de publier

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

le cancer gastrique est le troisième cancer le plus répandu en Chine et la principale cause de décès lié au cancer en Chine [1]. La majorité des patients du GC sont déjà à un stade avancé au moment du diagnostic (stade III et IV), ce qui rend le pronostic d'être triste, malgré l'amélioration de l'approche de traitement chirurgical et de l'adjuvant [2-5]. Indépendamment de la chimiothérapie et la chirurgie curative prévu, près de 60% des patients atteints de GC développer la récurrence et finissent par mourir de la maladie métastatique [6]. progression GC est un processus multifactoriel et en plusieurs étapes qui a hérité et les facteurs environnementaux jouent un rôle vital [7]. Les observations précédentes indiquent que les biomarqueurs classiques et des systèmes de mise en scène, en fonction des résultats cliniques et pathologiques, peuvent avoir leurs limites sur les applications cliniques et pousser à développer de nouveaux biomarqueurs moléculaires qui peuvent prédire les résultats et le traitement des patients [8, 9].

Lysosome protéine associée transmembranaire 4 beta (LAPTM4B) a été initialement cloné dans les carcinomes hépatocellulaires (CHC) par Shao et al, qui est situé sur le chromosome 8q22, une région fréquemment amplifié dans le cancer du sein et le CHC [10, 11]. Il code pour deux protéines ayant des poids moléculaires différents, 24 kDa et 35 kDa des protéines (LAPTM4B-24 et -35) avec quatre régions transmembranaires putatifs [12]. La localisation de LAPTM4B-35 a été trouvé non seulement dans les lysosomes, mais aussi dans la membrane plasmique et les organelles internes tels que les endosomes et l'appareil [13] Golgi. Il a été rapporté que LAPTM4B-35 est largement exprimé dans divers types de carcinome. les rapports précédents ont indiqué que la surexpression de LAPTM4B-35 est associée à des comportements biologiques défavorables et un mauvais pronostic dans de nombreux cancers, comme le cancer du sein [14], le HCC [15-17], la vésicule biliaire carcinome [18, 19], le cancer colorectal [20] , un carcinome de l'épithélium de l'ovaire [21] et carcinome de l'endomètre [22]. Il a également été rapporté que la variation allélique de LAPTM4B est associée à la susceptibilité génétique de GC [23]. De plus, la surexpression de LAPTM4B-35 par transfection de LAPTM4B ADNc favorise la prolifération cellulaire, la migration, l'invasion dans les xénogreffes de CHC chez des souris nude et induit multirésistance [24]. Knockdown de LAPTM4B par interférence ARN inverse inversé toutes ces caractéristiques phénotypiques malignes dans le CHC [24, 25].

Cependant, LAPTM4B-35 expression, sa pertinence pour les caractéristiques clinico-pathologiques, et le rôle biologique de LAPTM4B-35 GC restent peu claires. Dans la présente étude, nous avons cherché à identifier les LAPMT4B-35 expression dans GC et son lien potentiel avec des caractéristiques clinicopathologiques, et sa signification pronostique. En outre, des analyses in vitro fonctionnelles ont été réalisées pour caractériser les effets biologiques des LAPTMEB-35 tumorigénicité gastrique.

Matériaux et méthodes

consentement éclairé éthique

Tous les patients avaient signé pour obtenir des échantillons de tissus, et le protocole d'étude a été approuvé par le comité d'éthique de la recherche clinique de l'Hôpital Universitaire du Cancer de Pékin.

échantillons de tissus gastriques humaines

Un total de 240 (167 hommes et 73 femmes, âgés de 22-87 ans, et l'âge médian était de 60 ans) paraffine tissus GC fixés au formol, y compris 180 appariés cancéreuses et appariés tissus adjacents de la muqueuse gastrique noncancerous, ont été recueillies auprès de patients du GC subissant une gastrectomie à l'Hôpital Universitaire du Cancer de Pékin à partir de Janvier 2003 à Décembre 2011. L'information clinique et histologique pour chaque cas ont également été recueillies selon les directives institutionnelles approuvées. Les 1997 critères UICC TNM ont été utilisés pour la classification des cancers gastriques. La durée médiane de suivi depuis le moment du diagnostic était de 26,2 mois (extrêmes, 2.4-119.0 mois). Au total, 112 (46,7%) patients sont décédés dans la période de suivi.

immunohistochimie

sections de paraffine (4 pm) ont été déparaffinées et réhydratées dans le xylème et de l'éthanol. L'immunohistochimie a été réalisée comme décrit précédemment [16] à l'aide LAPTM4B-35-anticorps anti (1: 200) (offert par Pro RL Zhou.). contrôles négatifs, les sections ont été traitées comme le même protocole, sauf qu'elles ont été mises en incubation pendant une nuit à 4 ° C dans une solution de blocage sans anticorps primaire.

L'expression de LAPTM4B-35 a été évaluée par deux pathologistes expérimentés (Y Sun et B Dong), qui a travaillé de manière indépendante et ont été aveuglés à des résultats cliniques des patients. Les écarts entre les observateurs ont été trouvés dans moins de 10% des lames examinées, et un consensus a été atteint après un examen plus approfondi. évaluation Coloration vient d'être utilisé les méthodes semi-quantitatives pour classer LAPTM4B-35 expression que les cellules immunoréactives colorées positives et négatives. Le rapport de la positivité a été notée comme «« 0 »(< cellules de 10% positifs de la tumeur), '' 1" (cellules 10-50% positif de la tumeur), et '' 2 »(> cellules tumorales positives 50%). L'intensité de la coloration a été marqué comme '' 0 "(pas de coloration ou faiblement colorés), '' 1" (coloration modérée), ou '' 2 "(forte coloration). La somme du score d'intensité de la coloration et le score en pourcentage a été utilisé pour définir les niveaux de LAPMT4B d'expression: 0-2, expression négative et 3-4, expression positive (14). L'expression positive seulement évaluée par les sections d'au moins 10% de la surface positive de tumeurs.

Culture cellulaire, LAPTM4B-35 plasmide d'expression et hCas9 /gARN transfection

lignées cellulaires de cancer gastrique (SGC- 7901, BGC-823, MGC-803, MKN-28 et AGS) ont été cultivées dans DMEM (Wisent Inc., St-Bruno, QC, Canada) additionné de 10% de sérum fœtal bovin (FBS) (Hyclone, Logan, UT, USA) et 100 U /ml de pénicilline et 100 pg /ml de streptomycine à 37 ° C dans une atmosphère de 5% de CO _{2. Le pcDNA3
. 0-AF
contenant l'ensemble des ORF LAPTM4B produisant LAPTM4B-35 protéine a été offert par le professeur RL Zhou [11]. La transfection a été effectuée avec de la lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) selon le protocole du fabricant. Des clones de cellules positives ont été obtenues par sélection antibiotique G418 (Gibco, Grand Island, NY) à une concentration de 800 ng /ml.}

hCas9 et gARN vecteur ont été obtenu à partir de la Chine Zebrafish Resource Center (CZRC). La longueur totale de cas9 ADNc a été cloné dans le vecteur pXT7 et linéarisé, et coiffé d'ARNm a été synthétisé en utilisant mMessage mMachine ARNm kits de synthèse de transcription (Life Technologies, Carlsbad, Californie, USA). Les séquences d'amorces gARN utilisées étaient: amorce avant, 5'-TACGACTCACTATAGGGGGATGGTGCCGGTGCGGACAGTTT TAGAGCTAGAAATAGC-3 ', et l'amorce inverse: protocole 5'-AGCACCGACTCGGTGCCACT-3'.The a été suivie par le précédent document publié [26]. hCas9 ARNm (3 ng /pl) et gARN (0,2 ng /ul) ont été cotransfectées dans la cellule SGC-7901 réalisée avec Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA).

isolement de l'ARN, quantitative en temps réel la transcription inverse PCR (qRT-PCR)

L'ARN total a été extrait en utilisant le réactif Trizol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) et une transcription inverse en ADNc en utilisant M-MLV transcriptase inverse (Promega, Madison, WI, USA) selon les instructions du fabricant. PCR en temps réel a été réalisée en utilisant le système PCR rapide en temps réel ABI 7500 (Life Technologies, Carlsbad, Californie, USA). β-actine a été utilisée comme contrôle interne. Les séquences d'amorces utilisées sont énumérées ci-dessous: LAPMT4B-35: amorce sens: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT-3 ', l'amorce inverse: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; β-actine: amorce sens: 5'CCTGTGGCATCCACGAAACT-3 'amorce inverse: 5'GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'

La prolifération cellulaire test

La prolifération cellulaire a été mesurée par Cell Counting Kit-8. (CCK-8) (Dojindo, Japon) selon le protocole du fabricant. Un volume de 100 ul de suspension cellulaire (3.000 cellules par puits) ont été incubées dans une plaque à 96 puits (Costar, Corning, NY) pendant 24, 48, 72, 96 heures. 10 ul de la solution de CCK-8 a été ajoutée à chaque puits et mis en incubation pendant 3 heures à 37 ° C. Les valeurs d'absorbance de tous les puits ont ensuite été déterminées à 450nm avec une longueur d'onde de référence de 630nm en microplaques Reader (Bio-Rad, USA). L'expérience a été effectuée en triple et répété deux fois.

Wound guérison dosage

La migration cellulaire a été mesurée par cicatrisation dosage par le système IncuCyte HD (IncuCyte ZOOM, Essen BioScience, États-Unis). Les cellules ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits à la densité de 6 x 10 ^{4 cellules par puits. Plaie a été faite par les cellules monocouches confluentes avec un bloc de broche et les cellules ont été lavées avec 1 x PBS, cultivées dans du milieu DMEM avec du sérum fœtal bovin à 10%. Photographies de cellules ont été imagées en utilisant le système HD IncuCyte à des intervalles de 4 heures à partir de 2 régions séparées par puits en utilisant un objectif 10x. Les valeurs de 2 régions de chaque puits ont été regroupées et en moyenne sur tous les 3 répétitions}

Transwell essais d'invasion

Le (la taille des pores de 8 pm; Cellule Biolabs, USA) Transwell. Test a été utilisé pour analyser l'invasion des cellules selon les instructions du fabricant. 8 × 10 ^{4 cellules ont été placées dans les chambres supérieures dans des milieux exempts de sérum et les chambres inférieures ont été remplis avec du DMEM et SBF à 10%. Après incubation pendant 72 heures à 37 ° C, les cellules non invasives sur la surface supérieure de la membrane ont été enlevées avec un coton-tige. Les membranes ont été fixées avec du methanol pendant 10 minutes et colorées avec du violet cristal à 0,5% pendant 10 min. Les cellules sur le côté inférieur du filtre étaient de cinq vues microscopiques choisis au hasard ont été comptés.}

Analyse par Western blot

Les niveaux de lignées cellulaires GC d'expression de protéines ont été mesurées par analyse par Western Blot. Les cellules ont été lysées dans prérefroidi tampon de lyse RIPA (Pierce Biotechnology, Rockford, IL), inhibiteur de protéase contenant un cocktail (Roche, Bâle, Suisse) pendant 30 minutes après centrifugation à 15000 g pendant 20 min, le surnageant a été obtenu. 50 ug d'extraits de protéine ont été séparés par électrophorèse sur 10% de gel de SDS-polyacrylamide et transféré sur le 0,45 difluorure de polyvinylidène (PVDF) (Whatman, Allemagne). La membrane a été bloquée pendant 1 heure à température ambiante avec un tampon de blocage (pH 7,6) contenant 5% de lait écrémé en poudre, puis incubé avec anti-LAPTM4B-35 anticorps (1: 800; offert par le professeur RL Zhou) à 4 ° C pendant la nuit . Souris anti-humaine anticorps β-actine (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) a été appliquée comme témoin interne. Les bandes immunoréactives ont été visualisées en utilisant un système de détection de chimioluminescence (Pierce Biotechnology, Rockford, IL).

L'analyse statistique

test du chi carré a été utilisé pour comparer la différence de LAPTM4B-35 expression de la protéine entre GC les tissus et les tissus non cancéreux adjacents. modèles d'analyse de régression logistique inconditionnelles ont été utilisés pour analyser les relations entre l'expression LAPTM4B-35 et les paramètres clinicopathologiques ajustés selon le statut de genre. La différence de expression LAPMT4B-35
ARNm entre GC et les tissus adjacents noncancerous a été analysé par le Wilcoxon adapté test de paire.

La survie globale (OS) courbe a été calculée avec la méthode de Kaplan-Meier et analysés avec le test du log-rank. Les risques relatifs (RR) de décès associé à LAPTM4B-35 expression et d'autres variables prédictives ont été estimées à partir des risques proportionnels de Cox univariée modèle tout d'abord. modèles multivariée de Cox ont également été construits pour estimer le RR pour l'expression LAPMT4B-35. Toutes les analyses statistiques ont été effectuées en utilisant le progiciel statistique SPSS (version 20.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA). A deux côtés P
valeur inférieure à 0,05 a été considérée comme statistiquement significative.

Résultats

Analyse de l'expression de LAPTM4B-35 en lignes et GCS cellulaires GC

Nous avons examiné tout d'abord l'expression de LAPTM4B-35
par RT-PCR en 5 lignées de cellules GC (MGC-803, BGC-823, MKN-28, SGC-7901 et AGS), puis détecté sa l'expression protéique par Western blot. Les résultats ont montré que LAPTM4B-35 a été exprimé dans toutes les lignées cellulaires à la fois l'ARNm et les niveaux de protéine (figure 1A, supérieur et panneau inférieur), puis nous avons choisi BGC-823 et les cellules SGC-7901 pour nos tests de la fonction cellulaire suivants.

LAPTM4B-35
expression a également été détectée dans 24 paires de réséquées spécimens GC par qRT-PCR. Comme nous pouvons le voir dans la figure 1B, le LAPTM4B-35
expression dans les tissus du GC a été significativement plus élevée en comparaison avec les tissus noncancerous adjacents appariés ( P
= 0,017) (figure 1B).

LAPTM4B-35 expression de la protéine a été fréquemment observés dans GC
humains

Nous avons étudié l'expression de LAPTM4B-35 en GC et les tissus noncancerous adjacents au moyen d'une analyse immunohistochimique. LAPTM4B-35 n'a pas exprimé dans la muqueuse gastrique normale (figure 2A), mais exprimé dans la métaplasie intestinale, les cellules de dysplasie de la lésion (Données non représenté) et tumorales, et principalement localisées dans le cytoplasme ou de la membrane cellulaire (figure 2B et 2D -2H). LAPTM4B-35 fréquemment observé dans les tissus GC comparée à la muqueuse appariés adjacente noncancerous (68,3% contre 16,1%, P
= 0,000) (tableau 1).

Relation entre LAPTM4B-35 expression et caractéristiques clinico

Nous avons analysé la relation entre LAPTM4B-35 expression et les caractéristiques clinico des patients du GC. Comme le sexe, les objets de notre étude a leur écart (167 contre 73, tableau 2), nous avons calculé leur relation par une analyse de régression logistique et ajusté pour le statut de genre. LAPTM4B-35 était plus fréquemment observée GCS mal différenciées par rapport à celles modérées bien différenciées (65,4% contre 57,9%, P
= 0,017). En outre, LAPTM4B-35 expression a été associée à une invasion lymphovasculaire ( P
= 0,000), la profondeur de l'invasion ( P
= 0,016) et métastase ganglionnaire ( P
= 0,029) (tableau 2).

LAPTM4B-35 expression et le pronostic des patients
GC

la figure 3 représente l'analyse de LAPTM4B-35 expression et les résultats cliniques. Les courbes de survie de Kaplan-Meier a montré qu'il y avait une tendance de la survie globale plus courte (OS) chez les patients du GC avec LAPTM4B-35 expression positive par rapport à ceux qui sont négatifs ( P
= 0,064, log-rank = 3,425) (Fig 3A). Après les patients ont été stratifiés par TNM I-III ou les patients sans envahissement lypmphovascular, les patients atteints de LAPTM4B-35 ont montré une expression positive OS significativement plus courte que les négatives ( P
= 0,006 et P = 0,001
., respectivement) (figure 3B et 3D)

Les résultats des modèles univariée et multivariée de Cox pour OS des patients du GC en TNM stade I-III ont présenté cette profondeur d'invasion (RR = 3,103, IC à 95%: 1,427 -6,748; P
= 0,004), métastase ganglionnaire (RR = 3,015, IC à 95%: 1,552 à 5,858; P
= 0,001) et LAPTM4B-35 niveau d'expression (RR = 2.249 , IC à 95%: 1,242 à 4,072; P
= 0,007) affecté de manière significative la survie du GC, respectivement (tableau 3); en outre, LAPTM4B-35 expression positive était un facteur pronostique indépendant (RR = 1,897, IC à 95%: 1,041 à 3,457; P
= 0,025). métastase ganglionnaire (RR = 2,665, IC à 95%: 1,362 à 5,213; P
= 0,001) également indépendamment prédit OS (tableau 3)

LAPTM4B-35 promu prolifération des cellules tumorales

afin d'étudier l'effet de LAPMT4B-35 dans la fonction de la biologie cellulaire, deux lignées cellulaires ont été établies. cellules BGC-823 et SGC-7901 présentant l'expression relativement plus faible ou plus élevé de LAPTM4B-35 ont été séparément sélectionnés pour la surexpression et le dosage knockdown (Fig 1A). Dans la première ligne, cellulaire BGC-823-AF surexprimant LAPTM4B-35 a été établi de façon stable, et MOCK a été utilisé comme témoin pour cette lignée cellulaire. Deuxièmement, LAPTM4B-35 a été renversé de manière stable towarding au SGC-7901 (hCas9 /gARN) par le II regroupés répétitions palindromiques courtes régulièrement espacées système (CRISPR) le type et les résultats ont été identifiés par Western blot (figure 4A).

test de prolifération cellulaire a été mesurée par CCK-8 kit de comptage cellulaire. La valeur d'absorbance des cellules BGC-823-AF à 72 heures après l'épandage était significativement plus élevé que les cellules mères et les cellules Mock, et le résultat était juste en face en abattant des LAPTM4B-35 dans les cellules SGC-7901 (figure 4B).

LAPTM4B-35 amélioré la migration des cellules tumorales et la capacité d'invasion

Après la transfection avec pcDNA3.0-AF et hCas9 /gARN, nous avons effectué dosage guérison des plaies pour analyser la capacité de migration des LAPTM4B-35 over-expression cellules /knockdown gastriques de cancer (figure 5A). Les résultats ont montré que LAPTM4B-35 promu BGC-823 (BGC-823-AF) la migration des cellules en comparaison avec BGC-823 et MOCK ( P
< 0,05), et la régulation de LAPTM4B-35 expression pourrait inverser ce phénomène dans les cellules SGC-7901 ( P
< 0,05, figure 5B)

en conséquence, l'effet de LAPTM4B-35 sur l'invasivité des cellules tumorales a été étudiée en utilisant le test transwell. (figure 6A). Nous avons constaté que le nombre de cellules envahies était significativement plus élevée dans les BGC-823 cellules LAPTM4B-35 transfectées et plus faible dans les cellules SGC-7901 knockdown, que dans leurs cellules de contrôle, respectivement ( P
< 0,05, La figure 6B). Ces résultats suggèrent que LAPTM4B-35 favorise la migration et l'invasion des cellules cancéreuses gastriques.

Discussion

GC est une maladie très hétérogène où même les caractéristiques cliniques et pathologiques similaires conduisent à des résultats distincts [27, 28], ce qui indique que le système de classification TNM pour GC a leur limitation et poussent à la recherche de nouveaux biomarqueurs moléculaires qui permettent de prédire le résultat et le traitement du patient. L'oncogène LAPTM4B-35 est situé sur le chromosome 8q22, et le gain du nombre de copies d'ADN sur le chromosome 8q22 est une constatation fréquente dans GC selon notre étude précédente (données non publiées). Dans le cancer du sein, la surexpression de LAPTM4B-35 et 8q22 amplification ont contribué à de nove
chimiorésistance aux anthracyclines et sont permissives pour récidive métastatique [29].

Dans cette étude, nous avons étudié LAPTM4B-35
expression dans 24 cancer de l'estomac et de leurs spécimens noncancerous gastriques chirurgicaux appariés par qRT-PCR et a constaté que LAPTM4B-35
ARNm niveau d'expression dans le cancer gastrique était significativement élevée par rapport à celle dans le apparié groupe de tissus non cancéreux. En outre, l'analyse immunohistochimique dans 180 paires de cancer gastrique a montré LAPTM4B-35 a été surexprimé dans les tissus GC (68,3%) comparativement à leur muqueuse noncancerous apparié (16,1%). LAPTM4B-35 favorise la croissance tumorale et la tolérance au stress métabolique et génétique par l'induction de autophagy [30, 31]. Dans notre étude, la fonction de LAPTM4B dans le cancer gastrique a été étudiée par des essais in vitro. La surexpression de LAPTM4B-35 dans les cellules BGC-823 a également augmenté la viabilité des cellules dans des conditions de culture sans sérum aussi bien. Si ce phénomène est causé par autophage est nécessaire pour étudier.

De plus, nous avons également analysé la corrélation des LAPTM4B-35 expression avec des paramètres clinicopathologiques dans le cancer gastrique. expression LAPTM4B-35 haut était significativement corrélée avec le degré de différenciation, l'invasion lymphovasculaire, profondeur de l'invasion et de métastase ganglionnaire, ce qui suggère que LAPTM4B-35 peut être largement activé dans le cancer gastrique et il peut jouer un rôle vital dans la carcinogenèse gastrique et la progression tumorale. Comme la tumeur invasion lymphovasculaire et lymphonode métastases sont des indicateurs pronostiques cliniques très importantes pour la récidive de la tumeur, nous avons fait une analyse de survie. Les courbes de Kaplan-Meier stratifiées par LAPTM4B-35 expression et le stade de la tumeur ou de l'invasion lymphovasculaire révélé que LAPTM4B-35 patients positifs ont OS significativement plus faibles par rapport aux LAPTM4B-35 négatives dans les stades TNM I-III ou sans lymphovasculaire invasion sous-groupe. Une analyse de régression multivariée de Cox dans ce sous-groupe a démontré que, parmi tous les facteurs analysés, LAPTM4B-35 expression est un facteur pronostique indépendant chez les patients atteints de cancer gastrique dans TNM stades I-III, mais au stade IV. Il est raisonnable, car le patient au stade IV est incapable de recevoir l'opération radicale et peut être traitée avec beaucoup d'autres différents traitements palliatifs, qui tous auraient une incidence sur le pronostic. Ces résultats indiquent que la propension à LAPTM4B-35 peut prédit spécifiquement les types les plus agressifs et mortels de cancer gastrique dans les cas avec début et sans métastases distale ou sans invasion lymphovasculaire.

Dans notre étude, nous avons constaté que LAPTM4B expression positive -35 généralement corrélée avec un pronostic défavorable chez les patients du GC stratifiées par stade de la tumeur ou de l'invasion lymphovasculaire. Pour la fonction de LAPTM4B-35 en GC, nous avons encore réalisé test in vitro. La surexpression de LAPTM4B-35 dans les cellules BGS-823 a révélé une augmentation significative de la prolifération cellulaire, la migration et l'invasion et la régulation négative de LAPMT4B-35 plombée aux résultats opposés. Zhou et al. a montré que LAPTM4B-35 surexpression favorise la survie cellulaire, la prolifération et la migration déréglementé dans les cellules HCC [12]. Des études récentes ont signalé que LAPTM4B-35 a été associée de manière significative avec un résultat clinique pire dans de nombreuses tumeurs malignes humaines, telles que le CHC [16], une tumeur métastatique de l'ovaire [32], la vésicule biliaire [19, 33], le cholangiocarcinome extrahépatique [34] et le cancer de l'endomètre [22]. Ces preuves accumulées soutiennent nos résultats actuels, ce qui indique que LAPTM4B-35 surexpression peut jouer un rôle important dans la transformation maligne et la progression du GC.

Les mécanismes moléculaires de LAPTM4B-35 dans les propriétés de progression de la tumeur sont encore peu claires. Des études antérieures ont indiqué que LAPTM4B-35 est requise pour l'homéostasie lysosomes, l'acidification et la fonction, et que LAPTM4B-35 rend les cellules tumorales résistantes à la mort cellulaire induite par lysosome déclenchée par des stress environnementaux et génotoxiques [30, 31]. La surexpression de LAPTM4B-35 pourrait activer des proto-oncogènes, tels que c-myc, c-jun et c-fos [35], et favoriser la prolifération, la migration et l'invasion dans certaines lignées cancéreuses humaines qui renforcerait la croissance et la métastase des HCC xénogreffes chez la souris nude [36]. enquête connexe impliquait que LAPTM4B peut améliorer la prolifération ou la survie cellulaire par l'implication dans la voie de transduction du signal, comme la kinase-protéine voie phosphatidylinositol 3-kinase B. Et LAPTM4B-35 peut interagir avec certaines protéines liées au cancer, comme la protéine phosphatase 2A et la protéine kinase C [10]. Li et al ont trouvé que LAPTM4B-35 pousse la multirésistance des cellules cancéreuses en favorisant l'efflux de médicament et d'anti-apoptose en activant la signalisation PI3K /AKT [24], indiquant que LAPTM4B-35 peut être une nouvelle cible thérapeutique. Le rôle fonctionnel et le mécanisme de LAPTM4B en GC doivent être étudiées plus.

En conclusion, l'étude actuelle indique que LPTM4B-35 surexpression joue un rôle important dans la promotion de la prolifération cellulaire, la migration et l'invasion dans les cancers gastriques. LAPTM4B-35 expression positive dans les tissus de cancer gastrique en corrélation avec les mauvais résultats et a prouvé être un facteur pronostique indépendant du sous-groupe de patients GC dans les stades TNM I-III ou sans invasion lymphovasculaire. Ainsi, LAPTM4B-35 peut constituer un biomarqueur utile pour prédire le pronostic dans certains sous-groupe de GC. En outre, comme les rôles de LAPTM4B-35 en limitant la mort cellulaire lysosome médiation et la promotion de l'autophagie ont des effets de survie importants dans les cellules cancéreuses, et LAPTM4B-35 a été surexprimé dans une grande proportion de cancer de l'estomac, il pourrait être une cible utile pour le traitement du groupe de sous-type de cancer de l'estomac.

Informations complémentaires
S1 dataset. Les résultats individuels de l'ARNm d'expression relative LAPTM4B-35, la prolifération cellulaire, la migration et l'invasion, la survie des pathients et clinicopathologique features.
(Excel)
doi:10.1371/journal.pone.0121559.s001
(XLS)

Acknowledgments

We merci Guoshuang Feng (du Centre chinois pour le contrôle et la prévention) pour son aimable aide dans les statistiques de données.

• PLOS ONE: surexpression du récepteur pour produits de glycation avancés (RAGE) est associée à un mauvais pronostic dans gastrique Cancer
• PLOS ONE: Impact des niveaux d'expression intratumorale de fluoropyrimidine enzymes métabolisant sur les résultats de traitement des Adjuvant S 1-thérapie dans gastrique Cancer