Ploche ONE: Vplyv intratumorová expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov na spracovanie výsledkov Adjuvant S-1 terapia u rakoviny žalúdka

abstraktné

Analyzovali sme expresných hladín fluórpyrimidínu metabolizujúce enzýmy (thymidylátsyntázu [TS], dihydropyrimidíndehydrogenázy [prípravkoch], tymidínfosforyláza [TP] a orotátfosforibosyltransferázy [OPRT]) na identifikáciu potenciálnych biomarkerov súvisiace k výsledkom liečby u karcinómu žalúdka pacientov (GC) príjem adjuvantnej S-1 chemoterapie. V tejto štúdii bolo zaradených 184 pacientov, ktorí dostávali liečebné gastrektómii (D2 lymfadenektómia) a adjuvans S-1. Imunohistochemické vyšetrenie a kvantitatívne reverznej transkripcie PCR sa vykonávali na meranie proteínu a hladiny mRNA TS, DPD, TP a OPRT v nádorovom tkanive. V jednorozmerné analýze, nízka intratumorová expresie DPD proteín bol spojený s horšou 5-ročné prežitie bez známok ochorenia (DFS; 78% verzus 88%, p = 0,068). Nízka intratumorová expresie DPD mRNA (1. [najnižšie] kvartilu) bol takisto súvisí s horšou DFS (69% vs. 90%; p < 0,001) v porovnaní s vysokou intratumorální DPD výrazu (2. až 4. kvartilu). V mnohorozmerné analýzy, nízka intratumorální expresie DPD proteín alebo mRNA sa v súvislosti s horšou DFS (P menšia ako 0,05), bez ohľadu na iných klinických premenných. TS, TP, a OPRT expresné hladiny boli nesúvisí s výsledkami liečby. Ťažké non-hematologickej toxicity (stupeň ≥ 3) mala tendenciu k častejším vývoja u pacientov s nízkou intratumorální DPD mRNA (29% verzus 16%, p = 0,068). Na záver, u pacientov s vysokým GC intratumorální DPD expresiu nemal horší výsledok po adjuvantnej terapie S-1 v porovnaní s tými, s nízkou expresiou DPD. Namiesto toho, nízke intratumorální expresie DPD súvisela so zlou DFS

Citácia :. Kim J-Y, Shin E, Kim JW, Lee HS, Lee D-W, Kim S-H, et al. (2015) Vplyv intratumorová expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov na spracovanie výsledkov Adjuvant S-1 terapie u rakoviny žalúdka. PLoS ONE 10 (3): e0120324. doi: 10,1371 /journal.pone.0120324

Akademický Editor: Qing-Yi Wei, Duke Cancer Institute Spojené štáty

prijatá: 13.listopadu 2014; Prijaté: 20 január 2015; Uverejnené: 20.marca 2015

Copyright: © 2015 Kim et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje sú v novinách

Financovanie :. Táto štúdia bola čiastočne podporená výskumnými granty z Seoul National University Bundangu Hospital Research Fund (02-2014-019) a JEIL Pharmaceutical Company (Soul, Kórea). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

konkurenčnými záujmami :. Táto štúdia bola čiastočne financovaná z JEIL Pharmaceutical Company v podobe financovania výskumu na Keun -Wook Lee. Ostatné Autori uvádzajú žiadny konflikt záujmov. Nie sú žiadne patenty, produkty vo vývoji, alebo výrobky uvádzané na trh deklarovať. To však nič nemení priľnavosť jednotlivých autorov do všetkých politík ploche jeden na zdieľanie dát a materiálov, ako je podrobne uvedené v online príručke pre autorov.

Úvod

Karcinóm žalúdka (GC) je piata najčastejšou rakovinou a treťou najčastejšou príčinou úmrtí na rakovinu na celom svete. Približne polovica prípadov sa vyskytuje vo východnej Ázii [1]. Chirurgia je liekom voľby v lokalizovanej GC a D2 pitva je považovaný za štandardný postup. Cez D2 pitvy, recidíva je potrebné poznamenať, vo viac ako 40% pacientov s pokročilým štádiu GC po operácii samotnej [2, 3]. V poslednej dobe, dve prospektívnej štúdie ukázali, že adjuvantnej chemoterapie pre resekcii GC je účinný pri znižovaní miery recidívy [2, 3].

S-1 je perorálny činidlo obsahujúci tegafur (prodrug fluóruracilu), gimeracil (AN inhibítor dihydropyrimidíndehydrogenázy [prípravkoch]), a oxonate draselný (inhibítor 5-fluóruracilu [5-FU] v gastrointestinálnom trakte) [4]. Adjuvantná chemoterapia Trial of TS-1 pre rakoviny žalúdka (ACTS-GC) odhalila, že pomocná látka S-1 chemoterapie za jeden rok znižuje recidíve nádoru u pacientov s kuratívny resekciou GC [3]; miera prežitia bez relapsu po 5 rokoch bolo 65,4% v adjuvantnej S-1 skupine a 53,1% v chirurgii iba pre skupiny (pomer rizika [HR], 0,653, 95% interval spoľahlivosti [CI], 0,537 až 0,793). Na týchto výsledkov, pomocná látka S-1 chemoterapie je v súčasnej dobe široko používaný pre prevenciu recidívy GC vo východoázijských krajinách [5-7].

thymidylátsyntázu (TS), tymidínfosforyláza (TP), orotátfosforibosyltransferázy (OPRT ), a DPD sú spojené s fluoropyrimidínmi metabolizmu. Niektoré štúdie ukázali, že hladiny expresie týchto fluórpyrimidínu metabolizujúce enzýmy majú asociácie s výsledkami prežitia u pacientov s metastatickým GC dostávajú paliatívnu S-1-založené chemoterapii [8-10]. Avšak, tieto štúdie ukázali, nekonzistentné výsledky na prediktívne hodnoty týchto enzýmov v S-1-paliatívna chemoterapia, ktoré môžu byť vzhľadom na malý počet pacientov a rozdiely v S-1-liečebných režimov používaných u štúdií. Až do súčasnosti, štúdie o vzťahu medzi expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov a výsledky pomocnú S-1 zaobchádzanie v GC boli zriedkavé. Preto sme analyzovali proteínové a mRNA expresie profily fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov (TS, DPD, TP a OPRT) na identifikáciu markerov súvisiacich s výsledkami liečby adjuvantnej S-1 u pacientov s chemoterapiou GC.

Materiály a metódy

populácii pacientov

Pomocou rakovinu GC súboru pacientov, ktorý bol perspektívne udržiavaná na Seoul National University Hospital Bundangu [5, 6], táto štúdia bola spätne navrhnutý. V prospektívnej kohorty, všetci pacienti podstúpili kuratívny gastrektómii s D2 rozrábke a boli liečení adjuvantnej S-1 chemoterapie. Pacienti sa stretol týchto oprávnených kritériá: histologicky potvrdené gastroesophageal križovatke alebo adenokarcinómom žalúdka; patologické štádium II-III s použitím spoločný výbor amerického rakoviny (AJCC, 7 ^{ročník); Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) performance status (PS) 0-2; a zodpovedajúce kostnej drene, obličiek a pečene. Dvaja pacienti s pódiom IB a ďalšími rizikovými faktormi (tj N2 lymfatických uzlín japonskými predstavovať klasifikáciu [11]) boli tiež zahrnuté.}

pacientov, ktorí podstúpili gastrektómii v období od novembra 2006 do septembra 2010 bolo zapísané (N = 184 ). V tejto štúdii, písomný informovaný súhlas boli získané od pacientov za použitia archívnych nádorových tkanív a klinické údaje. Inštitucionálne Review Board of Seoul National University Hospital Bundangu schválila túto štúdiu. (IRB číslo: B-1205 /154-006)

Čistenie a toxicita posúdenie

S-1 bol daný ústne 4 týždňov, nasleduje 2-týždňová pauza. Doba trvania S-1 ošetrenie bol plánoval byť jeden rok, ak neexistuje žiadny dôkaz o recidívy, neprijateľným vedľajším účinkom, alebo odmietnutie pacienta. Počiatočná dávka a modifikácie S-1 dávke v priebehu liečby boli stanovené ako v predchádzajúcich správach [5, 6]. Toxicita bola odstupňované podľa kritérií National Cancer Institute Common Toxicity (verzia 3.0).

Intenzita dávka (DI) bol definovaný ako pomer celkového S-1 dávka na meter štvorcový pacienta, deleno celková S-1 trvania liečby. Relatívna intenzity dávky (RDI) sa vypočíta vydelením dostal DI plánovanú DI.

imunohistochémia (IHC)

Predtým farbených hematoxylínom a eozín sklíčka boli preskúmané a jeden zástupca formalínu fixný parafínu zaliate (FFPE) archívne blok bol vybraný. Tkanivové pole bloky boli pripravené, ako je popísané v našej predchádzajúcej štúdii (SuperBiochips Laboratories, Soul, Kórea) [8]. Boli použité nasledujúce primárne protilátky: anti-ľudskej TS (klon TS106, myšou monoklonálna, Thermo Scientific, 1:70 riedenie), anti-ľudský OPRT (klon 2F5, myší monoklonálne, Abnova; riedenie 1: 1000), anti-ľudský TP (. klon P-GF 44C, myšou monoklonálna, Thermo Scientific, riedenie 1: 500), a anti-ľudský DPD (klon ERP8811, králičie monoklonálne; abca, riedenie 1: 500). Väzba protilátky bola detekovaná za použitia avidín-biotín-peroxidáza komplexu (Universal Elitná ABC kit PK-6200; Vectastain, Burlingame, CA, USA) po dobu 10 min a Diaminobenzidine Tetrahydrochloride roztoku (Kit HK 153-5K; BIOGENEX, San Ramon, CA, USA). Rezy boli kontrastne 0,1% hematoxylín, dehydratáciu, a namontovať. Farbenie bola skúmaná dvoma nezávislými vyšetrovatelia nepoznali klinického výsledku. Farbenie Intenzity boli semi-kvantitatívne meria pri 200 × zväčšenie a kategorizované ako negatívne (skóre = 0) slabý (skóre = 1), stredná (skóre = 2), alebo silné (skóre = 3). Percento imunoreaktívnych buniek bola tiež hodnotená. IHC skóre sa vypočíta takto :. Skóre farbenie intenzity bol vynásobená percentom farebného priestoru vzorke nádoru

Kvantitatívne reverznej transkripcie polymerázová reťazová reakcia (QRT-PCR)

hladiny expresie mRNA génov boli kvantifikované pomocou QRT-PCR. RNA (500 ng) z FFPE tkaniva sa podrobí syntéze cDNA s použitím amfiRivert Platinum cDNA Synthesis Master Mix (GenDEPOT). Sedem génov (štyri fluóropyrimidínmi dráha gény a tri referenčné gény) boli vopred amplifikovanej v konečnom riedení 0,05 x pôvodnej koncentrácie TaqMan testu (Applied Biosystems od firmy Life Technologies). Thermo-Podmienky cyklovania boli nasledujúce: 1 cyklus 95 ° C (10 min), nasledovaný 14 cyklami 95 ° C (15 s) a 60 ° C (4 min). V nadväznosti na cieľové amplifikácie, vzorky boli zriedené 1: 5 so závesným DNA pufrom, a potom qPCR bola vykonaná na Fluidigm 48.48 dynamická pole s použitím systému BioMark HD podľa protokolu výrobcu. Vzorky boli vykonané v troch opakovaniach. Tri referenčné gény (ACTB, GAPDH a FTL) boli použité pre normalizáciu génovej expresie dát. Referenčné gény boli vybrané na základe ich nízku variabilitou expresie v našich predchádzajúcich dát microarray (dáta nie sú uvedené). Pre normalizáciu dát QRT-PCR, znamená prah cyklu hodnoty (Ct) boli prevedené na relatívnej expresie hodnoty (-ΔCt) odpočítaním strednej hodnoty referenčných génov, pričom každá jednotka odráža 2-násobné zvýšenie expresie. Použité sondy boli nasledovné: TS (Hs00426586_m1), OPRT (Hs00923517_m1), TP (Hs01034319_g1), DPD (Hs00559279_m1), ACTB (Hs01060665_g1), GAPDH (Hs02758991_g1) a FTL (Hs00830226_gH); Podrobnejšie informácie sú k dispozícii na http://www.appliedbiosystems.com (Applied Biosystems od Life Technologies).

Štatistická analýza

Rozdiely v klinickej charakteristiky boli porovnané pomocou X2 test, t
-tests, alebo Mann-Whitney U
test. X2-testy boli použité v porovnaní frekvencie distribúcie S-1-súvisiace toxicity medzi rôznymi skupinami. Prežívanie bez príznakov ochorenia (DFS) sa vypočítala odo dňa chirurgie v momente prvého recidívy alebo smrť z akejkoľvek príčiny. Celkového prežívania (OS) bola definovaná ako interval od operácie do úmrtia z akejkoľvek príčiny. Spôsob podľa Kaplan-Meiera bola použitá na analýzu DFS alebo OS. Jednorozmerné a mnohorozmerné analýzy na DFS a OS bolo vykonané s použitím log-rank testy a Cox proporcionálny nebezpečenstvo regresné testy, resp. Obojstranné hodnoty P < 0,05 boli považované za významné. Všetky dátové analýzy boli vykonané pomocou IBM SPSS Statistics 21 pre Windows (IBM Corp, Armonk, NY, USA).

Výsledky

Charakteristiky pacientov a dodávka S-1 chemoterapie

východiskové parametre 184 pacientov sú uvedené v tabuľke 1. Priemerný vek pacientov bol 57 rokov (rozmedzie 30-79 rokov). Laparoskopická gastrektómia bola vykonaná u 50% pacientov, a podiel pacientov v štádiu III ochorenia bola 55%. Medián follow-up doba bola 47,0 mesiaca (rozmedzie 3.5-81.8 mesiacov). Počas sledovania, recidívy a úmrtí boli potvrdené u 29 (16%) a 22 (12%) prípadov, resp. Päťročné DFS a OS sadzby u všetkých pacientov bolo 83% (obr. 1 (A)), a 87%, v danom poradí. Ako follow-up dĺžka nebola dostatočná pre ďalšiu analýzu OS, sme vykonali analýzu prežitie iba pre DFS. DFS výsledky podľa klinických premenných sú uvedené v tabuľke 1, Obr. 1 (B), a S1 Obr.

Plánované 1-rok liečba bola dokončená S-1 v 139 pacientov (76%), a priemerný počet dodávaných S-1 cyklov chemoterapie bola 7,4 (95% CI, 7,0 až 7,8). Priemer a medián systému rozvoja vidieka počas všetkých S-1 terapia cyklov boli 77% (95% CI, 73 až 81) a 88% (v rozmedzí od 4 do 100), v danom poradí. S-1 ošetrenie bolo celkovo znesiteľné, a profily toxicity sú uvedené v tabuľke S1

Vplyv expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov na výsledok liečby :. Jednorozmerná analýzy

184 pacientov, IHC bol úspešný vo 183 pacientov. Stanovili sme hodnoty mediánu IHC skóre pre každý proteín (TS, OPRT, TP a DPD) ako hodnotu cut-off rozdeliť pacientov do dvoch skupín. Kým hladiny expresie štyroch proteínov sa významne súvisí s DFS (tabuľka 2), s nízkym DPD hladiny expresie (IHC skóre < 10 [cut-off hodnoty, medián]) ukázali trend smerom k horšie, 5-ročné DFS (78% vs. . 88%, p = 0,068, obr. 2 (A)). Okrem toho, u pacientov s vyššou expresiou TP (IHC skóre na teplotu 0 [cut-off hodnoty; medián]) mala tendenciu mať kratšiu dobu DFS, než tie, ktoré sa žiadna expresia TP (78% vs. 87%; p = 0,094). Hladiny expresie TS a OPRT nemal žiadnu spojitosť s DFS výsledkami (p = 0,914 a 0,109, v danom poradí).

QRT-PCR testy úspešne vykonali v 179 pacientov. Rovnako ako v IHC testoch, je stredná hodnota hladín mRNA expresie jednotlivých génov bola stanovená ako hodnota cut-off pre skupiny. Medzi štyrmi gény, len úroveň expresie mRNA DPD ukázali trend, ktorý má vzťah k DFS výsledkov; Pacienti s nižšou expresiou mRNA DPD mal horšie DFS než tie s vyššou expresiou DPD (p = 0,067, obr. 2 (B)). Úrovne expresie mRNA pre TS, OPRT, a génov TP nie sú spojené s DFS (tabuľka 2). Ďalej sme klasifikovaný mRNA úrovne expresie DPD na štvrtiny, aby vyšetrila, či vzťah dávka-odpoveď existovali medzi jednotlivými úrovňami DPD génovej expresie a výsledky prežitie. Je zaujímavé, že len skupina pacient v najnižšom DPD génovej expresie kvartilu ukázala horšie DFS na iné kvartilu, ale nebol pozorovaný žiadny rozdiel v DFS sadzieb medzi 2 ^{nd, 3 rd a 4 th kvartilu ( obr. 2 (C)). Preto sme sa zaraďujú pacientov do dvoch skupín pomocou tohto cut-off hodnoty (1 st kvartilu [Najnižšia DPD mRNA expresie] vs. ostatné kvartil [vyššia DPD mRNA expresie vrátane nd, 3 2 rd, a 4 th kvartilov]) v týchto analýzach (pozri obr 2 (D)., Tabuľka 2)}

Vplyv expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov, na výsledok liečby :. mnohorozmerné analýzy

Medzi klinických premenných, čo sú faktory, ktoré ukázali, P < 0.10 v jednorozmerné analýzy pre DFS (vek [< 60 rokov oproti 60-69 rokov vs. ≥ 70 rokov; P = 0,003], chirurgická metóda [laparoskopická vs. otvorené; P = 0,082], lymfatická invázia [no áno vs.; P = 0,068], žilovej invázia [no vs. áno; P = 0,045], a etapa [IB /vs. II III; P = 0,012]; tabuľka 1) boli zahrnuté do viacnásobnej analýzy. Medzi proteíny alebo gény súvisiace s fluoropyrimidínmi metabolizmu, tie s P < 0.10 v jednorozmerných analýzach pre DFS boli tiež zaradené do viacrozmerné analýzy (tabuľka 2). Ako je uvedené v tabuľke 3, nízka DPD expresie proteínu úroveň (IHC skóre < 10, HR, 2,32, 95% CI, 1,08 až 4,96; p = 0,030) a nízke DPD génovej expresie (1 ^{st kvartil [najnižším kvartilu] , HR, 3,67, 95% CI 1,67 až 8,03; p = 0,001) boli v súvislosti s horšou DFS, bez ohľadu na iných klinických premenných. Vyšší vek (≥ 70 rokov) a vyšší stupeň bol tiež nezávisle spojené so zlou DFS.}

Vzťah medzi úrovňou DPD prejavu a toleranciu k S-1 terapia

A pozitívna korelácia medzi DPD IHC skóre a hladiny mRNA expresie bol pozorovaný (p = 0,022), hoci rozsahy IHC skóre v oboch skupinách (1 ^{st kvartilu DPD mRNA [DPD IHC skóre: stredná, 0; rozsah, 0-200] vs. ostatné kvartily [DPD IHC skóre: medián, 10; rozsah, 0-300]) prekrývali v značnom počte prípadov (S2) Obr}

žiadne rozdiely v s-1 RDI alebo frekvencia toxicity (hematologické alebo nie. hematologické) z s-1 liečbou sa pozorovali u pacientov s nízkym (menej ako 10) a vysoké (≥ 10) DPD IHC skóre [Tabuľka a v tabuľke S2]. Avšak, v porovnaní s pacientmi s vyššími nitronádorových úrovňou DPD mRNA (2 ^{nd až 4 th kvartilov), pacienti s nízkou úrovňou DPD mRNA (1 st kvartil) vykazovala tendenciu vzniku závažnej nehematologická toxicity (≥ 3. stupeň) častejšie, aj keď štatisticky nevýznamné (29% vs. 16%; p = 0,068); Avšak, výskyt alebo vyššieho stupňa 3 hematologických toxicít nebol rozdiel medzi týmito dvoma skupinami. Okrem toho, aj keď štatisticky nevýznamný, bol podiel pacientov, ktorí udržovali S-1 RDI ≥ strednej hodnoty (87,8%) pri adjuvantnej chemoterapie bola nižšia u pacientov v najnižšom kvartile expresie DPD mRNA ako u pacientov v iných kvartiloch (40% vs. 54%; P = 0,111; Tabuľka č. B v tabuľke S2)}

Diskusia

v tejto štúdii sme skúmali vzťah medzi nitronádorových expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov a výsledky prežitie pomocnú s -1 chemoterapie. Vysoká intratumorová DPD výraz nebol v spojení s horšími výsledkami prežitia; Namiesto toho, nízka expresia DPD bola spojená s nepriaznivým DFS u pacientov liečených GC s pomocnou S-1therapy. Hladiny expresie iných enzýmov nekoreluje s DFS. V našej štúdii, hladiny expresie fluórpyrimidínu metabolizujúce enzýmy boli hodnotené dvoma spôsobmi, a to IHC a QRT-PCR.

DPD je počiatočná a rýchlosť obmedzujúci enzým v katabolizme 5-FU. Niekoľko predklinických štúdií ukázalo, že nižšie intratumorová hladina mRNA expresiou alebo aktivitou DPD je spojený s lepšiu odozvu na 5-FU, a že vyšší stupeň DPD v nádorových bunkách súvisí s 5-FU odpor [12-14]. Podobné výsledky boli tiež pozorované u pacientov s rôznymi solídnymi nádormi, vrátane GC [14-22]. Účinnosť fluóropyrimidínmi chemoterapie u pacientov GC bolo preukázané, že sa v závislosti na úrovni nitronádorových DPD expresie, a to buď v paliatívnej [22], adjuvans [19 až 21], alebo neoadjuvantná [16-18] nastavenia.

Medzi tri zložky, ktoré obsahujú s-1, gimeracil sa používa ako inhibítor DPD na udržanie predĺženej koncentrácie 5-FU v nádorovom tkanive [23]. Aj keď niektoré štúdie preukázali, že účinnosť S-1, je tiež ovplyvnený nitronádorových úrovňou DPD expresie, ako sú iné fluoropyrimidíny [24, 25], väčšina štúdií zhodne ukazujú, že účinok S-1 terapie nie je ovplyvnená intratumorální DPD hladiny expresie, a to najmä v GC [8-10, 19, 26-29]. Predchádzajúce štúdie ukázali, že S-1 je účinnejší ako 5-FU alebo iné fluóropyrimidínmi u nádorov s vysokou expresiou DPD [19, 25, 28, 29]. Vzťah medzi účinnosti chemoterapie S-1 obsahujúci a expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov, bol skúmaný v GC [8-10]; Avšak, väčšina z týchto štúdií zahŕňali malý počet pacientov, a boli vykonané na metastatickým pacientov, ktorí dostávali GC rôznych režimov S-1, obsahujúci ako paliatívna liečba. Preto predchádzajúce výsledky nemožno zovšeobecniť pre pacientov, ktorí podstúpia GC kuratívny chirurgický zákrok a adjuvantnej S-1 chemoterapii

V našej štúdii, celkový liečebný výsledok D2 gastrektómii následne adjuvans S-1, chemoterapia bola vynikajúca .; 5-ročnej DFS sadzby u pacientov s štádiu IB /II a III, boli 91% a 77%, v danom poradí (tabuľka 1). Zo štyroch analyzovaných enzýmov (TS, DPD, OPRT a TP), len úroveň expresie DPD sa týkala liečby výsledku S-1. DPD proteín alebo mRNA nadmerná expresia nekoreluje s nižšou DFS u pacientov liečených GC adjuvantnej S-1 terapia; Toto pozorovanie je v súlade s predchádzajúcimi správami, že S-1 je účinný u nádorov s vysokým intratumorální DPD [19, 25, 29, 30].

Je zaujímavé, že v našom súbore pacientov s nízkym intratumorální DPD expresie bola v súvislosti s horšou DFS, v porovnaní s vysokou expresiou DPD. Toto pozorovanie bolo nečakané a mätúce, pretože kým sme dokončili analýzu údajov o tejto štúdii, nedošlo k žiadnemu štúdie o vzťahu medzi fluórpyrimidínu metabolizujúce enzýmy a výsledky pomocnú S-1 chemoterapie u pacientov s GC. Avšak takmer v rovnakej dobe, kedy sme popísali výsledky tejto štúdie pri akademickom schôdzi [31], štúdie s takmer rovnakú konštrukciu s našimi bol zaznamenaný v aktoch-GC vyšetrovateľov [32]. V tejto štúdii aktoch-GC vyšetrovatelia analyzovali intratumorová expresiu génov 4 (TS, DPD, OPRT a TP) u pacientov zaradených do ACTS-GC a zisťovanie ich úloha ako biomarkerov výsledkov liečby. Rovnako ako my, aktoch-GC vyšetrovatelia tiež navrhol, že nízka expresia DPD mRNA u nádorov súvisí s nepriaznivým DFS; u pacientov, ktorí dostali GC adjuvantnej chemoterapii s -1 (N = 401), u pacientov s nízkou expresiou intratumorální DPD mRNA mal horší 5-ročnej DFS (60,8% verzus 70,8%, p = 0,039) a OS (66,8% oproti 78,0 %, P = 0,015), než tie s vysokým DPD úrovne expresie [32]. Preto štúdie z oboch skupín ACTS-GC a našich vyšetrovateľov dosiahla nečakane rovnaký výsledok z nezávislých kohorty pacientov.

Keďže len u pacientov, ktorí dostali S-1 ošetrenie boli zaradení do tejto štúdie, zostáva neisté, či intratumorová úroveň DPD expresie je prediktívne alebo prognostický marker u pacientov liečených GC adjuvantnej S-1 terapia. Avšak, ako ACTS-GC mal kontrolnú skupinu pacientov, ktorí podstúpili len chirurgický zákrok bez adjuvantnej chemoterapie, aktoch-GC vyšetrovatelia ukázali, že prínos adjuvantnej S-1 terapia je väčšinou obmedzený na pacientov GC s vysokou intratumorální expresiou DPD mRNA [ ,,,0],operácia nasleduje pomocná látka S-1 terapia vs. samotnej operácii; HR na OS, 0,52 (95% CI; 0,38-0,72)]; Naproti tomu u pacientov s nízkou expresiou intratumorální DPD, adjuvans S-1 terapia sa zdalo, že majú menšiu výhodu [operácii nasleduje pomocná látka S-1 terapia vs. samotnej operácii; HR na OS, 0,85 (95% CI; 0,56-1,28)] [32]. Preto, s ohľadom na výsledky štúdie z oboch ACTS-GC vyšetrovateľa a nás, opatrne naznačujú, že expresia intratumorová DPD mRNA môže byť prediktívne biomarker pre účinnosť adjuvans S-1 u pacientov s chemoterapiou GC po D2 gastrektómii. Avšak, potrebuje náš návrh bude skúmať v budúcich prospektívnych štúdiách.

V prípade, že intratumorová hladina DPD výraz je prediktívne biomarker z pomocná látka S-1 chemoterapie u pacientov s GC, dôvodoch, prečo low intratumorová DPD výraz priznáva nižšia DFS výsledok u pacientov liečených GC adjuvantnej S-1 terapia bude vyžadovať ďalšie skúmanie. Po prvé, aj keď autori zo skupiny ACTS-GC ani zistenie vzťahu medzi profilmi toxicity alebo RDI S-1, a úrovňou intratumorální DPD expresie [32], sme analyzovali rozdiel v toxicite frekvencií a RDI z S-1 podľa že intratumorová DPD expresné hladiny. Nepodarilo sa nám nájsť žiadne rozdiely v toxicite a RDI medzi DPD vysokými a nízkymi DPD-pacientom IHC skóre. Avšak, aj keď štatisticky nevýznamné, pacienti s najnižšími úrovňami nitronádorových DPD mRNA (1 ^{st kvartil) naznačili tendenciu viac non-hematologická toxicita ≥ stupeň 3 (29% vs. 16%; p = 0,068) a zdalo sa, majú nižšiu toleranciu k s-1, než u pacientov s vyššími úrovňami DPD mRNA (S2 tabuľka). V predchádzajúcej štúdii [5], sme popísali, že RDI S-1 je spojená s DFS pacientov GC dostávajú adjuvantnej s-1 terapia a že najčastejšou príčinou zníženie dávky S-1 bol enterokolitída, jedným z najčastejších non-hematologickej toxicity vyvinuté pri adjuvantnej S-1 terapia. Aj keď, či hladina expresie DPD koreláciu medzi nádorovými bunkami a normálnymi hostiteľských buniek zostáva neznámy, Bertino et al. [15] uvádzajú, že nízky intratumorová DPD expresie môže byť spojená so zvýšenou toxicitou z kapecitabínu u pacientov s rakovinou pľúc. Cui a kol. [33] uvádzajú, že sérová hladina DPD expresie je spojená s vývojom toxicity chemoterapie S-1 na báze u pacientov s metastatickým GC. Celkovo vzaté, sme hypotézu, že intratumorální hladiny expresie DPD môže odrážať celkovú úroveň DPD v normálnych tkanivách hostiteľa, čo naznačuje, že nízka intratumorová DPD expresie môže byť v súvislosti s častejším vývoji S-1 toxicity a môže znížiť znášanlivosti pacienta k S-1. Táto hypotéza môže vysvetliť nižší DFS u pacientov s nízkou expresiou intratumorální DPD, v porovnaní s pacientmi s vysokou expresiou DPD, keď dostávajú adjuvantnej S-1 chemoterapiu. Po druhé, vysoká intratumorová DPD samy o sebe
môžu zveriť väčšiu citlivosť na S-1, než nízke intratumorální DPD u pacientov s GC. Shimizu et al. hlásil, že miera odpovede bola významne vyššia u pacientov s metastatickým karcinómom žalúdka scirrhous DPD-pozitívnych nádorov, ako u pacientov s DPD-negatívnymi nádormi, keď boli ošetrené S-1 na báze chemoterapie [29]. Všetky vyššie uvedené návrhy sú hypotéza vytvárajúce, a je potrebné viac štúdií.}

Okrem toho viac aspektov je potrebné ďalej objasnený. Štandardizácia QRT-PCR metód a optimalizácia medzným bodom pre hladiny DPD mRNA vo vzorkách nádorových FFPE musí byť vykonaná. Vyšetrovatelia zo skupiny ACTS-GC najnižšia tercilu z nitronádorových úrovní DPD mRNA ako limitná bod [32]. V našej štúdii, dolný kvartil bola použitá ako cut-off. Keď sme vykonali ďalšie analýzy využívajúce najnižšiu tercilu z nitronádorových úrovní DPD ako cut-off, vplyv úrovne expresie DPD na predpovedanie DFS bol stále platný v jednorozmerné (S3 obr) a mnohorozmerné analýzy (S3 tabuľka). Najvhodnejšie cut-off bod nitronádorových hladín expresie DPD mRNA pre predikciu výsledkov liečby adjuvantnej S-1 terapia musí byť overená v ďalších štúdiách. Okrem toho, intratumorová DPD expresné hladiny proteínu namerané IHC skóre (intenzita farbenie vynásobená percentom farebného priestoru) boli tiež v súvislosti s rôznymi výsledkami liečby v našej štúdii. Avšak v štúdii u ACTS-GC skupiny, v ktorých boli hladiny proteínovej expresie, merané farbením iba intenzitu, autori nemohli nájsť žiadnu súvislosť medzi výsledkami IHC a liečebných výsledkov [32]. Okrem toho, ACTS-GC bádatelia uvádzajú, že intratumorální TS mRNA expresné hladiny boli tiež prediktívne pre účinnosť adjuvans S-1 chemoterapie. Avšak, v našej štúdii, hladiny expresie TS-to, či bola meraná pomocou IHC alebo QRT-PCR, neboli v súvislosti s výsledkami prežitia adjuvantnej S-1 terapia. Preto sa tieto rôzne pripomienky medzi ACTS-GC vyšetrovateľov a nás (užitočnosti nitronádorových DPD expresie proteín úrovňou nameraných IHC a TS mRNA hladín expresie v predikciu výsledkov liečby) je potrebné ďalej posúdiť v budúcnosti.

na záver, pri príjme adjuvantnej s-1 terapie u pacientov s vysokým GC intratumorální DPD expresiu nemal horšie výsledky pre tých s nízkou expresiou DPD. Namiesto toho, nízke mRNA alebo proteín expresie DPD súvisela so zlou DFS. Podávanie nižších dávok S-1 z dôvodu toxicity mohlo viesť k nečakanej nižšej výsledku liečby u pacientov s nízkymi hladinami DPD. Hladiny expresie iných enzýmov fluórpyrimidínu metabolizujúce (TS, OPRT a TP) nie sú v spojení s výsledkami prežitia adjuvantnej S-1 ošetrenie. Budúce veľké perspektívne štúdie o biomarkerov prediktívnych o účinnosti adjuvantnej S-1 ošetrenie sú oprávnené.

Podporné informácie
S1 Obr. Prežitie výsledky podľa etáp: (a) prežitie bez známok ochorenia a (b) celkové prežitie
doi :. 10,1371 /journal.pone.0120324.s001
(DOCX)
S2 Obr. Distribúcia (A) IHC skóre DPD a hladiny (B), expresia mRNA DPD
(C) Korelácia medzi IHC skóre a mRNA expresiou DPD
doi: .. 10,1371 /journal.pone.0120324. S002
(DOCX)
S3 obr. Prežitie bez známok ochorenia krivky podľa nitronádorových úrovne expresie mRNA DPD (ak sú pacienti sú roztriedené do tercily)
doi :. 10,1371 /journal.pone.0120324.s003
(DOCX)
S1 Tab. Toxicity vyvinuté počas S-1 chemoterapie (na pacienta)
doi :. 10,1371 /journal.pone.0120324.s004
(DOCX)
S2 Tab. Porovnanie dodávky S-1, a vyvolané toxicity medzi intratumorová DPD-low a DPD vysokej expresie skupín [(A) o IHC skóre a (B) od hladiny expresie mRNA]
doi :. 10,1371 /journal.pone .0120324.s005
(DOCX)
S3 Tab. . Vplyv nitronádorových DPD mRNA hladín expresie na prežitie bez známok ochorenia
Hladiny expresie DPD mRNA boli rozdelené do 3 skupín (tercily)
doi :. 10,1371 /journal.pone.0120324.s006
(DOCX )

Poďakovanie

Tento článok bol predložený, čiastočne ako prezentácie plagátu na 2014 ESMO (European Society for Medical Oncology) kongres, Madrid, Španielsko (26-30 september 2014).

• Ploche ONE: LAPTM4B-35, Rak-súvisiace Gene je spojená so zlou prognózou v TNM štádiu I-III žalúdočné pacientov s nádorovým ochorením
• Ploche ONE: Zvýšená expresia eukaryotických translačný iniciačný faktor 5A2 (EIF5A2) koreluje s Cell agresivitou a nízke dosahované prežitie v žalúdočnej Cancer