PLoS ONE: MUC4 and MUC1 izražavanja u adenokarcinom želuca korelira s pomorskim Invazija i limfnog čvora metastaze: imunohistokemijskom proučavanje ranog karcinoma želuca

Sažetak pregled

Mi smo ranije izvijestili da MUC4 izraz je loš prognostički čimbenik u raznim karcinomima. Naša prethodna studija je također pokazala da MUC1 izraz u želučanim raka, uključujući rane i naprednim stadijima je loša prognostički čimbenik. U ovom istraživanju, ekspresijski profili MUC4 i MUC1 ispitana su imunohistokemijski (IHC) pomoću dva anti-MUC4 monoklonska antitijela (Mab), 8G7 i 1G8, i anti-MUC1 MAb DF3 u 104 gastrektomije uzorcima rane želučane adenokarcinoma s submukozne invazija (pT1b2), uključujući i 197 histoloških podtipu lezija. Prije IHC proučavanje ljudskih jedinki, procijenili smo specifičnost dviju Mab Western hibridizacija i IHC dvaju MUC4 mRNA ekspresiju želučanog stanične linije raka. Mab 8G7 reagirati jasno, dok mab 1G8 nije pokazao nikakvu reakciju, bilo Western blot-ili IHC. U IHC od želučanog karcinoma, a ekspresija djela MUC4 /8G7 otkriven mab 8G7, MUC4 /1G8 otkriven mab 1G8 i MUC1 /DF3 otkriven mab DF3 u dobro diferenciranim vrsta (70%, 38/54, 67%, 36/54, 52%, 28/54) bili su znatno veći od onih u slabo diferenciranim vrsta (18%, 10/55, 36%, 20/55, 13%, 7/55) ( P pregled < 0,0001; P pregled = 0,0021; P pregled < 0,0001), redom. Izraz MUC4 /8G7 bio povezan s limfni invazije (r = 0,304, P pregled = 0.033). S druge strane, izraz MUC4 /1G8 bio povezan s limfni invazije (r = 0,395, P pregled = 0,001) i limfnih čvorova metastaze (r = 0,296, P pregled = 0,045). Izraz MUC1 /DF3 bio povezan s limfni invazije (r = 0,357, P pregled = 0,032) i venskog invazije (r = 0,377, P pregled = 0.024). U zaključku, izraz MUC4 kao MUC1 početkom želučanog karcinoma je koristan marker za predviđanje loše prognostičke čimbenike povezane s invazijom plovila pregled

Izvor:. Tamura Y, Higashi M, Kitamoto S, Yokoyama S, Osako M Horinouchi M, et al. (2012) MUC4 i MUC1 izražavanja u adenokarcinom želuca korelira s pomorskim Invazija i limfnog čvora metastaze: imunohistokemijskom proučavanje ranog karcinoma želuca. PLoS ONE 7 (11): e49251. doi: 10,1371 /journal.pone.0049251 pregled

Urednik: Fazlul H. Sarkar, Wayne State University School of Medicine, Sjedinjene Američke Države Netlogu

Primljeno: 17. kolovoz 2012; Prihvaćeno: 5. listopada 2012; Objavljeno: 13. studenog 2012 pregled

Copyright: © 2012 Tamura i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija je podržan u sklopu kneževi Takamatsu Cancer Research Fund S. Yonezawa; Potpore-u-Aid za znanstvena istraživanja za znanstveno istraživanje (B) 23390085 S. Yonezawa; Znanstveno istraživanje (C) 21.590.399 M. Higashi; Mladi znanstvenici (B) 24701008 S. Yokoyama; Istraživanja na prioritetnim područjima 239349 S. Kitamoto (JSPS Fellowship) od Ministarstva prosvjete, znanosti, sporta, kulture i tehnologije, Japan; gušterače Research Foundation iz Japana u S. Yokoyama; a Kodama Memorial Foundation, Japan M. Higashi. S. Batra je podržan dijelom od strane Nacionalnog instituta za zdravlje potpore (CA78590, CA163120, CA133944 i CA111294). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa. Nema dodatnih vanjsko financiranje dobila za ovu studiju

suprotstavljenih interesa.. Autori izjavljuju da nemaju sukob interesa u vezi sa radom u studiju pregled

Uvod pregled

rak želuca je četvrti najčešći oblik raka u svijetu, a više od 90% želučanih karcinoma su adenokarcinomi [1]. Nedavno je u Japanu, rano otkrivanje od strane rutinske endoskopskog pregleda u Gastroenterologija klinikama rezultirala točne dijagnoze i učinkovite kirurške ili endoskopske tretmana, što je rezultiralo relativno bolju prognozu. U analizi 11,261 bolesnika s karcinomom želuca tretirane želučane resekcija je TNM 5 godina stopa preživljavanja za fazu la je 91,8%, a za stadiju IB stopa preživljavanja je 84,6% [2]. Za ranim želučanog karcinoma, da endoskopska submukozna disekcija (ESD) prvi je tretman izbora u Japanu, ali kriteriji dodatne operacije, uključujući limfne čvorove disekcija nakon ESD još uvijek kontroverzna [3]. Pregled

Naša serija od imunohistokemijski (IHC) studije za mucin izraz u različitim ljudskim neoplazmi su pokazali da je izraz MUC1 mucina (pan-epitelni membranom povezane mucin) je povezana s invazivnom proliferacije tumora i lošeg ishoda bolesnika, dok je izrazom MUC2 mucin (crijevna tipa izlučivanje sluzi) je povezan s ne-invazivne proliferacije tumora i povoljnog ishoda za pacijente [4], [5]. Naša prethodna studija pokazala je da MUC1 izraz u želučanog raka je loša prognostički čimbenik [6]. Pregled

MUC4 prvi izvijestio kako je Traheobronhalno sluzi [7] te je mucin membranom povezane [8]. U našoj studiji serije, izraz MUC4 u Intrahepaticni holangiokarcinomom, gušterače duktalni adenokarcinom, ekstrahepatičkom žučnih kanalića karcinoma, adenokarcinoma pluća, i karcinom oralnog pločastih stanica je neovisni čimbenik za lošom prognozom i koristan marker predvidjeti ishod pacijenata [ ,,,0],5], [9], [10], [11], [12], [13]. Nažalost, postoji nekoliko studija o MUC4 ekspresije profila u ljudskom raka želuca. U ovom istraživanju, ispitali smo profile ekspresije MUC4 kao MUC1 početkom želučanog tkiva raka, i otkrio da MUC4 and MUC1 izraz u ranim želučanog karcinoma će postati siromašni prognostički čimbenici po invazije limfnih žila, invazije krvnih žila i limfnog čvora metastaza. pregled

poznati anti-MUC4 monoklonska antitijela (Mab-i), 8G7 i 1G8, za otkrivanje različitih mjesta MUC4 molekule. Mab 8G7 prepoznaje tandem ponavljanja slijed (STGDTTPLPVTDTSSV) humanog MUC4α podjedinice [14]. Mab 1G8 se podiže u odnosu na sekvence štakora (štakor ASGP-2), te prepoznaje epitop na štakorima ASGP-2 podjedinica, što odgovara ljudskoj MUC4β podjedinice, te pokazuje križnu reaktivnost sa humanim uzorcima [15]. Dakle, posebna pažnja posvećena je usporedbom dvaju anti-MUC4 Mab-Western hibridizacija i IHC dva želuca staničnim linijama karcinoma, prije IHC proučavanje ljudskih tkiva raka želuca. Osim toga, budući da je polemika u vezi s prognostičkog značenja tih anti-MUC4 Mab, pregled literature MUC4 izražavanja u različitim oblicima raka također je izvršena. Pregled

Materijali i metode pregled

Pacijenti i uzorci tkiva

gastrektomije primjerci 104 ranih želučanog karcinoma, koji pokazuju submukozalnim invaziju pT1b2, sa ili bez limfnih čvorova metastaze, uzeo je iz spisa između 1994. i 2008. godine u bolnici Kagoshima-shi Medical Association. Srednja dob bolesnika bila je 65,7 (CD, 9.8, raspon, 39-92 godina, srednja dob 66 ​​godina); 64 slučajeva bili su muškarci, a 40 slučajeva su žene. Ovo istraživanje provedeno je u skladu s vodećim načelima Deklaracije u Helsinkiju, i odobren od strane Etičkog povjerenstva za Kagoshima-shi Medical Hospital Association (KMAH 2011/2/2). Informirani pisani pristanak koji je dobiven od svih bolesnika. U slučajevima s više od dvije histoloških tipova pomiješane u jednoj leziji svaki histološki uzorak je procijenjen samostalno prema japanskom klasifikaciji karcinom želuca (JCGC) [16]. Pregled

Procjena monoklonskih antitijela za MUC4

Stanice i uvjeti uzgoja. pregled

ljudska stanične linije raka želučani (SNU-16 i NCI-N87) i stanične linije raka gušterače (PANC1 i CAPAN1) kupljeni su od American Type Culture Collection (Manassas, VA). Oba želučani stanice raka su održavane u RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO); PANC1 stanice su održavane u DMEM (Sigma-Aldrich); Capan1 stanice su održavane u DMEM /F-12 (Sigma-Aldrich). Svi mediji su dopunjeni s 10% fetalnog goveđeg seruma (GIBCO, Breda, Nizozemska) i 100 U /ml penicilina /100 ug /ml streptomicina (Sigma-Aldrich). Sve stanice se inkubiraju u 5% CO2 na 37 ° C i održava na Polutekuće razine. Pregled

ekstrakcija RNA i RT-PCR. Pregled

Ukupna RNA je ekstrahirana iz stanica uporabom RNeasy mini kit (Qiagen, Hilden, Njemačka) i kvantificira NanoDrop ND-1000 spektrofotometra. Dobiveni mRNA (2 ug) reverzibilno prepisana na cDNA s Visokim RNA kapacitet za cDNA kit (tnom City, CA). Sljedeći primeri su dizajnirani za slijedeću PCR: MUC4, 5'TGGGACGATGCTGACTTCTC-3 ', 5'-CCCCGTTGTTTGTCATCTTTC-3'; ACTB, 5'-CTCTTCCAGCCTTCCTTCCTG-3 ', 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'. PCR je proveden s AmpliTag Gold Brzi PCR Master Mix (Applied Biosystems) slijedeći protokol proizvođača. Pregled

ekstrakcije proteina i Western blot. Pregled

Ukupno stanični lizati pripremljeni su korištenjem Ripa pufera koji sadrži koktel inhibitora proteaze (Nacalai Tesque, Kyoto, Japan). Koncentracija proteina je mjerena BCA testom (Thermo Scientific, Rockford, IL). Jednaku količinu proteina lizat riješiti na koji sadrži SDS 2% -tnom agaroznom gelu i pasivno prenosi na PVDF membranu preko noći na sobnoj temperaturi. Membrane su blokirane s 1% obranog mlijeka /PBST tijekom 2 sata i podvrgnuta standardnom postupku imunodetekcijom upotrebom specifičnog primarnog protutijela. Primarna antitijela su kako slijedi: anti-humani MUC4 mab 8G7 (1:1000, generirani od strane dr Surinder K. Batra Sveučilišta Nebraska Medical Center, Omaha, NE) i 1G8 (1:1000, kupljen od Invitrogen, Camarillo, CA), i anti-humani a-tubulin MAb DM1A (1:2,000, Sigma-Aldrich). pregled

fosforilacija na kultiviranim stanicama. pregled

MUC4 bojenjem u kulturi stanica, stanice su posađene na 8-komorni slajdovi (Becton Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ) i inkubiraju preko noći. Stanice su fiksirane s 3,7% -tnom formaldehidu tijekom 10 minuta pri sobnoj temperaturi i bojano je s mAb 8G7 (1:24,000) i MAb 1G8 (1:4,000) preko noći na 4 ° C, respektivno. Detekcija signala provedena je metodom imunoperoksidaznog pomoću Vectastain Elite ABC opreme (Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA), prema uputama proizvođača. pregled

Imunohistokem za ljudska tkiva

IHC za čovjeka želučani karcinom je učinjeno pomoću sljedećih protutijela u maksimalnim rezati dijelove iz svakog tumora. MUC4 je otkrivena dva Mab, 8G7 i 1G8. Za komparativne studije, MUC1 ekspresija također je pregledao mab DF3 (IgG-a, TFB, Tokyo, Japan). IHC provedena je metodom imunoperoksidaznog kako slijedi. Antigen dohvat provedena je pomoću CC1 antigena dohvat pufera (pH8.5 EDTA, 10.037 ° C, 30 min., Ventana Medical Systems, Tucson, AZ) za sve dijelove. Nakon inkubacije sa primarnim antitijelima (mAb MUC4 /8G7 razrijedi 1:3000, 37 ° C, 32 min .; MAb MUC4 /1G8 razrijedi 1:500, 37 ° C, 24 min .; MAb MUC1 /DF3 razrijeđen 1:50 37 ° C, 32 min.) u fosfatnom puferu s fiziološkom otopinom pH 7.4 (PBS) s 1% albumina goveđeg seruma, sekcije su obojene na osnovnom XT automatizirani kliznog Stainera pomoću kita za detekciju diaminobenzidinu (DAB ultraView, Ventana Medical Systems). Radi jednostavnosti, MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 i MUC1 /DF3 se koriste za označavanje mucinske antigena koji su otkriveni od strane svakog antitijela. Pregled

bodovanje rezultata i statističke analize. Pregled

Četiri oslijepio istražiteljima ( YT, MH, MG i SY) ocijenila bojenje podatke IHC samostalno. Kada je procjena razlikovala među četiri, konačna odluka je donesena konsenzusom. Rezultati su procijenjena je na temelju postotka pozitivno obojenih stanica karcinoma, a postotak podaci su svrstani u šest razreda prema sljedećem sustavu bodovanja: negativno, niti jedna od stanica karcinoma obojenih; blijeda, < 5% od karcinoma stanica obojenih; 1+, ≥5% < 25%; 2+, ≥25% < 50%; 3+, ≥50% < 75%; i 4+: ≥75% obojeni. Slučajevi s ≥5% od karcinoma stanica obojenih se smatra pozitivnim. Statistička analiza provedena je neparametrijskim postupcima koji koriste Excel Statistika ver.3 softver generira Hisae Yanai, Prirodoslovno-matematički fakultet, Sveučilište u Saitama (OMS Publishing, Japan). Pregled

Preživljavanje bolesnika je u odnosu između skupine s pozitivnim MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 ili MUC1 /DF3 izraz, a skupina s negativnim izrazom prema Kaplan-Meier metodi, a razlike između krivulja preživljavanja su ispitani pomoću log-rank testa. Vjerojatnost P < 0,05 smatrana je statistički značajna pregled

Rezultati

Procjena dva monoklonskih protutijela za MUC4 pregled

Kako istražiti razlike u specifičnosti antitijela između 8G7 i 1G8, mi. provodi RT-PCR, Western blot i IHC analiza pomoću dva želučanog raka stanične linije, SNU-16 i NCI-N87 stanica. MUC4 mRNA detektirana je u obje stanične linije karcinoma želuca (Sl. 1). U skladu s prethodnom izvješću [14], naši podaci su pokazali da 8G7 prepoznao vrlo visoku protein molekularne težine (više od 500 kD, što je očekivani veličina za rodnoj MUC4). Naprotiv, 1G8 ne pokazuje imunološki reaktivne trake (Sl. 1b). Isti rezultat zabilježen je u IHC analize (sl. 1 C). Pregled

Imunohistokemijska Bojenje gastrektomije primjeraka

imunohistokemijska bojanja ne-neoplastične želučane sluznice. Pregled

U ne -neoplastic sluznica slučajeva s rakom želuca, MUC4 /8G7 je ponekad izražena u citoplazmi površine sluznice epitela, i često, ali slabo u citoplazmi fundusnih i pilorusa žlijezde (Slika S1 a i D). MUC4 /1G8 često je izražen u staničnoj vrha i citoplazmi površine sluznice epitela, i često, ali slabo u citoplazmi fundusnih i pilorusa žlijezde (Slika S1 B i E), te je stalno vidjeti na vaskularni endotel. MUC1 /DF3 ponekad je izražena u površinskom sluznice epitela, i uvijek u fundusnih žlijezda (posebno intenzivno u stanici vrhovima), ali ne u pilorusa žlijezde (Slika S1 C i F). Pregled

Imunohistokemisjko bojenje želučanog adenokarcinoma. pregled

ispitali smo gastrektomije primjeraka 104 ranih želučanog karcinoma (pT1b2), jer smo željeli izbjeći velike degenerativne promjene koje se često vide u naprednim tkiva raka i prilagoditi pozornicu za točnu usporedbu IHC nalaz i kliničko čimbenici. pregled

Kada je više od dvije histološka tipa su pomiješane u jednoj leziji u gastrektomije primjeraka 104 ranih želučanog karcinoma, svaki histološki uzorak ocijenjen samostalno, u skladu s JCGC [16]. Stoga, u 104 gastrektomije uzoraka, mogli ocjenjivati ​​197 karcinom žarišta različitih histoloških tipova ukupno. Pregled

Među 197 lezije bilo je 15 lezije papilarni adenokarcinom (PAP) (Sl. 2A-D), 39 dobro diferencirana cijevnog adenokarcinoma (tub1) (Sl. 2E-H), 52 umjereno diferenciranog cijevnog adenokarcinoma (tub2) (Sl. 2I-L), 6 mucinozni karcinomi (MUC) (Sl. 2 M-P), 8 za krute tvari tipa slabo diferencirani adenokarcinomom (por1) (Sl. 2Q-T), 47 ne-krute tipa slabo diferencirani adenokarcinom (por2) (Sl. 2U-X) i od 30 karcinoma stanica pečat prstena (sig) (Sl. 2Y-b), na temelju kontekstu zajedničke histološka klasifikacija karcinoma želuca u JCGC [16]. Prema kontekstu u klasifikaciji WHO tumora želuca [17], kao i da je u JCGC [16], PAP i tub1 su svrstane u "dobro diferenciranog adenokarcinoma", a por1 i por2 su svrstane u "slabo diferencirana adenokarcinom ". Podaci o stopi ekspresiji MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 i MUC1 /DF3 sažeti su na slici 3. Detaljan broj i postotak pozitivno obojenih maligne stanice koriste sustav bodovanja sažeti su u tablici S1. Pregled

ekspresija profil MUC4 /8G7. pregled

Među 197 adenokarcinoma lezije na, MUC4 /8G7 izražena u 83 lezija (42%). MUC4 /8G7 pokazali značajno veću stopu pozitivnog izražavanja (≥5% stanica karcinoma obojeni) u dobro diferenciranim vrste (PAP + tub1: 70%, 38/54), nego u loše diferenciranim vrste (por1 + por2: 18% , 10/55) ( P pregled i 0.0001) (Slika 3A, strelice).. MUC4 /8G7 je izražen uglavnom u citoplazmi tumorskih stanica PAP (sl. 2b), tub1 (Sl. 2F) i tub2 (Sl. 2J), u slučajevima s pozitivnim izražavanja. Pregled

Profil Expression od MUC4 /1G8. pregled

Među 197 adenokarcinoma lezija u, MUC4 /1G8 je izražen u 95 lezija (48%). MUC4 /1G8 pokazali značajno veće stope pozitivnog izražavanja u dobro diferenciranim vrste (PAP + tub1: 67%, 36/54) nego da se u slabo diferencirane vrste (por1 + por2: 36%, 20/55) ( P pregled = 0,0021) (Sl. 3B, strelice). MUC4 /1G8 je izražen uglavnom na staničnim vrhovima PAP (Sl. 2C), tub1 (Sl. 2G) i tub2 (Sl. 2K), ili u intracitoplazmatskom mucin suštinu sig (sl. 2a), u slučajevima s pozitivni izraz. pregled

izražavanje profil MUC1 /DF3. pregled

Među 197 adenokarcinoma lezija u, MUC1 /DF3 je izražena u 62 lezija (31%). MUC1 /DF3 pokazali značajno veće stope pozitivnog izražavanja u dobro diferenciranim vrste (PAP + tub1: 52%, 28/54), nego da se u slabo diferencirane vrste (por1 + por2: 13%, 7/55) ( P pregled i 0.0001) (Slika 3C, strelice).. MUC1 /DF3 je izražen uglavnom na staničnim vrhovima Pap tub1 i tub2 (sl. 2 L), u slučajevima s pozitivnim izražavanja. Pregled

Usporedba mucina izraz u svakom histološka tipa. Pregled

u tub1, ekspresija djela MUC4 /8G7 i MUC4 /1G8 bili su znatno veći nego što je MUC1 /DF3 ( P pregled = 0,0106 i P pregled = 0,039, odnosno) (Sl. 3, * 1). U por2, stopa izraz MUC4 /1G8 bila je značajno viša od one MUC4 /8G7 ( P pregled = 0,0286) ili onaj MUC1 /DF3 ( P pregled = 0,0005) (Sl. 3, 2 x). U SIG, izraz stopa MUC4 /1G8 bila je značajno viša od one MUC4 /8G7 ( P pregled = 0,0158) ili da MUC1 /DF3 (sig, P pregled = 0,0019) (Slika , 3 x 3). U ostalim histolgical vrste (PAP, tub2, MUC i por1), nije bilo značajne razlike u postotku ekspresije među MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 i MUC1 /DF3 (Sl. 3). Pregled

Odnos između MUC4 ili MUC1 izraz i invazija limfnih žila, invazija krvnih žila i limfnih čvorova metastaza. pregled

Semikvantitativna evaluacija limfna invazija (ly), venski invazije (v) i statusa limfnih čvorova metastaze (N) je definiran u JCGC [16]. Limfna invazija (ly) je procijenjena kako slijedi; ly0, ne limfna invazija; ly1, minimalno limfna invazija; ly2, umjerena limfna invazija; i ly3, obilježen limfna invazija. Za venskog invazije (v), slično kao i procjena (v0 do v3) vrši se pomoću elastične bojanje (Victoria-plava), koji je upisan u Hematoxylin-eozinom bojenja. Ukupni broj limfnih čvorova i broj uključenih limfnih čvorova kod svakog čvora postaje (N) snimljeni su na sljedeći način; N0, nema regionalni limfni čvor metastaze; N1, metastaze u 1-2 regionalnim limfnim čvorovima; i N2, metastaze u 3-6 regionalnih limfnih čvorova. Regionalni limfni čvor metastaze zabilježeno je u 55 bolesnika (N1, 41 predmeta, N2, 14 slučajeva). Nije bilo značajne korelacije između histoloških tipova i limfni invazije, venske invazije ili statusa limfnih čvorova metastaza. Pregled

U svakom slučaju, što je najviša ocjena od šest IHC razreda (negativno, nesvjestica, 1+, 2+, 3+ ili 4+) u različitim histološkim tipovima se računati kao rezultat IHC u svakom pojedincu, npr "IHC ocjenu 4+" za slučaj s [tub1 rezultat, 3+; tub2 rezultat, 4+]. Istraživali smo korelaciju između rezultata IHC i ly, V i N čimbenika u svakog pacijenta. Kao što je prikazano u tablici 1, izraz MUC4 /8G7 bio povezan s limfni invazije (r = 0,304, P pregled = 0.033). Izraz MUC4 /1G8 bio povezan s limfni invazije (r = 0,395, P pregled = 0,001) i limfnih čvorova metastaze (r = 0,296, P pregled = 0,045). Izraz MUC1 /DF3 bio povezan s limfni invazije (r = 0,357, P pregled = 0,032) i venskog invazije (r = 0,377, P pregled = 0,024). Pregled

Nadalje, ispitali smo povezanost među IHC ocjenama MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 i MUC1 /DF3. Kao što je prikazano u tablici 2, postoji korelacija između MUC4 /8G7 rezultat i MUC4 /1G8 semaforu (r = 0,486, P pregled i 0.0001). Nasuprot tome, nije bilo korelacija između MUC4 /8G7 rezultat i MUC1 /DF3 rezultatom (r = 0,267, P pregled = 0,202), i nije bilo korelacija između MUC4 /1G8 rezultat i MUC1 /DF3 rezultatom (r = 0,245, p pregled = 0,269). pregled

Odnos između MUC4 ili MUC1 izražavanja i opstanak. pregled

Među 104 bolesnika, praćenje podataka dobiveno 87 pacijenata. Srednje razdoblje praćenja bilo je 47,5 mjeseci (raspon 0-193 mjeseci). U 87 bolesnika, jedan pacijent umro od želučanog karcinoma 39 mjeseci nakon operacije, jedan pacijent je pokazao metastaze u jetri, ali je preživio za 78 mjeseci, a dva pacijenta umrla od drugih bolesti. U 85 bolesnika s izuzetkom dva pacijenta umrla od drugih bolesti, Kaplan-Meier procjena je testiran pomoću log-rank testa. Između pozitivnog grupe i negativne grupe (MUC4 /8G7 + vs -, MUC4 /1G8 + vs - ili MUC1 /DF3 + vs -), log-rank test ukupnog preživljavanja (MUC4 /8G7, P = 0,27; MUC4 /1G8, P = 0,37; MUC1 /DF3, P = 0,22), a preživljavanje bez progresije bolesti (MUC4 /8G7, P = 0,85; MUC4 /1G8, P = 0,23; MUC1 /DF3, P = 0,83) nisu pokazale značajne razlike. Daljnja analiza 42 pacijenata preživjelo više od 5 godina i ne pokazuje značajne razlike. Pregled

Rasprava pregled

Nedavno smo izvijestili da je izraz MUC4 je nezavisna loša prognostički čimbenik pancreatobiliary adenokarcinoma [ ,,,0],10], [11], [12] kao i adenokarcinoma pluća [13] i oralni karcinom skvamoznih stanica [9]. MUC1 također je izvijestila da se siromašni prognostički čimbenik u različitim ljudskim novotvorina [4], [5]. Naša prethodna studija u želučanim raka, uključujući i rano raka i uznapredovalog raka pokazala je da MUC1 je koristan prognostički faktor za loš ishod u [6] pacijenata. U ovom istraživanju, odnos između izraza mucin i ishod pacijenta ne može se procijeniti, jer su želučani karcinom u ranoj fazi na pT1b2 a većina pacijenata su imali povoljan ishod. Ipak, dobiveni su sljedeći rezultati: (1) MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 i MUC1 /DF3 izrazi u svezi s limfni invazije. (2) Izraz MUC4 /1G8 bio povezan s limfnih čvorova metastaze. (3) MU1 /DF3 ekspresija bila povezana s venskom invazije. U Japanu, ESD je prvi tretman izbor za rane želučanog karcinoma. [3] Ispitivanje MUC4 kao MUC1 u ESD uzoraka može razjasniti hoće li dodatne operacije, uključujući limfne čvorove disekcije ili učestalim praćenjem za metastaze su potrebne. Pregled

Naša dosadašnja istraživanja pokazala da ne postoji korelacija između siginificant MUC4 izražavanje i MUC1 izraz [10], [11], [12], [13]. Također, u ovom istraživanju od želučanog karcinoma u ranoj fazi, nije bilo siginificant korelacija između ekspresije MUC4 i MUC1. Oba MUC4 i MUC1 izraz u želučanog karcinoma može biti povezano s lošim prognostičkim čimbenicima, kao što su limfni invazije, venske invazije i metastaziranja limfnog čvora, putem različitih mehanizama. Pregled

U prethodnom istraživanju želučanog karcinoma pomoću mab 8G7, Senapati et al. pokazala je da MUC4 /8G7 izraz nije bio povezan s tipom tumora, stadiju ili stupanj diferencijacije [18]. Zanimljivo je da su njihovi rezultati pokazuju stopu 42%, izraz u fazi raka I (n = 19), koji je u skladu s našim podacima (MUC4 /8G7: 42%, a MUC4 /1G8: 48%) u ovom istraživanju ispitivali Faza I raka (n = 104). Međutim, naša studija otkrila je da su oba MUC4 /8G7 i MUC4 /1G8 izrazi bili su različiti među histoloških tipova, a bile su značajno više u dobro diferenciranim vrsta nego u slabo diferenciranim tipa. MUC1 /DF3 izraz je također bio značajno viši u dobro diferenciranim vrsta nego u slabo diferenciranim tipa. Mi smo izvijestili da je MUC1 izraz bio visoko na dobro diferenciranog adenokarcinoma u želučanog karcinoma, uključujući uznapredovalog raka, a visoka MUC1 izraz može utjecati na preživljavanje bolesnika s dobro diferenciranim karcinomom želuca [6]. Visoka izraz MUC4 u dobro diferenciranog adenokarcinoma također mogu utjecati na preživljavanje pacijenata s rakom želuca. U našoj prethodnoj studiji [6], stopa visoke ekspresije MUC1 /DF3 bila je značajno viša u naprednim želučanog karcinoma nego da je u ranim želučanog karcinoma. Odnos MUC4 izražavanja s invazijom na želučanog karcinoma će biti zanimljivo područje proučavanja. Pregled

Postoji kontroverza u vezi s prognostički značaj MUC4 /8G7 i MUC4 /1G8 izražavanja. Stoga smo pregledali 19 članaka MUC4 IHC studija primjenjuju za razne ljudskih tkiva karcinoma (Tablica 3). Značaj MUC4 /8G7 i MUC4 /1G8 ne može se ocijeniti u 8 od 19 studija. Jedna studija je korištenjem poliklonalnog anti-MIUC4 antitijela izvijestio da MUC4 izraz se odnosi na fovorabel ishodom [19], tri studije pokazuju nikakvu korelaciju između ekspresije MUC4 i prognozu [20], [21], [22], a tri druge studije nisu bilo kakav komentar na korelacije između izraza MUC4 i prognozu [18], [23], [24], a preostali proučavanje raka štitnjače nisu dali MUC4 izraz u raka [25]. S druge strane, u ostalim 11 članaka, bilo je očito razlika od prognostičkog značenja između MUC4 /8G7 izražavanja i MUC4 /1G8 izražavanja. Većina studija koje koriste 8G7, koja je generirana protiv humanog MUC4, MUC4 /8G7 izraz se odnosi na agresivno ponašanje tumora ili lošim ishodom u ljudskim karcinoma [9], [10], [11], [12], [13], [ ,,,0],26]. Nasuprot tome, većina studija koje koriste 1G8, koja je podignuta protiv štakora ASGP-2, opisano je da MUC4 /1G8 izraz se odnosi na povoljan ishod [27], [28], [29], [30], iako je jedna studija gušterače adenokarcinom opisano da MUC4 /1G8 izraz se odnosi na slabe preživljavanje [31]. Ova jasna razlika, postavlja se pitanje da li 8G7 i 1G8 imaju bitno različite likove. Mab 1G8 se prikupljaju putem štakora Muc4 epitop [15]. Ljudska MUC4 i štakora Muc4 pokazuje više od 60% peptida sličnost sekvenci [32], ali oni nisu identični. Važno je napomenuti da IHC korištenjem Mab 1G8 uvijek prikazuje pozitivno bojenje u vaskularnom endotelu, što je nešto neobično kao izraz MUC4 koji je jedan od članova mucina. Pregled

Dakle, procijenili smo specifičnost mab 8G7 i Mab 1G8 pomoću Western blot-a IHC dva želučanih staničnim linijama raka. Naš Western blot analiza je pokazala da mab 8G7 prepoznao vrlo visoku protein molekularne težine (više od 500 kD, što je očekivani veličina za rodnoj MUC4), dok mab 1G8 ne pokazuje nikakve imunološki reaktivne trake. IHC analiza pokazala MAb 8G7 pozitivno bojenje nego Mab 1G8 negativan bojenje u dva želučane staničnim linijama raka. MUC4 mRNA također je izražen u dvije stanične linije karcinoma želuca u ovom istraživanju, kao što je prikazano u prethodnom istraživanju analizom stanične linije raka gušterače pomoću RT-PCR i sjevernoj blot analiza [33], [34]. Oba mab 8G7 i Mab 1G8 reagiraju s ljudskim tkivom s rakom želuca, iako su lokacije MUC4 /8G7 i MUC4 /1G8 izražavanja pokazuje značajno razliku. U želučanim tkivima raka MUC4 /8G7 je uglavnom eksprimiran u citoplazmi neoplastičnih stanica PAP i kada, dok MUC4 /1G8 je izražen uglavnom u staničnim vrhovima PAP i kada ili intracitoplazmatskim mucin supstancije SIG. Od citoplazmatske obrascu ekspresije MUC4 /8G7 se vidi iu gušterače adenokarcinom, Intrahepaticni holangiokarcinomom, extra jetre žučnih kanalića karcinoma, adenokarcinoma pluća i oralne karcinoma pločastih stanica [9], [10], [11], [12], [13 ] je Intracitoplazmatsko MUC4 /8G7 ekspresije u želučanim tkiva raka može biti razuman. Nasuprot tome, linearni ekspresije MUC4 /1G8 zajedno sa staničnim vrhovima želučanog tkiva raka mogu se odnositi na nepoznate funkcije ili karakteristike MUC4β podjedinice otkrivene MAb 1G8 potaknuto protiv epitopa štakora [15], kao što je ova studija pokazala da MUC4 /1G8 izraz odnosile su se na limfne invazije i limfnih čvorova metastaza koje su siromašne prognostički čimbenici, čak iu ranim karcinomom želuca. Osobito u por2 i sig, stopa izraz MUC4 /1G8 bila je značajno viša od one MUC4 /8G7 ili da MUC1 /DF3. Osim toga, tu je bila siginificant korelacija između MUC4 /8G7 izražavanja i MUC4 /1G8 izražavanja u bolesnika pregledanih. Dakle, IHC signal MUC4 /1G8 otkriven u gastrektomije uzoraka može pokazati značajan značenje epitopa otkrivenom putem mab 1G8, iako nije bilo reaktivnost MUC4 /1G8 ekspresije u ljudskim staničnim linijama karcinoma želuca (SNU-16 i NCI- N87). Epitop otkriven mab 1G8 je područje od interesa za buduće studije. Pregled

Na kraju, u ovom istraživanju ranih želučanog karcinoma, MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 i MUC1 /DF3 izrazi zabilježene uglavnom u dobro diferencirani adenokarcinom. Izraz MUC4 /8G7 bio povezan s limfni invazije. Izraz MUC4 /1G8 bio povezan s limfni invazije i limfnih čvorova metastaze. Izraz MUC1 /DF3 bio povezan s limfni invazije i venska invazije. Ispitivanjem MUC4 i MUC1 izražavanja u želučanog karcinoma postati koristan marker za predviđanje loše prognostičke čimbenike povezane s invazijom žila, čak iu ranom stadiju. Pregled

popratne podatke
Slika S1. pregled U ne-neoplastični sluznici slučajeva s rakom želuca, MUC4 /8G7 je ponekad izražena u citoplazmi površine sluznice epitela, i često, ali slabo u citoplazmi fundusnih i pilorusa žlijezde (A i D). MUC4 /1G8 često izražena u staničnom vrha i citoplazmi površine sluznice epitela, a često ali slabo u citoplazmi fundusnih i pilorusa žlijezde (B i E), i neprestano vidjeti na vaskularni endotel. MUC1 /DF3 ponekad je izražena u površinskom sluznice epitela, i uvijek u fundusnih žlijezda (osobito intenzivno u staničnim vrhovima), ali ne u pilorusa žlijezde (C i F). Izvorni uvećanje × 100 (A, B, C), × 400 (D, E, F) pregled, doi:. 10,1371 /journal.pone.0049251.s001 pregled (TIF) pregled Tablica S1. pregled Detaljan broj i postotak pozitivno obojenih maligne stanice koriste sustav bodovanja pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0049251.s002 pregled (DOC) pregled

Izvori pregled

zahvaljujemo gospodinu Y. Atsuchi, g K. Matsuo, Gospođa C. Babu, gđi Y. Nishimura, gđa S. Yoshimura i gđa I. Houjou za njihovu tehničku pomoć. pregled

• PLoS ONE: Visoka razina aromatske aminokiseline u želučanom soku, tijekom ranih stadija raka želuca Progression
• PLoS ONE: CYP2E1 RsaI /Pstl polimorfizam i rak želuca osjetljivosti: Meta-analiza na temelju 24 case-control Studies