PLoS ONE: MUC4 и MUC1 Экспрессия в аденокарциномы желудка коррелируется с судна инвазии и метастазов в лимфатических узлах: иммуногистохимического исследования раннего Желудочный Cancer

Абстрактный
<р> Ранее мы уже сообщали, что экспрессия MUC4 является плохим прогностическим фактором в различных карцином. Наше предыдущее исследование также показало, что экспрессия MUC1 в рака желудка, в том числе на ранних и поздних стадиях является плохим прогностическим фактором. В настоящем исследовании профилей экспрессии MUC4 и MUC1 были исследованы с помощью иммуногистохимии (IHC) с использованием двух анти-MUC4 моноклональных антител (мАт), 8G7 и 1G8, а также анти-MUC1 МАТ DF3 в 104 Гастрэктомия образцов ранней аденокарциномы желудка с подслизистой вторжение (pT1b2), в том числе 197 гистологических подтипов поражений. Перед исследованием IHC человеческих особей, мы оценивали специфичность двух МАТ с помощью Вестерн-блоттинга и IHC двух мРНК MUC4, экспрессирующих желудочных клеточные линии рака предстательной. MAb 8G7 реагирует четко, в то время как MAb 1G8 не показал какой-либо реактивности, либо вестерн-блоттинга или IHC. В ВВК из рака желудка, показатели экспрессии MUC4 /8G7, обнаруженные MAb 8G7, MUC4 /1G8, обнаруженные MAb 1G8 и MUC1 /DF3 обнаруженные MAb DF3 в хорошо дифференцированных типов (70%, 38/54, 67%, 36/54; 52%, 28/54) были значительно выше, чем в слабо дифференцированных типов (18%, 10/55, 36%, 20/55, 13%, 7/55) ( P
&л; 0,0001; P
= 0,0021; P
&л; 0,0001), соответственно. Выражение MUC4 /8G7 была связана с лимфатической инвазии (р = 0,304, P
= 0,033). С другой стороны, выражение MUC4 /1G8 была связана с лимфатической инвазии (р = 0,395, P
= 0,001) и узла метастаза лимфатический (г = 0,296, P
= 0,045). Выражение MUC1 /DF3 была связана с лимфатической инвазии (р = 0,357, P
= 0,032) и венозной инвазии (г = 0,377, P
= 0,024). В заключение отметим, что выражение MUC4, а также MUC1 в ранних рака желудка является полезным маркером для прогнозирования неблагоприятных прогностических факторов, связанных с инвазией сосудов
<р> Цитирование:. Тамура Y, Higashi M, Китамото S, Ёкояма S, Osako М, Horinouchi М., и др. (2012) MUC4 и MUC1 Экспрессия в аденокарциномы желудка коррелируется с судна инвазии и метастазов в лимфатических узлах: иммуногистохимическое изучению раннего рака желудка. PLoS ONE 7 (11): e49251. DOI: 10.1371 /journal.pone.0049251
<р> Редактор: Фазлул H. Саркар, Wayne State University школы медицины, Соединенные Штаты Америки
<р> Поступило: 17 августа 2012 года; Принято: 5 октября 2012 года; Опубликовано: 13 ноября, 2012
<р> Copyright: © 2012 Tamura и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Это исследование была частично поддержана князьями Такамацу фондом исследований рака S. Йонезава; Гранты-в-помощь для научных исследований по научным исследованиям (B) 23390085 С. Йонезава; Научно-исследовательский (С) 21590399 М. Хигаси; Молодых ученых (B) 24701008 С. Екояма; Научные исследования по приоритетным направлениям 239349 С. Китамото (ЯОРН стипендий) из Министерства образования, науки, спорта, культуры и техники, Япония; научный фонд Поджелудочная Японии С. Екояма; и Мемориальный фонд Кодама, Япония М. Higashi. С. Батра поддерживается частично Национальных институтов здравоохранения (гранты CA78590, CA163120, CA133944 и CA111294). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи. Никакого дополнительного внешнего финансирования не получил для этого исследования

Конкурирующие интересы:.. Авторы заявляют, что у них нет никакого конфликта интересов в отношении работы в исследовании

Введение
<р> Рак желудка является четвертым наиболее распространенным видом рака во всем мире и более чем на 90% от рака желудка являются аденокарциномы [1]. В последнее время в Японии, раннее обнаружение с помощью рутинного эндоскопического обследования в гастроэнтерологических клиниках привела точные диагнозы и эффективные хирургические или эндоскопические методы лечения, что приводит к относительно лучшим прогнозом. При анализе 11,261 пациентов с раком желудка, обработанной резекции желудка, то TNM 5-летняя выживаемость для стадии IA был 91,8%, и для стадии IB выживаемость составила 84,6% [2]. Для раннего рака желудка, эндоскопическая подслизистая диссекция (ESD) является первым выбором лечения в Японии, но критерии дополнительной операции, включая лимфодиссекция после того, как ОУР до сих пор противоречивы [3].
<Р> Наша серия иммуногистохимии (IHC) исследования для муцина выражение в различных человеческих новообразованиями показали, что экспрессия MUC1 муцина (пан-эпителиальный ассоциированный с мембранами муцина) связано с инвазивной распространением опухолей и плохим исходом пациентов, тогда как экспрессия MUC2 муцин (кишечный тип секреторной муцин) связано с неинвазивной распространением опухолей и благоприятный исход для пациентов [4], [5]. Наше предыдущее исследование показало, что экспрессия MUC1 в рака желудка является плохим прогностическим фактором [6].
<Р> MUC4 впервые было сообщено, как трахеобронхиального муцина [7] и представляет собой ассоциированный с мембранами муцин [8]. В нашем исследовании серии, экспрессия MUC4 при внутрипеченочном холангиокарциномой, поджелудочной железы протоковой аденокарциномы, внепеченочных желчных протоков карциномы, аденокарциномы легких и полости рта плоскоклеточный рак был независимым фактором неблагоприятного прогноза и является полезным маркером, чтобы предсказать исход больных [ ,,,0],5], [9], [10], [11], [12], [13]. Unfortunatly, есть несколько исследований профиля экспрессии MUC4 в развитии рака желудка человека. В настоящем исследовании мы изучили профили экспрессии MUC4, а также MUC1 в ранних желудочных раковых тканей и обнаружили, что MUC4 и MUC1 выражение в раннего рака желудка стала бы плохими прогностическими факторами вторжения лимфатических сосудов, разрастание кровеносных сосудов и лимфатических узлов метастазирование
. <р> Как анти-MUC4 моноклональные антитела (мАт), 8G7 и 1G8, как известно, чтобы обнаружить различные участки молекулы MUC4. MAb 8G7 распознает последовательность тандемного повтора (STGDTTPLPVTDTSSV) человеческого субъединицей MUC4α [14]. МАт 1G8 поднимается против крысиной последовательности (крысы ASGP-2), и распознает эпитоп на Крысе ASGP-2 субъединицей, что соответствует человеческому субъединицей MUC4β, и показывает перекрестную реактивность с образцов человека [15]. Таким образом, особое внимание было уделено сравнению двух анти-MUC4 МАТ с помощью Вестерн-блоттинга и IHC двух желудочных линий раковых клеток, перед исследованием IHC желудка раковых тканей человека. Кроме того, поскольку существует противоречие относительно прогностической значимости этих анти-MUC4 МАТ, обзор литературы выражения MUC4 в различных раковых заболеваний также была проведена.

Материалы и методы

Пациенты и ткани Образцы
<р> гастрэктомия образцы 104 ранних рака желудка, которые показывают подслизистого вторжение, pT1b2, с или без метастазов в лимфатических узлах, были извлечены из файла в период между 1994 и 2008 годах из больницы Кагосима-ши медицинской ассоциации. Средний возраст пациентов составил 65,7 (S.D., 9,8, диапазон, 39-92 лет, средний возраст 66 лет); 64 случая были мужчины, и 40 случаев были женщинами. Данное исследование было проведено в соответствии с руководящими принципами Хельсинкской декларации и одобрен Комитетом по этике для Кагосима-ши больницы медицинской ассоциации (KMAH 2011-02-02) путем. Сообщил, письменное согласие было получено от всех пациентов. В случаях с использованием более двух гистологических типов, смешанных в одном поражении, каждый гистологический образец оценивали независимо друг от друга, в соответствии с японской классификации Желудочный карцинома (JCGC) [16].

Оценка моноклональных антител для MUC4 <бр>

Клетки и условия культивирования.
<р> желудка человека раковых клеток линии (СНУ-16 и NCI-N87) и панкреатических раковых клеток линии (PANC1 и CAPAN1) были приобретены из американской коллекции типовых культур (Manassas, В.А.). Оба рака желудка клетки поддерживали в среде RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури); Клетки PANC1 поддерживали в среде DMEM (Sigma-Aldrich); Клетки Capan1 поддерживали в среде DMEM /F-12 (Sigma-Aldrich). Все средства массовой информации, дополненной 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Gibco, Бреда, Нидерланды) и 100 ед /мл пенициллина /100 мкг /мл стрептомицина (Sigma-Aldrich). Все клетки инкубировали в 5% СО 2 при 37 ° С и выдерживают при суб-сливающийся уровнях.

Выделение РНК и ОТ-ПЦР.
<Р> Суммарную РНК экстрагировали из клеток с использованием RNeasy мини (Qiagen, Hilden, Germany) и количественно оценивали с помощью NanoDrop ND-1000 спектрофотометра. Полученную мРНК (2 мкг) подвергали обратной транскрипции в кДНК с высокой пропускной способностью РНК к набору кДНК (Applied Biosystems, Foster City, CA). Следующие праймеры были сконструированы для последующей ПЦР: MUC4, 5'- TGGGACGATGCTGACTTCTC-3 ', 5'-CCCCGTTGTTTGTCATCTTTC-3'; ACTB, 5'-CTCTTCCAGCCTTCCTTCCTG-3 ', 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'. ПЦР проводили с AmpliTaq Gold Fast PCR Master Mix (Applied Biosystems) в соответствии с протоколом производителя.

экстракции белка и вестерн-блоттинга.
<Р> Всего лизаты клеток получали с использованием Рипа буфера, содержащего ингибитор протеазы коктейль (Nacalai Tesque, Киото, Япония). Концентрацию белка измеряли с помощью ВСА анализа (Thermo Scientific, Rockford, IL). Равное количество белка лизата разделяли на 2% агарозном геле, содержащем SDS и пассивно переносили на PVDF мембрану в течение ночи при комнатной температуре. Мембраны блокировали 1% обезжиренным молоком /PBST в течение 2-х часов и подвергали стандартной процедуре иммунологического с использованием специфических антител. Первичные антитела являются: анти-человеческий MUC4 MAb 8G7 (1:1000, порождена доктором Суриндер К. Батра, Университет штата Небраска медицинский центр, Омаха, Небраска) и 1G8 (1:1000, приобретены у Invitrogen, Camarillo, CA), и анти-человеческий а-тубулина МАТ DM1A (1:2,000, Sigma-Aldrich).

Иммуноцитохимическая для культивируемых клеток.
<р> для MUC4 окрашивания в культивируемых клетках, клетки были высеяны в 8-камерные слайды (Becton Dickinson и Компания, Franklin Lakes, NJ) и инкубировали в течение ночи. Клетки фиксировали 3,7% формальдегидом в течение 10 минут при комнатной температуре и окрашивают с моноклональными антителами 8G7 (1:24,000) и MAb 1G8 (1:4,000) в течение ночи при температуре 4 ° С, соответственно. Обнаружение сигнала проводили с помощью метода иммунопероксидазной с использованием Vectastain Elite ABC набор (Vector Laboratories, Inc., Burlingame, CA) в соответствии с инструкциями изготовителя.

Immunohistochemistry для тканей человека
<р> IHC для человека желудочная карцинома было сделано с помощью следующих антител в максимальных сечениях среза в каждой опухоли. MUC4 была обнаружена двумя МАТ, 8G7 и 1G8. Для сравнительного исследования, экспрессия MUC1 также исследовали с помощью MAb DF3 (IgG мыши, ТФБ, Токио, Япония). IHC проводили методом иммунопероксидазной следующим образом. Антиген поиска проводили с использованием CC1 антигена извлечения буфера (pH8.5 ЭДТА, 10037 ° С, 30 мин., Ventana Medical Systems, Tucson, AZ) для всех разделов. После инкубации с первичными антителами (MAB MUC4 /8G7 разбавленный 1:3000, 37 ° C, 32 мин .; МАТ MUC4 /1G8 разбавленный 1:500, 37 ° С, 24 мин .; МАТ MUC1 /DF3 разбавленный в соотношении 1:50, 37 ° с, 32 мин.) в фосфатно-солевом буферном рН 7,4 (PBS) с 1% бычьего сывороточного альбумина, срезы окрашивали на Benchmark XT автоматизированном режиме слайд ситечко с использованием набора для обнаружения диаминобензидин (UltraView DAB, Ventana Medical Systems). Для простоты, MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 и MUC1 /DF3 используются для обозначения муцина антигены, обнаруженные каждым антителом.

Подсчет результатов и статистического анализа.
<Р> Четыре ослепил исследователей ( YT, MH, MG и SY) оценивали данные окрашивания IHC независимо друг от друга. Когда оценка отличалась среди четырех, окончательное решение было принято на основе консенсуса. Результаты оценивали на основании процента положительно окрашенных клеток карциномы, а процент данные были разделены на шесть классов с использованием следующей оценочной системе: отрицательный, ни один из клеток карциномы окрашенными; слабый, &л; 5% раковых клеток окрашиваются; 1+, ≥5% до &лт; 25%; 2+, ≥25% до &лт; 50%; 3+, ≥50% до &лт; 75%; и 4 +: ≥75% окрашиваются. Случаи с ≥5% карциномы клеток окрашиваются считались положительными. Статистический анализ проводили с помощью непараметрических методов с использованием EXCEL-статистика Ver.3 программное обеспечение, порожденную Hisae Янаи, факультет естественных наук, Университета Сайтама (OMS Publishing, Япония).
<Р> Выживаемость пациентов сравнивали между группой с положительным MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 или MUC1 /DF3 выражение и группа с отрицательным выражением по методу Каплана-Мейера, а также различия между кривыми выживаемости были протестированы с использованием лог-рангового теста. Вероятность Р &ЛТ; 0,05 считалось статистически значимым

Результаты

Оценка двух моноклональных антител для MUC4
<р> Чтобы исследовать разницу в специфичности антител между 8G7 и 1G8, мы. проводят ОТ-ПЦР, Вестерн-блоттинга и анализ IHC с использованием двух желудочных линий раковых клеток, СНУ-16 и NCI-N87 клеток. МРНК MUC4 была обнаружена в двух желудочных линий раковых клеток (фиг. 1А). В соответствии с предыдущим докладом [14], наши данные показали, что 8G7 признали очень высоким содержанием белка молекулярной массой (более 500 кДа, который был ожидаемый размер для родной MUC4). Наоборот, 1G8 не показывает никаких иммунореактивных полос (рис. 1, б). Такой же результат наблюдался при анализе IHC (рис. 1в).

Иммуногистохимическое Окрашивание Гастрэктомия образцов

иммуногистохимическое окрашивание неопухолевых слизистой оболочки желудка.
<Р> В невозбужденном -neoplastic слизистая случаев с раком желудка, была выражена MUC4 /8G7 иногда в цитоплазме поверхности слизистой эпителия, и часто, но слабо в цитоплазме фундального и пилорического желез (рис S1 A и D). часто выражается MUC4 /1G8 в вершине клетки и цитоплазме поверхности слизистой эпителия, и часто, но слабо в цитоплазме фундального и пилорического желез (рис S1 В и Е), и был замечен постоянно на сосудистый эндотелий. MUC1 /DF3 иногда выражается в поверхностном слизистой эпителия, и всегда в фундальном желез (особенно интенсивно в клеточных верхушек), но не в пилорического желез (рис S1 C и F).

иммуногистохимическое окрашивание аденокарциномы желудка.
<р> мы исследовали образцы гастрэктомия 104 ранних рака желудка (pT1b2), так как мы хотели, чтобы избежать серьезных дегенеративных изменений, которые часто встречаются в передовых раковых тканей, а также отрегулировать почву для точного сравнения между IHC находки и клиникопатологическими факторы.
<р> Когда более двух гистологических типов были смешаны в одном поражении в гастрэктомия образцах 104 раннего рака желудка, каждая гистологическая картина была оценена независимо друг от друга, в соответствии с JCGC [16]. Таким образом, в образцах 104 Гастрэктомия, мы могли бы оценить 197 карцинома очаги различных гистологических типов в общей сложности.
<Р> Среди 197 поражений было 15 поражений папиллярной аденокарциномы (PAP) (рис. 2А-D), 39 хорошо дифференцированной трубчатой ​​аденокарциномы (tub1) (рис. 2E-H), 52 умеренно дифференцированной трубчатой ​​аденокарциномы (tub2) (рис. 2I-L), 6 из муцинозных карцином (MUC) (рис. 2 М-Р), 8 твердого типа слабо дифференцированной аденокарциномы (por1) (рис. 2Q-Т), 47 нетвердых типа слабо дифференцированы аденокарциномы (por2) (рис. 2U-X) и 30-клеточной карциномы перстень (сиг) (рис. 2Y-б), на основе контекста общей гистологической классификации рака желудка в JCGC [16]. В соответствии с контекстом в классификации ВОЗ опухолей желудка [17], а также, что в JCGC [16], PAP и tub1 были разделены на "хорошо дифференцированной аденокарциномы", и por1 и por2 были разделены на "слабо дифференцированной аденокарциномы ". Данные скорости экспрессии MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 и MUC1 /DF3 были обобщены на рисунке 3. Подробное количество и процент положительно окрашенных опухолевых клеток с использованием балльной системы были обобщены в таблице S1.

Выражение профиля MUC4 /8G7.
<р> Среди 197 аденокарциномы поражений, была выражена MUC4 /8G7 в 83 поражений (42%). MUC4 /8G7 показали значительно более высокий уровень положительного выражения (≥5% от раковых клеток окрашивали) в хорошо дифференцированных типов (PAP + tub1: 70%, 38/54), чем в слабо дифференцированных типов (por1 + por2: 18% , 10/55) ( P
&л; 0,0001) (рис 3А, стрелки).. MUC4 /8G7 выражалась главным образом в цитоплазме опухолевых клеток РАР (рис. 2В), tub1 (рис. 2F) и tub2 (рис. 2J), в случаях с положительным выражением.

Профиль экспрессии из MUC4 /1G8.
<р> Среди 197 аденокарциномы поражений, была выражена MUC4 /1G8 в 95 поражений (48%). MUC4 /1G8 показали значительно более высокие показатели положительной экспрессии в хорошо дифференцированных типов (PAP + tub1: 67%, 36/54), чем в слабо дифференцированы типов (por1 + por2: 36%, 20/55) ( P
= 0,0021) (рис. 3Б, стрелки). MUC4 /1G8 выражалась главным образом в клеточных верхушек РАР (рис. 2С), tub1 (рис. 2G) и tub2 (рис. 2K), или в цитоплазму муцина вещества сиг (рис. 2а), в случаях с положительное выражение.

выражение профиля MUC1 /DF3.
<р> Среди 197 аденокарциномы поражений, была выражена MUC1 /DF3 в 62 поражений (31%). MUC1 /DF3 показали значительно более высокие показатели положительной экспрессии в хорошо дифференцированных типов (PAP + tub1: 52%, 28/54), чем в слабо дифференцированы типов (por1 + por2: 13%, 7/55) ( P
&л; 0,0001) (рис 3C, стрелки).. MUC1 /DF3 выражалась главным образом в клеточных верхушек PAP, tub1 и tub2 (рис. 2 л), в случаях с положительным выражением.

Сравнение муцина выражение в каждом гистологического типа.
<Р> В tub1, выражение скорости MUC4 /8G7 и MUC4 /1G8 были значительно выше, чем у MUC1 /DF3 ( P
= 0,0106 и P
= 0,039, соответственно) (рис. 3, * 1). В por2, скорость экспрессии MUC4 /1G8 была значительно выше, чем у MUC4 /8G7 ( P
= 0,0286) или что из MUC1 /DF3 ( P
= 0,0005) (рис. 3, * 2). В сиг, скорость экспрессии MUC4 /1G8 была значительно выше, чем у MUC4 /8G7 ( P
= 0,0158) или из MUC1 /DF3 (сиг, P
= 0,0019) (рис . 3, * 3). В других histolgical типов (PAP, tub2, MUC и por1), не было никаких существенных различий в показателях экспрессии среди MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 и MUC1 /DF3 (рис. 3).

Отношения между MUC4 или MUC1 выражение и инвазия лимфатических сосудов, инвазия кровеносных сосудов и метастазов в лимфатических узлах.
<р> полуколичественный оценка лимфатической инвазии (LY), венозное инвазии (v) и состояние узла метастаз лимфатический (N) определяется в JCGC [16]. Лимфатической инвазии (LY) оценивали следующим образом; ly0, нет лимфатической инвазии; ly1, минимальный лимфатической инвазии; LY2, умеренное лимфатической инвазии; и ly3, отмеченные лимфатическую вторжения. Для венозной инвазии (V), аналогично оценке (v0 к v3) проводили с использованием эластичного окрашивания (Виктория-синий), который был добавлен в окрашивание гематоксилином-эозином. Общее количество лимфатических узлов и число пораженных лимфатических узлов на каждой узловой станции (N), были записаны следующим образом; N0, ни одна из региональных метастазов в лимфатических узлах; N1, метастазирование в 1-2 регионарных лимфатических узлах; и N2, метастазирование в 3-6 регионарных лимфатических узлах. Региональный метастаз лимфатических узлов наблюдалось у 55 пациентов (N1, 41 случаев; N2, 14 случаев). Там не было никакой существенной корреляции между гистологических типов и лимфатической инвазии, венозного вторжения или состояния узла метастаз лимфатический.
<Р> В любом случае, самый высокий балл из шести классов IHC (отрицательный, слабый, 1+, 2+, 3+ или 4+) в различных гистологических типов подсчитывали как оценка IHC каждого индивидуума, например, "IHC оценка 4+" для случая с [tub1 балла, 3+; tub2 оценка, 4+]. Мы оценили корреляцию между оценкой IHC и Л.Я., V и N факторов у каждого пациента. Как показано в таблице 1, выражение MUC4 /8G7 было связано с лимфатической инвазии (R = 0,304, P
= 0,033). Выражение MUC4 /1G8 была связана с лимфатической инвазии (р = 0,395, P
= 0,001) и узла метастаза лимфатический (г = 0,296, P
= 0,045). Выражение MUC1 /DF3 была связана с лимфатической инвазии (г = 0,357, P
= 0,032) и венозной инвазии (г = 0,377, P
= 0,024).
<Р> Кроме того, мы исследовали корреляцию между оценками IHC из MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 и MUC1 /DF3. Как показано в таблице 2, существует корреляция между MUC4 /8G7 балла и MUC4 /1G8 балл (г = 0,486, <ЕМ> P
≪ 0,0001). В отличие от этого, не было никакой корреляции между MUC4 /8G7 балла и MUC1 /DF3 балла (г = 0,267, P
= 0,202), и не было никакой корреляции между MUC4 /1G8 балла и MUC1 /DF3 балла (г = 0,245, P
= 0,269).

Отношения между выражением и выживания MUC4 или MUC1.
<р> Среди 104 пациентов, последующие данные были получены для 87 пациентов. Медиана период наблюдения составил 47,5 месяцев (диапазон 0-193 месяцев). В 87 пациентов, один пациент умер от рака желудка 39 месяцев после операции, один пациент показал метастазы печени, но выживали в течение 78 месяцев, и два пациента умерли от других заболеваний. В 85 пациентов, за исключением двух пациентов умерли от других заболеваний, оценка Каплана-Мейера был протестирован с использованием лог-рангового теста. Между положительной группой и отрицательной группы (MUC4 /8G7 + против -, MUC4 /1G8 + против - или MUC1 /DF3 + против -), лог-ранговый критерий общей выживаемости (MUC4 /8G7, P = 0,27; MUC4 /1G8, P = 0,37; MUC1 /DF3, P = 0,22) и выживаемости без прогрессирования заболевания (MUC4 /8G7, P = 0,85; MUC4 /1G8, P = 0,23; MUC1 /DF3, P = 0,83) не показали никаких существенных различий. Дальнейший анализ 42 пациентов выжили в течение более 5 лет и не показали никаких существенных различий.

Обсуждение

Недавно мы сообщали о том, что экспрессия MUC4 является независимым неблагоприятным прогностическим фактором панкреатобилиарной аденокарциномы [ ,,,0],10], [11], [12], а также аденокарциномы легких [13] и устные плоскоклеточный рак [9]. MUC1, также сообщалось, что плохим прогностическим фактором в различных человеческих новообразованиях [4], [5]. Наше предыдущее исследование в рака желудка, в том числе как раннего рака и на поздних стадиях рака показали, что MUC1 является полезным прогностическим фактором неблагоприятного исхода в [6] пациентов. В настоящем исследовании, взаимосвязь между экспрессией муцина и исход пациента не может быть оценена, так как рак желудка находятся в ранней стадии в pT1b2 и большинство пациентов имели благоприятный исход. Тем не менее, были получены следующие результаты: (1) MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 и MUC1 /DF3 выражения были связаны с лимфатической инвазии. (2) Выражение MUC4 /1G8 была связана с метастазов в лимфатических узлах. (3) Выражение /DF3 MU1 было связано с венозной инвазии. В Японии, ОУР является первым выбором для лечения раннего рака желудка [3]. Исследование MUC4, а также MUC1 в образцах ОУР может выяснить, является ли дополнительной операции, в том числе лимфодиссекции или частого наблюдения за метастазирования необходимы.
<Р> Наши предыдущие исследования показали, что не было никакой корреляции между siginificant MUC4 выражение и выражение MUC1 [10], [11], [12], [13]. Кроме того, в настоящем исследовании рака желудка на ранней стадии, не было никакой siginificant корреляции между выражением MUC4 и MUC1. Оба выражения MUC4 и MUC1 в рака желудка может быть связано с плохими прогностическими факторами, такими, как лимфатической инвазии, венозного инвазии и метастазов в лимфатических узлах, с помощью другого механизма.
<Р> В предыдущем исследовании рака желудка с использованием MAb 8G7, Senapati и др. Показано, что экспрессия MUC4 /8G7 не было связано с типом опухоли, стадии или степени дифференцировки [18]. Интересно, что их результаты показали скорость экспрессии 42% на стадии рака I (п = 19), которая в соответствии с нашими данными (MUC4 /8G7: 42% и MUC4 /1G8: 48%) в настоящем исследовании, исследующих I этап виды рака (N = 104). Тем не менее, наше исследование показало, что оба MUC4 /8G7 и MUC4 /1G8 выражения отличались среди гистологических типов, и были значительно выше в хорошо дифференцированных типов, чем в слабо дифференцированной типа. Выражение MUC1 /DF3 был также значительно выше в хорошо различаемых видов, чем в слабо дифференцированной типа. Мы сообщали, что экспрессия MUC1 была высокой в ​​хорошо дифференцированной аденокарциномы в рака желудка, включая поздних стадиях рака, а также высокая MUC1 выражение может повлиять на выживаемость больных с хорошо дифференцированной аденокарциномы желудка [6]. Высокая экспрессия MUC4 в хорошо дифференцированной аденокарциномы также может повлиять на выживаемость больных раком желудка. В нашем предыдущем исследовании [6], скорость высокой экспрессии MUC1 /DF3 была значительно выше в развитых рака желудка, чем в раннего рака желудка. Отношения выражения MUC4 с вторжением рака желудка была бы интересной областью исследования.
<Р> Существует спор относительно прогностической значимости MUC4 /8G7 и выражения MUC4 /1G8. Таким образом, мы рассмотрели 19 статей исследования MUC4 IHC применяется для различных тканей человека от рака (таблица 3). Значение MUC4 /8G7 и MUC4 /1G8 не может быть оценена в 8 из 19 исследований. Одно исследование с использованием моноклональных антител анти-MIUC4 сообщили, что экспрессия MUC4 связана с исходом fovorabel [19], три исследования показывают отсутствие корреляции между экспрессией MUC4 и прогнозом [20], [21], [22], остальные три исследования не сделали есть какие-либо комментарии о корреляции между выражением MUC4 и прогнозом [18], [23], [24], а остальные одно исследование рака щитовидной железы сообщили об отсутствии экспрессии MUC4 в раке [25]. С другой стороны, в остальных 11 статей, было очевидное различие прогностической значимости между экспрессией MUC4 /8G7 и выражения MUC4 /1G8. Большинство исследований с использованием 8G7, который был создан против человеческого MUC4, выражение MUC4 /8G7 связан с агрессивным поведением опухоли или неблагоприятный исход в карцином человека [9], [10], [11], [12], [13], [ ,,,0],26]. В противоположность этому, в большинстве исследований с использованием 1G8, который был поднят против крыс ASGP-2, описано, что экспрессия MUC4 /1G8 связано с благоприятным исходом [27], [28], [29], [30], хотя в одном исследовании панкреатических аденокарцинома описано, что выражение MUC4 /1G8 связана с плохой выживаемостью [31]. Это четкое различие возникает вопрос о том, есть ли у 8G7 и 1G8 существенно разные характеры. MAb 1G8 был поднят с использованием крысиной MUC4 эпитоп [15]. Человек MUC4 и крысы MUC4 показывает более чем 60% сходство пептидной последовательности [32], но они не идентичны. Следует отметить, что IHC с использованием MAb 1G8 всегда показывает положительное окрашивание в эндотелий сосудов, что является несколько необычным, как выражение MUC4, который является одним из членов муцинах.
<Р> Таким образом, мы оценивали специфичность MAb 8G7 и МАт 1G8 с помощью Вестерн-блоттинга и IHC двух желудочных линий раковых клеток. Наш Вестерн-блоттинг анализ показал, что MAb 8G7 признан очень высоким содержанием белка молекулярной массой (более 500 кДа, который был ожидаемый размер для родной MUC4), в то время как MAb 1G8 не показывает никаких иммунореактивных полос. Анализ ВВК также показал МАт 8G7 положительное окрашивание, но МАт 1G8 негативно окрашенную в двух желудочных линий раковых клеток. Была также выражена мРНК MUC4 в двух желудочных линий раковых клеток в настоящем исследовании, как показано в предыдущем исследовании анализа панкреатических раковых клеточных линий с помощью ОТ-ПЦР и блот анализа Northen [33], [34]. Оба MAb 8G7 и MAb 1G8 реагируют с желудочным раковых тканей человека, хотя расположение MUC4 /8G7 и экспрессии MUC4 /1G8 показали заметное различие. В желудочном раковых тканей, была выражена MUC4 /8G7, главным образом, в цитоплазме опухолевых клеток РАР и ванной, в то время как MUC4 /1G8 выражалась главным образом в клеточных верхушек PAP и ванной или внутрицитоплазматического муцина вещества сиг. Так как цитоплазматической характера экспрессии MUC4 /8G7 рассматривается также в аденокарциноме поджелудочной железы, внутрипеченочных холангиокарциномой, дополнительный печени желчных протоков карциномы, аденокарциномы легких и полости рта плоскоклеточный рак [9], [10], [11], [12], [13 ], цитоплазматическую паттерн экспрессии MUC4 /8G7 в желудочном раковых тканей может быть разумным. В противоположность этому, линейный образец экспрессии MUC4 /1G8 вместе с сотовыми верхушек желудочного рака тканей может отражать неизвестные функции или характеристики субъединицей MUC4β обнаруженные MAb 1G8 индуцированные против крысиного эпитопу [15], поскольку настоящее исследование показало, что MUC4 /выражение 1G8 были связаны с лимфатической инвазии и метастазирования лимфатических узлов, которые являются плохими прогностическими факторами даже в ранних стадиях рака желудка. В частности, в por2 и сиг, скорость экспрессии MUC4 /1G8 была значительно выше, чем у MUC4 /8G7 или из MUC1 /DF3. Кроме того, существует корреляция между siginificant /выражения MUC4 8G7 и выражения MUC4 /1G8 у обследованных больных. Таким образом, сигнал ВВК из MUC4 /1G8 обнаружены в образцах Gastrectomy может показать существенное значение эпитоп, обнаруженного MAb 1G8, хотя не было никакой реактивности экспрессии MUC4 /1G8 в желудочном линий раковых клеток человека (SNU-16 и NCI- N87). Эпитоп обнаружен MAb 1G8 является областью, представляют интерес для дальнейшего изучения.

В заключение, в настоящем исследовании раннего рака желудка, наблюдались MUC4 /8G7, MUC4 /1G8 и MUC1 /DF3 выражения в основном в хорошо дифференцированной аденокарциномы. Выражение MUC4 /8G7 была связана с лимфатической вторжения. Выражение MUC4 /1G8 была связана с лимфатической инвазии и метастазов в лимфатических узлах. Выражение MUC1 /DF3 была связана с лимфатической инвазии и венозного вторжения. Изучение экспрессии MUC4 и MUC1 в рака желудка станет полезным маркером для прогнозирования неблагоприятных прогностических факторов, связанных с инвазией сосудов, даже на ранней стадии.

Поддержка информации Рисунок S1 изображения.
В неопухолевых слизистой случаев с раком желудка, была выражена MUC4 /8G7 иногда в цитоплазме поверхности слизистой эпителия, и часто, но слабо в цитоплазме фундального и пилорического желез (А и D). часто выражается MUC4 /1G8 в вершине клетки и цитоплазме поверхности слизистой эпителия, и часто, но слабо в цитоплазме фундального и пилорического желез (В и Е), и был замечен постоянно на сосудистый эндотелий. MUC1 /DF3 иногда выражается в поверхностном слизистой эпителия, и всегда в фундальном желез (особенно интенсивно в клеточных верхушек), но не в пилорического желез (C и F). Оригинальное увеличение × 100 (A, B, C), × 400 (D, E, F)
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0049251.s001
(TIF)
Таблица S1.
Подробное количество и процент положительно окрашенных опухолевых клеток с использованием балльной системы
DOI:. 10,1371 /journal.pone.0049251.s002
(DOC)

Выражение признательности
<р> Мы благодарим г-н Ю. Atsuchi, г-н К. Matsuo, г-жа К. Баба, г-жа Ю. Нисимура, г-жу С. Ёсимура и г-жу И. Houjou за их технической помощи.

• PLoS ONE: Высокий уровень ароматических аминокислот в желудочном соке на ранних стадиях рака желудка Progression
• PLoS ONE: CYP2E1 RsaI /PstI полиморфизма и рака желудка Восприимчивость: Мета-анализ на основе 24 исследований случай-конт…