PLoS ONE: Naujas polimorfizmas biologinis rs629367 susijęs su padidėjusia rizika ir vargšų Survival skrandžio vėžio kinų iki reguliuojama Mirna let-7a Expression

Anotacija

Fonas

Variantas į pri -miRNA gali paveikti Mirna išraišką ir brandžios procesą arba sandūrų efektyvumą, tokiu būdu pakeisdamas paveldimą polinkį ir prognozės vėžio. Siekėme įvertinti Mirna let-7 vieno nukleotido polimorfizmas (SNP), susijęs su rizika ir prognozės skrandžio vėžio (GC), kaip prognozuoti biologinius žymenis, ir, be to, jos galimą mechanizmus.

Metodai

dviejų pakopų atvejo-kontrolės tyrimas buvo skirtas ekranas keturių Mirna SNP (pri-tegul-7a-2 rs629367 ir rs1143770, pri-tegul-7a-1 rs10739971, pri-tegul-7f-2 rs17276588) 107 GC pacientų 107 atrofinė gastritas (AG) ir atitiko 124 kontrolę naudojant PCR-RKIP. Du perspektyviausi SNP buvo patvirtintas kitoje nepriklausomoje 1949 mėginių (įskaitant 579 skrandžio vėžiu sergančių pacientų, 649 atrofinį gastritas ir 721 kontrolės), naudojant Sequenom MassARRAY platformą ir seka.

Rezultatai

Mes nustatėme, kad pri-tegul 7a-2 rs629367 CK variantas genotipas buvo susijęs su padidėjusia rizika skrandžio vėžio ir atrofinį gastritas iki 1,83 karto ir 1,86 karto, atitinkamai. Skrandžio vėžio prognozei, pacientai, sergantys rs629367 CC genotipą turėjo žymiai prasčiau išlikimą nei pacientams su AA genotipu (log-rank P
= 0,004). Mes toliau nagrinėjo tegul-7a raiškos lygį serume ir nustatė, kad tegul-7a išraiška padidėjusi palaipsniui už rs629367 AA, CA CC genotipą į atrofinį gastritas grupės ( P
= 0,043). Be to, mes patvirtino šias išvadas tyrimas in vitro iki ekspresija atvangos 7a vykdymo pri let-7A-2 laukinio tipo arba C polimorfinės tipo alelėms ( P
< 0,001).

Išvados

pri-tegul-7A-2 rs629367 CC genotipą gali padidinti skrandžio vėžio riziką, taip pat atrofijos gastritas ir taip pat buvo susijęs su prasta išlikimo skrandžio vėžio, kuris galbūt turi įtakos brandus atvangos 7a išraiška, ir gali pasitarnauti kaip prognozuoti biologinis žymuo aukštos rizikos ir blogos prognozės skrandžio vėžio

nurodomoji dalis:. Xu K Dong Q Jis, C Liu W Sun L Liu J et al., (2014) naujas polimorfizmas biologinis rs629367 susijęs su padidėjusia rizika Poor Išgyvenimo skrandžio vėžio kinų Up reguliuojama Mirna let-7a išraiška. PLoS ONE 9 (4): e95249. Doi: 10,1371 /journal.pone.0095249

redaktorius: Čing-Yi Wei kunigaikštis vėžio instituto, Jungtinės Amerikos Valstijos

Įstojo: Sausis 26, 2014 m Priėmė: Kovo 24, 2014 m Paskelbta: Balandžio 23, 2014

Visos teisės saugomos: © 2014 Xu et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas:. Šis darbas remia dotacijas iš nacionalinių pagrindinių pagrindinių mokslinių tyrimų programą Kinijos (973 programa ref nr. 2010CB529304), Nacionalinis gamtos mokslų fondas Kinijoje (nuorodos Nr 31.200.968), o Mokslas technologijų projektų Liaoning provincijoje (Ref kodas 2011225002) , Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

mikro RNR (miRNAs) yra 18-25 nukleotidų (NT) Ilgas, viengrandis nekoduojamame RNR [1]. Bet pri-Mirna, ikimokyklinio Mirna ar brandžiai Mirna variacija gali turėti įtakos brandus procesą ir funkcijos Mirna, kuri galėtų dar labiau paveikti šimtai baltymų ekspresiją sąveikos keliu [2]. Tam tikru mastu, kad Mirna variantas suvaidino savo vaidmenį kaip "onkogeno" arba "naviko slopinamojo geno" netiesiogiai [3].

tegul-7 yra antras nustatytą Mirna po pirmojo Mirna, Lin atradimas -4 [4] - [6]. Tegul-7 šeima turi 10 narių, įskaitant tegul-7a atvangos 7G, ​​tegul-7i, MIR-98 ir MIR-202. Leisti ", 7 šeimos vaidina svarbų vaidmenį palaikant normalią fiziologinę funkciją žmogaus. Pavyzdžiui, pri-Mirna apie leisti-7 šeimos galėtų derinti su LIN28 ir slopinti sandūrų tvarką Drosha ir Kauliukų žaidimai, du svarbūs restrikcijos fermentų dalyvauja per brandaus proceso visų Mirna [7]. Be to, pagal barbenimas žemyn Drosha fermentą slopinti visą Mirna brandus procesą visapusiškai, Kumaras al nustatė, kad pagrindinė priežastis, dėl aktyvumo ir skatinimo ląstelės piktybinę transformaciją buvo tegul-7 šeimos išraiškos downregulation [8]. Nors daugelis ankstesnių tyrimų prisidėjo plačiai iliustruoja biologines funkcijas leisti-7 šeimos, nedaugelis tyrime daugiausia dėmesio buvo skirta genetinių variantų šeimos nariams. Iš tiesų, jei du asmenys buvo atrinkti atsitiktinai, jų genomai gali įrodyti apie 0,1% įvairovę, iš kurių dažniausiai įvairovė buvo SNP [9]. Dėl šių skirtumų egzistavimą, tas pats genas gali sukelti įvairių genų ekspresijos produktų, kurie gali sukelti skirtingas ligos jautrumo, paveldimos fenotipo ir prognozės ligos [10].

Ankstesni tyrimai parodė, kad pri-Mirna SNP gali būti naudojamas kaip genetinių markerių, kaip prognozuoti su vėžio riziką. Pavyzdžiui, pri-miR-185 rs2008591 buvo susijęs su krūties vėžio rizika [11]; pri-Pasaulis-34B /C rs4938723 buvo susijęs su rizika kepenų vėžio [12]. Šiame tyrime, naudojant duomenis ncbi bioinformatikos duomenų bazių, mes patikrino visus SNP pirminės pirmtakas plotas tegul-7 šeimos (± 600 bp) ir nustatė, kad tik 4 SNP (pri-tegul-7a-1 rs10739971, pri -ėlis-7a-2 rs629367 ir rs1143770, pri-tegul-7f-2 rs17276588) turėjo Mažosios alelio dažnis (MAF) > 5% Kinijos gyventojų, ir jie visi buvo tagSNPs į Hapmap duomenų bazę. Iki šiol, nedaug tyrimų minėta tarp keturių tagSNPs ir ligų rizikos prognozavimas santykius išskyrus šizofrenija ligos [13], nesmulkiųjų ląstelių plaučių vėžio [14] ir diabetinės nefropatijos [15]. Jų galimas vaidmuo prognozuojant vėžio rizika išlieka beveik nežinomas

Skrandžio vėžys yra antra pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirties visame pasaulyje ir viena iš dažniausių vėžio Rytų Azijos ir Kinijos gyventojų [16] - [18].. Tyrimai parodė, kad keletas Mirna SNP buvo susijęs su skrandžio vėžio rizika [19] - [22]. Tačiau, ar pirmiau minėtų keturių tagSNPs į pri-Mirna genų tegul-7 buvo susijęs su skrandžio vėžiu ir atrofinį gastritas rizikos Kinijos gyventojų, ar ji gali būti naudojama kaip prognozavimo genetinės biologinis žymuo skrandžio vėžio, ir specifinis mechanizmas, kaip jie reguliuoja ligų riziką dar reikia patikslinti.

šiame tyrime mes pirmą kartą įvertino tarp šių keturių kandidačių tagSNPs į pri let-7a ir jautrumo skrandžio vėžiu ir jo pirmtako asociaciją atliekant dviejų pakopų atvejo ir kontrolės tyrimas kinų kalba. Tuo tarpu, mes ištirti, ar rizikos, susijusios polimorfizmas prisideda link skrandžio vėžio pacientų išgyvenimo. Be to, mes išnagrinėjo rizikos, susijusios polimorfizmo įtaką reguliuojant savo brandus Mirna išraišką serume ir skrandžio audinio, taip pat ištirti galimą jos reguliavimo mechanizmas tolygiam ligų riziką ir išlikimą. Atliekant šį tyrimą, mes tikimės pasiūlyti galimą taikymo perspektyva studijuojamos SNP kaip prewarning biologinis žymuo asmenims su didelės rizikos skrandžio vėžio ir jos ikivėžinių ligų (atrofija gastritas).

Metodai

Pacientai ir tyrimo dizainas

Mokslinių tyrimų projektas buvo patvirtintas etikos komiteto pirmasis filialas ligoninės Kinijos medicinos universiteto ir tyrimas buvo padalintas į tris nepriklausomas, tačiau susijusių dalių, įskaitant rizikos, prognozė ir mechanizmų tyrimų , Rizikos dalis buvo du etapai skirtos, vienas atrankos etapą, o kitas yra patvirtintas etapą. Norėdami išsiaiškinti kandidačių VNP-ai su skrandžio vėžio ir atrofijos gastritas rizikos asociaciją, atrankos etapas retrospektyviai įdarbino mėginius įskaitant 338 atvejų, kuriuos sudaro 107 skrandžio vėžiu sergančių pacientų, 107 atrofijos gastritas atvejais ir 124 kontrolinės grupės iš pirmasis filialas ligoninės Kinijos medicinos universiteto tarp 2005 ir 2010 metais patvirtintą etape, mes tyrė 1949 bylų iš viso, įskaitant 579 skrandžio vėžio, 649 atrofijos gastritas ir 721 sveikų nuo sveikatos patikrinimo programa skrandžio vėžio patikros Zhuanghe Liaoning Province, Kinija ar iš jo pacientų pirmasis filialas ligoninė Kinijos medicinos universiteto, nuo 2002 ir 2013 Visi šiame tyrime tiriamieji endoskopijos ir histologiškai patvirtinta. Skrandžio vėžio klasifikacija buvo padalinta į žarnyno tipo ir difuzinio tipo pogrupį analizės, kuri buvo grindžiama Lauren klasifikacija [23], [24]. Klasifikavimas ir rūšiavimas gastritas buvo grindžiamas atnaujintą Sidnėjaus sistemos [25], [26]. Dalykai, kurie endoskopijos ir histologiškai patvirtinta su normaliu gleivinės ar tik minimaliai gastritas be kitų sisteminių ligų ar kitų skrandžio ligų tarnavo kaip kontrolę. Rašytiniai informuoti sutinka buvo surinkti iš pacientų ir medicinos istoriją (įskaitant amžių, lytį, rūkymą ir alkoholio vartojimą), gaunama klausimyną ir įrašai buvo kompiuterizuotas kaip Ankstesnis aprašyta [24].

Jei toliau tirti asociaciją rizikos susijusios polimorfizmo su clinicopathologic parametrus ir išlikimo skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, mes panaudojome duomenis 150 skrandžio vėžio atvejų, kurių informacijos mirties ar išgyvenimo atveju buvo galima. Navikas histologinis klasės buvo įvertinta Pasaulinės sveikatos organizacijos kriterijais ir navikai buvo pastatytas naudojant 7-osios redakcijos TNM Tarptautinės Sąjungos kovos su vėžiu (UICC) /JAV Jungtinis komitetas vėžys (AJCC) (2010), remiantis pooperaciniu patologinio tyrimo , Pacientai (I) su tolimos metastazės rado prieš operaciją, (ii) kuriems buvo atlikta priešoperacinė radioterapija ar chemoterapija, arba (iii) su nebaigtais patologinių duomenų įrašai buvo pašalinti iš išgyvenamumo analizė. Tolesni buvo baigtas iki 2013 m rugpjūčio Galiausiai, 150 pacientai buvo įtraukti į išgyvenamumo analizė.

Dėl ryšio tarp rizikos susijusios polimorfizmo ir jos Mirna išraiškos serume vertinimo, 364 atvejai, įskaitant 164 skrandžio vėžio, 100 buvo išnagrinėti atrofinė gastritas ir 100 sveikų. Iš įtrauktų subjektų charakteristikos buvo parodyta Papildomo S1 lentelėje. Be to, dėl ryšio tarp rizikos susijusios polimorfizmo ir jos Mirna raiškos skrandžio audinio vertinimu, 97 ne canceous pavyzdžiai ir 94 skrandžio vėžiniai egzemplioriai buvo gauti iš 97 pacientų, kuriems buvo atlikta pašalintas skrandis tuo Pirmosios Affilicated ligoninės Kinijos medicinos universiteto nuo 2009 ir 2013 m

Dalyko genotipo

Genomo DNR buvo išskirta kaip aprašyta anksčiau su tam tikrais pakeitimais [27]. Genotipo nustatymo tyrimai buvo atlikti CapitalBio (Pekinas, Kinija), naudojant Sequenom MassARRAY platforma (Sequenom, San Diego, CA, USA) kaip buvo aprašyta anksčiau [24]. 5% visų mėginių buvo pakartotinai genotipą, o sutapimas lygis buvo 100%, o tai rodo, kad genotipo buvo teisinga. Išsamios medžiagos buvo parodyta papildomi metodai.

serumo H.pylori-IgG titras

aptikimo pagal metodą, aprašytą literatūroje [28], serumo, h. pylori
-IgG titras buvo aptikta IMUNOFERMENTINĖS analize (ELISA, Helicobacter pylori IgG rinkiniu; BIOHIT, Helsinkis, Suomija). Išsamios medžiagos buvo parodyta papildomi metodai.

RNR gavybos ir realaus laiko PGR reakcija Mirna išraiškos in vivo

buvo naudojamas Mirna išgauti metodas iš kraujo serumo ir audinių, kaip aprašyta Literatūra [29] su tam tikrais pakeitimais. Atvirkštinės transkripcijos reakcija buvo naudojamas vienas žingsnis pirmininkas scenarijus Mirna kDNR (Puikiai realiu laiku) komplektas (TAKARA Biotechnologijos Co, Ltd ", Dalianas, Kinija) ir realaus laiko PGR reakcija buvo naudojamas miRcute Mirna qPCR aptikimo komplektas (SYBR) (TIANGEN Biotech" Bendro ., Ltd Pekinas, Kinija). Išsamios medžiagos buvo parodyta papildomi metodai.

Laikina transfekcija ir realaus laiko PGR reakcija Mirna išraiškos in vitro pervežimas

komercinės išraiška plazmidžių pCMV-MIR-tegul-7a-2 rs629367- C buvo įsigytas iš Origene Company "(Origene Biotech Co., Ltd, Šanchajus, Kinija). Tai plazmidės buvo atlikta konkrečios svetainės mutagenezE ne -216 nuo C iki A (pCMV let-7a-2 rs629367-a) Sainuo Company "(Sainuo Biotech Co., Ltd, Pekinas, Kinija) ir patvirtino sekos. Ir kandidatės ląstelių linijos sekos buvo į genotipo pri-tegul-7a-2 rs629367 svetainė ištirti, ar yra kokių nors šio rs629367 Polimorfizmas svetainėje variantas. Tada ląstelių linijų iš laukinio tipo ir taip pat yra mažiausia dvi leiskite-7a išraiška, SGC-7901 ir AGS, buvo atrinkti transfekciją (Daugiau informacijos žr papildomi metodai ir papildomas S2 paveikslą). Žmogaus skrandžio karcinoma ląstelių linija, AGS buvo įsigytas iš ATCC, American Type Culture Collection, JAV ir SGC-7901 buvo nupirktas iš ląstelių banko Kinijos mokslų akademijos, Šanchajuje, Kinijoje. Po 72 valandų, bendras RNR ląstelių buvo išgaunamas ir Realaus laiko PGR buvo naudojamas aptikti tegul-7a išraiškos po atvirkštinės transkripcijos siekiant palyginti brandus atvangos 7a pagamintą pCMV let-7a-2 rs629367-A vs pCMV let-7a-2 rs629367 C.

Statistika

mokėsi keturi Mirna polimorfizmas buvo analizuotos Hardy-Weinberg pusiausvyros (HWE) tarp kontrolės. Nuolatiniai kintamieji buvo parodyta, kaip vidurkis ± standartinis nuokrypis (SD) ir lyginami dispersinė analizė, o diskrečiųjų kintamųjų atstovavo dažniais ir procentais ir lyginami χ2 kriterijaus [24]. Daugiamatė logistinė regresija su patikslinimus amžių, lytį ir H. pylori
infekcija buvo naudojamas įvertinti tarp Mirna polimorfizmas ir ligų riziką asociacija. Nes rūkymas ir alkoholio vartojimas turėjo beveik trečdaliu trūkstamus duomenis netiko kaip koregavimo koeficientai, tik kaip susisluoksniavusi veiksnių analizę tarp Mirna polimorfizmas ir ligų riziką asociacijos. Vienmatės ir daugiamatis išlikimo analizė buvo atlikta log-rank testą ir Cox proporciniai pavojų modelį. Išgyvenimo kreivės buvo susiejami naudojant Kaplan-Meier metodu. Daugiamatė išgyvenamumo analizė buvo atlikta, pridedant SNP visiems klinikos parametrus su P
< 0,05. Be to, iš Mirna kopijos buvo naudojami lg vertę už normaliojo pasiskirstymo, o Mirna polimorfizmas apie savo išraiška lygio poveikis buvo išbandytas su neatitinkančiu (ANOVA) bandymo analizę. Iš tegul-7a išraiškos koreliacija serume ir audiniuose buvo parodyta, kaip koreliacijos koeficientas pagal koreliacijos analize. Statistinė analizė atlikta naudojant SPSS versija 16.0 programinę įrangą (SPSS, Čikaga, IL, JAV) ir atrankos etape, p vertybių < 0,10 buvo laikomas svarbiu, o visi kiti tyrimai buvo laikoma P vertes. ≪ 0,05, kaip reikšmingas

rezultatai

Pagrindinė poveikis Mirna polimorfizmas skrandžio vėžio ir atrofija gastritas rizikos

genotipas dažniai studijavo SNP atrankos etape buvo parodyta 1 lentelėje, o electrophoretogram ir sekos figūra šie keturi Mirna polimorfizmas genotipai buvo parodyta Papildomo S1 paveiksle. pri-tegul-7f-2 rs17276588 buvo pašalinta iš tolesnės analizės, nes ji nukrypo nuo HWE. Du SNP buvo laikomi Perspektyvus būti susijęs su ligų riziką: variantas genotipas dažniai pri let-7a-1 rs10739971 tarp atrofijos gastritas ir kontrolinės grupės parodė statistinį skirtumą (27,1% vs 13,7% P
= 0.018, 1 lentelė), o variantas genotipas dažniai pri-tegul-7a-2 rs629367 tarp skrandžio vėžio ir kontrolinės grupės taip pat parodė, skirtumas (1,9% vs.6.5% P
= 0,094, 1 lentelė) , Mes laikomas p reikšmė < 0,10, kaip reikšmingas ir pasirinktas šis dviejų perspektyvių SNP svetaines į patvirtintą etape

Jei patvirtinti pri let-7a-1 rs10739971 ir pri-tegul-7A-2 rs629367 Polimorfizmas asociacija. su skrandžio vėžiu ir /arba atrofijos gastritas riziką, mes naujo įvertinti šiuos du SNP kitoje 1949 atvejų išsiplėtusios patvirtintu etape. Iš visų mėginių polimorfizmas dažniai buvo parodyta Papildomo S2 lentelėje. Sveikų buvo dažnis atitiko skrandžio vėžio ir atrofijos gastritas atvejais pagal amžių (± 5 metai) ir lytį (1:1). Po dažnio suderinimas, tik 501 skrandžio vėžio ir 501 kontrolės skrandžio vėžio rizikos analizę ir 612 atrofinė gastritas ir 612 valdikliai atrofinį gastritas rizikos analizę pagaliau buvo įtrauktas. Išsiplėtusioje patvirtintu etape variantas genotipas dažniai pri let-7A-2 rs629367 tarp skrandžio vėžio ir kontrolinės grupės buvo statistiškai skiriasi (6,4% vs 4,0%, 1 lentelė). Lyginant su bendrąja AA genotipą, variantas CK genotipas buvo susijęs su 1,83 kartus didesnė rizika skrandžio vėžiu ( P
= 0,048, 95% PI = 1,01-3,32, 1 lentelė), taip pat buvo susijęs su 1,86 kartus didesnė rizika atrofinį gastritas ( P
= 0,032, 95% PI = 1,06-3,28, 1 lentelė). Be to, variantas CK genotipas buvo susijęs su atrofinį gastritas 1,93 kartus didesnė rizika, palyginti su (AA + AC) genotipų ( P
= 0,021, 95% PI = 1,11-3,36, 1 lentelė) Tačiau mes nesilaikė statistiškai reikšmingas ryšys tarp pri-tegul-7a-1 rs10739971 ir ligų pavojus, patvirtintu etape.

Stratifikuotas analizė ir interation analizė

Jei toliau tirti galimą įtaką amžiaus, lyties ir aplinkos veiksniai, pavyzdžiui, statuso, H.pylori
infekcija, rūkymas ir alkoholio vartojimas genetine poveikio, mes atliekame sluoksninės analizes pri-tegul-7a-1 rs10739971 ir pri-tegul-7a-2 rs629367 polimorfizmas remiantis šiais veiksniais (2 lentelė). Mes pastebėti įvairius efektus pri let-7A-2 rs629367 apie susirgimo rizikos įvairiose pogrupius. Statistiniai ryšys tarp CC genotipą ir padidėjusio atrofinį gastritas rizika buvo rasta moterims ( P
= 0,025, arba [95% PI] = 2.59 [1.13-5.92]) H. pylori
serologiniai neigiamas pogrupis ( P
= 0,036, arba [95% PI] = 1,97 [1,05-3,73]), o ne geriamo pogrupio ( P
= 0,023 ARBA [95% PI] = 2,44 [1,13-5,26]). Be to, buvo nustatyta, kad CK genotipas turi būti susijęs su padidėjusia skrandžio vėžio rizika pacientams su amžiumi ≦ 50 metų ( P
= 0,026, ARBA [95% PI] = 6.02 [1,24-29,10]) ir h. pylori
serologiniai neigiamas subpopuliacija ( P
= 0,036, ARBA [95% PI] = 2,02 [1,05-3,90]). Tačiau, kai mes atliekame sąveikos analizę tarp rs629367 SNP ir H. pylori
infekcija, rūkymas ir alkoholio vartojimas, nerasta statistinė sąveika poveikis ( P
_{sąveika = 0,786 ir 0,382 atitinkamai žr papildomą lentelę S3). Nėra reikšmingas ryšys buvo rastas tarp pri-tegul-7a-1 rs10739971 ir skrandžio vėžio ar atrofijos gastritas riziką bet sluoksniuotoji analizė.}

Koreliacija tarp pri-tegul-7a-2 rs629367 polimorfizmas ir clinicopathologic parametrai ir ilgis išlikimo skrandžio vėžiu sergantiems pacientams

dėl statistiškai reikšmingas ryšys tarp rs629367 ir skrandžio vėžio ir atrofinį gastritas rizikos pagrindinio poveikio stebėjimas analizuoja ir susiskirstė į sluoksnius analizes, mes toliau tyrė, ar rizika susijęs rs629367 koreliuoja su clinicopathologic fenotipo ir prognostinė išlikimo skrandžio vėžio. Rezultatai parodė, kad nėra reikšminga koreliacija šio SNP buvo rasta klinikos parametrų, įskaitant naviko dydžio, naviko vietą, BORRMANN tipo, histologinis tipas, Lauren tipo, TNM etape augimo modelis, gylis invazijos, limfinės metastazių H.pylori
infekciją, rūkymas, alkoholio vartojimas, ir šeimos istorija ( P
> 0,05 žr papildomą lentelę S4), bet tai SNP buvo nustatyta, susijusios su skrandžio vėžiu išgyventi. BK genotipas vežėjai parodė nepalankią išlikimą (CC vs AA: 22.2 mėnesius vs 32,0 mėn) ir padidėjo HRS skrandžio vėžiu sergantiems pacientams pagal vieną požymį analizė (CK vs AA: P
= 0,011, žmogiškųjų išteklių [95% PI] = 3,39 [1,33-8,65]; CK vs AA + AC: P
= 0,005, žmogiškųjų išteklių [95% PI] = 3,51 [1,45-8,49]; 3 lentelė ir 1 paveikslas-A ir - B). Koreguojant keletą klinikos parametrais, kurie buvo galimi veikiančių veiksnių koreliuoja su skrandžio vėžiu išlikimo ( P
≤0.0001 už naviko dydžio, BORRMANN tipo, TNM etape, gylis invazijos ir limfinės metastazių, žr papildomą lentelę S5), statistiškai padidėjo HRS taip pat buvo gautas CC vežėjams Dispersinės analizės (CC vs AA: P
= 0,004, žmogiškųjų išteklių [95% PI] = 4,48 [1,60-12,60]; CK vs AA + AC: P
= 0,001, žmogiškųjų išteklių [95% PI] = 4,69 [1,84-11,95], 3 lentelė).

Koreliacija tarp rs629367 ir subrendę tegul-7a išraiška serume ir skrandžio audinių

siekiant ištirti galimą mechanizmą rs629367 polimorfizmo susijusio su skrandžio vėžiu, mes toliau nagrinėjo brandus tegul-7a išraiška in vivo ir in vitro. Pacientų charakteristikos atrinkti išraiškos serume ir audiniuose tyrimo buvo parodyta Papildomo S6 lentelėje. Serume lygio, suskirstyti pagal įvairių ligų, mes nustatėme, kad atrofinį gastritas grupės, brandus tegul-7a išraiška rs629367 AA, CA, CK genotipas parodė, kad palaipsniui didėja tendencija, ir šis skirtumas buvo statistiškai reikšmingas (3,30 ± 0,56 vs . 3.52 ± 0,55 vs 3,76 ± 0,34 P
= 0,043, 4 lentelė, 2 pav-A). Audinių lygmenyje mes išanalizavo tegul-7a SNP genotipų poveikį jo brandus tegul-7a raiškos skrandžio vėžio audinyje, ir nustatė, rs629367 A., CA, CK genotipas taip pat parodė, kad palaipsniui didėja tendencija, nors šis skirtumas nebuvo statistiškai reikšmė (4 lentelė).

brandus tegul-7a išraiška pCMV-MIR-pri-let-7a-2 rs629367-A ir -C

Pirmiausia, kandidatas ląstelių linijos sekos buvo į genotipo pri-tegul-7a-2 rs629367 svetainę ir nustatėme, kad šie kandidatas ląstelių linijos visi buvo rs629367 laukinio tipo (žr papildomą S3 paveikslą). Į vitro lygio, SGC-7901 ir AGS ląstelių linijos buvo transinfected į dvi plazmidžių, pCMV-MIR-pri-tegul-7a-2 rs629367-A ir pCMV-MIR-pri-tegul-7a-2 rs629367 C. Po 72 valandų, brandus tegul-7a išraiška turėjo statistinis reikšmingumas SGC-7901 ląstelių linijos ( P
< 0,001, 2 pav-B),. Variantas, C alelis išreiškė didesnį atvangos 7a, palyginti su senovės A alelio. AGS ląstelių linija gavo ne statistinį reikšmingumą ir tik parodė tendenciją pagal SGC-7901 (žr papildomą S4 pav.)

Diskusijos

Remiantis įvairių tyrimų, susijusių su brandaus miRNAs funkcijas [30], jis buvo gerai priimtas, kad Mirna vaidina svarbų vaidmenį vėžio vystymąsi kaip "onkogeno" arba "naviko slopinamojo geno" [31]. Tačiau tarp Mirna variantų ir vėžio rizika, taip pat prognozės santykiai dar turi būti paaiškinta, [32]. Šiame tyrime mes pranešta, pirmą kartą, paskirstymo dažniai keturių Mirna tagSNPs (pri-tegul-7a-1 rs10739971, pri-tegul-7A-2 rs629367 ir rs1143770, pri let-7f-2 rs17276588) Šiaurės kinų. Mes taip pat patvirtinta, kad perspektyvūs polimorfizmo svetainių nepriklausoma ir išplėtė mėginius ir nustatė variantas CC genotipą pri let-7a-2 rs629367 padidėjo skrandžio vėžio ir atrofinį gastritas riziką iki 1,83 ir 1,86 karto, taip pat susijęs su prasta išlikimo skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Mes taip pat tyrinėjo pri let-7A-2 rs629367 apie savo išraiška ir galimi mechanizmai poveikį, ir nurodė, kad šis mechanizmas gali dėl brandus tegul-7a raiškos kaitos, kuris ilgainiui gali pakeisti jautrumą ir prognozės skrandžio vėžys. Mūsų žiniomis, tai pirmas pranešimas apie rs629367 SNP santykius su jautrumu ir prognozės skrandžio vėžio.

Kaip žinome, genetiniai skirtumai, kurie atsiranda iš Mirna genų įskaitant jų priva- ir iš anksto Mirna regionuose , turės galimybę paveikti keletą biologinius kelius ir įtaka ligų tikimybę [33]. Taigi, priori- ir iš anksto Mirna polimorfizmas gali būti naudojamas kaip genetinių markerių prognozuoti vėžio riziką [32], [34], kuris turi daugiau naudos ir privalumų nei kodavimo genų polimorfizmas tuo prognozuoti potencialo, nes miRNAs dažnai įsikūręs vėžiu susijęs Genomo regionai [35] ir gali reguliuoti beveik visus koduojančių genų ekspresiją [36]. Neseniai įvairūs tyrimai sutelktas į pasirengimo Mirna polimorfizmas esančių kamieninių kilpos, pavyzdžiui, iš anksto Mir-196a2 rs11614913 [37], iš anksto Mir-146A rs2910164 [38], iš anksto Mir-499 rs3746444 [39], [40], iš anksto Mir-149 rs2292832 [41], iš anksto Mir-27a rs895819 [42]. Dėl RNR kosmoso struktūros sudėtingumo, vis daugiau dėmesio buvo skiriama SNP ant pri-Mirna. Atstovas pri-Mirna SNP buvo pri-Pasaulis-185 rs2008591 susijęs su krūties vėžiu, [11], pri-miR-34b /c rs4938723 susijęs su kepenų vėžiu [12], pri-Pasaulis-30C rs928508 [22] ir pri-miR -938 rs2505901 [43], susijusių su skrandžio vėžiu. tegul-7 šeimos buvo dauguma ankstesnių nustatyti miRNAs [4] ir vaidina svarbų vaidmenį išlaikant normalų fiziologinį funkciją žmogaus. Naudojant ncbi bioinformatikos duomenų bazes, mes nustatėme, 4 SNP pirminės pirmtakas plotas tegul-7 šeimos (pri-tegul-7a-1 rs10739971, pri-tegul-7a-2 rs629367 ir rs1143770, pri-tegul-7f-2 rs17276588) turėjo Mažosios alelio dažnis (MAF) > 5% Kinijos gyventojų, kurie visi buvo tagSNPs bet jų potencialūs prognozuoti vaidmenys buvo neaiški. Šioje studijoje, sijojant ir patvirtinti dviejų etapų tyrimą mes pirmą kartą nustatė, kad tarp 4 tagSNPs, pri-tegul-7a-2 rs629367 polimorfizmas buvo susijęs su jautrumu skrandžio vėžiu (variantas CC genotipo pri-tegul-7A-2 rs629367 padidėjo skrandžio vėžio ir atrofinį gastritas riziką iki 1,83 ir 1,86 karto). Tai pri-tegul-7a-2 rs629367 SNP buvo įsikūrusi vartotojų 3'-UTR, kuris buvo arčiausiai SNP su brandaus Mirna genų tarp keturių atrankos VNP-ai, ir tai būtų naujas biologinis prognozuojant skrandžio vėžio riziką.

Mes dar atliekami vienmatės ir daugiamatis Cox proporcinės pavojai regresijos analizę tolesnių duomenų ištirti pri let-7a-2 rs629367 SNP asociacijas su bendro išgyvenamumo skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Nuosekliai reikšmingų rezultatų nepastebėta iš Vienaveiksnės ir daugiamatis Cox modeliai (3 lentelė). Pri-tegul-7a-2 rs629367 variantas CC genotipas vežėjai parodė padidėjo HR su P
-Pridėtinės nuo 0,011 (RS = 3,39) ir 0,005 (RS = 3,51), lyginant su AA laukinio tipo ir AA + AC genotipas atitinkamai pagal vieną požymį analizė. Nes keli klinikos parametrai reikšmingai prisidėjo prie bendro skrandžio vėžio išlikimo ( P
≤0.0001 už naviko dydžio, BORRMANN tipo, TNM etape, gylis invazijos ir limfinės metastazių), mes atlikti analizę patikslinant tiems potencialiems prieštaringų veiksnių daugiamatė analizė. Galų gale, mes nustatėme, P
-Pridėtinės šio rs629367 SNP buvo didesnis ir statistiniai HRS taip pat buvo padidintas (CK vs AA: P
= 0,004, ŠS = 4,48; CK vs A. + AC: P
= 0,001, ŠS = 4,69, atitinkamai), o tai rodo, kad pri-tegul-7a-2 rs628367 gali būti nepriklausomas rizikos veiksnys skrandžio vėžio prognozei

Keletas tyrimų. parodė, kad Mirna polimorfizmas pakenkti Mirna tvarkymo ir išraišką brandžios Mirna ir vaidinti svarbų vaidmenį kancerogenezėje [12], [33]. Siekiant ištirti galimą mechanizmą rs629367 polimorfizmo, susijusios su skrandžio vėžio, šiame tyrime, mes tyrė pri-leisti-7a SNP poveikį subrendusio Let-7a išraiškos tiek in vivo ir in vitro. Kontroliuojant ligos veiksnys, mes nustatėme, serume atrofinį gastritas grupės, brandus tegul-7a išraišką rs629367 AA, CA, CK genotipas parodė reikšmingas palaipsniui didinti ( P
= 0,043 3 lentelė). Tai galėtų iš dalies paaiškinti reiškinį, kad variantas CC genotipas rs629367 buvo didesnis paskirstymo dažnį atrofinio gastritas grupėje, nei kontrolinėje grupėje (6,2%, palyginti su 3,9%, 1 lentelė). Iš rs629367 CC genotipo su padidintu atrofinio gastritas rizikos santykis rodo, kad šis SNP buvo susijęs su atrofinio gastrito ir net skrandžio vėžio greičiausiai iki subrendusio mirna išraiškos kaitos, kuri taip turi įtakos jautrumą skrandžio vėžio. Dėl išraiškos lygio vivo pagrindu, mes ir toliau statomi išreikštas plazmidės sudėtyje yra pri-tegul-7a-2 rs629367 laukinio A tipo alelį ir variantas, C alelis siekiant stebėti brandus tegul-7a išraiška dviejų skirtingų alelių. Mes nustatėme, kad po transinfection, SGC-7901 elementai, kurių sudėtyje pCMV-MIR-pri-tegul-7a-2 rs629367 C alelis, pastebėta didesnė subrendęs tegul-7a išraišką negu A alelio ( P
< 0,001, Figūra 1). Gautas in vitro eksperimento rezultatas buvo Priebalsis su ta vivo, o tai taip pat rodo, kad pri-tegul-7a-2 rs629367 polimorfizmas gali turėti įtakos brandus tegul-7a išraišką ir pakeisti jautrumą skrandžio vėžio. Keli tyrimai pranešė, kad tegul-7a buvo auglys slopintuvas [44], [45]. Mes spėliojo, kad nukrypimas nuo A iki C galėtų nuostolis savo pirminę funkciją naviko slopinti, kurie galėtų pakeisti skrandžio vėžio jautrumą ir pirmaujanti blogos išlikimo prognozė.

Skrandžio vėžys yra daug veiksnių liga, kurią sukelia genetinis polinkis o taip pat aplinkos veiksniai [46]. Ištirti galimą įtaką amžių, lytį ir aplinkos veiksniai, pavyzdžiui, statuso, H.pylori
infekcija, rūkymas ir alkoholio vartojimas genetine poveikio, mes toliau nagrinėjo galimai įtakai veiksnių poveikį šios pri let-7A -2 rs629367 SNP, ir nustatė, pri-tegul-7a-2 rs629367 buvo susijęs tik su ligų riziką H. pylori
serologiniai neigiamas pacientų grupėje ir ne geriamojo grupei. Be H. pylori
serologija neigiamas pacientams už rs629367 SNP ir atrofinį gastritu ir skrandžio vėžio riziką padidėjusi būti 2,12 ir 1,97 karto, kuris buvo didesnis nei visoje atvejais PVA (1,83 ir 1,86 kartus, atitinkamai) Asociacija AR , Tačiau nebuvo statistinė reikšmė H. pylori
serologija-teigiamiems pacientams. Be to, šis reiškinys taip pat buvo pastebėtas sluoksniuotu analizės geriant: ne geriamojo grupei, arba kad rs629367 SNP ir atrofinį gastritas rizika padidėjusi būti 2,39 karto asociacijos, o ten buvo ne statistinis reikšmingumas geriamajame grupei. Tai gali būti dėl to, kad H.pylori parsisiųsti ir geriamojo buvo susijęs su skrandžio vėžio atvejų. Brenner ir kt. buvo iškėlė hipotezę, kad H.pylori
buvo būtina priežastis skrandžio vėžio [47], ir Tramacere et al., nustatė, kad buvo stiprus ryšys tarp alkoholio vartojimo ir sergamumo skrandžio vėžiu [48], [49]. Todėl, kad šių dviejų aplinkos veiksnių pašalinimas pagamintas AR didesnis nei analizuojant visą mėginius.

• PLoS ONE: kinkuoti-Kaip receptorių signalizacijos Kelias į Helicobacter pylori infekcija ir susijusios skrandžio vėžys: atvejo ir kontrolės tyrimas ir genų ekspresijos analizė
• PLoS ONE: Laparoskopinė Blužnis konservavimo blužnies hilar limfadenektomija Atlieka Po virškinamąjį traktą skydeliams ir Intrafascial Space pažengusiems Aukštutinė trečiosios skrandžio vė…