PLOS ONE: Functional Promotor -308G > A Variant no Fator de Necrose Tumoral ct Gene está associada a risco e progressão do câncer gástrico em um Population

Abstract

Fundo

factor de necrose tumoral α (TNF-α) desempenha um papel crucial no desenvolvimento e progressão do cancro gástrico. Um polimorfismo funcional, -308 G > A (rs1800629), que está localizado na região promotora de gene TNFA
, tem sido sugerido para alterar a produção de TNF-α e o risco de cancro influência. No presente estudo, procurou-se investigar se esse polimorfismo tem efeitos sobre o risco e progressão do câncer gástrico em uma população chinesa.

Métodos

Foram genotipados o TNFA
-308 G > um polimorfismo utilizando o método TaqMan em um estudo de caso-controle de dois estágios que compreende um total de 1686 doentes com cancro gástrico e 1895 indivíduos sem câncer. A regressão logística foi utilizada para avaliar as associações genéticas com ocorrência e progressão do cancro gástrico.

Resultados

Nós encontramos uma associação significativa entre os genótipos variantes e aumento do risco de câncer gástrico [ P = 0,034
, odds ratio (OR) = 1,39, intervalo de confiança de 95% (CI) = 1,01-1,67, GA /AA vs. GG]. Resultados semelhantes foram observados no estudo de replicação de acompanhamento. Quando combinados os dados dos dois estudos, encontramos uma associação mais significativa ( P
= 0,001, OR = 1,34, 95% CI = 1,13-1,59), especialmente para idosos (> 65 anos). Além disso, os pacientes portadores dos genótipos variantes tinha uma significativamente maior prevalência de estágio T4 da doença ( P
= 0,001, OR = 2,19, IC 95% = 1,39-3,47) e metástases à distância ( P
= 0,013, OR = 1,61, IC 95% = 1,10-2,35)

Conclusões

Nossos resultados sugerem que o promotor funcional -308 G >. Um polimorfismo no TNFA
influenciam a susceptibilidade e progressão do câncer gástrico na população chinesa

Citation:. Hong Y, Z Ge, Jing C, Shi J, Dong X, Zhou F, et al. (2013) Promotor Funcional -308G > A Variant no Fator de Necrose Tumoral ct Gene está associada a risco e progressão do câncer gástrico na população chinesa. PLoS ONE 8 (1): e50856. doi: 10.1371 /journal.pone.0050856

editor: Ramon Andrade de Mello, Universidade do Porto, Portugal |

Recebido: 27 de maio de 2012; Aceito: 29 de outubro de 2012; Publicação: 10 de janeiro de 2013

Direitos de autor: © 2013 Hong et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este trabalho foi apoiado em parte pelo "Six Summit Talent" Projeto da província de Jiangsu (SWYY-71-028), a National Science Foundation Natural de Jiangsu (BK2011194) ea National Science Foundation Natural da China (30872084, 30972444 e 81001274). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico é o quarto tipo de câncer mais comum ea segunda principal causa de morte relacionada ao câncer em todo o mundo, e particularmente prevalente em alguns países, incluindo a China [1], [2]. Embora a etiologia exata do câncer gástrico continua a ser identificado, acumulando estudos epidemiológicos têm mostrado que a dieta, tabagismo, álcool e, especialmente, Helicobacter pylori
( H. Pylori
) infecção, são bem conhecidos causas de cancro gástrico [3], [4]. No entanto, uma alta prevalência desses fatores de risco nem sempre resultar em uma alta incidência de câncer gástrico, o que sugere que outros fatores sensíveis, tais como as variações genéticas e diferenças ambientais podem ainda contribuir para a carcinogênese gástrica. Recentemente, evidências emergentes sugerem que os polimorfismos genéticos em genes candidatos foram associados com a susceptibilidade a cancro gástrico [5], [6], [7].

Tem sido sugerido que a inflamação crónica da mucosa gástrica induzida pela H. pylori
é um passo crítico no desenvolvimento de cancro gástrico [8], [9]. Nesse caso, variações genéticas nos genes de citoquinas relacionadas com inflamação pode ser potenciais factores de susceptibilidade para esta doença. Uma das citocinas importantes associados com H. pylori
é o factor de necrose tumoral (TNF) -α que é codificada pelo gene de TNFA
[10]. TNF-α é uma citoquina pleiotrópica produzida principalmente por monócitos e macrófagos activados e desempenha um papel importante na resposta inflamatória [11]. Sugeriu-se que mais de expressão de TNF-α mostrou uma gravidade de dose-resposta significativa como marcadores de risco de lesões pré-neoplásicas para câncer gástrico [12].

O gene TNFA
é localizada dentro da região do antigénio de leucócitos humanos de classe III no cromossoma 6 (6p21) e é altamente polimórfico. Polimorfismos no gene TNFA
foram mostrados para influenciar grandemente o seu nível de expressão [13]. Por conseguinte, muitos estudos tentaram investigar se os polimorfismos no promotor de TNFA
poderia ser usado como o factor determinante putativo de susceptibilidade para várias doenças, incluindo o cancro gástrico. Entre os muitos polimorfismos em TNFA
promotor, o TNFA
-308 G > Um polimorfismo foram descontroladamente estudada e há estudo funcional sugerindo que o alelo -308A está associada com aumento da produção de TNF-α [14]. Como para câncer gástrico, foram realizadas uma série de estudos para investigar as associações entre o TNFA
-308 G > Um polimorfismo e câncer gástrico em várias populações, no entanto, os resultados destes estudos formar permanecem inclusivo [15], [16], [17], [18], [19]. Até à data, dois publicados meta-análises sobre este assunto têm sugerido que a -308 G > A polimorfismo estava associada com o cancro gástrico em populações ocidentais, mas não em populações asiáticas [20], [21]. Aqui, no presente estudo, foi realizado um estudo caso-controle em relação larga de duas etapas que incluíram um total de 1686 doentes com cancro gástrico e 1895 indivíduos sem câncer para avaliar melhor a influência do TNFA
-308 G >. um polimorfismo no risco de câncer gástrico e progressão na população chinesa

Materiais e Métodos

Ética declaração

o estudo foi aprovado pelo Conselho da Nanjing Institutional Review Medical University, Nanjing, China. No recrutamento, consentimento informado foi obtido de todos os participantes envolvidos neste estudo.

Estudo população

Este é um estudo epidemiológico molecular em curso do cancro gástrico realizado no Primeiro Hospital Afiliado da Universidade Médica de Nanjing , Nanjing, China. O desenho do estudo e os critérios de inclusão dos sujeitos foram previamente descrito noutro local [22]. Em breve, dois estudos de caso-controle de base hospitalar independentes foram incluídos no presente estudo. No geral, o conjunto de teste incluía 750 casos gástricas e 835 de idade e sexo-correspondida controles recrutados no segundo hospital afiliada da Universidade de Nanjing Medical, Nanjing e Hospital do Câncer de Nantong, Nantong, China a partir de março de 2006 a janeiro de 2010, ea conjunto de validação incluiu 936 casos e 1.060 controles inscritos do Hospital das Yixing Pessoas, Yixing, China a partir de janeiro de 1999 a dezembro de 2006. Todos os indivíduos eram étnicos chineses han provenientes de famílias diferentes e não tinha nenhuma relação de sangue. Todos os pacientes foram diagnosticadas com histologicamente confirmados, câncer gástrico incidente e foram recrutados consecutivamente, sem restrição de idade e sexo. Os cortes histológicos de todos os casos foram revistos por dois patologistas de forma independente. Aqueles pacientes que tiveram câncer anterior, metástase de câncer de outros ou de origem desconhecida, ou radioterapia ou quimioterapia anterior foram excluídos. Os controles foram recrutados de indivíduos saudáveis ​​que estavam buscando exame físico nos ambulatórios do hospital correspondente e foram para os casos por idade (± 5 anos) e sexo-correspondida frequência. Os controles sem câncer foram geneticamente relacionada aos casos e não tinha história individual de câncer. Cada paciente doou 5 ml de sangue venoso após a apresentação de um consentimento informado por escrito. A taxa de resposta para casos e controles foi tanto acima de 85%.

extração de DNA e genotipagem

O DNA genômico total foi isolado e purificado a partir de leucócitos de sangue periférico por digestão com proteinase K e fenol /extracção com clorofórmio. O TNFA
-308 G > A polimorfismo foi genotipados utilizando o método TaqMan-MGB (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA), que utiliza duas sondas TaqMan MGB específica de alelo e um par de iniciadores de PCR para detectar o alvo SNP específico. A sequência dos iniciadores e sondas estão disponíveis mediante pedido. A mistura de reacção de 10 pL continha 20 ng de DNA genómico, 3,5 mL de 2 × TaqMan Master Mix A genotipagem, 0,25 mL da mistura de iniciadores e sondas e 6,25 mL de água duplamente destilada. A amplificação foi realizada sob as seguintes condições: 50 ° C durante 2 min, 95 ° C durante 10 min, seguido por 45 ciclos de 95 ° C durante 15 seg, e 60 ° C durante 1 min. Seguindo as instruções do fabricante, as amplificações foram realizadas em 384 poços ABI 7900HT Tempo real PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) e a discriminação alélica foram realizadas utilizando o programa SDS 2.4 (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). As taxas de genotipagem desses SNPs foram todos acima de 98%. Para garantir a precisão da genotipagem, dois controle negativo experimental (água) e dois controles experimentais positivos com genótipo conhecido foram incluídos em cada placa de reação. Além disso, cerca de 5% das amostras foram seleccionados aleatoriamente para a genotipagem repetido para confirmação; e os resultados foram 100% concordantes

A análise estatística

Antes de uma análise mais aprofundada, as freqüências alélicas de TNFA
-308G >. Um polimorfismo nos controles de conjunto de teste, validação definido e combinado definir foram avaliadas contra partida de Hardy-Weinberg (HWE) usando um goodness-of-fit χ2-teste. Diferenças nas distribuições de idade, o sexo e as frequências de genótipos do TNFA
-308G > Um polimorfismo entre os casos e controles foram avaliados pelo teste de χ2 de Pearson. As associações entre o -308G > A genótipos e risco de câncer gástrico, bem como as características clínicas dos pacientes foram medidos calculando odds ratio (OR) e intervalos de confiança de 95% (IC) de análise de regressão logística incondicional com o ajuste para idade e sexo. Todas as análises estatísticas foram realizadas com o software SAS 9.1.3 (SAS Institute, Cary, NC, EUA) e um de dois lados valor P
inferior a 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.

resultados

características da população do estudo

a distribuição das características demográficas e características clínicas dos dois conjuntos de grupo de estudo de frequência são apresentados na Tabela 1. os casos e controles foram pareados por idade e sexo ( P
= 0,383 e 0,424 no conjunto de teste e P
= 0,164 e 0,061 no conjunto de validação, respectivamente). Embora mais idosos (> 65 anos) e do sexo feminino foram apresentados no conjunto de teste do que no conjunto de validação, não foi observada diferença significativa na idade e sexo entre os casos e controles quando combinadas as duas populações (Tabela 1). No conjunto de teste, havia 295 pacientes cárdia câncer gástrico (CGC) e 455 de câncer gástrico pacientes não-cárdia (NCGC); 406 pacientes diagnosticados como tipo difuso de câncer gástrico e 299 como tipo intestinal. estágio TNM clínico é categorizada de acordo com a profundidade de invasão, metástase de linfonodos e metástases à distância. A percentagem de fase TNM de doentes no conjunto de teste de I a IV foram 26,8%, 22,0%, 35,5% e 15,7%, respectivamente. Dos 936 pacientes no conjunto de validação, 358 foram CGC e 578 foram NCGC; 539 pacientes diagnosticados como tipo difuso de câncer gástrico e 397 como tipo intestinal. Cerca de 27,7%, 19,8%, 42,2% e 10,3% dos pacientes foram encontrados para ter TNM fase I, II, III e IV doenças, respectivamente.

Associação entre a TNFA
-308 G > Um polimorfismo e câncer gástrico risco

os resultados de genotipagem do TNFA
-308 G > a polimorfismo entre os pacientes e controles no conjunto de dois estudo são apresentados na Tabela 2. a freqüências genotípicas observadas nos controles de conjunto de teste, conjunto de validação e o conjunto combinado eram todos conformes à HWE ( P
= 0,481, 0,448 e 0,946, respectivamente). Nós, então, utilizado o teste χ2 de Pearson e análise de regressão logística para avaliar a associação entre o TNFA
-308 G > Um polimorfismo eo risco de câncer gástrico. No conjunto de teste, verificou-se que havia mais genótipos variantes (GA /AA) no grupo caso do que no grupo controle ( P
= 0,034). Em comparação com os indivíduos com genótipo GG, encontramos esses assuntos com GA genótipos /AA tiveram um risco aumentado de câncer gástrico (OR ajustado = 1,39; IC95% = 1,01-1,67). associações similares foram observados no estudo de replicação (GA vs. GG: OR = 1,29, 95% CI = 1,02-1,65 e GA /AA vs. GG: OR = 1,31, IC 95% = 1,03-1,65). Quando combinados os dados dos dois estudos, uma associação mais significativa foi observada (GA vs. GG: OR = 1,33, 95% CI = 1,12-1,59 e GA /AA vs. GG: OR = 1,34, IC95% = 1,13-1,59 )

Para avaliar se a TNFA
-308 G >. Um polimorfismo desempenha papel diferente em subgrupos de idade, sexo, local do tumor e tipos histológicos, nós então realizada análise estratificada com base nessas variáveis . Como mostrado na Tabela 3, a análise estratificada mostrou que o risco aumentado associado com o TNFA
-308GG /genótipos GA foi mais evidente entre os indivíduos mais idosos (> 65 anos) ( P Art < 0,001, OR = 1,70, 95% CI = 1,28-2,25). Além disso, não foi observada diferença significativa na estratificação de sexo, local do tumor e tipos histológicos

Associação entre a TNFA
-308 G >. Um polimorfismo e características clínicas dos pacientes com câncer gástrico

Polimorfismos em genes candidatos têm sido sugeridos para influenciar a progressão do câncer. Em seguida, avaliamos se o TNFA
-308 G > Um polimorfismo tem efeitos sobre as características clínicas dos pacientes, incluindo a fase TNM, metástases à distância, linfonodo metástases e profundidade de infiltração tumoral. Como mostrado na Tabela 4, verificou-se que os pacientes portadores dos genótipos variantes tinha uma significativamente maior prevalência de estágio T4 de profundidade invadido ( P
= 0,001, OR = 2,19, IC 95% = 1,39-3,47) e metástases à distância ( P
= 0,013, OR = 1,61, IC 95% = 1,10-2,35), indicando o polimorfismo pode ser associado com a progressão do cancro gástrico.

Discussão

as principais conclusões do nosso estudo são as associações significativas entre o TNFA
-308 G > Um polimorfismo eo risco de câncer gástrico e progressão. TNF-α é um mediador importante imunitário na resposta inflamatória e tem sido sugerida para ser um promotor tumoral endógeno na carcinogénese humana [23], [24], [25]. No cancro gástrico, Senthilkumar et ai.
Demonstrado que o TNF-α ARNm e expressão de proteínas estavam significativamente aumentados em pacientes com adenocarcinomas gástricos, usando RT-PCR, transferência de Western e imuno-histoquímica [12]. A influência da -308G > Um polimorfismo no nível de expressão TNFA
foi anteriormente investigado. . Karen
et ai mostraram que a -308G > Um polimorfismo pode afectar a afinidade de factor de ligação e resultar em um factor de ligação para o alelo -308A mas não o alelo -308G, que, em seguida, conduzir a um aumento da expressão de TNFA
[14]. Considerando-se que o TNF-α é sobre-regulada no cancro gástrico, é possível que os indivíduos portadores do alelo -308A (isto é. GA /AA), que está associada com o aumento do nível de TNF-α, têm um risco aumentado de cancro gástrico. Portanto, é biologicamente plausível que o TNFA
-308G >. Uma confere susceptibilidade dos indivíduos para câncer gástrico

Até o momento, foram realizados vários estudos epidemiológicos moleculares para investigar a associação entre o TNFA
-308G > Um polimorfismo eo risco de câncer gástrico. No entanto, os resultados destes estudos ainda não são conclusivos. Há duas publicada meta-análises sobre as associações entre o TNFA
-308G > A eo risco de câncer gástrico que identificaram este polimorfismo como um fator de risco para câncer gástrico em populações caucasianas, mas não em populações asiáticas [20] , [21]. Quando avaliaram as duas meta-análises, encontramos apenas 3 estudos com um total de 513 casos e 714 controles e 5 estudos com um total de 833 casos e 1375 controles em populações chinesas foram incluídos nas meta-análises de Zhang et ai.
[20] e Gorouhi et ai.
[21], respectivamente (Tabela 5). O número de estudos e o tamanho da amostra destes estudos podem ser muito limitados para gerar um resultado estável. Destes estudos, somente Lu et al., Achou uma associação significativa entre TNFA
-308GA genótipo e aumento do risco de risco de câncer gástrico (OR = 1,81, IC 95% = 1,04-3,14) . Nosso estudo identifica ainda mais o TNFA
-308G > Um polimorfismo como um fator de risco para câncer gástrico em população chinesa, que pode ser de valor na avaliação do papel da α TNF na carcinogênese gástrica. Como indicado pelo Poder e software Tamanho Exemplo de cálculo, nosso estudo tinha um poder de 96% para detectar uma OR de 1,50 ou superior e uma mínima ou de 0,62 com uma frequência de exposição de 9% no tamanho da amostra (1686 casos e 1895 controles) , o que sugere que o tamanho da amostra do nosso estudo é eficiente

Além disso, descobrimos que o TNFA
-308G >. Um polimorfismo foi associado com aumento do risco de câncer gástrico entre os subgrupos de mais velhos indivíduos (idade > 65 anos), em vez de indivíduos mais jovens. Esta observação é bem suportado por um grande corpo de estudos, que ligam o sistema imunológico fraco com o envelhecimento [26], [27]. O sistema imunitário de indivíduos com idade sofre alterações que podem ser responsáveis ​​por um aumento da susceptibilidade a doenças malignas [26]. Tem sido proposto que a elevada expressão de α TNF pode estar envolvido no crescimento do tumor e se espalhou através da influência remodelação do tecido do estroma e desenvolvimento [28], [29]. Em nosso estudo, também encontramos o TNFA
-308G > Um polimorfismo estava associado a agressividade clínica tal como o estágio do tumor avançado e metástases à distância. observação semelhante foi também relatado em outro estudo [30]. Se confirmado por estudos adicionais, este polimorfismo pode ajudar a prever com precisão o curso clínico de câncer gástrico. No entanto, estes resultados devem ser interpretados com cautela porque não há possibilidade de que as associações com mau prognóstico são devido a uma fase tardia no momento do diagnóstico.

Ao interpretar os resultados, algumas outras limitações também devem estar preocupados. Em primeiro lugar, uma vez que nosso estudo foi desenhado com base em hospital, a possibilidade de viés de seleção de temas que foram associados com um genótipo particular pode existir. No entanto, as distribuições genotípicas em nossos controles eram semelhantes às distribuições relatados em outros estudos chineses e conformes à HWE. Portanto, o viés de seleção em termos de distribuições de genótipos não seria substancial. Em segundo lugar, H. pylori
estado da infecção é uma causa bem conhecida de cancro gástrico e tem sido sugerido para influenciar a expressão de TNF-α [31]. Variações genéticas em TNFA
podem interagir com este fator a afetar o risco de caner gástrico. Infelizmente, a falta de informação disponível sobre H. pylori
estado da infecção no nosso estudo nos limitam a explorar mais estas interações. Assim, novos estudos, com dados mais detalhados sobre H. pylori
são garantidos

Em conclusão, os nossos resultados sugerem a -308G >. Um polimorfismo no promotor de TNFA
tem uma influência significativa sobre a ocorrência e progressão de gástrico no população chinesa. Embora as associações parecia ser estatisticamente significativa em nossa população, estes resultados devem ser verificadas independentemente por outros estudos prospectivos com maior tamanho de amostra simultânea de controles bem combinados e participantes homogêneos imparciais-correspondido.

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