Абстрактный
Фон
<р> белок теплового шока 60 (HSP60) является шаперонина с необходимыми функциями для ячейки физиология и выживание, и его экспрессия коррелирует с прогнозом в ряде злокачественных опухолей. Целью данного исследования является определение взаимосвязи состояния Hsp60 с клинико-патологическими параметрами и прогноза при раке желудка.
Введение
<р> рак желудка является одной из основных причин рака, связанных смерти во всем мире благодаря своей частоте, плохой прогноз и ограниченные возможности лечения [1]. Полная резекция опухоли и прилегающих лимфатических узлов является единственным эффективным методом излечения [2]. К сожалению, после полной резекции, уровень 5-летней выживаемости остается на низком уровне [3]. Несколько исследований показали, что различные генетические и эпигенетические изменения участвуют в процессе канцерогенеза и прогрессии рака желудка [4] - [6]. Однако, молекулярный механизм участвует в развитии рака желудка остается неясной.
<Р> Белки теплового шока (HSP) представляют собой набор из эволюционно консервативных белков. Белки теплового шока были классифицированы на различные подсемейства на основе их молекулярной массы [7] или систематические символы гена [8]. В широком смысле, у млекопитающих, четыре основных семейства БТШ признаны: HSP90 (HSP90α, HSP90β, GRP94), HSP70 (HSP70, HSC70, mHSP70, GRP78), HSP60 и малые HSPs (HSP27, αB-кристаллин, Hsp22). Накопление белка в неправильно свернутых нагруженных клеток, вызывает проявления HSPs, которые предотвращают агрегацию белка и облегчения рефолдинга или устранение неправильно упакованных белков в их качестве шаперонов [9]. Недавно сообщалось, что HSPs значительно связаны с раком [10].
<Р> HSP60 (также называемый Cpn60) в основном содержится в митохондриях, хотя он также был обнаружен на экстра-митохондриальная сайтов [11 ]. HSP60, способствует складывание митохондриальных белков и способствует протеолитической деградации неправильно свернутых или денатурированных белков в АТФ-зависимым способом [12]. В последнее время, ее роль и применение в развитии человеческого рака и управления в настоящее время активно изучаются, и результаты являются весьма обнадеживающими [13]. HSP60, кажется, есть потенциал в области диагностики, прогнозирования и профилактики и лечения различных злокачественных опухолей человека, в том числе пищеводного плоскоклеточного рака [14], бронхиальная канцерогенеза [15], колоректальный рак [16] и глиобластомы [17]. Тем не менее, роль HSP60 на прогноз больных раком желудка, остается неясным.
<Р> В настоящем исследовании мы оценили уровень HSP60 в желудочном раковых тканей с помощью иммуногистохимии. Корреляция Hsp60 состояния с клинико-патологическими параметрами и выживаемости больных раком желудка затем анализировали. Кроме того, сообщалось, что ММР-9 играет важную роль в желудочном рецидива рака и прогноз [18]. Поэтому мы также исследовали взаимосвязь Hsp60 и MMP-9 белка при раке желудка.
Пациенты и образцов
<р> Исследование было одобрено Institutional Review Совет и человеческий Комитет по этике филиал больницы медицинского университета Гуйлиня. Письменное согласие на использование образцов для исследовательских целей было получено от всех пациентов до операции.
<Р> Желудочный ткани карциномы были получены из образцов Гастрэктомия 223 пациентов из отделения общей хирургии, аффилированном больницы Гуйлиня медицинского университета ( Гуйлинь, Китай). Все операции проводились в период с января 2005 года по декабрь 2008 года Критерии приемлемости данного исследования были следующие: (1) патологическое исследование подтверждает наличие рака желудка и опытной радикальной операции, (2) полные основные клинические данные, (3 ) отсутствие какого-либо предварительного лечения рака, и (4) не вызывает серьезных осложнений или других злокачественных заболеваний. Существовали 144 мужчин и 79 женщин (средний возраст 58,0 лет, диапазон, 22-82 лет). Соответствующие клинические патологические признаки (таблица 1) были получены из файлов пациентов. Стадия опухоли была классифицирована в соответствии с системой 7-ой Международный союз борьбы с раком (UICC) TNM постановка [19].
Immunohistochemistry окрашивание
<р> В общей сложности 223 образцов желудочного рака использовались в иммуногистохимии (IHC ) анализ. В соответствии с протоколом [20] для IHC на срезах тканей залитых парафином, парафином блоки рассекают приблизительно 4 мкм толщиной. Слайды обжигали при температуре 60 ° С в течение 2 ч, депарафинизировали ксилолом и регидратации с использованием градиенте спирта (100% спирта, 95% спирта, 80% спирта и 70% спирта). Слайды ткани были затем обрабатывают 3% раствором перекиси водорода в метаноле в течение 30 мин для гашения эндогенной пероксидазной активностью, и антигены были получены в 0,01 М цитратном буфере натрия (рН 6,0) с использованием микроволновой печи. Через 30 мин после предварительной инкубации в 10% нормальной козьей сыворотки, чтобы предотвратить неспецифическое окрашивание, образцы инкубировали в течение ночи с использованием первичных антител, либо анти-HSP60 (Abcam, # ab31115, Великобритания, разбавление 1:200) или анти-ММР-9 ( Abcam, # ab38898, Великобритания, разбавление 1:200), в увлажненной контейнере при температуре 4 ° с. Слайды ткани были обработаны без биотина системой обнаружения хреновый-пероксидазы в соответствии с инструкциями изготовителя (Gene Tech). Результаты IHC были оценены двумя независимыми исследователями, ослепленных к идентичности пациентов и клинического состояния. В несоответствующих случаях патологоанатом обзор дел, и был достигнут консенсус
<р> HSP60 и ММР-9 интенсивности окрашивания оценивались по шкале 0-3 в соответствии с процентом положительной опухоли (0, &л.; 5% положительных клеток; 1, 5-10%; 2, 11-50%, или 3, > 50%). Уровень очень низкий в течение 0, низкое в течение 1, 2 умеренное течение и высокий для 3 (рис. 1). Уровни HSP60 и MMP-9 были классифицированы как негативные для оценки ≤1 и положительный результат для оценки ≥2.
Результаты
Ассоциация HSP60 с клинико-патологическими переменных Обсуждение
<р> Для выяснения биологической значимости HSP60 при раке желудка, мы исследовали иммуногистохимическое уровень HSP60 в опухолевых тканях желудка (рис. 1). HSP60, окрашивание, главным образом, расположены в цитоплазме опухолевых клеток. Положительная скорость HSP60 была 58,3% (130/223) в образцах рака желудка.
<Р> По результатам иммуногистохимии, мы коррелировала статус Hsp60 в 223 желудочных образцов рака с восемью другими широко признанными клиникопатологическими параметрами (таблица 1 ). Наш анализ показал, что уровень HSP60 при раке желудка была достоверно коррелирует с глубиной инвазии ( P
= 0,043), метастазов в лимфатических узлах ( P
= 0,018) и стадии заболевания ( P
= 0,048), но не было связано с полом, возрастом, размер опухоли, опухоли и степени дифференцировки ( P
> 0,05) (таблица 1). Следует отметить, что соотношение Hsp60 статуса с видным серозной вторжения и метастазов в лимфатических узлах позитивности предложил потенциальную роль HSP60 в повышенной инвазии и метастазирования рака желудка.
Влияние опухоли Hsp60 уровня белка на прогноз
<р> Для дальнейшего определения влияния HSP60 на ОС и RFS, мы впервые проводили однофакторный анализ традиционных клиникопатологическими переменных для прогноза. Результаты однофакторного анализа приведены в таблице 2. Сверхэкспрессия HSP60 ( P
= 0,001), больший размер опухоли ( P
&л; 0,001), сайт опухоли ( P
= 0,014), видный серозный вторжение ( P
&л; 0,001) и метастазов в лимфатических узлах ( P
&л; 0,001) были связаны с плохой скоростью OS от больных раком желудка , Кроме того, анализ Каплан-Майера показал, что избыточная экспрессия HSP60 ( P
= 0,002), больший размер опухоли ( P
&л; 0,001), сайт опухоли ( P =
0,008), видный серозный вторжение ( P
&л; 0,001) и метастазов в лимфатических узлах ( P
&л; 0,001) были отрицательными прогностическими факторами для БВ в больных раком желудка (таблица 2). Кроме того, для оценки независимого влияния Hsp60 оверэкспрессии на OS и RFS, многовариантного регрессионной модели Кокса с поправкой на размер опухоли, опухоли, глубина инвазии, метастазов в лимфатических узлах и HSP60 была выполнена. Наши результаты показали, что HSP60 статус был бедным независимым прогностическим фактором для ОС в больных раком желудка (отношение рисков 1,594; 95% ДИ 1.114-2.280). Кроме того, положительные пациенты экспрессии HSP60 были почти в 1,5 раза чаще страдают от рецидивов, чем те, с отрицательным выражением Hsp60 (отношение рисков, 1.460; 95% ДИ 1.024-2.081). Размер опухоли, глубина инвазии и метастазов в лимфатических узлах все имели независимое прогностическое значение в многомерном анализе (таблица 3).
<р> Анализ выживаемости показал, что операционная система и RFS достоверны отличаются среди 223 пациентов в зависимости от уровня HSP60 ( P
= 0,001, P
= 0,002) (рис. 2А). Послеоперационный медиана ОВ и RFS были 26.0 месяцев и 20,0 месяцев соответственно. Послеоперационные медиана времени OS в HSP60-положительным (п = 130) и Hsp60-отрицательных (п = 93) у больных раком желудка подгруппы были 17,5 месяцев и 36,0 месяцев, и медиана RFS времена были 14.0 месяцев и 33,0 месяцев. Кроме того, показатели OS и RFS через 5 лет были 30,2% и 29,3% для Hsp60-положительных пациентов по сравнению с 48,9% и 43,5% для Hsp60-отрицательных пациентов, соответственно ( P
= 0,001 и P
= 0,002;. Таблица 2)
<р> для дальнейшей оценки прогностического значения HSP60 в разных подгрупп, пациенты были разделены в зависимости от размера опухоли (рис 2B, C), глубина инвазии (рис.. 2D, Е) и метастазов в лимфатических узлах (рис. 2F, G). Уровень HSP60 сохранила свою прогностическую ценность в прогнозировании короче ОС и RFS в подгруппах для размера опухоли. Для подгрупп T3 /T4 и больных N1-3, значимые корреляции были обнаружены между Hsp60 статусом и ОС ( P
= 0,003 и P
= 0,002; соответственно) и RFS ( P
= 0,008 и P
= 0,003; соответственно). HSP60 не имел прогностическое значение в отношении ОС или RFS для пациентов с T1 /T2 и N0 (все P
≫ 0,05). Таким образом, представляется, что HSP60 может служить мощным прогностическим фактором для пациентов с распространенным раком желудка в различных группах риска.
HSP60 суперэкспрессия предсказать неблагоприятный прогноз независимо от опухоли инвазивности
<р> Чтобы лучше понять клинические значение HSP60 на агрессивностью при раке желудка, мы исследовали взаимосвязь HSP60 с глубиной инвазии и метастазов в лимфатических узлах при раке желудка. Положительные темпы HSP60 были 63,7% и 63,3% в более заметным серозной вторжения группы (T3 /T4) и более частое лимфатических узлов участие группы (N1-3), в то время были только 50,0% и 46,2% в T1 /T2 и N0 ( P
= 0,043 и P
&л; 0,018, соответственно) (таблица 1). Кроме того, уровень HSP60 был достоверно коррелирует с ММР-9, в 223 образцах желудочного рака. Из 93 пациентов с низким уровнем HSP60, 65 пациентов (69,9%) имели низкий уровень ММР-9, в то время как 77 из 130 пациентов (59,2%) с высоким уровнем HSP60 также имели высокий уровень MMP-9 ( P
&л;.. 0,001) (рис 3)
<р> Мы исследовали далее влияние опухоли инвазии на прогностическое значение HSP60 при раке желудка с помощью MMP-9 в качестве индикатора для инвазивного потенциала индивидуальных опухолевые клетки. Все пациенты были разделены на либо низкой инвазивности подгруппы (низкий ММР-9, N = 118) или высокой инвазивности подгруппы (высокий MMP-9, N = 105), в соответствии с уровнем индекса ММР-9. Кривые выживаемости Каплана-Мейера были затем построены, чтобы исследовать ассоциацию между статусом Hsp60 и выживаемости (рис. 4). В высокой опухолевой инвазивности подгруппы, HSP60 избыточная экспрессия была связана с более короткой ОС ( P
= 0,013) и RFS ( P
= 0,032) по сравнению с операционной системой и RFS у пациентов с низким уровнем HSP60, в то время как не было никакого прогностическое значение в отношении ОС или RFS в низкой инвазивности подгруппе.
<р> в настоящем исследовании, уровень HSP60 был исследован в 223 желудочных тканях карциномы с помощью иммуногистохимии. Мы обнаружили, что HSP60 статус был в значительной степени связано с глубиной инвазии и метастазов в лимфатических узлах. Кроме того, анализ выживаемости Каплана-Мейера показал, что время выживания (OS и RFS) от больных раком желудка с Hsp60 избыточной экспрессии были значительно короче, чем те, с низким уровнем HSP60. Кроме того, многомерный анализ Кокса модели показал, что HSP60 статус был независимым фактором для обоих прогнозных индексов (ОС и RFS) при раке желудка. Эти данные свидетельствуют о том, что HSP60, играет важную роль в прогнозировании опухоли, и может быть потенциальным прогностическим фактором развития рака желудка. Наши результаты согласуются с ранее сообщенных результатов. В нескольких исследованиях было показано, что аномальная экспрессия HSP60 в раковых клетках связан с опухолевой прогрессии. Танака и др. [21] сообщили, что скорость положительность хеликобактерной HSP60 был у пациентов с раком желудка диффузного типа значительно выше, чем у H. Pylori-инфицированных пациентов без рака желудка, которые предположили, что H. пилори HSP60 может быть связано с желудочным канцерогенеза, особенно в случае диффузного рака. Faried и др. [14] сравнивали соотношение Hsp60 состояния с клинико-патологическими параметрами и прогноза в пищеводного плоскоклеточный рак и предположил, что HSP60 коррелирует с прогнозом пациента в пищеводного плоскоклеточной карциномы человека. Кроме того, Капелло и др. [22] оценивали наличие и экспрессию HSP60 и HSP10 в карцином кишечника с метастазами в лимфатических узлах и обнаружили, что HSP60, HSP10 и избыточная экспрессия была функционально связана с опухолевой прогрессии в карцином кишечника. Тем не менее, Капелло и др. [23] сравнили экспрессию Hsp60 и HSP10 при раке легкого с этим хронической обструктивной болезнью легких с помощью иммуногистохимии и обнаружили противоречивые результаты, что потеря HSP60 и HSP10 иммунопозитивность связана с развитием и прогрессированием бронхиальной рака у курильщиков с хронической обструктивной легочной болезнь
. <р> Клиническая стадия является наиболее важным фактором, влияющим на прогноз у больных раком желудка. Несколько систем доступны для классификации рака желудка. Среди них, Международный союз борьбы с раком (UICC) Система TNM постановка является одним из самых распространенных. Хотя система TNM успешно сортовой пациентов на их прогноз в соответствии с клинико-патологическими переменных, он достиг своего предела в обеспечении критически важной информации, которая может повлиять на стратегию лечения. Это трудно для желудочно-кишечного тракта хирургов, чтобы предсказать, какие именно люди будут испытывать рецидив среди продвинутых пациентов, перенесших излечению. Для того, чтобы преодолеть ограничения этих традиционных систем, многие молекулярные маркеры были изучены и показано, что потенциальное прогностическое значение. Тем не менее, на сегодняшний день, биомаркеров, которые могут наслаиваться больных раком желудка с лечебной иссечения в стадии TNM III /IV по-прежнему существенно ограничены. В нашем стратифицированной анализе, мы обнаружили, что HSP60 статус имел четкую прогностическую ценность для OS и RFS у пациентов метастазов в лимфатических узлах (N1-3) T3 /T4 и. Эти данные указывают на то, что HSP60 может выступать в качестве интеллектуального инструмента для выявления пациентов с раком желудка с высоким риском рецидива.
<Р> Это было известно, что деградация внеклеточного матрикса (ECM) был сигналом для начала вторжения и метастаз, и ММР являются важными молекул, участвующих в деградации ЕСМ во время инвазии и метастазирования [24]. Чу и др. [18] сообщили, что рак ММР-9 значимо коррелировали с глубиной инвазии и метастазов в лимфатических узлах и ММР-9-положительных больных раком желудка имели худшие результаты, чем те, с ММР-9-негативных опухолей. Чжао и др. [25] обнаружили, что ММР-9 целевых РНК-интерференции удалось успешно подавить экспрессию ММР-9 и ингибируют рост клеток и инвазии SGC7901 рака желудка в пробирке и в естественных условиях. Кроме того, Лин и др. [26] сообщили, что белок теплового шока 60 антихеликобактерной усиливается миграцию клеток рака желудка и способствовали образованию пробки, кроме того, она может ускорить развитие рака на пути экспрессии провоспалительных цитокинов. Сообщалось, что HSP60, предлагается в качестве мишени для терапии опухолей [27]. Наши результаты показали, что уровень HSP60 и ММР-9 коррелировали друг с другом, что указывает на более высокую инвазивной и метастазирующей активностью в раковых клетках Hsp60-положительным. Кроме того, была выражена весьма HSP60 в глубину инвазии, особенно в Т3 и Т4 карцином. Что касается состояния лимфатических узлов был заинтересован, у пациентов с метастазами в лимфатические узлы, как правило, показывают повышенную экспрессию HSP60. Кроме того, пациенты, которые имели Hsp60 сверхэкспрессии, в которых опухолевые клетки проявили высокую инвазивность, имели плохую операционную систему и более короткие RFS. Коллективно, HSP60 в рак желудка, способствующего агрессивности опухоли позволяет предположить, что HSP60 может быть осуществимо мишенью в терапии рака.
<Р> Таким образом, мы показали, что HSP60 может играть важную роль в опухолевой инвазии, метастазирования и прогноза, а также может работать в качестве перспективной мишени для прогностической прогнозирования при раке желудка. Определение HSP60 может помочь выявить больных раком желудка с высокой степенью риска и тем самым помочь выбор соответствующих методов лечения. Дальнейшие исследования необходимо уточнить роль HSP60 в развитии рака желудка.
Выражение признательности
<р> Мы с благодарностью отмечаем клинические данные, предоставленные отделом патологии (филиал больницы Гуйлиня медицинского университета).
Антибиотик Х-206 эффективен против SARS-CoV-2 in vitro
Новый инструмент регистрирует и отслеживает рост микробиома
Антиоксиданты в рационе могут повысить риск рака кишечника.
Отметка потенциальных молекулярных предикторов ответа на биологическую терапию при язвенном колите
Язвенный колит
Половина используемых лекарств повреждает кишечные бактерии,
Новое исследование определяет связь между микробиомом кишечника и инсультами.
Недавнее исследование, проведенное в клинике Кливленда, демонстрирует влияние диеты с высоким содержанием холина, который часто содержится в большом количестве в красном мясе и яичных желтках, и триме
Исследователи используют фаговую терапию для успешного лечения алкогольной болезни печени.
В первый раз, исследователи успешно использовали бактериофаговую (фаговую) терапию для устранения связанного с алкоголем заболевания печени на животных моделях. Кредит изображения:Кристоф Б
Вибрация всего тела помогает уменьшить воспаление,
благодаря микробиому кишечника Вибрация всего тела, по-видимому, улучшает многие симптомы сахарного диабета II типа. при этом глюкоза и деструктивное воспаление нарастают. Процедура помогает организму