PLoS ONE: Значение клинико-патологическими и прогностическое значение лактатдегидрогеназы экспрессирующем в больных раком желудка

Абстрактный

Введение
<р> ЛДГ-А, фермент, ответственный за превращение пирувата в лактат, было продемонстрировано, повышающей регуляции во многих типах рака и привести к более агрессивным поведение путем регуляции пролиферации и антиапоптоз. Тем не менее, его экспрессия в раке желудка (GC) не отличается тщательно. Цель данного исследования состояла в том, чтобы разъяснить выражение и потенциальное воздействие LDH-A в GC.

Методы
<р> Мы исследовали-A ЛДГ выражение с помощью иммуногистохимии на микрочипе GC ткани (ТМА) и используя Вестерн-блот на свежих тканей GC и клеточных линий. Прогностическое значение и корреляция с другими клиникопатологическими факторами были оценены. Мы трансфицировали миРНК в GC клетки против СДГ-A. ЛДГ-А анализировали с помощью Вестерн-блоттинга и в режиме реального времени RT-PCR. Рост клеток оценивали в пробирке и в естественных условиях. Лактат и производство АТФ клетками определяли.

Результаты
<р> Был значительно выше ЛДГ-А выражение карциномы, чем в неопухолевых слизистой оболочки (NNM). Был положительная корреляция СДГ-А выражение с возрастом, гистологического типа и метастазами лимфы. Анализ выживаемости показал, что высокий уровень экспрессии LDH-A в GC было связано с более низкой общей выживаемости (OS). Когда стратифицированная по классам Lauren и гистологической классификации, значение появилось в диффузного типа и недифференцированной типа GC. При многомерном анализе, ЛДГ-А выражение GC был независимым прогностическим фактором риска для ОС (отношение риска = 1,829, 95% ДИ 1.375-2.433, P &л; 0,0001). Конкретные миРНК против LDH-А в росте клеток замедляется клеточной линии GC как в пробирке и в мышиных моделях. ЛДГ-нокдаун также снижается лактат и производство АТФ в клетках GC.

Выводы
<р> Наше исследование указывает на онкогенного роль СДГ-A в GC. ЛДГ-А выражение является независимым прогностическим фактором риска у больных ГЦ и повышающей регуляции экспрессии LDH-A может прогнозировать неблагоприятный исход в диффузного типа и недифференцированной типа GC. Наши результаты свидетельствуют о том, что ЛДГ-A может быть потенциальной терапевтической мишенью при раке желудка
<р> Образец цитирования:. Sun X, Sun Z, Zhu Z, Гуань H, J Чжан, Чжан Y, и др. (2014) Значение клинико-патологическими и прогностическое значение лактатдегидрогеназы экспрессирующем в больных раком желудка. PLoS ONE 9 (3): e91068. DOI: 10.1371 /journal.pone.0091068
<р> Редактор: Энтони W.I. Ло, Китайский университет Гонконга, Гонконг
<р> Поступило: 12 августа 2013 года; Принято: Февраль 7, 2014 года; Опубликовано: 7 марта 2014
<р> Copyright: © 2014 Sun и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Это исследование была поддержана грантами от научно-исследовательских проектов в провинции Ляонин отдела науки и техники (№ 2007225017, № 2009225011-2 и № 2011415052) и проектов науки и техники в городе Шеньян (№ F11-264-1-19). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов

Введение
<р> метаболические свойства раковых клеток значительно отличаются от тех, из нормальных клеток, как раковые клетки преимущественно используют гликолиз вместо митохондриального окислительного фосфорилирования, даже в присутствии кислорода; Это явление известно как эффект Варбурга [1], [2], [3]. Удивительно высокий уровень занимают глюкозы и лактата в опухолях в присутствии кислорода привело Варбург предположить, что аберрантное метаболизм может быть причиной многих видов рака [2]. Тем не менее, преимущество метаболической трансформации дает раковым клеткам, остается неясным [4], [5]. В последнее время открытие связи между онкогенов и метаболических процессов привело к всплеску интереса к работе Варбурга. Существует все больше доказательств, свидетельствующих о том, что адаптация аэробного гликолиза раковых клеток может способствовать распространению рака [5]. метаболизм Рак был под обширные исследования в надежде найти новые эффективные методы лечения для рака.
<р> ЛДГ-A, является важным ферментом, который играет важную роль в конечной стадии эффекта Варбурга путем превращения пирувата в лактат , В различных типах злокачественных опухолей человека, экспрессия СДГ-А была повышающей регуляции [6], [7]. В пищеводного плоскоклеточный рак, ЛДГ-А была повышающей регуляции в тканях рака и способствует выживанию опухолевых клеток [8]. Кроме того, ЛДГ-А сообщалось, для усиления роста и миграции клеток рака желудка [9]. Тем не менее, статус экспрессии и функции LDH-А в рак желудка (GC) до сих пор остаются неизвестными.
<Р> В этом исследовании мы исследовали экспрессию LDH-А в большой группе образцов ГХ и коррелировали ее выражение с клиническими патологических параметров и общей выживаемости (OS). Наши результаты показывают, что экспрессия СДГ-А была повышающей регуляции в клинических образцов желудочного рака, и экспрессия белка коррелировал с возрастом и гистологической классификации. Кроме того, мы обнаружили, что высокая ЛДГ-А выражение было связано с плохим прогнозом у больных ГЦ. Взятые вместе, наше исследование показало онкогенного функцию LDH-А при раке желудка и предложил ЛДГ-A в качестве нового потенциального прогностического фактора и потенциальной терапевтической мишени.

Материалы и методы

Пациенты

настоящее исследование было включено 264 пациентов с ГК, следовавших хирургическое лечение с января 2006 года по май 2007 года в первый филиал больницы Китайского медицинского университета. Группа состояла из 194 мужчин и 70 женщин со средним возрастом 59 (диапазон 29-81) лет. Ни один из пациентов не подверглись химиотерапии или лучевой терапии перед хирургическим вмешательством. Последующая информация была собрана из всех пациентов.

Этика Заявление
<р> Этическое одобрение данного исследования было получено от Комитета по этике исследования Китайского медицинского университета, Китай. Все пациенты, обеспечивающие опухолевой ткани, а также нормальные образцы тканей желудка письменное согласие до хирургического удаления рака желудка, чтобы обеспечить эти исследования должны быть предприняты. Все процедуры исследования животных проводились в соответствии с национальными институтами здравоохранения Руководство по уходу и использованию лабораторных животных и были проведены в соответствии с институциональными этических принципов. Эти лабораторные животные были приобретены у Шанхайский филиал Центра Института лабораторных животных наук, Китайской академии медицинских наук (также известный как Шанхай CAS, номер сертификата: SCXK [Ху] 2003-0003). Все экспериментальные процедуры были проведены в соответствии с руководящими принципами для институциональных уходу и использованию лабораторных животных, а также протоколы были одобрены по уходу и использованию комитета Institutional животных в Китае медицинского университета, Шэньян, Китая. Все усилия были предприняты, чтобы минимизировать страдания.

Тканевые Образцы и Патология
<р> Все пациента, полученных парафином образцов рака желудка (n = 264) и их совпадающая образцы NNM (2 см от рака п = 209) были собраны из хирургической резекции и архивируются в соответствии с протоколами, утвержденными институциональным наблюдательным советами первый филиал больницы Китайского медицинского университета в. Свежее карциномы желудка и прилегающих NNM собирали и замораживали при -80 ° С до экстракции белка гомогенизацией в RIPA буфера для лизиса. Гистологические диагноз и другие микроскопические характеристики были подтверждены патологов и ТНМ постановка для каждого рака желудка оценивали в соответствии с системой Международным союзом по борьбе с раком (МСБР) для степени распространения опухоли. Была выражена Гистологическое архитектура рака желудка в классификации Лорен и классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ). Кроме того, размер опухоли, глубина инвазии, и лимфатической были определены.

Клеточные линии и культуры

Линии клеток желудка человека MKN28 (хорошо дифференцированная), AGS, SGC-7901 (умеренно дифференцированные ), MGC803 (слабо дифференцированы) и нормальной человеческой желудка клеточная линия ГЭС-1 купил из клеточного банка китайской академии наук. Пять клеточные линии поддерживали в среде RPMI 1640 (город Hyclone, Логан, США) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (FBS). Все клеточные линии были в 5% CO <суб> 2 увлажненной атмосфере при 37 ° С.

Тканевая микрочипов (TMA) и иммуногистохимический
<р> были идентифицированы репрезентативных участков твердых опухолей и прилегающей NNM в HE-окрашенных участков отобранных случаях и основные ткани 1,5 мм диаметра на блок донора штамповали и переносили в блок-получателя с максимумом 200 (10 × 20) ядер с использованием 1,5-мм перфоратор диаметр инструмента. После того, как вновь расплавляют, участки (4 мкм толщиной) были последовательно вырезают из каждой ткани микрочипов блока, HE окрашивание проводили на TMA для подтверждения опухоли и слизистой ткани. Иммуногистохимическое анализ проводили на участках TMA, Скороварка опосредованного поиска антигена проводили в цитратном буфере (рН 6,0) в течение 10 мин. Срезы инкубировали с 1:300 разбавлении LDH-A (мышечная субъединица) Кролик моноклональное антитело (epitomics) в течение ночи при температуре 4 ° С, а затем инкубировали с козьим антителом против мышиного или анти-кроличий Энвижн Система Плюс-HRP (Dako Cytomation) для 30 мин при комнатной температуре. После промывки три раза в PBS в течение 10 минут каждый, срезы инкубировали с ДАБ в течение 1 мин, контрастному окрашиванию гематоксилином Майера, обезвожены, очищены и установлены. Пропуски первичного антитела использовали в качестве отрицательного контроля.

Вестерн-блот-анализ
<р> Протеины концентрации образцов, извлеченных из образцов тканей и клеточных линий с использованием радиоиммунного преципитации буфера для анализа лизиса определяли с использованием реагента Брэдфорда ( Sigma) в соответствии с инструкциями изготовителя. Денатурированного белка разделяли на додецилсульфата натрия (SDS) -polyacrylamide гель (10% акриламид) и переносили в поливинилиденфторида мембраны (Millipore, Bedford, MA), который был затем блокированы в 5% обезжиренном молоке в Трис-буферном солевом растворе (рН 7,5). Для иммуноблоттинга, мембрану инкубировали в течение ночи с ЛДГ-А (мышца субъединица) Кролика моноклонального антитела (1:1500) (epitomics) при температуре 4 ° С. Затем смесь промывали с помощью TBST и инкубировали с вторичными антителами в течение 15 минут. Сигналы были обнаружены усиленной хемилюминесценции (Pierce, Rockford, IL).

Последующие действия после операции
<р> 264 пациентов, перенесших gastroctomy были подвергнуты закрыть клиническое наблюдение, в том числе грудной клетки /брюшной полости /малого таза компьютерная томография (КТ) томография, уровень СЕА, и анализ крови на 2-х до 3-х месяцев с интервалом в год и гастроскопии. Последующая деятельность по итогам было согласовано с национальными Всесторонний Онкологический сети Руководства (NCCN) Практика в развитии рака желудка. Общая выживаемость (OS) ставка была определена как интервал от начальной операции до смерти. Конечная дата последующего исследования для проведения анализа был 29 июня 2012 года

Оценка иммуногистохимическим окрашиванием
<р> иммунореактивность оценивали независимо друг от друга двух исследователей, которые были ослеплены к исходу пациента. Оценка была основана на интенсивности окрашивания. Окрашивание интенсивности для СДГ-A оценивали как 0 (отрицательный); 1 (слабый); 2 (умеренная); и 3 (сильный). Образцы были разделены на две группы в соответствии с их оценками: 0 и 1 являются низкая экспрессия группой; 2 и 3 являются высокая экспрессия группа. В случае несоответствия в выигрыше, слайды были повторно рассмотрены как патологоанатомами под микроскопом.

Генерация малых интерферирующих (SI) РНК Нокдаун Стабильные клеточные линии
<р> На основе ЛДГ -A последовательность, shRNA была разработана с использованием миРНК Target Finder (Амбион): нуклеотидная последовательность вставленного ShLDH-A был 5'-ATCCAGTGGATATCTTGACCTACG TGGCT-3 '. Клеточная линия генерируется инфицировать клетки с зашифрованным плазмиду использовали в качестве контроля. 10 мкг shRNA и 25 мкл липофектамина 2000 (Invitrogen Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США) смешивают вместе с 1350 мкл среды RPMI-1640 (без FBS), а затем смесь трансфецировали в МГЦ-803 клеток рака желудка. Смесь добавляли в 25-ти см 2 культуральный флакон, который был предварительно высевали с 1 × 10 6 МГЦ-803 клеток рака желудка. Питательную среду заменяли полной средой RPMI-1640, 6 ч после инокуляции и на 28 ч после трансфекции, стабильные клеточные клоны были отобраны в течение 2-х недель с неомицином и анализировали с помощью иммуноблоттинга.

Экстракция РНК и в режиме реального времени Количественные оТ-ПЦР-анализ
<р> Общую РНК выделяли из клеток с использованием реагента TRIzol в соответствии с инструкциями производителя (Invitrogen), и 1 мкг РНК подвергали обработке непосредственно в кДНК с использованием обратной транскрипции набора (Promega, Madison, Висконсин), в соответствии с инструкциями изготовителя. Реакции амплификации проводили в объеме 20 мкл, 0,2 мкл SYBR Green (Bio-Rad, Hercules, Калифорния). Эти реакции проводили в трех повторностях с использованием BioRad прибора Icycler (Bio-Rad). -актина использовали в качестве внутреннего контроля. Праймеры, используемые были следующие: ЛДГ-А, 5'-CTCCTGTGCAAAATGGCAAC-3 '(вперед) и 5'-CCTAGAGCTCACTAGTCACAG-5' (обратный); и р-актина, 5'-GATCATTGCTCCTCCTGAGC-3 '(вперед) и 5'-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3' (обратный). Специфичность в реальном времени количественной ПЦР была подтверждена путем плавления анализа кривых и электрофореза в агарозном геле.

МТТ и колонии Формирование анализа
<р> Для анализа роста клеток, равное число клеток высевали в 48 -Ну пластины. Общее количество клеток измеряли каждый день с помощью МТТ-анализе в соответствии с протоколом производителя (Roche Applied Science). Для анализа образования колоний, равное количество контрольных клеток и клеток глушителей экспрессии LDH-A были посеяны в 60 мм чашки для культивирования в трех экземплярах. Клетки культивировали в течение 7 дней, клеточный рост был остановлен после того, как 7 дней в культуре путем удаления среды и добавления 0,5% раствора фиолетового кристаллического в 20% -ном метаноле. После окрашивания в течение 5 мин, неподвижные клетки промывали фосфатно-солевым буферным раствором (PBS), фотографировали, и растворяли с 1% SDS. Количество колоний в каждой группе подсчитывали.

Туморогенность Анализ
<р> MGC-803 GC клетки ксенотрансплантаты были получены на 6-недельных самок бестимусных голых мышей (Vital River Laboratories, Пекин, Китай) с помощью инъекции 5 × 10 6 клеток в 0,2 мл PBS в бок каждой мыши (6 мышей /группу). Образование опухоли оценивали каждую неделю. Объем опухоли рассчитывали по формуле:. V (мм 3) = A × B 2/2 (где самый большой поверхностный диаметр и б является наименьшим поверхностным диаметр)

Измерение концентрации лактата и АТФ
<р> После 48 часов инкубации, лактата и уровни АТФ в культуральной среде измеряли с использованием коммерчески доступных наборов анализа (приобретены у BioVision [Mountain View, Калифорния] и Roche Applied Science , соответственно). Результаты были скорректированы для окончательного подсчета клеток числа.

Статистический анализ
<р> Все статистические анализы проводили с помощью программы SPSS 17.0 (SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс). Общие показатели выживаемости определяли, используя оценочную функцию Каплана-Мейера, событие определяется как смерть для связанных с раком причин. Тест журнала ранга был использован для определения различий между кривыми выживаемости. В одномерном анализе, двухвостый χ 2 теста или два хвостами испытаний т были использованы для статистических сравнений. И модель пропорционального риска Кокса была использована в однофакторного анализа и многовариантного анализа, чтобы выявить значимые факторы, коррелирующие с прогнозом. Для всех анализов, только величины р и Лт;. 0,05 считались значимыми

Результаты

ЛДГ-A Выражение в ткани рака желудка человека
<р> Мы сортовой окрашенные срезы ГК ТМА и ядра ткани NNM для их цитоплазмы иммуногистохимического интенсивности окрашивания против СДГ-белка. Считываемые образцы включали 264 карциномы желудка и 209 NNM согласованный. Типичная диффузное окрашивание цитоплазмы белка можно найти во многих карциномы желудка и нормальной желудочной ткани, как показано на рисунке 1, раковой ткани показали положительную окрашивание цитоплазмы на 201 случаев (76,14%), в то время как среди 209 случаев NNM, 131 случаев ( 62,68%) имели LDH-положительное выражение (таблица 1). Для исследования количества экспрессии LDH-A в образцах GC, экспрессия СДГ-A исследовали с помощью Вестерн-блот-анализа в семи случайно выбранных опухолей и парными нормальных тканей. Повышающей регуляции СДГ-А наблюдалась в образцах GC по сравнению с парными нормальными тканями (рис. 2а). Эти исследования показали, что ЛДГ-A значительно усиливается в раковых образцах по сравнению с соседними нераковых тканей (Таблица 1. р = 0,002).

Анализ экспрессии LDH-А в желудочном клеточных линиях
<р> Вестерн-блоттинга анализ проводили в желудочном клеточных линиях. Вестерн-блот показал, что экспрессия СДГ-A был значительно сильным в слабо дифференцированной MGC803 и умеренно дифференцированной AGS; слабая в умеренно дифференцированной SGC-7901 и хорошо дифференцированы MKN28; и отсутствует в нормальной желудочной линии клеток человека GES-1 (рис. 2 б).

Переменные в клинико-патологическими 264 Случаи Желудочный карцинома
<р> Как показано в таблице 2, Мы обнаружили, что повышенная экспрессия ЛДГ-а была значимо связана с возрастом пациентов (р = 0,004) и гистологического типа (р = 0,02), метастазов в лимфатических узлах (Р = 0,043), но не с пола (р = 0,072), размер опухоли (р = 0,086) , глубина инвазии (P = 0,328), лимфатической инвазии (P = 0,738), Lauren оценка (P = 0,152) или стадии TNM (P = 0,417).

Выживание Анализ
<р> 5 -летний скорость ОС из 264 пациентов с первичным раком желудка составила 46% (122/264), 142 смертельных случаев, наблюдаемых в течение периода наблюдения. Средняя продолжительность наблюдения составила 50 месяцев (диапазон 9-78 месяцев). Анализ выживаемости кривой выживания и лог-ранговый критерий Каплана-Майера показал, что у пациентов с высоким уровнем экспрессии LDH-А в ткани опухоли было значительно хуже общей выживаемости, чем у пациентов с низким уровнем A ЛДГ экспрессии опухоли (P < 0,001;. Рисунок 3) , С целью изучения потенциальной взаимосвязи между выражением LDH-А и прогноза в различных типах GC, мы оценивали выживаемость пациентов в разных подгруппах: Когда статистический анализ был проведен расслаивается по классам Lauren и гистологической классификации, значение появилось в диффузного типа ГХ и недифференцированные типа ГХ (Р &л; 0,001, соответственно), но не в кишечном (Р = 0,179) или дифференцированные (р = 0,104) из них. Многофакторный анализ проводили с использованием модели пропорциональных рисков Кокса для всех значимых переменных в одномерном анализе. В таблице 3 приведены значения: скорректированный для других ковариатов, результаты многовариантного анализа показали, что ЛДГ-А выражение (Р &л; 0,001), лимфатической инвазии (Р = 0,046) и степень Lauren (Р = 0,001), ТНМ стадия (Р = 0,006), но не возраст (Р = 0,053), размер опухоли (Р = 0,111), глубина инвазии (Р = 0,598), метастазов в лимфатических узлах (Р = 0,089), или гистологического типа (Р = 0,674), были независимыми прогностическим факторы риска для ОС (таблица 3).

Нокдаун СДГ-A по миРНК снижает экспрессию СДГ-A в MGC-803
<р> по мнению западных результатов пятно и в режиме реального времени RT -PCR, экспрессия СДГ-A эффективно уменьшается в LDH-A-миРНК экспрессирующих клеток МГЦ-803. Как показано на рисунке 4, экспрессия СДГ-A белка анализированы с помощью Вестерн-блот трудно обнаружить, а уровень мРНК PKM2 был уменьшен на 74%, в LDH-A-миРНК клеток, экспрессирующих МГЦ-803. ЛДГ-А выражение оставалось неизменным в обеих клеточных линиях, GC и клеточных линий, экспрессирующих контроль миРНК.

Нокдаун LDH-A ингибирует рост GC Клеточные линии MGC-803
<р> Для оценки опухоли рост клеток, мы использовали МТТ и колонии анализов пласта. В МТТ-анализе, глушителей экспрессии LDH-A ингибирует пролиферацию клеток МГЦ-803 (фиг. 5а, б). Рост клеток МГЦ-803, экспрессирующих LDH-A Серна уменьшилась на 64%, после 168 часов инкубации сравнению с контрольными клетками (P &ЛТ; 0,05). Последовательно, глушителей экспрессию СДГ-A ослабляется рост креплении независимый клеток MGC-803 (рис. 5с, д). ЛДГ-нокдаун в этих клетках предотвратили образование колоний, что указывает на креплении-зависимый рост был восстановлен. Эти результаты также предложил онкогенного роль СДГ-А при раке GC.

Нокдаун LDHA тормозил туморогенности в моделях ксенотрансплантата мыши

В этом исследовании мы рассмотрели онкогенного потенциала СДГ-A в естественных условиях. Туморогенность в естественных условиях клеток siLDH-A МГЦ-803 и контрольных клеток оценивали с помощью подкожной инъекции клеток у бестимусных голых мышей. В соответствии с исследованиями в пробирке, приглушения экспрессию LDH-А резко ослабило туморогенности клеток ЛДГ-A размера опухоли. Для всех подобранных ксенотрансплантатов опухоли siLDH-А были значительно меньше, чем у контрольных (рис. 5е, е).

Нокдаун СДГ-A с помощью миРНК уменьшает лактата и АТФ в Человеческий GC клеточных линиях MGC- 803
<р> Поскольку ЛДГ-A является ключевым ферментом для превращения пирувата в лактат, изменение его экспрессии в клетках GC должно влиять на лактат производство и энергетический обмен. Чтобы проверить эту гипотезу, мы сравнили лактата и производство АТФ между ЛДГ-A миРНК нокдаун клеток и контрольных клеток после 48-часовой инкубации. Когда ЛДГ-А был сбит миРНК, способность клетки производить лактата и АТФ резко снизилась на 61,5% и 63,3% через 48 часов, соответственно (рис. 6а, б).

Обсуждение

в 1920-е годы, Варбург впервые продемонстрировал, что раковые клетки занимают более высокие ставки глюкозы, чем нормальные клетки и вырабатывают энергию почти аэробного гликолиза для их потребность в энергии для адаптации экологических ограничений, таких как прерывистой гипоксии [10], [11]. Тем не менее, это изменение обмена веществ не просто адаптация к гипоксической среде, но является активным сотовая стратегия, которая дает значительное преимущество для пролиферации и злокачественной опухоли. Теперь Vegran и др
. [12] сообщили, что лактат может непосредственно модулировать фенотип эндотелиальных клеток, потенциально представляет собой важный механизм, с помощью которого опухоли контролировать свое собственное кровоснабжение через сосудистую формообразования. Поскольку активные формы кислорода (ROS) являются естественными побочными продуктами митохондриального дыхания, было высказано предположение, что превращение глюкозы в лактат может защитить раковые клетки от окислительного стресса [13]. В последнее время данные свидетельствуют о том, что восстанавливая нормальную окислительное фосфорилирование в раковых клетках, могут не только ингибировать рост и пролиферацию клеток, а также ухудшают способность метастатических злокачественных клеток [14]. Таким образом, значение конститутивно вверх регулируемой аэробного гликолиза недавно была признана в опухолевой прогрессии, но молекулярные механизмы, приводящие к этому фенотипу и их вклад в развитие рака недостаточно хорошо изучены.
<Р> ЛДГ-А, фермент несет ответственность за превращение пирувата в лактат, играет важную роль в процессе гликолиза. Несколько исследовательских сообщили, что экспрессия СДГ-A может быть вызван несколькими онкогенов [15]. Эти отчеты поддерживают идею, что ЛДГ-индукционные имеет решающее значение для онкогенной активности этих онкогенов в раковых клетках.
<Р> Онкогенная активность СДГ-А было сообщено в пищеводу рака, рака поджелудочной железы и клеток рака желудка [ ,,,0],8], [9], [16]. Юнцзе Чжан и др
. Сообщается, что ЛДГ-Снижение может подавлять туморогенности кишечного типа рака желудка (ММСК) клеток downregulating Oct4 [17]. И Чжиюй Wang и др
. Сообщается, что ЛДГ-заглушающие подавляет онкогенность рака молочной железы с помощью индукции окислительного стресса опосредованного апоптоза митохондриальной затрагивающего пути [18]. Здесь мы исследовали фиксированных формалином, залитых парафином опухолевой ткани из 264 пациентов, для экспрессии LDH-А и сообщил характеристику LDH-A экспрессии в человеческой GC, и представить его корреляцию с клинико-патологическими параметрами и прогноз пациентов. Во-первых, мы обнаружили, что экспрессия СДГ-A был повышен в образцах GC по сравнению с совпадающими нормальными тканями. Этот результат может быть согласуется с предыдущим исследованием, что в различных типах злокачественных опухолей человека, экспрессия СДГ-А была повышающей регуляции [4], [5]. В опухолевой ткани, наше исследование показало, что ЛДГ-А выражение сильно коррелирует с GC клинико-патологический характеристики: возраст, метастазов в лимфатических узлах и гистологической классификации. Таким образом, мы полагаем, что до регулируемого ЛДГ-Выражение может способствовать распространению и развитию ГКС. Во-вторых, мы дополнительно анализировали прогностическую роль СДГ-A на общую выживаемость пациентов с GC. Kaplan-Meier анализ показал статистически значимую связь между LDH-A выражения и общей выживаемости пациентов, а также пациентов с более сильными СДГ-окрашиванием имели более низкий уровень выживаемости. Когда статистический анализ был проведен стратифицированная по классам Lauren и гистологической классификации, значение появилось в диффузного типа GC и недифференцированного типа GC, но не в кишечных или дифференцированных из них. Конкретные миРНК против СДГ-A проводили в MGC803 клеток и рост запаздывающим клеток в пробирке и в мышиных моделях. ЛДГ-нокдаун также снижается лактат и производство АТФ в клетках GC. Таким образом, наши результаты свидетельствуют о том, что экспрессия СДГ-A был независимым прогностическим фактором ОС, и указал, что ЛДГ-A может иметь онкогенного роль в развитии опухоли, особенно при диффузной типа ГХ или пациентов типа GC недифференцированные. В соответствии с нашим исследования, было сообщено, что нокдаун экспрессии LDH-А в гепатоцеллюлярной клетках карциномы человека может индуцировать апоптоз [8], и понижающей регуляции СДГ-A может увеличить производство ROS и цитозольного Ca2 + сигнализации, которая снижала внутренней мембраны митохондрий потенциал и привело к высвобождению цитохрома с в гепатоцеллюлярной карциномы клеток.
<р> Взятые вместе, наше исследование показывает, что до регулируемой экспрессии LDH-а обеспечивает желудочные раковые клетки с преимуществами роста. В то же время, проведенное исследование показывает, ЛДГ-A в качестве потенциальной терапевтической мишени.

• PLoS ONE: Увеличение микроРНК-630 Expression в рак желудка связано с плохой общей Survival
• PLoS ONE: Влияние индивидуального и социально-экономический статус соседства на рак желудка Survival