Ploche ONE: LAPTM4B-35, Rak-súvisiace Gene je spojená so zlou prognózou v TNM štádiu I-III žalúdočné pacientov s nádorovým ochorením

abstraktné

Pozadie

lysosom spojené s transmembránový proteín 4β-35 (LAPTM4B-35), člen cicavčieho 4-tetratransmembrane klenout proteínovej superrodiny, bola hlásená byť nadmerne vystavený v niekoľko rakoviny. Avšak expresia LAPTM4B-35 a jej úloha v progresii rakoviny žalúdka (GC) zostáva neznámy. Cieľom tejto štúdie bolo zistiť LAPTM4B-35 expresie v GC, jeho potenciálny význam pre patologickým parametre a role LAPTM4B-35 počas žalúdočné rakoviny.

metódami

V tejto štúdii, parafín boli analyzované vzorky -embedded s GC (n = 240, vrátane 180 párových vzoriek) a 24 spárované čerstvé zmrazené tkaniva. QRT-PCR a imunohistochémia (IHC) sa použili na analýzu expresie LAPTM4B-35 v GC. Účinky LAPTM4B-35 na proliferáciu GC bunka, migrácie a invázie boli stanovené expresiou a porazený testy.

Výsledky

IHC ukázali, že LAPTM4B-35 bol vyjadrený v 68,3% (123/180 ) z GC tkanív, zatiaľ čo v 16,1% (29/180) zo svojich párových priľahlých noncancerous žalúdočných tkanivách ( P
= 0,000). LAPTM4B-35
hladín mRNA v tkanivách GC boli tiež významne zvýšené v porovnaní so svojimi párovými priľahlými nenádorové tkaniva ( P
= 0,017). Nadmerná expresia LAPTM4B-35 boli významne spojené so stupňom rozlíšenia, hĺbkou invázie, lymphovascular invázie a lymfatických uzlín ( P Hotel &0,05). Kaplan-Meierove krivky prežitia sa zistilo, že pacienti s LAPTM4B-35 expresie mal významný pokles celkového prežívania (OS) vo fázach pacienti GC I-III ( P
= 0,006). Multivariačný analýza preukázala vysokú expresiou LAPTM4B-35 bol nezávislý prognostický faktor pre OS v stupni I-III GC pacientov ( P
= 0,025).

Záver

Tieto nálezy ukazujú, že nadmerná expresia LAPTM4B-35 môže byť vo vzťahu k progresii GC a zlou prognózou, a tak môže slúžiť ako nový marker predikcie prognózy u pacientov GC

Citácia :. Cheng X, Zheng z, z Bu, Wu X , Zhang L, X Xing et al. (2015) LAPTM4B-35, Rak-súvisiace Gene je spojená so zlou prognózou v TNM štádií I-III rakovina žalúdka pacienta. PLoS ONE 10 (4): e0121559. doi: 10,1371 /journal.pone.0121559

Akademický Editor: Ken-ichi Mukaisho, Shiga University of Medical Science, Japonsko

prijatá: 10.04.2014; Prijaté: 12.02.2015; Uverejnené: 07.04.2015

Copyright: © 2015 Cheng et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Všetky relevantné údaje spadajú do papiera a jeho podporné informácie súbory

Financovanie: Táto práca bola podporená Národnej prírodnej Science Foundation Číny (č 30471677 a 81141024) a Národný kľúčové technológie R &D Programme (Peking Mestského Science and Technology. projekt Z121100007512010). Platcovia prispel k dizajnu štúdie, efektívnosť, činidiel, materiály, analýzu dát a rozhodnutie publikovať

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

karcinóm žalúdka je treťou najčastejšou rakovinou v Číne a hlavnou príčinou úmrtí na nádorové ochorenia v Číne [1]. Väčšina pacientov GC sú už v pokročilom štádiu v čase diagnózy (fáza III a IV), čím prognózu byť skľučujúca, aj napriek zlepšeniu chirurgické a adjuvantná liečba prístupu [2-5]. Bez ohľadu na to chemoterapie a zamýšľaného liečebného zákroku, takmer 60% pacientov s GC rozvíjať opakovania a nakoniec zomrie na liečbu metastáz [6]. GC postup je multifaktoriálne a niekoľkostupňový proces, v ktorom zdedil a environmentálne faktory zohrávajú kľúčovú úlohu [7]. Skoršie pozorovania ukazujú, že klasické biomarkery a stagingu systémy, založené na klinických a patologických nálezov, môže mať svoje obmedzenia klinických aplikácií a núti k vývoju nových molekulárnych biomarkerov, ktoré môžu predpovedať výsledok a liečbu pacienta [8, 9].

lysosom-proteín spojený transmembránový 4 beta (LAPTM4B) bol pôvodne klonovaný v hepatocelulárny karcinóm (HCC) podľa Shao et al, ktorý sa nachádza na chromozóme 8q22, oblasť často amplifikovaná v karcinómu prsníka a HCC [10, 11]. To kóduje dva proteíny s rôznou molekulovou hmotnosťou 24 kDa a 35 kDa proteíny (LAPTM4B-24 a -35) so štyrmi domnelé transmembránovej regiónoch [12]. Lokalizácia LAPTM4B-35 bolo zistené, a to nielen v lysozomy, ale aj v plazmatickej membráne a vnútorné organel, ako je Golgiho aparátu a endosomů [13]. Bolo oznámené, že LAPTM4B-35 bol široko exprimovaný v rôznych typoch karcinómov. Predchádzajúce správy ukázali, že nadmerná expresia LAPTM4B-35 je spojená s nepriaznivými biologické správanie a zlou prognózou u mnohých typov rakoviny, ako je rakovina prsníka [14], HCC [15-17], žlčníka karcinóm [18, 19], kolorektálneho karcinómu [20] , epiteliálne karcinóm vaječníkov [21] a endometria karcinóm [22]. Tiež bolo opísané, že alelické variácie LAPTM4B bolo spojené s genetickou predispozíciou GC [23]. Okrem toho, že nadmerná expresia LAPTM4B-35 transfekcia cDNA LAPTM4B podporuje bunkovú proliferáciu, migráciu, inváziu v HCC xenografe u nahých myší a indukuje odolnosť proti mnohým liekom [24]. Vyradenie LAPTM4B podľa RNA interferencie naopak obrátil všetky tieto malígnych fenotypových vlastností v HCC [24, 25].

Avšak, LAPTM4B-35 expresie, jeho vzťah k patologickým charakteristikám a biologická role LAPTM4B-35 v GC zostávajú nejasné. V tejto štúdii sme sa zamerali na identifikáciu LAPMT4B-35 expresie v GC a jeho potenciálny vzťah s klinicko-funkcií, a jeho prognostický význam. Okrem toho sa v in vitro funkčné testy boli vykonávané na charakterizáciu biologické účinky LAPTMEB-35 v žalúdku skúšky na tvorbu nádorov.

Materiály a metódy

Ethics

Všetci pacienti podpísali informovaný súhlas pre získanie vzoriek tkaniva, a protokol štúdia bola schválená etickou komisiou Clinical Research Peking fakultnej nemocnice rakoviny.

vzoriek ľudskej žalúdočnej tkaniva

a celkom 240 (167 mužov a 73 žien, vo veku 22-87 rokov a priemerný vek bol 60 rokov) formalínom pevné parafínové vložené GC tkanív, vrátane 180 párované rakovinové a uzavreté priľahlé nerakovinové tkanivá žalúdočnej sliznice, boli získané od pacientov podstupujúcich gastrektómii GC na Peking University Hospital Cancer od januára 2003 do decembra 2011. klinické a histologické informácie pre každý prípad bol tiež vyberá podľa schválených inštitucionálnymi smernicami. Z roku 1997 kritériá UICC-TNM boli použité pre klasifikáciu karcinómov žalúdka. Medián follow-up trvania od doby stanovenia diagnózy bol 26,2 mesiacov (rozmedzie 2.4-119.0 mesiacov). Celkovo bolo 112 (46,7%) pacientov zomrelo v follow-up obdobia.

Imunohistochémia

parafínové rezy (4 um) boli zbavené vosku a rehydratuje v xylémom a etanolu. Imunohistochémia bola vykonaná ako bolo opísané skôr [16] za použitia anti-LAPTM4B-35 protilátky (1: 200) (nadaný Pre RL Zhou.). Ako negatívne kontroly boli rezy spracované ako rovnakého protokolu, okrem toho, že boli inkubované cez noc pri 4 ° C v blokujúcom roztoku bez primárnej protilátky.

Expresia LAPTM4B-35 bola hodnotená dvoma skúsenými patológov (Y Sun a B Dong), ktorý pracoval samostatne a boli oslepení na klinické výsledky u pacientov. Rozdiely medzi pozorovateľmi boli nájdené u menej ako 10% vyšetrených šmykľavkami a sa dosiahol konsenzus po ďalšom preskúmaní. Farbenie posúdenie bol práve použitý semikvantitatívny metódy klasifikovať LAPTM4B-35 vyjadrenia ako negatívne a pozitívne farbených imunoreaktívnych buniek. Pomer pozitivity bola hodnotená ako " '0" (menej ako 10% pozitívnych nádorových buniek),' '1 "(10 až 50% pozitívnych nádorových buniek), a' '2" (viac ako 50% pozitívnych nádorových buniek). Intenzita sfarbenia bola hodnotená ako " '0" (Žiadne farbenie alebo slabo zafarbených),' '1 "(stredne postriekaní), alebo' '2" (silný farbenie). Súčet skóre intenzity farbenia a percentuálne skóre bol použitý na definovanie hladiny LAPMT4B výraz: 0-2, negatívne vyjadrenia a 3-4, pozitívne vyjadrenie (14). Pozitívne expresia iba hodnotí sekciách s najmenej 10% pozitívnej oblasti nádorov.

Bunková kultúra, LAPTM4B-35 expresné plazmid a hCas9 /gRNA transfekcia

žalúdočné rakovina bunkové línie (SGC- 7901, BGC-823, MGC-803, MKN-28 a AGS) boli kultivované v DMEM (Wisent Inc., St-Bruno, QC, Kanada) doplnenom 10% fetálnym hovädzím sérom (FBS) (HyClone, Logan, UT, USA) a 100 u /ml penicilínu a 100 ug /ml streptomycínu pri 37 ° C v atmosfére 5% CO _{2. pcDNA3
. 0-AF
obsahujúci celý ORF LAPTM4B produkujúce LAPTM4B-35 proteín bol nadaný prof RL Zhou [11]. Transfekcia bola vykonaná s Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) podľa protokolu výrobcu. Pozitívne klony boli získané výberom antibiotík s G418 (Gibco, Grand Island, NY) v koncentrácii 800 ng /ml.}

hCas9 a gRNA vektor sa dostal z Číny zebrafish Resource Center (CZRC). Plná dĺžka Cas9 cDNA bol klonovaný do vektora pXT7 a linearizovaný a limitovaný mRNA sa syntetizuje za použitia mMESSAGE mMACHINE mRNA syntéza transkripčných výstroje (Life Technologies, Carlsbad, Kalifornia, USA). Sekvencie primérov boli použité Grňa: dopredný primer 5'-TACGACTCACTATAGGGGGATGGTGCCGGTGCGGACAGTTT TAGAGCTAGAAATAGC-3 ', a reverzný primer: 5'-protokol AGCACCGACTCGGTGCCACT-3'.The nasledovalo skôr publikované práce [26]. hCas9 mRNA (3 ng /ul) a gRNA (0,2 ng /ul) boli kotransfekovány do SGC-7901 bunky, ktorá bola vykonaná s Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA).

Izolácia RNA, kvantitatívne real-time reverznej transkripcie PCR (QRT-PCR)

Celková RNA bola extrahovaná za použitia TRIzolu činidla (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) a reverznej transkripcii do cDNA za použitie M-MLV reverznej transkriptázy (Promega, Madison, WI, USA), v súlade s pokyny výrobcu. Real-time PCR bola vykonaná s použitím Fast real-time systém ABI 7500 PCR (Life Technologies, Carlsbad, Kalifornia, USA). β-aktínu bol použitý ako vnútorná kontrola. Tieto sekvencie primérov sú uvedené ďalej: LAPMT4B-35: dopredný primer: 5'-GGAAGCAGGACAGCCAACTT-3 ', reverzné primer: 5'-TTATTCTCGATCTCACAACCAAAC-3'; β-aktínu: dopredný primer: 5'-CCTGTGGCATCCACGAAACT-3 'reverznej primer: 5'-GAAGCATTTGCGGTGGACGAT-3'

testu proliferácie buniek

Bunková proliferácia bola meraná pomocou mobilného počítanie Kit-8. (CCK-8) (Dojindo, Japan) podľa protokolu pri výrobe je. Objem 100 ul bunkovej suspenzie (3000 buniek na jamku) bolo inkubovať v 96-jamkové doštičky (Costar, Corning, NY) po dobu 24, 48, 72, 96 hodín. 10 ul roztoku CCK-8 sa pridá do každej jamky a inkubovať počas 3 hodín pri teplote 37 ° C. Hodnoty absorbancie každej jamky sa potom stanoví pri 450 nm s referenčnou vlnovou dĺžkou 630 nm v Microplate Reader (Bio-Rad, USA). Experiment bol vykonaný v triplikátech a bol dvakrát opakovaný.

hojenie rán test

Migrácia buniek bola meraná pomocou testu hojenie rán u systému IncuCyte HD (IncuCyte ZOOM, Essen BioScience, USA). Bunky boli nasadené na 96-jamkové doštičky v hustote 6 x 10 ^{4 buniek na jamku. Rana bola vykonaná pomocou konfluentní jednovrstvových buniek s pin bloku a bunky sa premyjú 1 x PBS, kultivované v DMEM médiu s 10% fetálnym hovädzím sérom. Fotografie buniek boli zobrazené s použitím HD systému IncuCyte na 4-hodinových intervaloch od 2 oddelených oblastiach na jamku s použitím 10x ciele. Hodnoty od 2 oblastí každej jamky boli spojené a v priemere vo všetkých 3 opakovania}

Transwell invázie testy

Transwell (8μm veľkosť pórov, Cell Biolabs, USA). Test bol použitý na analýzu invázie buniek v súlade s pokynmi výrobcu. 8 x 10 ^{4 bunky boli umiestnené v horných komorách v médiu bez séra, a spodnej komory boli naplnené DMEM a 10% FBS. Po inkubácii po dobu 72 hodín pri 37 ° C, neinvazívna bunky na hornom povrchu membrány boli odstránené bavlneným tampónom. Membrány boli fixované metanolom po dobu 10 minút a farbené 0,5% kryštálovou violeťou po dobu 10 minút. Bunky na spodnej strane filtra boli z piatich náhodne vybraných mikroskopických pohľady boli počítané.}

Western blot analýza

Úroveň expresie proteínu z bunkovej línie GC boli merané pomocou Western blot analýzy. Bunky boli lyžovanie v RIPA vopred vychladené lyzačného pufra (Pierce Biotechnology, Rockford, IL) s obsahom kokteilu inhibítora proteázy (Roche, Bazilej, Švajčiarsko) počas 30 min po odstredení pri 15,000g po dobu 20 minút, bol získaný supernatant. 50 ug proteínových extraktov boli separované elektroforézou na 10% SDS polyakrylamidovom gélu a prenesené na 0,45 um polyvinylidendifluoridovou (PVDF) membránu (Whatman, Nemecko). Membrána bola blokovaná po dobu 1 hodiny pri teplote miestnosti blokujúcim pufrom (pH 7,6) obsahujúci 5% netučného sušeného mlieka, a potom inkubované s anti-LAPTM4B-35 protilátkou (1: 800; nadaný prof RL Zhou) pri teplote 4 ° C cez noc , Myšou anti-ľudský β-aktínu protilátky (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) bola použitá ako vnútorná kontrola. Imunoreaktívnych pásy boli vizualizované pomocou detekcie chemiluminiscencie systém (Pierce Biotechnology, Rockford, IL).

Štatistická analýza

Chi-kvadrát test bol použitý na porovnanie rozdielu v LAPTM4B-35 expresie proteínu medzi GC tkaniva a priľahlé nerakovinové tkanivá. Nepodmienené modely logistickej regresnej analýzy boli použité na analýzu vzťahov medzi LAPTM4B-35 expresie a klinicko-parametrov upravených o postavení žien a mužov. Rozdiel výraz LAPMT4B-35 mRNA
medzi GC a priľahlých nenádorové tkaniva bola analyzovaná pomocou Wilcoxon uzavreté testu páru.

Celkové prežívanie (OS) krivka bola vypočítaná pomocou metódy Kaplan-Meier a analyzovaná pomocou log-rank testu. Relatívna rizika (RR) úmrtie spojené s LAPTM4B-35 expresie a ďalších prediktorov boli odhadnuté z jednorozmerné Cox modelu proporčne rizík za prvé. Viacrozmerná Coxovho modely tiež boli konštruované tak, aby odhad RR pre LAPMT4B-35 expresie. Všetky štatistické analýzy boli vykonávané s použitím SPSS softvérového štatistického balíka (verzia 20,0; SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Obojstranná hodnota P
menej ako 0,05 bola považovaná za štatisticky významné.

Výsledky

Expression analýza LAPTM4B-35 v bunkových líniách GC a GC

sme najprv skúmali expresiu LAPTM4B-35
RT-PCR v 5 GC bunkových líniách (MGC-803, BGC-823, MKN-28, SGC-7901 a AGS), a potom detekované jeho expresia proteínu pomocou Western blot. Výsledky ukázali, že LAPTM4B-35 bol exprimovaný vo všetkých bunkových líniách ako v mRNA a hladiny proteínu (obr 1A, horný a spodný panel), potom sme zvolili BGC-823 a SGC-7901 buniek pre naše nasledujúcich funkčných testov buniek.

LAPTM4B-35
expresie bola tiež detekovaná u 24 párov resekcii GC vzorkách QRT-PCR. Ako môžeme vidieť na obrázku 1B ako je LAPTM4B-35
výraz v GC tkanivách bola významne zvýšená v porovnaní s párovými priľahlými noncancerous tkanív ( P
= 0,017) (obr 1B).

LAPTM4B-35 expresie proteínu sa často pozorovaný u ľudských GC

Sledovali sme expresiu LAPTM4B-35 v GC a priľahlých nenádorové tkaniva pomocou imunohistochemické analýzy. LAPTM4B-35 ani vyjadriť v normálnej žalúdočnej sliznice (obr 2A), ale vyjadrené v črevnej metaplázia, dysplázia lézie (Data bola nie je znázornené) a nádorové bunky, a lokalizované hlavne v cytoplazme alebo na bunkovú membránu (obr 2B a 2D -2H). LAPTM4B-35 často pozorované v GC tkanivách v porovnaní s prispôsobeným priľahlé nenádorové sliznice (68,3% verzus 16,1%, P
= 0,000) (tabuľka 1).

Vzťah medzi LAPTM4B-35 expresie a klinicko-patologické rysy

sme analyzovali vzťah medzi LAPTM4B-35 expresie a klinicko-charakteristiky pacientov GC. Vzhľadom k tomu, pohlavie, objekty v našej štúdii má svoju odchýlku (167 vs. 73, tabuľka 2) sme vypočítali ich vzťah tým, logistické regresnej analýzy a nastaví na status žien a mužov. LAPTM4B-35 bola častejšie pozorovaná zle diferencovanej GCS v porovnaní s tými stredne-dobre diferencovaných (65,4% verzus 57,9%, P
= 0,017). Okrem toho LAPTM4B-35 expresie bola spojená s lymphovascular inváziou ( P
= 0,000), hĺbka invázie ( P
= 0,016) a lymfatických uzlín ( P
= 0,029) (tabuľka 2).

LAPTM4B-35 expresie a prognóza pacientov GC

Obrázok 3 ukazuje analýzu LAPTM4B-35 expresie a klinické výsledky. Kaplan-Meierove krivky prežitia ukázali, tam bola tendencia kratšie celkové prežívanie (OS) u pacientov s GC LAPTM4B-35 pozitívna expresia v porovnaní s tými negatívne ( P
= 0,064, log-rank = 3,425) (obr 3A). Po Pacienti boli rozdelení podľa TNM I-III alebo pacientov bez lypmphovascular invázie, pacienti s LAPTM4B-35 pozitívnym výrazom ukázal podstatne kratšia OS ako tých negatívnych ( P
= 0,006 a P
= 0,001 ., v uvedenom poradí) (obrázok 3B a 3D)

výsledky jednorozmerné a viacrozmerné modely Coxa for OS pacientov GC v TNM Stage i-III vystavoval, že hĺbka invázie (RR = 3,103, 95% interval spoľahlivosti: 1,427 -6,748; P
= 0,004), lymfatických uzlín (RR = 3,015, 95% CI: 1,552 až 5,858; P
= 0,001) a LAPTM4B-35 hladina expresie (RR = 2,249 , 95% CI: 1,242 až 4,072; P
= 0,007) významne ovplyvnila prežitie GC, respektíve (tabuľka 3); Okrem toho, LAPTM4B-35 pozitívne výraz bol nezávislý prognostický faktor (RR = 1,897, 95% CI: 1,041 až 3,457; P
= 0,025). Lymfatických uzlín (RR = 2,665, 95% CI: 1,362 až 5,213; P
= 0,001) aj samostatne predpovedal OS (tabuľka 3)

LAPTM4B-35 podporoval proliferáciu nádorových buniek

Za účelom skúmania účinku LAPMT4B-35 vo funkcii bunkovej biológie, boli zriadené dve bunkové línie. BGC-823 a SGC-7901 bunky prezentujúce relatívne nižšie alebo vyššie expresiu LAPTM4B-35 boli oddelene vybrané pre nadmernú expresiu a smiešne nízke testu (obr 1A). V prvom, bunkové línie BGC-823-AF expresiou LAPTM4B-35 stabilne bola založená, a MOCK bol použitý ako kontrola pre túto bunkovú líniu. Po druhé, LAPTM4B-35 bol stabilne zrazil towarding do SGC-7901 (hCas9 /Grňa), ktorú II zoskupený pravidelne rozmiestnenými krátke palindromic opakuje systému (CRISPR) typu, a výsledky boli identifikované westernovým prenosom (obr 4A).

testu proliferácie buniek bola meraná pomocou CCK-8 na počítanie buniek súpravy. Hodnota absorbancie buniek na 72 hodín BGC-823-AF po rozšírení bola podstatne vyššia ako tie materské bunky a predstieranou buniek, a výsledkom bola naproti tým, že porazí z LAPTM4B-35 v SGC-7901 buniek (Obr 4b).

LAPTM4B-35 zvýšenú migráciu nádorových buniek a invázie schopnosť

Po transfekciu s pcDNA3.0-AF a hCas9 /Grňa, sme vykonali hojenie rán testu analyzovať migračnú schopnosť LAPTM4B-35 nadmerná expresia /porazený buniek karcinómu žalúdka (obr. 5A) Výsledky ukázali, že LAPTM4B-35 podporovaný BGC-823 (BGC-823-AF) migráciu buniek v porovnaní s BGC-823 a MOCK ( P Hotel &0,05) a down-reguláciu expresie LAPTM4B-35 by mohol zvrátiť tento jav v SGC-7901 buniek ( P
menšie ako 0,05, obr 5B)

v súlade s tým je účinok LAPTM4B-35 na invazivitě nádorových buniek bola skúmaná pomocou testu transjamkových. (obrázok 6A). Zistili sme, že zabratých počet buniek bola významne vyššia u LAPTM4B-35-transfekciou BGC-823 buniek a nižšie v porazený SGC-7901 buniek, ako v ich kontrolných bunkách, v danom poradí ( P
menšie ako 0,05, obr 6B). Tieto výsledky naznačujú, že LAPTM4B-35 podporuje migráciu a inváziu buniek karcinómu žalúdka.

Diskusia

GC je veľmi heterogénne ochorenie, kde aj podobné klinické a patologické rysy viesť k určitým výsledkom [27, 28], čo naznačuje, že TNM predstavovať systém pre GC má svoje obmedzenia a núti k hľadaniu nových molekulárnych biomarkerov, ktoré môžu predpovedať výsledok a liečbu pacienta. Onkogén LAPTM4B-35 je lokalizovaný na chromozóme 8q22 a zisk počtu kópií DNA na chromozóme 8q22 je častým nálezom u GC podľa našej predchádzajúcej štúdii (nepublikovaná dáta). V prípade rakoviny prsníka, nadexpresiou LAPTM4B-35 a 8q22 amplifikácie boli prispel k de nove
chemorezistence na antracyklíny a sú tolerantné k metastatické recidívy [29].

V tejto štúdii sme skúmali LAPTM4B-35
výraz v 24. rakovinou žalúdka a ich spárovaných noncancerous chirurgických vzoriek žalúdočnej QRT-PCR a zistil, že LAPTM4B-35
mRNA úrovne expresie v karcinómu žalúdka bola výrazne zvýšená v porovnaní s údajmi v spárované noncancerous skupina tkanivo. Okrem toho, imunohistochemická analýza v 180 párov karcinómu žalúdka ukázalo LAPTM4B-35 bol nadmerne exprimovaný v tkanivách (GC 68,3%) v porovnaní so svojím párovým nenádorové sliznice (16,1%). LAPTM4B-35 podporuje rast nádoru a tolerancia k metabolickej a genetickej záťaže pomocou indukcie autofagie [30, 31]. V našej štúdii, funkcia LAPTM4B v karcinómu žalúdka bola skúmaná in vitro testoch. Nadmerná expresia LAPTM4B-35 v BGC-823 buniek, tiež zvyšuje životaschopnosť buniek za podmienok bez séra kultivačných rovnako. Ak je tento jav spôsobený autophage je potreba byť vyšetrovaný.

Okrem toho sme tiež analyzovali korelácie LAPTM4B-35 expresie s klinicko-parametrami v karcinómu žalúdka. High LAPTM4B-35 expresie bola významne koreluje s mierou diferenciácie, lymphovascular inváziu, hĺbku invázie a lymfatických uzlín, čo naznačuje, že LAPTM4B-35 môže byť značne aktivované u karcinómu žalúdka a môže hrať dôležitú úlohu v žalúdočnej karcinogenéze a progresie nádoru. Vzhľadom k tomu, nádor lymphovascular invázie a metastázy lymphonode sú veľmi dôležité klinické prognostické ukazovatele recidívy, sme si urobili analýzu prežitie. Kaplan-Meierove krivky rozdelení podľa LAPTM4B-35 expresie a štádiom nádoru alebo lymphovascular invázii ukázalo, že LAPTM4B-35 pozitívnych pacientov majú podstatne horší OS v porovnaní s LAPTM4B-35 negatívnych tie v TNM štádií I-III alebo bez lymphovascular invázie podskupiny. Multivariačný Cox regresná analýza v tejto podskupine preukázala, že medzi všetkými analyzoval faktormi, LAPTM4B-35 expresie je nezávislý prognostický faktor u pacientov s rakovinou žalúdka v TNM štádiu I-III, ale v štádiu IV. Je vhodné, pretože pacient v štádiu IV, je schopný prijímať radikálne operáciu a môžu byť liečené s mnohými ďalšími rôznymi paliatívnej liečby, z ktorých všetky by mať vplyv na prognózu. Tieto výsledky ukazujú, že sklon k LAPTM4B-35 sa môže špecificky predpovedá najagresívnejších a fatálne typov rakoviny žalúdka v prípadoch, skoro a bez distálnej metastáz alebo bez lymphovascular inváziu.

V našej štúdii sme zistili, že LAPTM4B -35 pozitívny výraz všeobecne koreluje s horšou prognózou u pacientov GC rozdelených podľa štádia nádoru alebo lymphovascular inváziu. Pre funkciu LAPTM4B-35 v GC, sme sa ďalej vykonáva v teste in vitro. Nadmerná expresia LAPTM4B-35 v BPS-823 buniek ukázali významné zvýšenie bunkovej proliferácie, migrácie a invázie a down-regulácia LAPMT4B-35 vedenú do opačných výsledkov. Zhou et al. ukázal, že LAPTM4B-35 Nadmerná expresia podporuje prežívanie buniek, deregulovaný proliferáciu a migráciu v HCC bunkách [12]. Nedávne štúdie preukázali, že LAPTM4B-35 boli významne spojené s horší klinickým výsledkom v mnohých ľudských malignít, ako sú napríklad HCC [16], metastatické ovariálne nádor [32], žlčníka [19, 33], extrahepatické cholangiokarcinomem [34] a rakoviny endometria [22]. Tieto nahromadené dôkazy podporujú naše doterajšie poznatky, čo ukazuje, že nadmerná expresia LAPTM4B-35 môže hrať dôležitú úlohu v malígnej transformácii a progresii GC.

molekulárne mechanizmy LAPTM4B-35 v nádorových vlastností progresie sú stále nejasné. Niektoré predchádzajúce štúdie ukázali, že je potrebné LAPTM4B-35 pre lysosom homeostázy, okysľovania a funkcie, a že LAPTM4B-35 činí nádorových buniek rezistentných k bunkovej smrti sprostredkovanej lysosom vyvolané v oblasti životného prostredia a genotoxické namáhanie [30, 31]. Nadmerná expresia LAPTM4B-35 mohol aktivovať niektoré protoonkogeny, napríklad c-myc, c-Jun a c-fos [35], a podporovať proliferáciu, migráciu a inváziu v niektorých ľudských nádorových líniách, ktorý by podporil rast a metastázy HCC xenotransplantátov u nahých myší [36]. Súvisiace prešetrovania vyplynulo, že LAPTM4B môže zlepšiť proliferáciu buniek alebo prežívanie prostredníctvom zapojenia do transdukcia signálu, ako je kináza-proteín kináza B dráhy fosfatidylinozitol 3. A LAPTM4B-35 môžu interagovať s niektorými proteínmi súvisiacich s rakovinou, ako je proteín fosfatázy 2A a proteín kinázy C [10]. Li et al zistili, že LAPTM4B-35 motivuje liečivám rezistencie nádorových buniek tým, že podporuje liekové efluxné a anti-apoptózu aktiváciou PI3K /Akt signálne [24], čo ukazuje, že LAPTM4B-35 môže byť nový cieľ liečby. Funkčný význam a mechanizmus LAPTM4B v GC vyžadujú ďalšie skúmanie.

Na záver, aktuálny štúdia ukazuje, že nadmerná expresia LPTM4B-35 hrá dôležitú úlohu pri podpore bunkovej proliferácie, migrácie a invázie do karcinómov žalúdka. LAPTM4B-35 pozitívna expresia u karcinómu žalúdka tkanivách koreluje so zlou prognózou a ukázala sa byť nezávislý prognostický faktor v podskupine GC pacienta v TNM štádií I-III alebo bez lymphovascular invázie. Tak, LAPTM4B-35 môže predstavovať užitočný biomarker pre prognózu v určitej podskupine GC. Okrem toho, ako role LAPTM4B-35 k obmedzovaniu lysosom-sprostredkované bunkovej smrti a propagáciu autofagie mať významný vplyv na prežitie v rakovinových bunkách, a LAPTM4B-35 bol nadmerne exprimovaný vo veľkom podiele rakoviny žalúdka, môže to byť užitočný cieľ pre liečbu podtyp skupinu rakoviny žalúdka.

Podporné informácie
S1 sady dát. Jednotlivé výsledky relatívna mRNA LAPTM4B-35 prejavu, množenia sa, migrácie a invázie, prežitie pathients a klinicko features.
(Excel)
doi:10.1371/journal.pone.0121559.s001
(XLS)

Acknowledgments

We Ďakujem Guoshuang Feng (z čínskeho centra pre kontrolu a prevenciu chorôb) za jeho láskavú pomoc v oblasti štatistiky dát.

• Ploche ONE: Zvýšená expresia receptora pre pokročilých glykácia konečných produktov (RAGE) súvisí so zlou prognózou v žalúdočnej Cancer
• Ploche ONE: Vplyv intratumorová expresných hladín fluórpyrimidínu-metabolizujúcich enzýmov na spracovanie výsledkov Adjuvant S-1 terapia u rakoviny žalúdka