PLoS ONE: Caveolin-1 ekspressiotaso Cancer Associated Sidekudosmuodostussolujen ennustaa lopputulosta Mahalaukun Cancer

tiivistelmä

Tavoitteet

Altered ilmaus epiteelin tai strooman caveolin-1 (Cav-1) havaitaan erilaisten ihmisen syöpien. Kuitenkin kliininen merkitys Cav-1 ilmentymisen mahasyövän (GC) vielä tunneta laajalti. Tässä tutkimuksessa pyritään selvittämään kliinis merkitys ja ennusteen arvioinnissa sekä kasvainsolujen ja syöpään liittyvät fibroblasteja (valuuttalisiin) Cav-1 in GC.

Menetelmät ja tulokset

Kvanttipisteet immunofluoresenssilla histokemia suoritettiin tutkia ilmentymistä Cav-1 20 tapausta gastriitti ilman suolen metaplasiaa (IM), 20 tapausta gastriitti IM ja 286 tapausta GC. Positiivinen hinnat epiteelin Cav-1 gastriitti ilman IM, gastriitti IM ja GC oli laskeva ( P
= 0,012). Alhainen ilmentyminen Cav-1 in valuuttalisiin muttei kasvainsoluissa oli itsenäinen ennustaja huonon ennusteen GC potilailla ( P
= 0,034 ja 0,005 vastaavasti taudista vapaa elossaolo ja kokonaiselossaoloaika). CAV-1 tason kasvainsoluissa ja valuuttalisiin osoittanut mitään merkittävää korrelaatiota klassiset kliinis.

Johtopäätökset

Menetys epiteelin CAV-1 voi edistää pahanlaatuisten etenemistä ja matalan valuuttalisiin CAV-1 tason airut huonompi tulos GC potilaan, mikä viittaa valuuttalisiin Cav-1 voi olla ehdokkaana terapeuttinen kohde ja käyttökelpoinen prognostinen merkkiaine GC.

Citation: Zhao X, hän Y, Gao J, Fan L, Li Z, Yang G, et ai. (2013) Caveolin-1 ekspressiotaso Cancer Associated Sidekudosmuodostussolujen ennustaa tulos mahasyövän. PLoS ONE 8 (3): e59102. doi: 10,1371 /journal.pone.0059102

Editor: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 06 joulukuu 2012; Hyväksytty: 11 helmikuu 2013; Julkaistu: 19 maaliskuu 2013

Copyright: © 2013 Zhao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Opiskelijakirjaston Innovaatiohankkeiden Kiinassa (NO. 111048670) ja National Natural Sciences Foundation of China (NO. 30900652). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. "

Kilpailevat edut: Guilin Fanpu Biotechnology Co., Ltd antoi teknistä tukea TMA rakentamiseen. Ei ole olemassa patentteja, tuotteiden kehittämiseen tai kaupan tuotteiden julistaa. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Kuten normaaleissa kudoksissa, kasvaimet koostuvat kahdesta erillisistä mutta vuorovaikutteinen osastoja, parenchyma ja strooman. Kasvaimia, kasvaimen solut ovat itse parenkyymin, kun taas strooman sisältää seosta, soluväliaineen (ECM) osia ja ei-pahanlaatuisia soluja, kuten syövän liittyy fibroblastien (valuuttalisiin), verisuonten endoteelisolujen ja immuunijärjestelmän solujen ja tulehdussolujen [1], [2], [3]. Viime vuosina, syvällisiä vaikutuksia tuumorin strooman kasvuun ja etäpesäkkeiden erilaisten kasvainten on laajasti selvitetty [2], [3]. Tuumorisolut voidaan laukaista laskeuman reaktiivisen strooman, joka sisältää aktivoitua valuuttalisiin, immuuni- ja inflammatoristen solujen, ECM elementtejä, jotka voivat suosia ja metastaasit syöpien [2], [3]. Sitä paitsi, vaikka selvä roolit proteiinien molekyyli- välisen ylikuulumisen kasvain ja stroomasolulinja ovat epäselviä muuttunut ilmentyminen strooman proteiineja on ilmenee uusien biomarkkereiden erilaisissa ihmisen syövissä, mukaan lukien rinta- [4], [5], [6] [7], eturauhas- [8], nenänielun [9] ja tyvisolusyöpä [10].

caveolin geeniperheen on kolme jäsentä: CAV1
, CAV2
, ja CAV3
, proteiineja koodaava caveolin-1 (Cav-1), caveolin-2 ja caveolin-3, vastaavasti [11]. CAV1
sijaitsee kromosomissa 7 (locus 7q31.1) ja sisältää kolme eksonia (35, 165 ja 324 emäsparia) ja kaksi intronia (1,5 ja 32 kb) [11]. CAV-1 muodostaa suuria rakenteellisia osa kaveoleja, jotka ovat pulloon muotoinen vesicular kohtiin, solukalvon [12], [13]. Erilaiset reseptorit ja signalointi molekyylit lokalisoitu kaveoleja ja negatiivisesti säätelee Cav-1 kautta rakennustelineet domain. Lisäksi Cav-1 on vuorovaikutuksessa suoraan kaksikerroksisen kolesterolin ja sfingolipidit sisällä caveolin, siis vaikuttaa lipidien homeostaasin ja liikenteen [12], [13]. Vuonna syöpiä, on yhä selvempää, että Cav-1 on osallisena säätelyssä useita syöpään liittyvän prosesseja, jotka vaihtelevat solutransformaatioon, kasvaimen kasvua, invaasio ja metastaasi, että monilääkeaineresistenssin ja angiogeneesissä [14]. CAV-1 esittää osaston riippuva rooli kasvaimia. Vuonna epiteelin osastossa, Cav-1 vaikuttaa sekä positiivisesti että negatiivisesti kasvainten kehittymiseen. Kasvaimen strooman, erityisesti valuuttalisiin, alhainen ilmentyminen Cav-1-proteiinin ennustaa vahingollisia rinta- ja eturauhassyövän [4], [5], [6], [8], [12], [15]. Kuitenkin kliininen arvot Cav-1 in GC pysyvät ole täysin selvä. Perustuen ennen tutkimuksia, me hypoteesia, että roolit Cav-1 in epiteelin ja strooman voivat olla erilaisia, roolit epiteelin Cav-1 on epävarma, mutta alhainen ilmentyminen Cav-1 in valuuttalisiin voi edistää GC etenemistä ja korreloi vahingollisia GC potilaiden .

Täsmennetään suhdetta Cav-1 ja GC etenemisen tai tukahduttaminen, olemme analysoineet nimenomaan sekä strooman ja epiteelisolujen ilmentymistä Cav-1 kudoksissa kohdissa kautta kehittynyt kvanttipistei- (QDS) -pohjaisen immunofluoresenssimenetelmällä histokemia (QDS-IHC), joka oli kehitetty myös aikaisemmissa tutkimuksissa ja jotka ovat olleet laajalti akkreditoituja ja käytetty laboratorioissa [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ]. Fluoresoiva puolijohde nanocrystal QDS ovat uusi luokka monimuotoisen epäorgaanisten fluoroforien, joissa on paljon hyötyä ominaisuuksia, kuten kapea emissiovyön huiput, aallonpituus niiden fluoresenssin riippuu suuresti niiden koot ja erilaiset QD värejä voidaan samanaikaisesti virittää yksi valonlähde pienellä spektrin päällekkäisiä [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Nämä ominaisuudet tekevät QDS erittäin hyödyllinen multipleksoidun molekyylien immuunifluoresenssivasta kuvantamisen [21], [23]. Kehittynyt useita tavoitteita merkintöjä tekniikka QDS-IHC käytössä tarkka analyysi Cav-1 ilmentymisen valuuttalisiin, samanaikainen havaitseminen alfa-sileän lihaksen aktiini (α-SMA), joka on merkkiaine valuuttalisiin ja Cav-1-proteiinia.

Materiaalit ja menetelmät

potilaat ja seuranta

Koska aika oli rajallinen ja jotkut potilaat olivat pois sairaalasta, joten on vaikea saada kirjallinen suostumus. Soitimme kullekin potilaalle, selitti Tutkimuksemme käytettiin akateemisen vaihdon vain, ja ei ollut haitallista heidän terveyttään, eikä sisälsi yksityisiä tietoja. Kun vaadimme, julkisen notaarin oli läsnä, ja saimme matkapuhelimen lyhyen viestin, joka me tarvitaan potilailla, jotka hyväksyvät tutkimuksen lähettää meille. Jos potilaalla on kuollut, saimme suostumus hänen laillinen edustaja. Lopuksi saatu suullinen suostumus kaikilta 300 potilasta. Kaikkiaan 340 formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut kudokset saatiin potilailta diagnosoitu vuosina heinäkuusta 2005 helmikuuhun 2012 lukien 300 GC, 20 gastriitti ilman suolen metaplasiaa (IM) kudosten ja 20 gastriitti IM kudoksiin. Gastriitti ilman IM ja chat näytteet olivat peräisin adenokarsinooman paracancerous kudoksista. Serial osassa vahvistettu ei kasvainkudoksessa todettiin näistä näytteistä. Näytteet kerättiin arkistoista Patologian osasto, Zhongnan sairaala Wuhan University (Hubein, P. R. Kiina). Histologinen diagnoosi ja laadut erilaistumisen määritettiin mukaisesti Maailman terveysjärjestön (WHO) kriteerit GC. Kaikki GC näytteet luokiteltu perustuen UICC TNM luokittelu (2009). Kaksi board-sertifioitu patologit (Yang GF ja Fan LF) vahvisti, että histopatologisia piirteitä näistä näytteistä. 326 näytteet onnistuttu säilyttämään lisäanalyysiä varten; välin, 14 GC näytteet menetetään dia aikana immunovärjäykseen. Kliinis tekijät GC potilaista on lueteltu taulukossa 1. 247 GC potilailla oli riittävä kudoksen analyysi kasvainsolujen ja syöpään liittyvät sidekudosta Cav-1 immunovärjäyksellä. Kaikki nämä 300 potilasta hoidettiin radikaali resektio tai sytoreduktiivisen leikkaus GC, ennen kemoterapian tai sädehoidon. Tutkimus hyväksyi instituutin Research Medical Ethics komitean School of Basic lääketieteen, Wuhan University.

Follow-up alkoi mennessä leikkauksen ja päättyi elokuussa 2012. Lopuista 286 GC kudoksia potilailta , 257 kirjoilla meidän seurantaan kohortti ja 116 potilaalla onnistuneesti saavuttaneet viiden vuoden seurannassa tai kuoli GC sisällytettiin selviytymisen analyysiin. Potilaat, jotka eivät pääse viisi vuotta seurannassa ja kuoli muiden sairauksien tai johtuu odottamattomista, jätettiin pois selviytymisen tutkimus. Mediaani seuranta 116 potilaista oli 62 (vaihteluväli 1-85) kuukautta. Kokonaiselossaoloaika määriteltiin aikaväli alkaen leikkauksen kuolemaan. Taudista vapaa eloonjääminen määritettiin aikaväli alkaen leikkauksen toistuminen. Diagnoosi uusiutumisen perustui seuraavat kriteerit: paikallisen uusiutumisen löytyi endoskooppinen biopsia tai relaparotomy; etäpesäke säteilytieteiden, ultraääni- tai Osteri.

Tissue Microarray Hakemisto Rakentaminen

Kahdet kudossiruina (TMA) rakennettiin. Kukin sarja sisälsi 5 TMA jotka asennettiin 340 yksilöitä. Edustavimpien kasvain alueet määritellään hematoxylin- ja eosiini-värjätyt leikkeet ja merkitty dia. Tapamme rakensi TMA ja microarray järjestelmä instrumentti oli sama edellisessä tutkimuksessa [24], [25]. Kuten aiemmin tutkimukset eivät raportoineet kasvaimensisäisenä heterogeenisyys Cav-1 ilmentymisen GC ja meidän toteutettavuus kokeilu osoitti, että yksi ydin kohti kasvain TMA ja suuri osa oli hyvä johdonmukaisuus [26], [27], [28], siis testaus kokeilu, yksi ydin otettiin näyte kussakin tapauksessa. Lyhyesti, yksi johdin, jonka halkaisija on 1,5 mm, otettiin kustakin näytteestä ja työnnetään tyhjä "vastaanottaja" parafiinilohkoihin; nämä lohkot leikattiin osiin (4 pm paksu) ja käytettiin QDS-IHC analyysi.

QDS-pohjainen Immunofluoresenssikoe Histochemistry

Cav-1 immunoreaktiivisuus havaittiin yhdet TMA. Vasta-aineet, QDS konjugoitu streptavidiini antureista (QDS-SA) kanssa 605 nm emissio aallonpituudella ja niihin liittyvät reagenssit Cav-1 havaitseminen olivat samat kuin ennen [16] kanssa seuraavat merkittävät menettelyjä: deparaffinizing → antigeeni haku → esto → ensisijainen vasta-aineen Cav -1 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA) → pesu- ja estämällä → biotinyloitua IgG → pesu- ja estämällä → 605 nm-QDS-SA → pesu → asennus ja havainnointi. Saatu signaali merkintöjä solujen havaittiin kautta käyttäen Olympus BX51 fluoresenssimikroskopiaa (CCD DP72). QDS signaali oli tavoite erityinen, punainen, ja photostable. Autofluorisaatiota kudos--tausta oli vihreä. Koska Cav-1 normaalisti paikantuu endoteelisoluissa verisuonten [27], [29], että tutkitaan jokainen TMA, se voidaan toimi sisäisen positiivisen ja laadunvalvonta QDS-IHC. TBS sijasta Cav-1 primäärinen vasta-aine toimi negatiivisena kontrollina.

QDS-pohjainen Double Immunofluoresoivat Leimaus

Käytimme yhdet TMA CAV-1 /α-SMA rinnakkaispaikantumisen, havaitaan QDS -pohjainen kaksinkertainen immuunifluoresenssivasta merkintöjä tekniikka mukaan valmistajan ohjeiden (Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.). Kaikki laimennus vaiheet (vasta-aineet ja QDS) suoritettiin TBS, joka sisälsi 2% naudan seerumin albumiinia (BSA, Sigma, St. Louis, MO, USA). Antigeeni haku suoritettiin sitruunahappoa (10 mM, pH 6,0) 95 ° C: ssa 10 min, minkä jälkeen seos jäähdytettiin 30 minuutin ajan. TMA inkuboitiin ensin 2% BSA-puskurissa 37 ° C: ssa 30 minuutin ajan, ja sitten 4 ° C: ssa yön yli kanin anti-CAV-1 polyklonaalista vasta-ainetta ja hiiren anti-α-SMA monoklonaalinen vasta-aine (1:300 laimennus, Abcam, Cambridge, MA), jotta vasta-siteet. Sitten TMA pestiin kolme kertaa TBS-T: n (0,5% Tween TBS) 5 min joka kerta, ja niitä inkuboitiin biotinyloidun vuohen anti-hiiri-IgG (1:400 laimennus, Jackson Immuno- Research, West Grove, PA) 37 ° C: ssa 30 min. Sillä QDS konjugaatio, vasta-aine-sitovaa TMA inkuboitiin 2% BSA-puskurissa 37 ° C: ssa 10 min, inkuboitiin QDS (525 nm), on konjugoitu streptavidiini (1:200, Wuhan Jiayuan kvanttipisteiden Co., Ltd.) ja QDS (605 nm), on konjugoitu vuohen anti-kani-IgG: tä (1:100, Wuhan Jiayuan kvanttipisteiden Co., Ltd.) 50 minuutin ajan, huuhdeltiin kolme kertaa TBS-T: 5 min kukin. Lopuksi, TMA suljettiin 90% glyserolia (Sigma). Immuunifluoresenssivasta signaali havaittiin Caliper n monispektriset mikroskoopilla kuvantamisjärjestelmien (Caliper Life Sciences). Koska immunofluoresenssimenetelmällä signaali yhden merkintöjen ja kaksinkertainen merkintä oli snapped CCD-DP72 ja monispektriset mikroskoopilla kuvantamisjärjestelmien vastaavasti me kalibroitu tulokset kahden välineen vertailtavuuden varmistamiseksi näissä kokeissa. Positiivinen signaali α-SMA oli vihreä, ja Cav-1 oli punainen. CAV-1 ilmentymisen endoteelisoluissa verisuonten [27], [29], α-SMA ilmentyminen verisuonten ja tunnettu positiivinen kudosta pidetään positiivisesta kontrollista. TBS sijasta kaksi ensisijaista vasta toimi negatiivisena kontrollina, vain osoittaa autofluoresenssin signaali.

pisteytys on Immunofluoresoivat Tulokset

Tulokset arvioitiin kahdella patologit (Yang GF ja Fan LF) samanaikaisesti samassa displayer , jotka ovat riippumattomia ja sokkona kliiniset piirteet tutkimuksen. Tulokset kahden patologeista verrattiin ja mahdolliset discrepant pistemäärät arvioida uudelleen arvioinnit, jollaisen värjättyä kudosnäytteen kahden patologit saavuttaa yksimielisyys pisteet. Menetelmät teki Cav-1-värjäys kasvainsolujen ja valuuttalisiin olivat samat. Tulokset määritettiin yhdistämällä osa positiivisesti värjäytyneiden solujen ja värjäytymisen intensiteetti. Leikkeitä perin skannattu alhaisella teholla. Sitten soluja viisi edustaja kenttiä kunkin yksilön suurennos on suuri (200 x) laskettiin CAV-1-värjättyä kasvainsolujen tai valuuttalisien. Alue positiivinen (AP) arvostellaan solut seuraavasti: 0 (ei positiivista alueella tai positiivinen alue ja alle 5%), 1 (positiivinen alue 5-25%), 2 (positiivinen alue 26-50%), 3 ( positiivinen alue 51-75%) ja 4 (positiivinen alue > 75%). CAV-1 värjäytymisen intensiteetti (IS), jonka lukuarvo on johtanut Pisteet: 0 (negatiivinen: ei positiivista signaalia), 1 (heikko: vaalea tai tumma punainen merkkivalo) ja 2 (voimakas: kirkkaan punainen signaali). Ekspressiotasot Cav-1 laskettiin perustuen koko pisteet kuin seuraava yhtälö: intensiteetti jakelu (ID) = AP × IS.

Kynnysarvo korkean ja matalan ilmentyminen määritettiin vastaanottimessa toimivat ominaisuus ( ROC) käyrä analyysi kanssa suhteessa yleiseen eloonjäämiseen. Mukaan optimaalinen herkkyys ja spesifisyys ROC käyrä kokonaiselinaika tila, 1,5 määriteltiin optimaalinen katkaisu Cav-1 immuunifluoresenssivasta pisteet valuuttalisiin (ID pisteet ≥1.5 määritelty korkea ilmaisun ja ID pisteet < 1,5 osoitti heikkoa ilmentymistä) 3,5 määriteltiin optimaalinen katkaisu Cav-1 immuunifluoresenssivasta pisteet kasvainsoluissa (ID pisteet ≥3.5 määritelty korkea ilmaisun ja ID pisteet < 3,5 osoitti heikkoa ilmentymistä).

tilastollinen analyysi

Käytimme SPSS 17.0 ohjelmisto (Chicago, IL, USA) suorittaa kaikki tilastollisia analyysejä. Friedman testiä käytettiin analysoimaan ero Cav-1 alkuperäinen tulokset eri mahavaurioita. ROC-käyrä analyysi suoritettiin määrittämään cutoff pisteen korkea tai matala Cav-1 tasolla ja arvioimalla ennustearvo Cav-1 lauseke kokonaiselossaolo. Χ2 testin tai Fisherin testiä käytettiin analysoimaan korrelaatio kliinis parametrien ja Cav-1 ilme. Spearmanin rank korrelaatio suoritettiin analysoida yhdistyksen välillä Cav-1 ilmentymisen kasvainsoluissa ja valuuttalisien. Yleinen eloonjääminen ja taudista vapaan eloonjääntiprosentin arvioitiin käyttämällä Kaplan-Meier menetelmällä ja verrattiin käyttämällä pitkän rank testi. Monimuuttujamenetelmin käyttämällä Coxin suhteellista vaaraa regressiomallin käytettiin testaamaan riippumattomien ennusteen arvoja. Kaksi tailed P
-arvot < 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Expression of Cav-1 in Different Limakalvovauriot

lokalisointi ja ilmentyminen Cav-1 gastriitti ilman IM, gastriitti IM ja GC arvioitiin QDS-IHC käyttäen Cav-1 polyklonaalinen vasta-aine. Vahva voimakkuus donitsin muotoiset positiivinen signaali Cav-1 kasvaimen strooman oli sisäisen valvonnan endoteelisolujen ilmaisun (Fig. 1A). Gastriitti ilman IM kudoksia, negatiivinen Cav-1-signaali on pääasiassa pinnan limakalvojen solut (Fig. 1A) ja positiivisen signaalin pääasiassa pohjan ja kaulan fundic rauhanen solut (Fig. 1 C). Gastriitti IM kudosten, joissakin tapauksissa ei todettu Cav-1 jakelun (Fig. 1 E) ja joitakin positiivisesti Cav-1 värjäytymistä vastaanottokyky solu- ja pikarisolu- of metaplastiset rauhaset (kuvio. 1G). Expression of Cav-1 immunoreaktiivisuus oli ensisijaisesti havaittu solukalvon (Fig. 1) ja sytoplasmassa. Standardi Signaalin pisteytys näytettiin kuviossa. 1I-K ja edustavia esimerkkejä Cav-1 ilmentymisen GC olivat osoitti kuvassa. 2. rinnakkaispaikantumisen of Cav-1 ja α-SMA proteiinit havaittiin QDS-pohjainen kaksinkertainen immuunifluoresenssivasta merkintöjen GC, ja analysoitiin multispektrikuvaussensoreita järjestelmiä, tarkasti tunnistaa Cav-1 ilmentymisen valuuttalisiin (Fig. 3). Jakauma signaalin Cav-1 fibroblasteissa on satunnainen ja ei mitenkään CAV-1 asema tuumorisoluissa.

Taulukko 2 tiivistää alkuperäisen tulokset Cav-1 ilmentymisen gastriitti ilman IM, gastriitti IM ja GC. Vuonna epiteelin osastossa, 30% (6/20) gastriitti ilman IM, 55% (11/20) gastriitti IM, 75% (15/20) GC pisteytettiin 0, osoittaa Cav-1-proteiinin ilmentymisen taso pienenee asteittain . Friedman testi osoitti, että ero Cav-1 värjäystä pisteet välillä gastriitti ilman IM, gastriitti IM ja GC oli tilastollisesti merkitsevä ( P
= 0,012).

korrelaatio Expression of Cav-1 välillä kasvainsolujen valuuttalisiin

korrelaatio kasvainsolujen ja valuuttalisiin in Cav-1 ilmentyminen analysoitiin myös. Kuten taulukosta 3, joukossa 226 tapausta alhainen Cav-1expression tuumorisoluissa, 121 (53,5%) tapauksista oli pieni ilmentymistä Cav-1 in valuuttalisiin (Fig. 2A), ja joukossa 21 tapausta korkean Cav-1 ilmentymisen tuumorisoluissa, 9 (42,9%) tapauksessa näytetään korkean Cav-1 ilmentymisen valuuttalisiin (Fig. 2C). Toinen 117cases osoitti selvästi ilmentymistilanne kasvainsolun ja valuuttalisiin (Fig. 2E ja G). Mitään merkittävää korrelaatiota perustettiin välillä kasvainsolujen ja valuuttalisiin Cav-1 ilmentymisen (r = -0,20, P
= 0,751).

Kliininen merkitys Cav-1 ilmentäminen tuumorisoluissa ja valuuttalisien of GC

Kaikki 286 GC näytteet olivat saatavilla analyysiä Cav-1 immunovärjääminen kasvainsoluissa ja 247 (86,4%) tapauksista oli riittävästi kudoksia analysointiin Cav-1 immunovärjääminen valuuttalisien. Taulukko 3 tiivistää korrelaatio kasvainsolujen tai valuuttalisiin in Cav-1 ilmentymisen ja klassinen kliinis parametrit GC, kuten ikä, sukupuoli, T vaiheessa ja imusolmuke tilaansa univariate analyysiin. Kuitenkaan mitään merkittävää suhdetta löytynyt.

Lisäksi olemme tutkineet ennustetekijöiden arvon Cav-1 ilmentymisen kasvainsoluissa ja valuuttalisien. Kaplan-Meier-analyysi ja log-rank-testi osoitti, että alhainen ilmentyminen Cav-1 in valuuttalisiin sijaan kasvainsoluissa ennusti huono selviytymistä. Mediaani kokonaiselossaoloaika matalan valuuttalisiin Cav-1 ilmentymisen alaryhmä oli 73,0 kuukautta (95% CI, 55,589-90,411), kun taas seurannan väli, korkean valuuttalisiin Cav-1 ilmentymisen alaryhmä oli laskennallinen eloonjäämisprosentti on noin 0,8 (kuvio . 4A). Kuten on esitetty kuviossa. 4B, alhainen ilmentyminen Cav-1 in valuuttalisiin ennusti myös varhainen uusiutuminen GC potilaista. Kuva 4C ja D osoitti, että kasvainsolut Cav-1 asema ei ollut merkittävää korrelaatiota eloonjäämiseen ja taudista vapaan eloonjäämisen ( P
= 0,178 ja 0,104, tässä järjestyksessä). Lisäksi kumulatiivinen 5 vuotta eloonjäämisaste potilaiden, joiden kasvaimet näytteillä korkea valuuttalisiin Cav-1 ilmentymisen oli 75,5% (95% CI, 0,642-+0,868), kun taas se oli vain 57,4% (95% CI, 0,456-,692) matalissa valuuttalisien CAV-1 ryhmässä ( P
= 0,053).

univariate analyysi, TNM vaiheessa T vaiheessa imusolmuke tila ja valuuttalisiin CAV-1 tason havaittiin merkitsevästi tautiin liittyvän elinaika GC potilaista ( P
= 0,001, 0,003, 0,010 ja 0,029, vastaavasti, taulukko 4). TNM vaiheessa T vaiheessa ja valuuttalisiin Cav-1 tason merkittävästi korreloi kokonaiselinaika ( P
= 0,012, 0,006 ja 0,013, vastaavasti, taulukko 4). Sen määrittämiseksi, onko valuuttalisiin Cav-1 ilmentymisen oli itsenäinen ennustaja GC potilaiden toistuminen ja selviytymisen, Monimuuttuja-analyysi suoritettiin käyttäen COX suhteellista vaaraa regressiomallia yhdessä iän, T luokitus, TNM ja muissa elimissä ominaisuuksia. Jälleen Cav-1 tasoa valuuttalisiin oli itsenäisesti ja merkitsevästi yhteydessä GC potilaiden toistuminen ja tulos ( P
= 0,034 ja 0,005, vastaavasti, taulukko 4). Päinvastoin, kasvainsolut Cav-1 tason jättänyt ennustaa GC potilaan toistuminen ja eloonjäämisen samanaikainen mallissa (taulukko 4).

kuolema ennustearvo Cav-1 kynnysarvoja tuumorisoluissa ja valuuttalisien analysoitiin yhtä hyvin. Kuten osoitti kuvassa 5, Cav-1 tason valuuttalisiin ennusti kuolemaa hyvän suorituskyvyn; alue käyrän alla oli 0,627 (95% CI: 0,515-0,738; P
= 0,032). Katsovat, Cav-1 tason kasvainsoluissa ei ennustaa kuolemaa, jossa ala käyrän 0,551 (95% CI: 0,438-0,664; P
= 0,393).

Keskustelu

Täällä raportoimme että Cav-1 immunoreaktiivisuus pääasiassa havaittu solukalvon ja solulimassa. Gastriitti ilman IM kudoksia, Cav-1 signaali pääasiassa havaittu pohja ja kaulan fundic rauhasen soluihin. Gastriitti IM kudosten Cav-1 värjäystä lähinnä etsii ja vastaanottokyky solu- ja pikari solu metaplastiset rauhaset. Tämä tulos korreloi toisessa tutkimuksessa, jossa analysoitiin Cav-1 mahalaukun kudoksesta kautta immunohistokemia [27]. CAV-1 ilmentymisen pienenee asteittain etenemistä GC ja ilmentymistasoon valuuttalisiin pikemminkin kuin kasvainsoluissa jossain määrin ennustaa uusiutumisen ja eloonjäämisen GC potilailla.

roolit CAV-1-proteiinin kasvaimen kehityksen kasvaimen riippuvaisia ​​ja osasto-riippuvainen [12], [30]. CAV-1-geeni on paikallistettu lokukseen D7S522 ihmisen kromosomin 7q31.1, joka on usein poistettu joidenkin kasvainten [11]. Lisäksi Cav-1 on osallisena caveolin rakennustelineiden verkkotunnuksen ja voi aiheuttaa sytokiinin reseptorin signalointi [14], mikä viittaa tuumorisuppressorigeenin roolia Cav-1. Kasvain edistävää vaikutusta Cav-1 on laajalti vahvistanut varovasti havaitsemalla sen ekspressiotasot ja kliiniset arvot lajikkeiden syöpien, kuten kielen okasolusyöpä, ruokatorven okasolusyöpä, virtsarakon siirtymä- solukarsinoomat, nenänielun karsinooma ja kaulan okasolusyöpä [16], [31], [32], [33], [34]. CAV-1 on erilaisia ​​rooleja kasvainsoluissa ja strooman soluja. Esimerkiksi, rinta- ja eturauhassyövän, menetys strooman Cav-1, mutta ei ole kasvainsoluja Cav-1 ennakoi huonoon ennusteeseen [6], [8], [12], [14], mikä osoittaa, lokero-riippuvainen roolit Cav- 1.

tulokset osoittivat, että Cav-1 ekspressiotaso epiteeli soluissa pienenevät asteittain kanssa pahanlaatuinen etenemistä GC. Samanlaisia ​​tuloksia on raportoitu toisessa tutkimuksessa [26] tutkivat Cav-1 ilmentymisen IM ja GC, mikä Cav-1 voidaan pitää tuumorisuppressori kehittämiseen GC. Lisäksi sekä kasvainsoluissa ja valuuttalisiin Cav-1-proteiinin ekspression tila ei korreloi tyypillinen kliinis parametrit, kuten T-vaiheessa, TNM-luokitus ja Lauren luokitus. Se oli toisin kuin toisessa tutkimuksessa [26], joka osoitti, että alhainen ilmentyminen kasvainsoluissa Cav-1-proteiinin korreloi korkean T vaiheessa TNM-luokitus ja imusolmuke etäpesäke. Ero saattaa johtua arviointimenetelmä: arvioimme värjäytyminen kertomalla intensiteetti ja solujen osuus värjätään ja määritetään cutoff pisteen joka oli optimaalinen herkkyys ja spesifisyys ROC käyrä perustuu eloonjäämiseen asema; kun taas muissa tutkimukseen vain prosenttiosuus immunopositiivista solujen arvioitiin ja kynnykselle positiivinen tai negatiivinen ei esitetty. Lisäksi suurempi otoskoko Tutkimuksemme vaikuttaa tuloksiin samoin.

valuuttalisiin ovat kaikkein olennaisia ​​osia kasvain strooman, jossa tärkeitä toimintoja asiakkuutta laskeuman ECM, säännellä epiteelin erilaistumista ja tulehdusvasteen ja vuorovaikutuksessa hiussuonisto erittämällä metalloproteinaasien ja endoteelikasvutekijä [35]. Koska Cav-1-proteiini on tarvittava rakenneosa kaveoleja, muuttunut ilmentyminen Cav-1 proteiinia valuuttalisiin vaikuttaisi erilaisia ​​patologisia prosesseja ja siten edistää kasvainten kehittymiseen. Menetys Cav-1-proteiinin valuuttalisiin edistää aktivointi valuuttalisiin kautta aktivoimalla TGF-β-reitin, mikä helpottaa kasvaimen mikroympäris- remodeling ja kasvainten kehittymiseen [12]. Kuitenkin toinen tutkimus julkaistiin Cell
raportoitu päinvastoin toiminnot valuuttalisiin Cav-1-proteiinia, joka stroomasoluihin Cav-1 suosii kasvaimen invaasio ja etäpesäkkeiden kautta voiman riippuvan arkkitehtoninen sääntely microenvironment [36]. Siksi rooli valuuttalisiin Cav-1 on edelleen epävarma. Tässä esitetyt tulokset osoittivat itsenäinen ennustetekijöiden ennustaja GC joihin Cav-1 ekspressiotaso valuuttalisien. Alhainen ilmentyminen Cav-1 in valuuttalisiin muttei kasvainsoluissa itsenäisesti prognosticated varhainen uusiutuminen ja huono selviytyminen GC potilaista. ROC-analyysi osoitti kuoleman ennustamiseksi arvo matalan Cav-1 in valuuttalisien. Tulokset osoittivat kasvaimen estävää roolia valuuttalisiin Cav-1-proteiinia ja vastasivat löydös rinta- ja eturauhassyöpää, joka selvitetty, että menetys strooman Cav-1 ennakoi huonon ennusteen [8], [12], [15]. Myös rintasyöpä, on selvää, että kehittämisen kanssa syövän, kasvaimen microenvironment tulee hypoksinen ja huonosti ravitsemus kapealla, stimuloiva autophagy vuonna valuuttalisien. Sitten epänormaali aktivoitu autophagy heikentää Cav-1 in valuuttalisien. Tietenkin, onko vastaavia mekanismeja GC vaatii enemmän in vitro
tutkimuksissa.

Lisäksi menetys strooman Cav-1 on suuri ennustearvo ER (+), PR (+), HER2 (+), ja niin sanottu triple-negatiivinen rintasyöpäpotilaiden (ER (-) /PR (-) /HER2 (-)). Samalla vireille hormonaalisen hoidon ei vaikuta sen ennustearvoa, joten se uusi universaali tai laajalti sovellettavia rintasyövän prognostinen markkeri [37]. GC on neljäs yhteinen ja kolmannen kuoleman aiheuttavan syöpää maailmassa [38], jolta puuttuu edelleen riittävän sopiva biomarkkereita ennustetekijöiden arviointiin ja henkilökohtaisen anti-syövän hoitoon. HER2 positiivinen GC potilaita hyötyneet trastutsumabi hoito kuitenkin vain harvat potilaat ovat HER2 positiivisia, esimerkiksi vain 19% GC: lla todettiin HER2 positiivinen tutkimuksessamme. Nykyään kehittynyt GC potilaalla on negatiivinen HER2 kärsivät edelleen huonosta selviytymistä. Näin tunnistetaan lisää tavoitteita, jotka tukahduttaa GC kehitys on erittäin tarpeen. Tässä osoitimme arvot käyttäen strooman proteiinien biomarkkereina GC, mikä saattaa edistää molekyylityypityksen GC ja siten hoidossa GC, tarkastaa olennainen roolit kasvaimen strooman kasvaimen kehitystä. Lisäksi ennakoiva tutkimus on erittäin suositeltavaa validoida ennusteen arvioinnissa sekä tutkia kliinistä merkitystä havaitsemiseksi Cav-1 in valuuttalisiin.

Yksi mielenkiintoinen asia on, että vaikka valuuttalisiin Cav-1 tila voidaan käyttää ennustajana kun korrelaatio valuuttalisiin Cav-1 tasot ja klassinen kliinis parametrit GC analysoitiin, ei merkitsevää yhteyttä löytynyt. Näin ollen edistää tuumorin invaasiota ja etäpesäkkeiden voi olla ensisijainen mekanismeja, joilla menetys valuuttalisiin Cav-1 edistää GC kehitystä. Kemoterapia on yleisin lisähoitona, joita suositellaan keskimmäiseen ja pitkälle GC potilaiden Kiinassa. Yhdessä tulokset esitetään tässä, me korosti, että onko alhainen ilmentyminen Cav-1 in valuuttalisiin korreloi kemoterapiaa resistenssi voi olla merkittävä ongelma ansaitsee lisätutkimuksia.

Lopuksi tutkimuksessamme kautta kehittynyt QDS perustuvan kaksinkertainen immuunifluoresenssivasta merkintöjen tekniikka, Cav-1 proteiinia valuuttalisiin oli juuri sijoitettu. Pseudo-väri co-localization kuvien sallittu meidät arvioimaan Cav-1 tason valuuttalisiin yksinomaan kuitenkin QDS-IHC ja QDS-pohjainen kaksinkertainen immuunifluoresenssivasta merkintöjä tekniikka ei yleisesti käytetty kliinisissä laboratorioissa. Immunohistokemia on yleisimmin harjoitettu tekniikka kliinisissä laboratorioissa. Aikaisemmat tutkimus ilmenee, että QDS-IHC menetelmä on herkkä ja spesifinen kuin IHC [22]. Jos haluat tunnistaa samanaikaisesti kahteen eri proteiineja, kuten Cav-1 ja α-SMA yhdessä dia, QDS-pohjainen kaksinkertainen merkintä on uusi, luotettava ja vaihtoehtoinen menetelmä, jonka avulla voimme saada tulokset mahdollisimman tarkasti.

Johtopäätökset

Yhteenvetona meidän tutkimuksessa arvioitiin Cav-1 ilmentymisen sekä kasvainsoluissa ja valuuttalisiin ja tutkitaan niiden kliinistä merkitystä GC potilaille. On huomionarvoista, että ilmaus Cav-1 in valuuttalisiin sijaan kasvainsoluihin erityisen käyttökelpoinen ennustamaan alussa toistuminen ja huono selviytyminen näkymiä GC potilaista, mikä viittaa Cav-1 in valuuttalisiin voi olla ehdokkaana terapeuttinen kohde ja käyttökelpoinen prognostinen merkkiaine GC potilaiden . Lisätutkimuksia tarvitaan selvittämään mekanismeja, joilla korkea Cav-1 in valuuttalisiin tukahduttaa GC etenemistä ja mahdollisesti kehittää hoitomuotoja kohdistaminen Cav-1. Lisäksi kliinisiä lisätutkimuksia on tärkeää tarkistaa ennusteen arvioinnissa on valuuttalisiin Cav-1 in GC ja voisiko se edistää henkilökohtaista anti-syövän hoitoon.

Kiitokset

Tekijät Kiitokset Dr. Kathryn Solka, Biokemian, Rush University Medical Center kirjoittamiseen apua.

• PLoS ONE: Prognostic Value of Cancer Stem Cell Marker CD133 Expression mahasyövän: järjestelmällinen katsaus
• PLoS ONE: Targeting CDH17 Estää syövän etenemiseen mahasyövän by downregulating Wnt /β-kateniinin Signaling