Stomach Health > Желудок Здоровье >  > Gastric Cancer > Рак желудка

PLoS ONE: Кавеолин-1 уровень экспрессии в рака, связанного фибробластами Предсказывает исхода в рака желудка

Абстрактный

Цели и задачи
<р> Измененная экспрессия эпителиального или стромы кавеолина-1 наблюдается (CAV-1) в различных типах злокачественных опухолей человека. Тем не менее, клиническое значение CAV-1 выражение в рак желудка (GC) остается в значительной степени неизвестны. Настоящее исследование направлено на изучение клинико-патологическими значимость и прогностическую ценность обоих опухолевых клеток и раковых ассоциированных фибробластов (CAFS) CAV-1 в GC.

Методы и результаты
<р> Квантовые точки иммунофлюоресценции гистохимия была выполнена изучить экспрессию CAV-1 в 20 случаев гастрита без кишечной метаплазии (IM), 20 случаев гастрита с IM и 286 случаев GC. Положительные показатели эпителиальной CAV-1 в гастрита без обмена мгновенными сообщениями, гастрите с IM и ГХ показал тенденцию к снижению ( P
= 0,012). Низкая экспрессия CAV-1 в CAFS, но не в опухолевых клетках была независимым прогностическим фактором неблагоприятного прогноза у больных GC ( P
= 0,034 и 0,005, соответственно, в болезни и выживаемости без общей выживаемости). CAV-1 уровень в опухолевых клетках и CAFS не показал существенной корреляции с классическими клинико-патологическими особенностями.

Выводы
<р> Потеря эпителиальной CAV-1 может способствовать злокачественной прогрессии и низкой CAFS CAV-1 уровень хуже вестник исход GC пациента, предлагая CAFS CAV-1 может быть кандидатом терапевтической мишенью и полезным прогностическим маркером GC
<р> Образец цитирования:. Чжао X, Y Он, Гао J, Вентилятор L, Li Z, Ян G, и другие. (2013) Кавеолин-1 уровень экспрессии в Cancer Associated фибробластами предрекает исход в рака желудка. PLoS ONE 8 (3): e59102. DOI: 10.1371 /journal.pone.0059102
<р> Редактор: DunFa Пэн, Vanderbilt University Medical Center, Соединенные Штаты Америки
<р> Поступило: 6 декабря 2012 года; Принято: 11 февраля 2013 года; Опубликовано: 19 марта 2013
<р> Copyright: © 2013 Чжао и др. Это статья с открытым доступом распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник кредитуются

Финансирование:. Эта работа Работа выполнена при поддержке Национального инновационного проекта Бакалавриат Китая (NO. 111048670) и Национального фонда естественных наук Китая (NO. 30900652). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи "

Конкурирующие интересы:. Гуйлинь Fanpu биотехнологии Co., Ltd дала технологическую поддержку строительства ТМА. Там нет патентов, продукты в разработке или реализуемой продукции, чтобы объявить. Это не меняет приверженность авторов на всех политик PLoS ONE на данных и материалов общего доступа.

Введение
<р> Как и нормальные ткани, опухоли состоят из двух дискретных, но интерактивных отсеков, паренхимы и стромы. В опухолях, сами опухолевые клетки паренхимы, тогда как строма включает смесь внеклеточного матрикса элементов (ECM) и незлокачественных клеток, таких как рак, связанный фибробласты (CAFS), эндотелиальные клетки сосудов и иммунных и воспалительных клеток [1], [2], [3]. В последние годы глубокие влияния строме опухоли на рост и метастазирование в различных типах опухолей, были широко освещены [2], [3]. Опухолевые клетки могут вызывать осаждение химически активного стромы, содержащей активированные CAFS, иммунные и воспалительные клетки, ECM элементы, которые могут способствовать инвазию и метастазирование раковых образований [2], [3]. К тому же, хотя определенные роли белков в молекулярном взаимного влияния между опухолью и стромальной клетки остаются неясными, измененную экспрессию стромальных белков проявились в качестве новых биомаркеров в различных типах рака человека, в том числе молочной железы [4], [5], [6] , [7], простаты [8], носоглотки [9] и базально-клеточный рак [10]
<р> семейство генов кавеолин состоит из трех членов:. CAV1
, CAV2 <бр> и CAV3
, кодирующие белки, кавеолин-1 (CAV-1), кавеолин-2 и кавеолин-3, соответственно [11]. CAV1
расположена на 7-й хромосомы (локус 7q31.1) и содержит три экзона (35, 165 и 324 п.н.) и двух интронов (1,5 и 32 кб) [11]. CAV-1 представляет собой основную структурную составляющую кавеол, которые являются колбовидные везикул инвагинации плазматической мембраны [12], [13]. Различные рецепторы и сигнальные молекулы локализованы в кавеолах и отрицательно регулируется CAV-1 через ее подмостей домена. Кроме того, CAV-1 взаимодействует непосредственно с бислой холестерина и сфинголипидов в пределах кавеолином, поэтому, влияющие на липидный гомеостаз и транспорт [12], [13]. В раковых заболеваний, становится все более очевидным, что CAV-1 участвует в регуляции нескольких раковых ассоциированных процессов, начиная от трансформации клеток, роста опухоли, инвазии и метастазированию, множественной лекарственной устойчивости и ангиогенеза [14]. CAV-1 показывает отсеком-зависимый роль на опухоли. В эпителиальной отделении, CAV-1 влияет как положительно, так и отрицательно на развитие опухоли. В строме опухоли, особенно CAFS низкая экспрессия Cav-1 белка предсказывает неблагоприятный исход при раке молочной железы и простаты [4], [5], [6], [8], [12], [15]. Тем не менее, клинические значения CAV-1 в GC остается не совсем понятно. На основании ранее проведенных исследований, мы гипотезу, что роль CAV-1 в эпителии и строме могут быть различными, роли эпителиального CAV-1 является неопределенным, но низкой экспрессии КАВ-1 в CAFS может способствует развитию GC и коррелирует с неблагоприятным исходом пациентов GC .
<р> Для того, чтобы прояснить взаимосвязь между CAV-1 и GC прогрессии или подавления, мы проанализировали специфически как стромальных и эпителиальных клеток экспрессию CAV-1 в тканях секций, с помощью передовых квантовых точек (КТ) иммунофлюоресценции основанное которые были разработаны в наших предыдущих исследованиях и которые гистохимия (КТ-IHC) были широко аккредитованы и используются в лабораториях [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22 ]. Флуоресцентные полупроводниковые нанокристаллические квантовые точки представляют собой новый класс многофункциональных неорганических флуорофоров, которые имеют много выгоду свойств, таких как узких пиков полосы излучения, длина волны их флуоресценции сильно зависит от их размеров и различных QD цветов могут быть одновременно возбуждаются одним источником света с минимальным спектрально перекрытия [16], [17], [18], [19], [20], [21], [22]. Эти свойства делают квантовые точки чрезвычайно полезны для мультиплексной молекулярной визуализации иммунофлуоресцентного [21], [23]. Передовой несколько целей маркировки технология квантовых точек-IHC позволило точный анализ CAV-1 экспрессии в CAFS, путем одновременного обнаружения альфа-актин гладких мышц (α-SMA), который является маркером CAFS и CAV-1 белка.

материалы и методы

пациенты и последующая деятельность

Поскольку время было ограничено, а некоторые пациенты из больницы, так что трудно получить письменное согласие. Мы позвонили к каждому пациенту, объяснил наше исследование было использовано только для академических обменов, а не вред их здоровью, а также не содержали их личную информацию. Когда мы позвонили, нотариус присутствовал, и мы получили мобильный телефон короткое сообщение, которое мы требовали согласия пациентов, исследование, чтобы отправить нам. Если у пациента мертв, мы получили согласие от его законного представителя. И, наконец, мы получили устное согласие от всех 300 пациентов. В общей сложности 340 фиксированных формалином, залитых парафином тканей были получены от пациентов, диагностированных в период с июля 2005 года по февраль 2012 года, в том числе 300 ШС, 20 гастрита без кишечной метаплазии (IM) тканей и 20 гастрита с тканями обмена мгновенными сообщениями. Гастрит без обмена мгновенными сообщениями и обмена мгновенными сообщениями с образцами были получены из аденокарциномы paracancerous тканей. Серийный раздел подтвердили не опухолевой ткани не было найдено в этих образцах. Образцы были собраны из архивов Департамента патологии, Чжуннань больницы университета города Ухань (Хубэй, P.R. Китай). Гистологический диагноз и сорта дифференциации были определены в соответствии с Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) критерии для GC. Все образцы GC были классифицированы на основе классификации UICC TNM (2009). Два совета сертифицированных патологи (Yang GF и вентилятор LF) вновь подтвердил Гистопатологические особенности этих образцов. 326 образцов были успешно сохранены для дальнейшего анализа; В то же время, 14 образцов GC были потеряны из слайда во время иммунным окрашиванием. Клинико-патологическими факторами больных ГЦ были приведены в таблице 1. Для 247 больных ГХ имеется достаточно ткани для анализа опухолевых клеток и рака, связанного фибробластической CAV-1 иммунное окрашивание. Все эти 300 пациентов лечили радикальной резекции или циторедуктивного операции ГК, до введения химиотерапии или лучевой терапии. Это исследование было одобрено научно-исследовательского медицинского комитета по этике Института Школы фундаментальных медицинских наук, Ухань университета им.
<Р> Последующие действия начались на дату операции и закончилась в августе 2012 года Среди оставшихся 286 ГК тканей от пациентов , 257 поступил в нашей последующей когорты и 116 пациентов, которые успешно достигли пяти лет наблюдения или умерли из-GC были включены в анализ выживаемости. Пациенты, которые не достигли пяти лет наблюдения и умер от других заболеваний или из-за неожиданных событий, были исключены из исследования выживаемости. Средний период наблюдения из 116 пациентов было 62 (диапазон: 1-85) месяцев. Общая выживаемость была определена как интервал от момента операции до смерти. Болезнь выживаемость была определена как интервал от момента операции до рецидива. Диагноз рецидива был основан на следующих критериях: местный рецидив найден эндоскопической биопсии или релапаротомии; метастазирование по радиологической, ультразвуковой или цитологического исследования.

Ткань микрочипов Строительство
<р> были построены два набора микрочипов ткани (TMAS). Каждый набор содержал 5 TMAS, которые были установлены с 340 образцов. Наиболее представительные участки опухоли были определены на hematoxylin- и эозином окрашенных участков и отмечены на слайде. То, как мы построили TMAS и система микрочипов инструмента были одинаковыми с нашего предыдущего исследования [24], [25]. Как ранее исследования не сообщали о внутриопухолевой гетерогенность CAV-1 выражение в GC и наше технико-экономического эксперимента показали, что одно ядро ​​на опухоль на TMA и больших участков показали хорошую согласованность [26], [27], [28], поэтому в тестировании эксперимент, одно ядро ​​отбирали в каждом конкретном случае. Кратко, один сердечник с диаметром 1,5 мм был взят из каждого образца и вставляли в пустые "получателей" парафиновых блоков; эти блоки были разрезаны на секции (4 мкм) и использовали для анализа КТ-IHC.

на основе квантовых точек Иммунофлуоресценции Гистохимия
<р> CAV-1 иммунореактивность была обнаружена в одном наборе ТМА. Антитела, QDS, конъюгированный стрептавидин зонды (КТ-SA) с длиной волны излучения 605 нм и связанных с ними реагентов для детекции КАВ-1 были такими же, как и ранее [16] со следующими основными процедурами: deparaffinizing → поиска антигена → блокировании → первичного антитела для Cav -1 (Cell Signaling Technology, Beverly, MA) → умывания и блокирование → биотинилированного IgG → умывания и блокирование → 605 нм КТ-SA → умывания → монтажа и наблюдения. Сигнал, полученный от маркировки клеток был обнаружен с помощью с помощью Olympus BX51 флуоресцентной микроскопии (CCD DP72). Сигнал был целевой КТ специфический, красный и фотостабильным. Аутофлюоресценции ткани-фон был зеленым. Так как CAV-1 обычно локализуется в эндотелиальных клетках кровеносных сосудов [27], [29], которые изучали в каждом районе аэродрома, он может быть подан в качестве внутреннего положительного и контроля качества в КТ-IHC. TBS вместо CAV-1 первичного антитела служили в качестве отрицательного контроля.

на основе квантовых точек Двойной Иммунофлуоресцентного Этикетировочное
<р> Мы использовали один набор для Cav ТМА-1 /α-SMA колокализации, детектируется квантовыми точками основанное технология двойного иммунофлуоресцентного маркировки в соответствии с инструкциями изготовителя (Wuhan Jiayuan Quantum Dots Co., Ltd.). Все стадии разбавления (антител и квантовых точек) были выполнены в TBS, содержащим 2% бычьего сывороточного альбумина (BSA, Sigma, St. Louis, MO, USA). Антиген поиск проводили в лимонной кислоте (10 мМ, рН 6,0) при 95 ° С в течение 10 мин с последующим охлаждением в течение 30 мин. ТМА сначала инкубировали в 2% буфера BSA при 37 ° С в течение 30 мин, а затем при температуре 4 ° С в течение ночи в кроличьего анти-CAV-1 поликлональные антитела и мышиного анти-α-SMA моноклональное антитело (разведение 1:300, Abcam, Кембридж, штат Массачусетс), с целью связывания антител. Затем были ТМА три раза промывали TBS-T (0,5% твина в TBS) в течение 5 минут каждый раз, и инкубировали в биотинилированным козьим против мышиного IgG (разбавление 1:400, Jackson ImmunoResearch, Вест-Гроув, штат Пенсильвания) при 37 ° C в течение 30 мин. Для квантовых точек сопряжения, антитело-связывающий TMAS инкубировали в 2% буфера BSA при 37 ° С в течение 10 мин, инкубировали в квантовых точках (525 нм), конъюгированной со стрептавидином (1:200, Ухань Jiayuan квантовых точек Лтд) и КТ (605 нм), конъюгированный с козьими антителами против кроличьего IgG (1:100, Учанский Jiayuan квантовых точек Лтд) в течение 50 мин, промывали три раза TBS-T в течение 5 мин каждый. И, наконец, были запечатаны ТМА с 90% глицерином (Sigma). Сигнал иммунофлуоресцентного наблюдали мультиспектральных систем микроскопии изображений (в суппорт суппорт Life Sciences). Поскольку иммунофлуоресцентного сигнал одной маркировки и двойной маркировки были раскуплены с помощью ПЗС-DP72 и мультиспектральных систем микроскопии изображений соответственно, мы откалиброван результаты двух инструментов для обеспечения сопоставимости этих экспериментов. Положительный сигнал a-SMA был зеленым, и CAV-1 был красным. Выражение CAV-1 в эндотелиальных клетках кровеносных сосудов [27], [29], экспрессия α-SMA в кровеносных сосудах и известной положительной ткани рассматриваются в качестве положительного контроля. TBS вместо двух первичных антител служили в качестве отрицательного контроля, показывая только сигнал автофлюоресценции.

тонировка Иммунофлуоресцентного
Результаты

Результаты оценивались двумя патологи (Yang GF и вентилятор LF) одновременно в той же Displayer , которые являются независимыми и ослепил клинических признаков исследования. Сравнивали оценки двух патологов и любые несоответствующие баллы переоцениваются переоценкой окрашенных образцов ткани на двух патологов для достижения консенсуса счет. Методика для озвучивания CAV-1 окрашивание опухолевых клеток и CAFS были одинаковыми. Лучшие результаты были определены путем объединения доли положительно окрашенных клеток и интенсивность окрашивания. Срезы сначала сканируются при низкой мощности. Затем клетки из пяти репрезентативных полей каждого образца при большом увеличении (200 ×) подсчитывали для CAV-1-окрашенных опухолевых клеток или CAFS. Область положительных (AP) дифференцируются клетки, как не следует: 0 (нет положительной области или положительной области &лт; 5%), 1 (положительная площадь 5-25%), 2 (положительная площадь 26-50%), 3 ( положительной области 51-75%) и 4 (положительная область > 75%). CAV-1 интенсивность окраски (IS) по численному значению не привело баллов: 0 (отрицательный: нет положительный сигнал), 1 (слабый: светлый или темный красный сигнал) и 2 (сильный: ярко-красный сигнал). рассчитывались Уровни экспрессии КАВ-1 в расчете на общий балл, как по следующему уравнению:. Распределение интенсивности (ID) = AP × IS
<р> пороговое значение для высокой и низкой экспрессии определяли на приемнике (эксплуатационная характеристика ROC) анализ кривой с относительно общей выживаемости. В соответствии с оптимальной чувствительности и специфичности кривой ROC по общему статусу выживания, 1.5 была определена в качестве оптимального среза для CAV-1 балл иммунофлуоресцентного в CAFS (идентификатор оценка ≥1.5 определен высокий уровень экспрессии и ID оценка &л; 1,5 указано низкая экспрессия) , 3.5 была определена в качестве оптимального среза для CAV-1 балл иммунофлуоресцентного в опухолевых клетках (идентификатор оценка ≥3.5 определен высокий уровень экспрессии и ID оценка &л; 3,5 указано низкая экспрессия).

Статистический анализ
<р> Мы использовали программное обеспечение SPSS 17.0 (Чикаго, Иллинойс, США) для проведения всех статистических анализов. Тест Фридмана применяли для анализа разности CAV-1 оригиналам среди различных желудочных поражений. анализ кривой ROC проводили для определения точки среза высокого или низкого уровня КАВ-1 и оценить прогностическую ценность CAV-1 выражение для общей выживаемости. Тест χ2 или точный критерий Фишера использовали для анализа корреляции между клинико-патологическими параметрами и CAV-1 выражение. тест ранговой корреляции Спирмена был проведен анализ связи между CAV-1 экспрессии в опухолевых клетках и CAFS. Общая выживаемость и выживаемость без признаков заболевания были оценены с использованием метода Каплана-Мейера и сравнивали с помощью теста долго ранга. Многофакторный анализ с использованием Cox пропорционального риска регрессионной модели была использована для проверки независимых значений прогноза. Два хвостатых P
-значения &л;. 0,05 считались статистически значимыми

Результаты

Экспрессия CAV-1 в различных желудочных поражениях

локализации и экспрессия CAV-1 в гастрита без обмена мгновенными сообщениями, гастрит с IM и ГХ оценивали с помощью КТ-IHC с использованием поликлональных антител CAV-1. Сильная интенсивность пончика положительный сигнал CAV-1 в строме опухоли был внутренний контроль эндотелиальной экспрессии (фиг. 1А). В гастритом без тканей IM, отрицательный CAV-1 сигнал преимущественно в поверхностных слизистых клеток (фиг. 1А) и позитивный сигнал преимущественно в основание и горлышко фундального железистых клеток (рис. 1в). При гастритах с IM тканей, в некоторых случаях не показали распределение CAV-1 (рис. 1д), а некоторые показали положительную CAV-1 окрашивание в абсорбционной ячейке и бокаловидных клеток из метапластических желез (рис. 1G). Выражение CAV-1-иммунореактивности в основном наблюдалась в клеточной мембране (рис. 1 л) и цитоплазмы. Уровень сигнала скоринг был показан на рис. 1I-K и типичные примеры CAV-1 экспрессии в GC были показаны на рис. 2. колокализации КАВ-1 и α-SMA белки детектировали с помощью КТ на основе маркировки двойного иммунофлуоресцентного в GC, и анализировали с помощью мультиспектральных систем формирования изображений, чтобы точно определить CAV-1 выражение в CAFS (рис. 3). Распределение сигнала CAV-1 в фибробластах является случайным и не имеет никакого отношения со статусом CAV-1 в опухолевых клетках.
<Р> Таблица 2 приведены исходные оценки КАВ-1 выражение в гастрита без IM, гастрит с IM и GC. В эпителиальной отделении, 30% (6/20) гастрита без обмена мгновенными сообщениями, 55% (11/20) гастрита с IM, 75% (15/20) ГК были забиты 0, показывая CAV-1 белка уровень экспрессии постепенно уменьшающуюся , Фридман тест показал, что разность CAV-1 окрашивания оценка между гастритом без IM, гастрит с IM и ГХ было статистически значимым ( P
= 0,012).

Корреляция Выражение CAV-1 между опухолевые клетки и CAFS
<р> Корреляция между опухолевыми клетками и CAFS в CAV-1 выражение также было проанализировано. Как было показано в таблице 3, в том числе 226 случаев с низкой CAV-1expression в опухолевых клетках, 121 (53,5%) пациентов показали низкую экспрессию CAV-1 в CAFS (фиг. 2А), а среди 21 больных с высоким уровнем экспрессии КАВ-1 в опухолевых клетках, 9 (42,9%) случаев отображается высокий уровень экспрессии КАВ-1 в CAFS (рис. 2в). Остальные 117cases показали статус отчетливое выражение в опухолевой клетке и CAFS (рис. 2Е и G). Нет значимая корреляция была основана между опухолевыми клетками и CAFS CAV-1 выражение (г = -0,20, P
= 0,751).

Клиническое значение CAV-1 Expression в опухолевых клетках и CAFS из GC

Все 286 пробы GC были доступны для анализа CAV-1 иммунным окрашиванием в опухолевых клетках и 247 (86,4%) случаев имели достаточное количество ткани для анализа CAV-1 иммунным окрашиванием в CAFS. В таблице 3 приведены корреляции между опухолевыми клетками или CAFS в CAV-1 экспрессии и классические клинико параметры GC, такие как возраст, пол, Т стадии и состояния лимфатических узлов в одномерном анализе. Тем не менее, никаких существенных отношений не было найдено.
<Р> Кроме того, мы исследовали прогностическую ценность CAV-1 экспрессии в опухолевых клетках и CAFS. Анализ Каплана-Мейера и тест журнала ранга показали, что низкий уровень экспрессии CAV-1 в CAFS, а не в опухолевых клетках предсказывали плохую выживаемость. Медиана общей выживаемости с низким CAFS CAV-1 выражение подгруппа была 73,0 месяцев (95% CI, 55.589-90.411), в то время как в последующих интервале, высокая CAFS CAV-1 выражение подгруппа имеет расчетный коэффициент выживаемости приблизительно 0,8 (рис . 4А). Как показано на рис. 4B низкая экспрессия CAV-1 в CAFS также предсказал ранний рецидив пациентов GC. Рисунок 4C и D показали, что опухолевые клетки CAV-1 статус не имели значимой корреляции с общей выживаемости и выживаемости без признаков заболевания ( P
= 0,178 и 0,104, соответственно). Кроме того, совокупный 5 летняя выживаемость пациентов, у которых опухоли показали высокие CAFS CAV-1 выражение было 75,5% (95% ДИ 0.642-0.868), в то время как только 57,4% (95% ДИ 0.456-0.692) в низких CAFS CAV-1 группа ( P
= 0,053).
<р> в одномерном анализе, TNM стадии, Т стадии, состояние лимфатических узлов и CAFS CAV-1 уровня были обнаружены в значительной степени связаны с заболеванием выживаемость пациентов GC ( P
= 0,001, 0,003, 0,010 и 0,029, соответственно, таблица 4). ТНМ этап, Т стадии и CAFS CAV-1 уровня были достоверно коррелирует с общей выживаемости (<ЕМ> P
= 0,012, 0,006 и 0,013, соответственно; таблица 4). Для того, чтобы определить, был ли CAFS CAV-1 выражение является независимым предиктором рецидива и выживаемости GC пациентов, многомерный анализ проводился с использованием ЦОГ регрессионной модели опасности, наряду с возрастом, Т классификации, стадии TNM и другие особенности опухоли. Опять же, CAV-1 уровень в CAFS был независимо друг от друга, и в значительной степени связано с рецидивом GC пациентов и исхода ( P
= 0,034 и 0,005, соответственно, таблица 4). Напротив, опухолевые клетки CAV-1 уровень не в состоянии прогнозировать рецидив и выживаемость GC пациента в одновременной модели (таблица 4).
<Р> Смерть прогностическое значение CAV-1 порогов в опухолевых клетках и в CAFS анализировали также. Как показано на рисунке 5, CAV-1 уровень в CAFS предсказал смерть с хорошей производительностью; площадь под кривой была 0,627 (95% ДИ: 0.515-0.738; P
= 0,032). Принимая во внимание, CAV-1 уровень в опухолевых клетках не удалось предсказать смерть, с площадью под кривой 0,551. (95% ДИ: 0.438-0.664; P
= 0,393)

Обсуждение <бр>

Здесь мы сообщали, что CAV-1 иммунореактивности в основном наблюдается в клеточной мембране и цитоплазме. В гастритом без тканей IM, CAV-1 сигнал преимущественно обнаруживается в основании и шейки фундального железистых клеток. При гастритах с тканями обмена мгновенными сообщениями, CAV-1 окрашивание в основном находит в абсорбционной клетки и бокаловидных клетки метапластических желез. Этот результат согласуется с другом исследовании, в котором содержится анализ CAV-1 в желудочной ткани с помощью иммуногистохимии [27]. CAV-1 выражение постепенно уменьшается с прогрессированием GC и уровнем экспрессии в CAFS, а не в опухолевых клетках в определенной степени предсказывает рецидив и выживаемость у больных ГЦ.
<Р> Роль CAV-1 белка в развитии опухоли опухоль-зависимой и купе-зависимой [12], [30]. CAV-1 ген локализован в локусе D7S522 хромосомы 7q31.1 человека, который часто удалены в некоторых типах опухолей [11]. Более того, КАВ-1 участвует в домене кавеолин подмостей и может вызывать ингибирование сигнального рецепторов цитокинов [14], что указывает на роль супрессора опухоли CAV-1. Опухоль поощрение активности CAV-1 широко подтверждается путем тщательного выявления ее уровни экспрессии и клинические значения в разновидностей рака, таких как язык плоскоклеточного рака пищевода плоскоклеточный рак, мочевого пузыря переходный карциномы, карциномы носоглотки и шеи плоскоклеточный рак [16], [31], [32], [33], [34]. CAV-1 имеет различные роли в опухолевых клетках и клетках стромы. Например, при раке молочной железы и рака простаты, потеря стромы CAV-1, но не опухолевых клеток CAV-1 предвещает плохой прогноз [6], [8], [12], [14], что указывает на купе-зависимой роли резонаторе 1.

Наши результаты показали, что CAV-1 уровень экспрессии в эпителии клеток постепенно снижалась с злокачественной прогрессии GC. Аналогичные результаты были получены в другом исследовании [26] следственным CAV-1 экспрессию IM и GC, подразумевая, CAV-1 может рассматриваться как опухолевый супрессор в развитии GC. К тому же, как опухолевые клетки и CAFS CAV-1 статус экспрессии белка не коррелировали с типичными клинико-патологическими параметрами, такими как Т-стадии, стадии TNM и классификации Lauren. Это было в отличие от другого исследования [26], который показал, что сниженная экспрессия гена опухолевых клеток CAV-1 белка коррелировал с высоким T стадии, стадии TNM и метастазов в лимфатических узлах. Разница может быть связано с методом оценки: мы оценивали окрашивание путем умножения интенсивности и доли клеток, окрашенных и определили точку среза, что имел оптимальную чувствительность и специфичность кривой ROC на основе общего состояния выживания; в то время как в других исследованиях оценивали только процент иммуноположительных клеток и порог положительного или отрицательного, не было представлено. К тому же, чем больше размер выборки нашего исследования повлияли на результаты.

CAFS являются одними из наиболее важных компонентов опухоли стромы, с важными функциями вызывая осаждение ЕСМ, регулируя эпителиальной дифференцировки и воспалительной реакции и взаимодействия с микрососудов секретируя матричные металлопротеиназы и фактор роста эндотелия сосудов [35]. Так как Cav-1 белок является необходимым условием структурным компонентом кавеол, измененное выражение CAV-1 белка в CAFS будут влиять различные патологические процессы и, следовательно, способствуют развитию опухолей. Потеря CAV-1 белка в CAFS способствует активации CAFS через активацию TGF-бета пути, поэтому облегчая опухоль микросреде ремоделирования и развитие опухоли [12]. Тем не менее, другое исследование, опубликованное в Cell
сообщили противоположные функции CAFS Cav-1 белок, стромальных CAV-1 способствует опухолевой инвазии и метастазирования через силу зависящих от архитектурного регулирования микросреды [36]. Таким образом, роль CAFS CAV-1 остается неопределенным. Представленные здесь результаты продемонстрировали независимое прогностическое предсказатель GC с участием уровня экспрессии Cav-1 в CAFS. Низкая экспрессия CAV-1 в CAFS, но не в опухолевых клетках независимо друг от друга прогнозируемым раннего рецидива и плохой выживаемости больных GC. Анализ ROC указывает на смерть, предсказывающий значение низкой CAV-1 в CAFS. Результаты предполагало роль опухоли ингибирования из CAFS CAV-1 белка и были совместимы с нахождением в груди и рака простаты, который выяснены, что потеря стромальных CAV-1 предвещает плохой прогноз [8], [12], [15]. Кроме того, при раке молочной железы, то ясно, что с развитием рака, микроокружение опухоли становится гипоксическая и нишей плохое питание, стимулируя аутофагии в CAFS. Тогда ненормальное активированный аутофагия деградирует CAV-1 в CAFS. Конечно, существуют ли подобные механизмы в GC требует больше
пробирке исследования в области.
<Р> Кроме того, потеря стромы CAV-1 имеет большое прогностическое значение в ER (+), PR (+), HER2 (+), а также так называемые больных раком молочной железы тройной негативный (ER (-) /PR (-) /HER2 (-)). Одновременно с этим возбуждено эндокринная терапия не влияет на его прогностическую ценность, что делает его новый универсальный или широко применяется рак молочной железы прогностический маркер [37]. GC является четвертым общим и третье причинение смерти рака в мире [38], который до сих пор не хватает достаточного количества подходящих биомаркеров для прогностической оценки и персонализированного лечения противоракового. Пациенты положительно GC HER2 приносят пользу от лечения трастузумаб, однако, лишь немногие пациенты положительный HER2, например, только 19% больных ГХ показал положительный HER2 в нашем исследовании. В настоящее время, прогрессирующих больных GC с отрицательным HER2 по-прежнему страдают от плохого выживания. Таким образом, выявление более целей, которые подавляют развитие GC чрезвычайно необходимы. При этом, мы продемонстрировали значения с использованием стромальных белков в качестве биомаркеров в GC, которые могли бы способствовать Молекулярное типирование GC и, следовательно, лечения GC, проверив существенно важную роль опухоли стромы в развитии опухоли. Кроме того, проспективное исследование настоятельно рекомендуется, чтобы подтвердить прогностическую ценность и исследовать клиническую значимость обнаружения CAV-1 в CAFS.
<Р> Одна интересная вещь, что, хотя CAFS CAV-1 статус может быть использован в качестве предсказателя , при анализе корреляции между уровнями CAFS CAV-1 и классических клинико-патологическими параметрами GC, никакого существенного объединения не было найдено. Таким образом, способствуя опухолевой инвазии и метастазированию не может быть основным механизмом, с помощью которого потеря CAFS CAV-1 способствует развитию GC. Химиотерапия является наиболее распространенной вспомогательной терапии, которые рекомендуются для пациентов среднего и продвинутого этапа GC в Китае. В сочетании с результатами, представленными здесь, мы отмечали, что ли низкая экспрессия CAV-1 в CAFS коррелирует с устойчивостью к химиотерапии может быть примечателен проблема, заслуживающим дальнейшего изучения.
<Р> Наконец, в нашем исследовании, с помощью передовых квантовых точек на основе двойная технология маркировки иммунофлуоресцентного, CAV-1 белка в CAFS был точно расположен. Псевдоегипетском цвета совместно локализации изображения позволили нам оценить уровень CAV-1 в CAFS исключительно, однако, КТ-IHC и квантовых точек на основе технологии двойного иммунофлуоресцентного маркировки обычно не используется в клинических лабораториях. Иммуногистохимия является наиболее широко практикуется технология в клинических лабораториях. Наше предыдущее исследование демонстрирует, что метод КТ-IHC как чувствительный и специфический как IHC [22]. Если вы хотите, чтобы обнаружить одновременно двух различных белков, таких как CAV-1 и a-SMA в одном слайде, квантовые точки на основе двойной маркировки представляет собой новый, надежный и альтернативный метод, с помощью которого мы можем получить результаты как можно точнее.

Выводы

В заключение, наше исследование оценивали экспрессию CAV-1 в обеих опухолевых клетках и CAFS и исследовали их клиническое значение для больных GC. Следует отметить, что выражение CAV-1 в CAFS, а не опухолевые клетки особенно применимыми в прогнозировании раннего рецидива и плохие перспективы выживания больных ГЦ, предполагая CAV-1 в CAFS может быть кандидатом терапевтической мишенью и полезным прогностическим маркером пациентов GC , Необходимы дальнейшие исследования, чтобы исследовать механизмы, с помощью которых высокие уровни CAV-1 в CAFS подавляют развитие GC и, возможно, разработать терапевтику ориентации CAV-1. Кроме того, дальнейшие клинические испытания будут иметь важное значение для проверки прогностическое значение CAFS CAV-1 в GC и может ли она способствовать персонализированного лечения противоракового.

Выражение признательности

Авторы благодарят Dr. Kathryn Solka, кафедра биохимии, Rush University Medical Center для написания помощи.

Other Languages